一種雙氫青蒿素含量的高效液相色譜測(cè)定方法
【專利摘要】本發(fā)明的目的在于提供一種雙氫青蒿素含量的高效液相色譜測(cè)定方法。該測(cè)定方法采用二甲亞砜溶解，高效液相色譜法測(cè)定雙氫青蒿素的含量，雙氫青蒿素在二甲亞砜中呈單一異構(gòu)體，當(dāng)溶液進(jìn)入流動(dòng)相時(shí)異構(gòu)體開(kāi)始轉(zhuǎn)化平衡，其色譜峰呈雙峰，因出峰時(shí)間（異構(gòu)體轉(zhuǎn)化平衡時(shí)間）精確可控，雙峰峰面積之和穩(wěn)定、重現(xiàn)性好，滿足測(cè)定精密度要求。本發(fā)明所述測(cè)定方法避免了雙氫青蒿素在其他溶劑中異構(gòu)體轉(zhuǎn)化、雙峰峰面積之和不穩(wěn)定不可控，從而導(dǎo)致的含量測(cè)定精密度較低的缺點(diǎn)，提高了雙氫青蒿素含量測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，為雙氫青蒿素建立穩(wěn)定、可靠、全面的質(zhì)量控制方法提供科學(xué)依據(jù)。
【專利說(shuō)明】一種雙氫青蒿素含量的高效液相色譜測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物分析領(lǐng)域；更具體地，本發(fā)明涉及一種雙氫青蒿素含量的高效液相色譜測(cè)定方法。
【背景技術(shù)】
[0002]雙氫青蒿素作為青蒿素主要衍生物之一，由青蒿素經(jīng)四氫硼鈉還原而成，是青蒿素類藥物在體內(nèi)主要的活性形式之一，具有更好的水溶性、吸收快、排泄和代謝迅速、高效、低毒等優(yōu)點(diǎn)。雙氫青蒿素在控制瘧疾癥狀、救治腦型瘧與抗氯喹原蟲(chóng)耐藥株惡性瘧等方面具有較大的優(yōu)勢(shì)。雙氫青蒿素含量測(cè)定常用方法為紫外分光光度法和高效液相色譜法，后者也是《中國(guó)藥典》收錄的含量測(cè)定方法。
[0003]紫外分光光度法測(cè)定含量的原理為:采用加入乙醇溶解后靜置，加入2%Na0H溶液，放入60°C水浴中恒溫反應(yīng)0.5h，在238nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度計(jì)算含量。但是，雙氫青蒿素在乙醇溶液中是以a和0體平衡狀態(tài)存在，其平衡穩(wěn)定時(shí)間、2%Na0H溶液加入量及在60°C水浴中恒溫反應(yīng)時(shí)間、其他雜質(zhì)在238nm波長(zhǎng)處有吸收均會(huì)導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確。
[0004]現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)(《中國(guó)藥典》2010年版二部)采用“乙腈-水(6: 4)做溶劑，高效液相色譜法測(cè)定雙氫青蒿素含量，雙氫青蒿素存在異構(gòu)體(a-雙氫青蒿素與(6-雙氫青蒿素)轉(zhuǎn)化現(xiàn)象，雙氫青蒿素呈雙峰，雙峰間存在轉(zhuǎn)化和平衡的現(xiàn)象，峰面積之和不穩(wěn)定(峰面積RSD為3.26%)，導(dǎo)致含量測(cè)定結(jié)果不夠準(zhǔn)確可靠。
[0005]紫外分光光度法及現(xiàn)行高效液相色譜法中，雙氫青蒿素均存在異構(gòu)體(a-雙氫青蒿素與P -雙氫青蒿素)轉(zhuǎn)化現(xiàn)象，雙氫青蒿素兩主峰面積或吸光度的比例會(huì)發(fā)生改變，且峰面積或吸光度之和不恒定，常溫下需2小時(shí)以上才能平衡；而若采用“置水浴中保溫”方法，可能產(chǎn)生其他降解雜質(zhì)。
[0006]目前還沒(méi)有一種高效液相色譜準(zhǔn)確測(cè)定雙氫青蒿素含量的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種雙氫青蒿素含量的高效液相色譜測(cè)定方法。本方法采用二甲亞砜溶解，高效液相色譜法測(cè)定雙氫青蒿素的含量，雙氫青蒿素在二甲亞砜中呈單一異構(gòu)體，當(dāng)溶液進(jìn)入流動(dòng)相時(shí)異構(gòu)體開(kāi)始轉(zhuǎn)化平衡，其色譜峰呈雙峰，因出峰時(shí)間(異構(gòu)體轉(zhuǎn)化平衡時(shí)間)精確可控，雙峰峰面積之和穩(wěn)定、重現(xiàn)性好，保證了雙氫青蒿素含量測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。
