一種腫瘤標(biāo)記物及其在制備結(jié)直腸癌診斷試劑中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于基因工程和醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種新的結(jié)直腸癌早期診斷的腫瘤標(biāo)記物，更具體地說公開了一種與結(jié)直腸癌相關(guān)的腫瘤標(biāo)記物及其應(yīng)用。該標(biāo)志物為CystatinSN（CST1）、CystatinS(CST4)、CystatinSA(CST2)的組合。該標(biāo)志物及其引物、抗體可用于診斷試劑盒應(yīng)用，用于結(jié)直腸癌的輔助診斷。
【專利說明】一種腫瘤標(biāo)記物及其在制備結(jié)直腸癌診斷試劑中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于基因工程及腫瘤學(xué)領(lǐng)域，涉及一種與結(jié)直腸癌相關(guān)的血清/組織腫瘤標(biāo)記物及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]結(jié)腸癌、直腸癌是常見的惡性腫瘤，進(jìn)展期占大多數(shù)，其發(fā)病率已居惡性腫瘤的第4位。隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展、生活方式、生活環(huán)境及膳食結(jié)構(gòu)的改變，結(jié)直腸癌的發(fā)病率呈不斷上升趨勢。雖然結(jié)直腸癌的診斷水平有了提高，但早期結(jié)直腸癌的檢出率仍然較低而死亡率較高。據(jù)統(tǒng)計顯示，早期結(jié)腸癌根治后5年生存率約為80%，而進(jìn)展期結(jié)腸癌術(shù)后5年生存率僅為50%。因此，早期診斷是提高結(jié)腸癌治愈率的關(guān)鍵因素，尋找敏感性、特異性高的腫瘤標(biāo)志物成為臨床科學(xué)研究的重點(diǎn)目標(biāo)。
[0003]血清腫瘤標(biāo)志物是結(jié)腸癌診斷常用方法之一，CEA、CA19-9、CA242等。其中以CEA為主，有40%~70%結(jié)腸癌患者中CEA增高。但這些標(biāo)記物單獨(dú)作為診斷胰腺癌的指標(biāo)尚不精確，敏感性較低，并且在其他消化道腫瘤及良性疾病中也有升高，因此對結(jié)腸癌早期診斷的價值有限。另外，一些基因腫瘤標(biāo)志物如P53，k-ras等也用于臨床結(jié)腸癌的早期診斷，但始終未能達(dá)到診斷的目的。因此，尋找敏感性高、特異性強(qiáng)、結(jié)果穩(wěn)定的腫瘤標(biāo)志物仍是結(jié)腸癌早期診斷中亟待解決的問題。
[0004]半胱氨酸蛋白酶抑制劑(Cystatins, CSTs)能抑制細(xì)胞內(nèi)外的半胱氨酸蛋白酶，在腫瘤的生長、血管生成、浸潤和轉(zhuǎn)移起重要作用，可作為腫瘤診斷和預(yù)后估計的標(biāo)志物。Cystatins最早是由Anastasi等采用親和層析的方法首次在雞蛋清中分離得到的對半胱氨酸蛋白酶有抑制作用的一種蛋白質(zhì)，作為一個半胱氨酸蛋白酶抑制劑的超家族，依據(jù)其分子結(jié)構(gòu)主要分成三大類:⑴胞內(nèi)cystatin也稱stefis,包括A和B2個成員！⑵分泌型cystatins,包含有C、D、E/·M、F、G、S、Sv和SA等成員；⑶血漿中的激肽原，包含低分子質(zhì)量和高分子質(zhì)量激肽原。目前這個家族中，研究較多，并且與惡性腫瘤關(guān)系較為明確的主要是CystatinA、B、C和M等。CST1、CST4、CST2均屬于Cystatin家族中的II型分泌蛋白，近年來有研究發(fā)現(xiàn)，Cyatatin SN在胃癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)，并與胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)。又有研究結(jié)果表明，其在直腸癌細(xì)胞中和患者血液中有高表達(dá)?；贑ystatin家族的功能，將其作為臨床腫瘤標(biāo)記物具有很大的臨床應(yīng)用價值及前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的首要目的是針對上述技術(shù)問題，提出一種與結(jié)直腸癌相關(guān)的組織腫瘤標(biāo)記物。
[0006]本發(fā)明的第二個目的是提供上述組織腫瘤標(biāo)記物的mRNA引物及抗體。
[0007]本發(fā)明的第三個目的是提供上述組織腫瘤標(biāo)記物的mRNA引物及抗體在制備結(jié)直腸癌診斷劑中的應(yīng)用。
