本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

β2-微球蛋白(β2-microglobin，β2-MG)，是人體組織相容抗原(HLA)的一個(gè)β輕鏈，由淋巴細(xì)胞及有核細(xì)胞合成和分泌。β2-微球蛋白的分子內(nèi)含一對(duì)二硫鍵，不含糖，其血清蛋白電泳位于β2區(qū)域。人體內(nèi)幾乎所有的有核細(xì)胞均能合成β2-微球蛋白，但是主要由淋巴細(xì)胞合成。β2-微球蛋白廣泛存在于人血清、腦脊液、尿液、初乳、唾液等體液中，而且含量微小。

糖尿病腎病在長(zhǎng)期糖尿病患者中非常多見(jiàn)，長(zhǎng)期發(fā)展可更嚴(yán)重?fù)p害腎功能，嚴(yán)重影響糖尿病患者的生存質(zhì)量即加重這些患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。早期診斷糖尿病腎病并對(duì)其進(jìn)行干預(yù)可以提高糖尿病患者的生存質(zhì)量。目前，在臨床常用的腎功能檢測(cè)指標(biāo)為尿素和肌酐，尿素和肌酐在檢測(cè)的過(guò)程中存在操作簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉的優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于腎功能的檢測(cè)中。然而上述這兩個(gè)檢測(cè)指標(biāo)容易受年齡、性別、肌肉組織含量和蛋白質(zhì)攝入等因素的影響，其對(duì)腎功能的評(píng)估存在準(zhǔn)確度低、穩(wěn)定差的缺陷。

β2-微球蛋白的代謝僅依賴域腎臟，有細(xì)胞表面脫落或釋放入血的β2-微球蛋白，從腎小球自由濾過(guò)，幾乎所有的近端腎小管重新收并分解代謝，不再反流入血，因而在正常情況下血清β2-微球蛋白可以保持著穩(wěn)定的水平。而且β2-微球蛋白分子量小，因而能夠從腎小球自由地濾過(guò)，而且β2-微球蛋白除了由腎臟排泄外極少有腎外的分解代謝，因此，其在體內(nèi)的產(chǎn)生速率恒定，不會(huì)受年齡、性別、機(jī)體肌肉組織的影響而影響其血清水平含量。在體內(nèi)β2-微球蛋白生成不增加的情況下，血清β2-微球蛋白水平升高是反映腎小球?yàn)V過(guò)功能損傷極靈敏的指標(biāo)。

李麗波等發(fā)表了一篇題目為“β2-微球蛋白酶聯(lián)免疫分析試劑盒的研制”的論文，該論文以β2-微球蛋白抗體包被微孔板，四甲基聯(lián)苯胺為底物，用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記β2-微球蛋白，建立了β2-微球蛋白酶聯(lián)免疫分析試劑盒。該試劑盒與放射性免疫分析法的相關(guān)系數(shù)為0.9000，而且還具有操作簡(jiǎn)單、快速的優(yōu)點(diǎn)。但是，該試劑盒檢測(cè)靈敏度較低，無(wú)法滿足對(duì)含量微小的β2-微球蛋白的臨床檢測(cè)要求，大大的影響臨床腎臟疾病的診斷。

專利文獻(xiàn)CN101813700B在2010年3月31日公開(kāi)了一種納米微球免疫比濁法檢測(cè)β2-微球蛋白試劑盒，該試劑盒包括試劑R1、試劑R2以及參考校準(zhǔn)品；所述試劑R1由三羥甲基氨基甲烷、廣譜殺菌劑、乙二胺四乙酸二鈉、NaCl、吐溫-20、PEG-6000，純化水組成；所述試劑R2由三羥甲基氨基甲烷、結(jié)合有抗人β2-微球蛋白抗體的納米微球、防腐劑組成，所述納米微球直徑為50-150nm，制備得到的試劑盒無(wú)需稀釋、操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，適用于各種類型的全自動(dòng)生化分析儀。但是，該試劑盒靈敏度較低，影響臨床腎臟疾病的診斷，大大限制了該試劑盒的應(yīng)用。