[0008]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取如下措施:
[0009]本發(fā)明所述雙氫青蒿素含量的高效液相色譜測(cè)定方法，包括如下步驟:
[0010](I)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水為流動(dòng)相，流速為0.6ml/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)為216nm ；
[0011](2)對(duì)照品溶液的制備:取雙氫青蒿素對(duì)照品適量，精密稱定，加二甲亞砜溶解并定量稀釋制成每Iml中含3~5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；[0012](3)供試品溶液的制備:取雙氫青蒿素原料藥試樣適量，精密稱定，加二甲亞砜溶解并定量稀釋制成每Iml中含3?5mg的溶液，作為供試品溶液；
[0013](4)測(cè)定:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5?10iU，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液雙氫青蒿素色譜峰面積；根據(jù)對(duì)照品溶液雙氫青蒿素濃度及其色譜峰面積和供試品溶液雙氫青蒿素色譜峰面積及試樣重量，用外標(biāo)法計(jì)算試樣中雙氫青蒿素的含量，即得。
[0014]在上述雙氫青蒿素含量的高效液相色譜測(cè)定方法中，所述步驟(I)流動(dòng)相中乙腈和水的體積之比為60: 40。
[0015]本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明所述測(cè)定方法以二甲亞砜做溶劑檢驗(yàn)雙氫青蒿素含量，雙氫青蒿素在二甲亞砜中為單一異構(gòu)體，當(dāng)溶液進(jìn)入流動(dòng)相時(shí)才開(kāi)始異構(gòu)體轉(zhuǎn)化平衡，由高效液相色譜儀控制的出峰時(shí)間(異構(gòu)體轉(zhuǎn)化平衡時(shí)間)精確可控，測(cè)得的雙峰峰面積之和穩(wěn)定、重現(xiàn)性好，可準(zhǔn)確測(cè)定含量。避免了雙氫青蒿素用其他溶劑配成溶液后即開(kāi)始發(fā)生異構(gòu)體轉(zhuǎn)化、雙峰峰面積之和不穩(wěn)定，從而導(dǎo)致的含量測(cè)定精密度低、結(jié)果不準(zhǔn)確的缺點(diǎn)。本發(fā)明所述測(cè)定方法提高了雙氫青蒿素含量測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，為雙氫青蒿素建立穩(wěn)定、可靠、全面的質(zhì)量控制方法提供科學(xué)依據(jù)。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0016]圖1是實(shí)施例1中乙腈-水作溶劑時(shí)于Omin進(jìn)樣雙氫青蒿素含量測(cè)定的高效液相色譜圖。
[0017]圖2是實(shí)施例1中乙腈-水作溶劑時(shí)于IOmin進(jìn)樣雙氫青蒿素含量測(cè)定的高效液相色譜圖。
[0018]圖3是實(shí)施例1中乙腈-水作溶劑時(shí)于20min進(jìn)樣雙氫青蒿素含量測(cè)定的高效液相色譜圖。
[0019]圖4是實(shí)施例2中二甲亞砜作溶劑時(shí)于Omin進(jìn)樣雙氫青蒿素含量測(cè)定的高效液相色譜圖。
[0020]圖5是實(shí)施例2中二甲亞砜作溶劑時(shí)于IOmin進(jìn)樣雙氫青蒿素含量測(cè)定的高效液相色譜圖。
[0021]圖6是實(shí)施例2中二甲亞砜作溶劑時(shí)于20min進(jìn)樣雙氫青蒿素含量測(cè)定的高效液相色譜圖。
[0022]圖7是實(shí)施例6中二甲亞砜作溶劑時(shí)雙氫青蒿素對(duì)照品I含量測(cè)定的高效液相色譜圖。
[0023]圖8是實(shí)施例6中二甲亞砜作溶劑時(shí)雙氫青蒿素對(duì)照品2含量測(cè)定的高效液相色譜圖。
[0024]圖9是實(shí)施例6中二甲亞砜作溶劑時(shí)雙氫青蒿素供試品I含量測(cè)定的高效液相色譜圖。