[0008]本發(fā)明的第四個目的在于提供一種檢測結(jié)直腸/直腸癌的試劑盒。[0009]本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案得以實(shí)施:
[0010]發(fā)明提供了一種與結(jié)直腸癌相關(guān)的組織基因標(biāo)記物，該標(biāo)記物為CystatinSN、CystatinS和CystatinSA中的一種或多種的組合。
[0011]優(yōu)選地,所述的標(biāo)記物為CystatinSN、CystatinS和CystatinSA的組合。
[0012]本發(fā)明同時提供了 CystatinSN、CystatinS和/或CystatinSA在制備結(jié)直腸癌診斷試劑或結(jié)直腸癌診斷試劑盒中的應(yīng)用。
[0013]更具體地說，本發(fā)明提供了 CystatinSN、CystatinS和/或CystatinSA檢測試劑在制備結(jié)直腸癌診斷試劑或結(jié)直腸癌診斷試劑盒中的應(yīng)用。
[0014]所述的檢測試劑包括檢測引物，序列如SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO: 2。
[0015]或者，所述的檢測試劑包括CystatinSN、CystatinS和/或CystatinSA蛋白抗體。
[0016]所述的抗體可以通過商品化的途徑獲得。
[0017]發(fā)明同時提供給了一種用于診斷結(jié)直腸癌的試劑盒,含有CystatinSN、CystatinS和/或CystatinSA基因檢測試劑。
[0018]或者，用于診斷結(jié)直腸癌的試劑盒含有CystatinSN、CystatinS和/或CystatinSA蛋白檢測試劑。
[0019]或者，用于診斷結(jié)直腸癌的試劑盒含有基因檢測試劑和蛋白檢測試劑中的一種或多種。
[0020]更優(yōu)選地，上述的診斷試劑或診斷試劑盒含有CystatinSN、CystatinS和CystatinSA基因的組合檢測試劑；或CystatinSN、CystatinS和CystatinSA蛋白的組合檢測試劑。
[0021]發(fā)明同時提供了一種用于檢測結(jié)直腸癌的引物，序列如SEQ ID NO:1和SEQ IDNO:2所示。
[0022]表1CystatinSN, S，SA 引物序列
[0023]
【權(quán)利要求】
1.CystatinSN>CystatinS和/或CystatinSA在制備結(jié)直腸癌診斷試劑或結(jié)直腸癌診斷試劑盒中的應(yīng)用。
2.CystatinSN>CystatinS和/或CystatinSA檢測試劑在制備結(jié)直腸癌診斷試劑或結(jié)直腸癌診斷試劑盒中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的檢測試劑包括檢測引物，序列如SEQID NO:1和 SEQ ID NO:2。
4.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的檢測試劑包括CystatinSN、CystatinS和/或CystatinSA蛋白抗體。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述的抗體為與CystatinSN、CystatinS和CystatinSA蛋白特異性識別的抗體。
6.一種用于診斷結(jié)直腸癌的試劑盒，其特征在于所述試劑盒含有CystatinSN、CystatinS和/或CystatinSA基因檢測試劑；或者所述試劑盒含有CystatinSN、CystatinS和/或CystatinSA蛋白檢測試劑。
7.—種如權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于所述試劑盒含有CystatinSN、CystatinS和CystatinSA基因檢測試劑；或者所述試劑盒含有CystatinSN、CystatinS和CystatinSA蛋白檢測試劑。
8.一種引物，其特征在于序`列如SEQ ID N0:1和SEQ ID N0:2所示。
9.一種與結(jié)直腸癌相關(guān)的基因標(biāo)記物，其特征在于該標(biāo)記物為CystatinSN、CystatinS和CystatinSA中的一種或多種的組合。
10.如權(quán)利要求1所述的基因標(biāo)記物，其特征在于為結(jié)直腸組織基因標(biāo)記物。
【文檔編號】G01N33/574GK103740854SQ201410043885
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2014年1月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月29日
【發(fā)明者】吳斌 申請人:中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院