因此，研究和開(kāi)發(fā)出一種靈敏度高、穩(wěn)定性好的β2-微球蛋白檢測(cè)試劑盒仍是當(dāng)前亟需解決的難題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了克服現(xiàn)有技術(shù)中β2-微球蛋白檢測(cè)試劑盒存在檢測(cè)靈敏度較低、穩(wěn)定性差的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用，以解決上述問(wèn)題。

本發(fā)明提供了一種β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒包括試劑R1和試劑R2，所述試劑R1由以下組分及其濃度組成：

磷酸二氫鉀100-160mmol/L、十二烷基葡萄糖苷40-70mmol/L、八(乙二醇)一(十二烷基)醚50-100mmol/L、單十二烷基九乙二醇醚80-120mmol/L、氯化鈣2-4mmol/L和對(duì)羥基苯甲酸酯1-5mmol/L，余量為水；

所述試劑R2由以下組分及其濃度組成：?jiǎn)问榛乓叶济?0-120mmol/L、十二烷基葡萄糖苷40-70mmol/L、抗人β2-微球蛋白抗體膠乳5-20g/L和對(duì)羥基苯甲酸酯1-5mmol/L，余量為水；所述抗人β2-微球蛋白抗體膠乳的直徑為130-150nm。

進(jìn)一步地，所述試劑盒包括試劑R1和試劑R2，所述試劑R1由以下組分及其濃度組成：

磷酸二氫鉀120mmol/L、十二烷基葡萄糖苷50mmol/L、八(乙二醇)一(十二烷基)醚80mmol/L、單十二烷基九乙二醇醚100mmol/L、氯化鈣3mmol/L和對(duì)羥基苯甲酸酯2mmol/L，余量為水；

所述試劑R2由以下組分及其濃度組成：?jiǎn)问榛乓叶济?00mmol/L、十二烷基葡萄糖苷50mmol/L、抗人β2-微球蛋白抗體膠乳12g/L和對(duì)羥基苯甲酸酯2mmol/L，余量為水；所述抗人β2-微球蛋白抗體膠乳的直徑為130-150nm。

進(jìn)一步地，所述試劑R1的pH值為7.5-7.8。

進(jìn)一步地，所述試劑R1的pH值為7.6。

進(jìn)一步地，所述試劑R1與試劑R2的體積比為4:1。

進(jìn)一步地，所述抗人β2-微球蛋白抗體膠乳的直徑為142nm。

進(jìn)一步地，所述抗人β2-微球蛋白抗體膠乳的制備方法為：

用0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液在室溫下稀釋抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體和膠乳的混合物，在磁力攪拌器上混勻，所述抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體和膠乳的混合物中抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體與膠乳的重量比為1:2-4，所述磷酸鉀緩沖液的加入量為膠乳重量的1-2倍；接著放在37℃的恒溫條件下攪拌，所述轉(zhuǎn)速為300rpm，加入含有甘氨酸的0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液中封閉1小時(shí)，離心,去上清，再加入0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液，即得。

進(jìn)一步地，所述抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體和膠乳的混合物中抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體與膠乳的重量比為1:3。

進(jìn)一步地，所述磷酸鉀緩沖液的加入量為膠乳重量的1.5倍。

本發(fā)明提供的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒的試劑R1中的十二烷基葡萄糖苷的分子式為C₁₈H₃₆O₆，CAS號(hào)為110615-47-9；八(乙二醇)一(十二烷基)醚的分子式為C₂₈H₅₈O₉，CAS號(hào)為3055-98-9；單十二烷基九乙二醇醚的分子式為C₃₀H₆₂O₁₀，CAS號(hào)為3055-99-0。

校準(zhǔn)品，購(gòu)置利德曼公司的多項(xiàng)高值免疫標(biāo)準(zhǔn)液，標(biāo)準(zhǔn)值見(jiàn)說(shuō)明書。

