索拉菲尼個性化治療肝癌的分型診斷試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種索拉菲尼個性化治療肝癌的分型診斷試劑盒。本發(fā)明揭示了Gankyrin過表達可以明顯抑制索拉菲尼引起的細胞死亡以及皮下腫瘤增殖，但是若聯(lián)合羥氯喹則明顯抑制Gankyrin過表達引起的抗藥反應。本發(fā)明為索拉菲尼的臨床應用提供了新的參考依據(jù)。
【專利說明】索拉菲尼個性化治療肝癌的分型診斷試劑盒
【技術(shù)領域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領域；更具體地，本發(fā)明涉及索拉菲尼個性化治療肝癌的分型診斷試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]原發(fā)性肝癌(簡稱肝癌)是世界范圍內(nèi)第六位的最常見惡性腫瘤，每年新增病例約70余萬，其中肝細胞癌約占80%。肝癌是中國最常見的惡性腫瘤，我國每年新發(fā)肝癌病例約占全球發(fā)病總數(shù)的55%，肝癌亦是我國第二大腫瘤致死原因。至今，手術(shù)切除仍是治療肝癌的最佳治療方法，也是早期肝癌的首選治療措施。但由于原發(fā)性肝癌發(fā)病隱匿，發(fā)展快速，確診時能手術(shù)切除者僅為10%左右，即使施行手術(shù)，仍有許多病例無法完全切除或腫瘤難以避免術(shù)后復發(fā)。此外，由于手術(shù)對人體的創(chuàng)傷較大，會使患者的免疫力降低，并且導致一系列并發(fā)癥。對于晚期肝癌，多因肝功能不全而無法手術(shù)。這一部分病人，需通過各種非手術(shù)切除的方法進行治療，或者先行非手術(shù)治療，讓腫塊縮小局限，再行手術(shù)切除治療，即二期切除，可使病人獲得較好的益處。因此，尋找有效的肝癌非手術(shù)治療方式對于提高肝癌患者，尤其是中晚期肝癌患者的生存率是至關重要的。
[0003]索拉菲尼作為一種新型的腫瘤藥物越來越受到人們的重視。但是其依然存在并不是所用肝癌患者都有效的問題(Shen YC et al，Liver Cancer.20132(3-4):345-364.)。因而，索拉菲尼聯(lián)合用藥也得到關注。近年來，自噬在腫瘤中的作用及功能成為了熱點問題(Choi,A.M.et al，N Engl J Med.368 (19) 1845-6)。特別是自噬抑制劑作為治療腫瘤的輔助用藥，可以達到同等條件下低副作用的效果。自噬抑制劑羥氯喹聯(lián)用索拉菲尼可以更有效的治療肝癌(Shi YH et al,Autophagy.201 IOct ；7(10):1159-72)。雖然這種治療方案可以有效提高索拉菲尼對肝癌的治療效果，但是，這種聯(lián)合用藥療法的特異性問題亟待解決。
[0004]Gankyrin是人26S蛋白酶體的一個非ATP酶調(diào)節(jié)亞基，包含七個ankyrin序列。2000年發(fā)現(xiàn)其在人肝癌組織中的高表達。Gankyrin可以通過影響MDM2/P53，CDK4/Rb，NF-kb/RelA, RhoA/ROCK/Ras, PI3K/AKT/HIF_lalpha，Wwp2/0ct4 信號通絡影響肝癌的發(fā)生發(fā)展。Gankyrin已經(jīng)證實可以作為肝癌治療的重要靶點(Li H et al,Gastroenterology.2005,128 (7):2029-41)。在臨床應用這些研究結(jié)果都提示我們Gankyrin在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著無可替代的重要作用。并且有驗證證實Gankyrin對P53以及0ct4的調(diào)控有助于肝癌細胞抵御化療藥物引起的腫瘤細胞的死亡。
[0005]目前，有關Gankyrin在肝癌的發(fā)展發(fā)生中的報道很多，但至今未見Gankyrin作為索拉菲尼聯(lián)用羥氯喹分子診斷試劑盒的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供索拉菲尼個性化治療肝癌的分型診斷試劑盒。
[0007]在本發(fā)明的第一方面，提供Gankyrin蛋白的用途，用于制備進行肝癌的索拉菲尼治療的預后評估的診斷試劑。[0008]在一個優(yōu)選例中，所述的預后包括:肝癌切除術(shù)后的預后。
[0009]在另一優(yōu)選例中，所述的索拉菲尼治療還包括:索拉菲尼聯(lián)合氯喹或3-甲基腺嘌呤治療。
[0010]在本發(fā)明的另一方面，提供特異性檢測Gankyrin蛋白表達水平的試劑的用途，用于制備進行肝癌的索拉菲尼治療的預后評估的診斷試劑盒。
[0011]在一個優(yōu)選例中，所述的特異性檢測Gankyrin蛋白表達水平的試劑是抗人Gankyrin的抗體。
[0012]在本發(fā)明的另一方面，提供一種用于肝癌的索拉菲尼治療的預后評估的試劑盒，所述試劑盒中包括:特異性檢測Gankyrin蛋白表達水平的試劑。
[0013]在一個優(yōu)選例中，所述的試劑盒中還包括:攜帶有可檢測信號分子的檢測抗體。