[0025]圖10是實(shí)施例6中二甲亞砜作溶劑時(shí)雙氫青蒿素供試品2含量測(cè)定的高效液相色譜圖。
【具體實(shí)施方式】[0026]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明的
【發(fā)明內(nèi)容】
作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。應(yīng)理解，本發(fā)明的實(shí)施例只用于說(shuō)明本發(fā)明而非限制本發(fā)明，在不脫離本發(fā)明技術(shù)思想的情況下，根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，做出的各種替換和變更，均應(yīng)包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
[0027]實(shí)施例1
[0028]精密稱取雙氫青蒿素對(duì)照品25.22mg，置25ml量瓶中，加乙腈-水(60: 40)適量，超聲處理使其溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為測(cè)試溶液；精密量取20iU注入液相色譜儀，記錄色譜圖。用十八烷基硅烷鍵合硅膠(CAPCELL PAK C18MG II, IOOmmX 4.6mm, 3 u m)為填充劑；以乙腈-水(60: 40)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為216nm ;流速為0.6ml/min。分別于0min、10min、20min進(jìn)樣對(duì)雙氫青蒿素的色譜峰面積進(jìn)行測(cè)定,高效液相色譜圖如圖1~3所示。雙氫青蒿素的色譜峰均呈雙峰。根據(jù)圖1~3計(jì)算色譜峰面積之和的RSD%以及色譜峰面積之比的RSD%，結(jié)果如表1所示?？芍V峰面積之和的RSD%為3.26%,色譜峰面積之比的RSD%S 75.6%。表明以乙腈-水作溶劑時(shí)，雙氫青蒿素存在異構(gòu)體(a -雙氫青蒿素與3 -雙氫青蒿素)轉(zhuǎn)化現(xiàn)象，雙峰間存在轉(zhuǎn)化和平衡的現(xiàn)象，峰面積之和不穩(wěn)定，二峰面積之比亦不穩(wěn)定，導(dǎo)致含量測(cè)定結(jié)果不夠準(zhǔn)確可靠。
[0029]表1實(shí)施例1RSD%的計(jì)算結(jié)果
[0030]
【權(quán)利要求】
1.一種雙氫青蒿素含量的高效液相色譜測(cè)定方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水為流動(dòng)相，流速為0.6ml/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)為216nm ； (2)對(duì)照品溶液的制備:取雙氫青蒿素對(duì)照品適量，精密稱定，加二甲亞砜溶解并定量稀釋制成每Iml中含3?5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液； (3)供試品溶液的制備:取雙氫青蒿素原料藥試樣適量，精密稱定，加二甲亞砜溶解并定量稀釋制成每Iml中含3?5mg的溶液，作為供試品溶液； (4)測(cè)定:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5?10iil，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液雙氫青蒿素色譜峰面積；根據(jù)對(duì)照品溶液雙氫青蒿素濃度及其色譜峰面積和供試品溶液雙氫青蒿素色譜峰面積及試樣重量，用外標(biāo)法計(jì)算試樣中雙氫青蒿素的含量，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于:所述步驟(I)流動(dòng)相中乙腈和水的體積之比為60: 40。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103760265SQ201410019299
【公開(kāi)日】2014年4月30日 申請(qǐng)日期:2014年1月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月15日
【發(fā)明者】王白露, 曾令高, 梁靜, 張偉 申請(qǐng)人:重慶市食品藥品檢驗(yàn)所