質(zhì)控品，購(gòu)置利德曼公司的多項(xiàng)免疫質(zhì)控血清，質(zhì)控值見(jiàn)說(shuō)明書。

進(jìn)一步地，所述抗人β2-微球蛋白多克隆抗體包括羊抗抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體或兔抗抗人β2-微球蛋白多克隆抗體或鼠抗抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體，上述β2-微球蛋白多克隆抗體均購(gòu)于北京阿匹斯生物科技有限公司，上述抗體僅與人β2-微球蛋白反應(yīng)，與其它抗原無(wú)免疫交叉反應(yīng)，效價(jià)能夠滿足本試劑要求。膠乳購(gòu)于BangsLaboratories公司。

本發(fā)明提供的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)原理為：人血清中β2-微球蛋白與抗血清試劑中的β2-微球蛋白抗體形成抗原抗體復(fù)合物，使反應(yīng)出現(xiàn)濁度，在600nm下檢測(cè)吸光度的變化與校準(zhǔn)品比較測(cè)得血清中β2-微球蛋白的濃度。具體為：先加入試劑R1(樣本稀釋液)，解除樣本中抗原周圍的電子層和水化層，使抗原位點(diǎn)充分暴露；然后加入試劑R2(抗人β2-微球蛋白抗體膠乳溶液)，使抗人β2-微球蛋白抗體膠乳與樣本中相應(yīng)的β2-微球蛋白抗原反應(yīng)，形成不溶性的抗原-抗體復(fù)合物，產(chǎn)生一定的濁度，其濁度高低與樣本中的β2-微球蛋白含量成正比；在規(guī)定波長(zhǎng)下測(cè)定該不溶性抗原-抗體復(fù)合物的吸光度值，與已知濃度的β2-微球蛋白參考校準(zhǔn)品進(jìn)行比較，則可計(jì)算出樣本中β2-微球蛋白的含量。

進(jìn)一步地，經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒檢測(cè)高、中、低值三個(gè)濃度β2-微球蛋白的血清樣本的批內(nèi)變異系數(shù)分別為2.35％、2.44％和3.38％，批間變異系數(shù)分別為3.70％，2.80％和3.07％，均低于5％，說(shuō)明本發(fā)明提供的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒具有較高的精密度。

進(jìn)一步地，本發(fā)明提供的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)限為0.2mg/L，其在20℃分別放置6個(gè)月和12個(gè)月后靈敏度和線性方程的R²值基本無(wú)變化，在4℃下保存36個(gè)月后，試劑盒靈敏度及線性良好，與剛制備的試劑盒無(wú)明顯差別，說(shuō)明本發(fā)明提供的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒具有較高的穩(wěn)定性和較好的靈敏性。

另外，本發(fā)明還提供了所述β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒在檢測(cè)β2-微球蛋白中的應(yīng)用。

總之，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒具有測(cè)定靈敏度高、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好和穩(wěn)定性高的優(yōu)點(diǎn)，是一種較為理想的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒，有利于該試劑盒的推廣和應(yīng)用。

具體實(shí)施方式

以下通過(guò)具體實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明不僅僅限于以下實(shí)施例。在本發(fā)明的范圍內(nèi)或者在不脫離本發(fā)明的內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的變更、組合或替換，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，且包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。

實(shí)施例1、一種β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒

所述β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒包括體積比為4:1的試劑R1和試劑R2

所述試劑R1由以下組分及其濃度組成：磷酸二氫鉀100mmol/L、十二烷基葡萄糖苷40mmol/L、八(乙二醇)一(十二烷基)醚50mmol/L、單十二烷基九乙二醇醚80mmol/L、氯化鈣2mmol/L和對(duì)羥基苯甲酸酯1mmol/L，余量為水；所述試劑R1的pH值為7.5。

試劑R1制備方法為：將上述磷酸二氫鉀、十二烷基葡萄糖苷、八(乙二醇)一(十二烷基)醚、單十二烷基九乙二醇醚、氯化鈣和對(duì)羥基苯甲酸酯加入適量的水溶解，接著加水調(diào)節(jié)pH至7.5，即得。

所述試劑R2由以下組分及其濃度組成：?jiǎn)问榛乓叶济?0mmol/L、十二烷基葡萄糖苷40mmol/L、抗人β2-微球蛋白抗體膠乳5g/L和對(duì)羥基苯甲酸酯1mmol/L，余量為水；所述抗人β2-微球蛋白抗體膠乳的直徑為130nm；