[0014]在另一優(yōu)選例中，所述的可檢測信號分子選自:辣根過氧化物酶、堿性磷酸酯酶、葡萄糖氧化酶、β - D-半乳糖苷酶、脲酶、過氧化氫酶、或葡萄糖淀粉酶。
[0015]在另一優(yōu)選例中，所述的試劑盒中還包括:免疫組化試劑；較佳地，所述的免疫組化試劑包括:顯色試劑，二甲苯，乙醇，H2O2甲醇液，抗原修復液，封閉液，PBS,中性樹脂。
[0016]在另一優(yōu)選例中，所述的可檢測信號分子是辣根過氧化物酶，還包括免疫組化試劑:
[0017]內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑；
[0018]DAB 緩沖液；
[0019]DAB 底物；
[0020]蘇木素體細胞染色液；
[0021]空白對照試劑；
[0022]檸檬酸組織抗原修復液；
[0023]Gankyrin陽性對照片；
[0024]PBS磷酸鹽緩沖液；或
[0025]DAB顯色液配制管。
[0026]在本發(fā)明的另一方面，提供一種肝癌的索拉菲尼治療的預后評估的方法，所述方法包括:
[0027](I)應用所述的試劑盒檢測受試者離體肝癌組織中Gankyrin蛋白表達水平；
[0028](2)分析蛋白表達水平，
[0029]若Gankyrin低表達,則該受試者預后治療方案為:應用索拉菲尼治療；
[0030]若Gankyrin高表達，則該受試者預后治療方案為:應用索拉菲尼聯(lián)合氯喹或3_甲基腺嘌呤治療。
[0031]在本發(fā)明的另一方面，提供特異性抑制Gankyrin表達的干擾試劑的用途，用于制備與索拉菲尼聯(lián)用治療肝癌的藥物。
[0032]在一個優(yōu)選例中,所述的特異性抑制Gankyrin表達的干擾試劑具有以下結(jié)構(gòu):
[0033]Seq 正向-X-Seq 反向；
[0034]其中，核苷酸序列如SEQ ID Ν0:3所示為與Seq1^1互補的序列；
[0035]X為位于Seq1^P Seq反向之間的間隔序列(較佳地為GTTTTGGCCACTGACTGAC)，并且所述間隔序列與Seqil^和互補。[0036]在另一優(yōu)選例中，所述的干擾分子可形成以下結(jié)構(gòu):
[0037]
【權(quán)利要求】
1.Gankyrin蛋白的用途，用于制備進行肝癌的索拉菲尼治療的預后評估的診斷試劑。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的索拉菲尼治療還包括:索拉菲尼聯(lián)合氯喹或3-甲基腺嘌呤治療。
3.特異性檢測Gankyrin蛋白表達水平的試劑的用途，用于制備進行肝癌的索拉菲尼治療的預后評估的診斷試劑盒。
4.如權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，所述的特異性檢測Gankyrin蛋白表達水平的試劑是抗人Gankyrin的抗體。
5.一種用于肝癌的索拉菲尼治療的預后評估的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括:特異性檢測Gankyrin蛋白表達水平的試劑。
6.如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中還包括:攜帶有可檢測信號分子的檢測抗體。
7.如權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述的可檢測信號分子是辣根過氧化物酶，還包括免疫組化試劑: 內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑； DAB緩沖液； DAB底物； 蘇木素體細胞染色液； 空白對照試劑； 檸檬酸組織抗原修復液； Gankyrin陽性對照片； PBS磷酸鹽緩沖液；或 DAB顯色液配制管。
8.特異性抑制Gankyrin表達的干擾試劑的用途，其特征在于，用于制備與索拉菲尼聯(lián)用治療肝癌的藥物。
9.如權(quán)利要求8所述的用途,其特征在于，所述的特異性抑制Gankyrin表達的干擾試劑具有以下結(jié)構(gòu): Seq正向Ueq反向； 其中，核苷酸序列如SEQ ID N0:3所示;Seq反向為與Seqtt互補的序列； X為位于Seqtt和Seq&^^間的間隔序列，并且所述間隔序列與Seqtt和Seqg不互補。
10.一種用于與索拉菲尼聯(lián)用治療肝癌的干擾試劑，其特征在于，其具有以下結(jié)構(gòu): Seq正向Ueq反向； 其中，核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示;Seq反向為與Seqtt互補的序列； X為位于Seqtt和Seq&^^間的間隔序列，并且所述間隔序列與Seqtt和Seqg不互補。
【文檔編號】G01N33/68GK103969452SQ201410239634
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2014年5月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月30日
【發(fā)明者】王紅陽, 陳瑤, 羅韜, 付靜, 談冶雄 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學