所述抗人β2-微球蛋白抗體膠乳的制備方法為：

用0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液在室溫下稀釋抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體和膠乳的混合物，在磁力攪拌器上混勻，所述抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體和膠乳的混合物中抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體與膠乳的重量比為1:2，所述磷酸鉀緩沖液的加入量為膠乳重量的1倍；接著放在37℃的恒溫條件下攪拌，所述轉(zhuǎn)速為300rpm，加入含有甘氨酸的0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液中封閉1小時(shí)，離心,去上清，再加入0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液，即得。

試劑R2制備方法為：將上述單十二烷基九乙二醇醚、十二烷基葡萄糖苷、抗人β2-微球蛋白抗體膠乳和對(duì)羥基苯甲酸酯加入水中攪拌均勻，即得。

實(shí)施例2、一種β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒

所述β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒包括體積比為4:1的試劑R1和試劑R2，

所述試劑R1由以下組分及其濃度組成：磷酸二氫鉀120mmol/L、十二烷基葡萄糖苷50mmol/L、八(乙二醇)一(十二烷基)醚80mmol/L、單十二烷基九乙二醇醚100mmol/L、氯化鈣3mmol/L和對(duì)羥基苯甲酸酯2mmol/L，余量為水；所述試劑R1的pH值為7.6；所述試劑R1的制備方法如實(shí)施例1。

所述試劑R2由以下組分及其濃度組成：?jiǎn)问榛乓叶济?00mmol/L、十二烷基葡萄糖苷50mmol/L、抗人β2-微球蛋白抗體膠乳12g/L和對(duì)羥基苯甲酸酯2mmol/L，余量為水；所述抗人β2-微球蛋白抗體膠乳的直徑為142nm；

所述抗人β2-微球蛋白抗體膠乳的制備方法為：

用0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液在室溫下稀釋抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體和膠乳的混合物，在磁力攪拌器上混勻，所述抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體和膠乳的混合物中抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體與膠乳的重量比為1:3，所述磷酸鉀緩沖液的加入量為膠乳重量的1倍；接著放在37℃的恒溫條件下攪拌，所述轉(zhuǎn)速為300rpm，加入含有甘氨酸的0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液中封閉1小時(shí)，離心,去上清，再加入0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液，即得。

所述試劑R1的制備方法如實(shí)施例1。

實(shí)施例3、一種β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒

所述β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒包括體積比為4:1的試劑R1和試劑R2

所述試劑R1由以下組分及其濃度組成：磷酸二氫鉀160mmol/L、十二烷基葡萄糖苷70mmol/L、八(乙二醇)一(十二烷基)醚100mmol/L、單十二烷基九乙二醇醚120mmol/L、氯化鈣4mmol/L和對(duì)羥基苯甲酸酯3mmol/L，余量為水；所述試劑R1的pH值為7.8；所述試劑R1的制備方法如實(shí)施例1。

所述試劑R2由以下組分及其濃度組成：?jiǎn)问榛乓叶济?20mmol/L、十二烷基葡萄糖苷70mmol/L、抗人β2-微球蛋白抗體膠乳20g/L和對(duì)羥基苯甲酸酯3mmol/L，余量為水；所述抗人β2-微球蛋白抗體膠乳的直徑為150nm；

所述抗人β2-微球蛋白抗體膠乳的制備方法為：

用0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液在室溫下稀釋抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體和膠乳的混合物，在磁力攪拌器上混勻，所述抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體和膠乳的混合物中抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體與膠乳的重量比為1:4，所述磷酸鉀緩沖液的加入量為膠乳重量的1倍；接著放在37℃的恒溫條件下攪拌，所述轉(zhuǎn)速為300rpm，加入含有甘氨酸的0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液中封閉1小時(shí)，離心,去上清，再加入0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液，即得。

所述試劑R2的制備方法如實(shí)施例1。

對(duì)比例1、一種β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒

所述β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒包括體積比為4:1的試劑R1和試劑R2，

所述試劑R1由以下組分及其濃度組成：磷酸二氫鉀120mmol/L、吐溫-2050mmol/L、八(乙二醇)一(十二烷基)醚80mmol/L、單十二烷基九乙二醇醚100mmol/L、氯化鈣3mmol/L和對(duì)羥基苯甲酸酯2mmol/L，余量為水；所述試劑R1的pH值為7.6；所述試劑R1的制備方法如實(shí)施例1。

所述試劑R2由以下組分及其濃度組成：?jiǎn)问榛乓叶济?00mmol/L、十二烷基葡萄糖苷50mmol/L、抗人β2-微球蛋白抗體膠乳12g/L和對(duì)羥基苯甲酸酯2mmol/L，余量為水；所述抗人β2-微球蛋白抗體膠乳的直徑為142nm；

所述抗人β2-微球蛋白抗體膠乳的制備方法與實(shí)施例2類似。

所述試劑R2的制備方法如實(shí)施例1。

與實(shí)施例2的區(qū)別在于：將十二烷基葡萄糖苷替換為吐溫-20。

對(duì)比例2、一種β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒

所述β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒包括體積比為4:1的試劑R1和試劑R2，

所述試劑R1由以下組分及其濃度組成：磷酸二氫鉀120mmol/L、十二烷基葡萄糖苷50mmol/L、單十二烷基九乙二醇醚180mmol/L、氯化鈣3mmol/L和對(duì)羥基苯甲酸酯2mmol/L，余量為水；所述試劑R1的pH值為7.6；所述試劑R1的制備方法如實(shí)施例1。

所述試劑R2由以下組分及其濃度組成：?jiǎn)问榛乓叶济?00mmol/L、十二烷基葡萄糖苷50mmol/L、抗人β2-微球蛋白抗體膠乳12g/L和對(duì)羥基苯甲酸酯2mmol/L，余量為水；所述抗人β2-微球蛋白抗體膠乳的直徑為142nm；

所述抗人β2-微球蛋白抗體膠乳的制備方法與實(shí)施例2類似。

所述試劑R2的制備方法如實(shí)施例1。

與實(shí)施例2的區(qū)別在于：沒(méi)有添加八(乙二醇)一(十二烷基)醚，增加單十二烷基九乙二醇醚的用量。

對(duì)比例3、一種β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒

所述β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒包括體積比為4:1的試劑R1和試劑R2，

所述試劑R1由以下組分及其濃度組成：磷酸二氫鉀120mmol/L、十二烷基葡萄糖苷50mmol/L、八(乙二醇)一(十二烷基)醚80mmol/L、單十二烷基九乙二醇醚100mmol/L、氯化鈣3mmol/L和對(duì)羥基苯甲酸酯2mmol/L，余量為水；所述試劑R1的pH值為7.6；所述試劑R1的制備方法如實(shí)施例1。

所述試劑R2由以下組分及其濃度組成：?jiǎn)问榛乓叶济?00mmol/L、十二烷基葡萄糖苷50mmol/L、抗人β2-微球蛋白抗體膠乳12g/L和對(duì)羥基苯甲酸酯2mmol/L，余量為水；所述抗人β2-微球蛋白抗體膠乳的直徑為125nm；

所述抗人β2-微球蛋白抗體膠乳的制備方法與實(shí)施例2類似。

所述試劑R2的制備方法如實(shí)施例1。

與實(shí)施例2的區(qū)別在于：所述抗人β2-微球蛋白抗體膠乳的直徑為125nm。

對(duì)比例4、一種β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒

所述β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒包括體積比為4:1的試劑R1和試劑R2，

所述試劑R1和試劑R2的組分和濃度如實(shí)施例2。

所述試劑R1和試劑R2的制備方法如實(shí)施例1。

所述抗人β2-微球蛋白抗體膠乳的制備方法為：

用0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液在室溫下稀釋抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體和膠乳的混合物，在磁力攪拌器上混勻，所述抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體和膠乳的混合物中抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體與膠乳的重量比為1:1，所述磷酸鉀緩沖液的加入量為膠乳重量的1倍；接著放在37℃的恒溫條件下攪拌，所述轉(zhuǎn)速為300rpm，加入含有甘氨酸的0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液中封閉1小時(shí)，離心,去上清，再加入0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液，即得。

與實(shí)施例2的區(qū)別在于：所述抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體和膠乳的混合物中抗人β2-微球蛋白抗體多克隆抗體與膠乳的重量比為1:1。

試驗(yàn)例一、β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒的精密度試驗(yàn)

1、試驗(yàn)材料：實(shí)施例2制備的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒，高、中、低三種濃度的β2-微球蛋白的血清樣本。

2、試驗(yàn)方法：參考美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)話研究所(CLSI)EP5A2文件的方法，采用實(shí)施例2制備的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒對(duì)高(4.65mg/L)、中(2.45mg/L)、低(0.65mg/L)值三個(gè)濃度的β2-微球蛋白的血清樣本分別進(jìn)行重復(fù)性測(cè)定，將高、中、低值三個(gè)濃度β2-微球蛋白的血清樣本分別分裝成20管，放置-20℃中保存，采用日本HITACH的7600全自動(dòng)生化分析儀每天測(cè)一管，連續(xù)測(cè)定20天，計(jì)算各濃度的批內(nèi)和批間變異系數(shù)(CV％)。

3、試驗(yàn)結(jié)果：

試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。

表1血清高中低三種水平β2-微球蛋白的精密度分析

由表1可知，本發(fā)明提供的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒檢測(cè)高、中、低值三個(gè)濃度的β2-微球蛋白的血清樣本的批內(nèi)變異系數(shù)分別為2.35％、2.44％和3.38％，批間變異系數(shù)分別為3.70％，2.80％和3.07％，均低于5％，說(shuō)明本發(fā)明提供的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒具有較高的精密度。

試驗(yàn)例二、β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒的靈敏度試驗(yàn)

1、試驗(yàn)材料：實(shí)施例2制備的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒，利德曼公司的多項(xiàng)高值免疫標(biāo)準(zhǔn)液。

2、試驗(yàn)方法：參考日本JJCLA文件規(guī)定的檢測(cè)限判斷標(biāo)準(zhǔn)，將β2-微球蛋白標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確稀釋成0.1-0.5mg/L的5個(gè)低濃度樣本，各測(cè)定10次，以測(cè)定結(jié)果與基質(zhì)液的不重疊的最低值為檢測(cè)限。

3、試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果如表2所示。

表2 β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒的的靈敏度試驗(yàn)

注：*為吸光度值×1000

由表2可知，本發(fā)明提供的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒在0.2mg/L濃度的測(cè)定結(jié)果與基質(zhì)液的不重疊，因此，說(shuō)明本發(fā)明提供的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)限為0.2mg/L，具有檢測(cè)限度低、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。

試驗(yàn)例三、β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒的穩(wěn)定性試驗(yàn)

1、試驗(yàn)材料：實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3、對(duì)比例1、對(duì)比例2、對(duì)比例3和對(duì)比例4制備的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒。

2、試驗(yàn)方法：

將實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3、對(duì)比例1、對(duì)比例2、對(duì)比例3和對(duì)比例4制備的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒在20℃分別放置6個(gè)月和12個(gè)月后，按照試驗(yàn)例二的方法測(cè)定試劑盒的靈敏度，并將實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3、對(duì)比例1、對(duì)比例2、對(duì)比例3和對(duì)比例4制備的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒與利德曼試劑分別檢測(cè)血清β2-微球蛋白，然后將上述結(jié)果進(jìn)行回歸分析，計(jì)算R²值。

3、試驗(yàn)結(jié)果：

試驗(yàn)結(jié)果如表3所示。

表3 β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒的穩(wěn)定性試驗(yàn)

由表3可知，本發(fā)明提供的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒在20℃分別放置6個(gè)月和12個(gè)月后靈敏度和線性方程的R²值基本無(wú)變化，說(shuō)明本發(fā)明提供的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒具有較高的穩(wěn)定性和較好的靈敏度。

另外，本發(fā)明提供的β2-微球蛋白的快速檢測(cè)試劑盒在4℃下保存36個(gè)月后，試劑盒靈敏度及線性良好，與剛制備的試劑盒無(wú)明顯差別。