一種超高效合相色譜法測定食品中維生素e含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及維生素E的定量檢測領(lǐng)域，具體而言，涉及一種超高效合相色譜法測 定食品中維生素E含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]維生素E又稱為生育酚，包括生育酚和三烯生育酚兩類共8種化合物，S卩a、0、 Y、S生育酚和a、0、Y、S三烯生育酚。維生素E是一種活性很高的天然抗氧化劑，能 夠保護(hù)細(xì)胞膜及低密度脂蛋白免受自由基引起的氧化，具有預(yù)防慢性疾病、心血管疾病、動 脈粥樣硬化和癌癥的功能。其中，a生育酚抗氧化能力最強(qiáng)，目前被研究的最多。然而，其 它三種生育酚同樣具有促進(jìn)人體健康的獨(dú)特生物學(xué)特性。生育三烯酚也具有化學(xué)預(yù)防和維 持神經(jīng)營養(yǎng)的重要作用。
[0003]目前，多種方法被用于食品及食品添加劑中維生素E的定量分析，包括非水毛細(xì) 管電泳法、高效液相色譜法、氣相色譜法等。同時(shí)分析樣品中八種維生素E異構(gòu)體主要采用 高效液相色譜法，該方法最主要的缺點(diǎn)是分析時(shí)間長、分離度低、有機(jī)溶劑用量大。
[0004] 有鑒于此，特提出本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種超高效合相色譜法測定食品中維生素E含量的方法， 所述的測定方法能在7min內(nèi)快速分離并分別定量檢測出食品中八種維生素E異構(gòu)體的含 量，具有檢測速度快、有機(jī)溶劑用量少、分離度高、靈敏度高、再現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：
[0007] -種超高效合相色譜法測定食品中維生素E含量的方法，包括下列步驟：
[0008] 將質(zhì)量為m的食品進(jìn)行提取維生素E的預(yù)處理，得到體積為V的提取液；
[0009] 采用超高效合相色譜儀分離并分別檢測出所述提取液中八種維生素E異構(gòu)體的 含量，得到各自的質(zhì)量濃度；所述八種維生素E異構(gòu)體為：a、P、Y、S生育酚和a、0、 T、S三烯生育酚；
[0010] 所述超高效合相色譜儀的檢測條件為：色譜柱的直徑為3. 0mm、柱長為100mm、填 料粒徑為I. 7ym，填料為2-乙基吡啶；流動相為超臨界二氧化碳和甲醇/異丙醇（I: 1) 的混合液；采用梯度洗脫，其中，超臨界二氧化碳在不同時(shí)間段的體積百分比為：0-2.Omin 為 90 % -100 %，2. 0-6.Omin為 75 % -85 %，6. 0-6. 2min為 90 % -100 % ;分析時(shí)間： 4. 5-6.Omin;柱溫：40-60°C;備壓：1500-3000psi;進(jìn)樣量：0? 2-10yL;流速：1. 0-3.OmL/ min;檢測波長為294nm;
[0011]通過以下公式分別計(jì)算得到所述食品中八種維生素E異構(gòu)體的含量：（質(zhì)量濃度 *V)/m〇
[0012]上述測定方法先將食品中的維生素E提取出來，然后在超高效合相色譜儀中采用 特定的洗脫條件，將a、P、T、S生育酚和a、0、y、S三烯生育酚這八種異構(gòu)體分別選 擇性地分配，進(jìn)而分離開，并定量檢測出其濃度。最后代入公式（質(zhì)量濃度*V)/m，計(jì)算出食 品中八種維生素E異構(gòu)體的含量。整個(gè)超高效合相色譜的檢測過程不會超過7min，溶劑用 量極少，并且譜圖顯示完全可以同時(shí)將八種維生素E異構(gòu)體有效分離開。
[0013] 上述測定方法適用于測定各種類型的食品，例如，植物組織（辣木葉）、水果（番木 瓜）和食品添加劑（茶樹油）等。
[0014] 優(yōu)選地，所述預(yù)處理的方法為：
[0015] 先將食品打漿，再加入乙醇、維生素C溶液和氫氧化鉀溶液進(jìn)行皂化反應(yīng)，得到皂 化產(chǎn)物；
[0016] 用乙醚對所述皂化產(chǎn)物進(jìn)行萃取，收集提取物；
[0017] 用乙醇溶解所述提取物，即得提取液。
[0018]該預(yù)處理方法對a、P、Y、S生育酚和a、0、Y、S三烯生育酚的提取率高，損 失少。其中，加入維生素C溶液可以避免檢測成分被氧化，乙醚萃取時(shí)對維生素E的選擇性 高，因此用乙醚萃取可以起到富集的效果，提高后期檢測的準(zhǔn)確度；最后用乙醇作為溶劑定 容，既可以充分溶解維生素E，又不會對后續(xù)的色譜分離造成干擾。
[0019] 優(yōu)選地，進(jìn)行皂化反應(yīng)時(shí)，乙醇、維生素C溶液和氫氧化鉀溶液的體積比為 5. 5-6. 5 :1 :1. 8-2. 2,且維生素C溶液的濃度為0. 1-0. 2g/mL，氫氧化鉀溶液的濃度為 0?5-0. 6g/mL。
[0020] 采用上述比例的乙醇、維生素C和氫氧化鉀，可以在幾乎零氧化率的條件下將食 品中的維生素E充分提取出來，提取率可以達(dá)到90 %以上。
[0021] 優(yōu)選地，所述阜化反應(yīng)的時(shí)間為30min以上。
[0022] 皂化30min以后，反應(yīng)基本達(dá)到飽和，如果再延長反應(yīng)時(shí)間，提取率會提高，但相 應(yīng)的成本會急劇增加。
[0023] 優(yōu)選地，用乙醇溶解所述提取物之前還包括：
[0024] 蒸餾回收乙醚。
[0025] 回收的乙醚還可以用于下次萃取，通過該步驟實(shí)現(xiàn)降低能耗、綠色環(huán)保檢測的目 的。
[0026] 優(yōu)選地，每1克食品，至少加入8mL氫氧化鉀溶液。
[0027] 皂化反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)物之間的配比對反應(yīng)產(chǎn)物的產(chǎn)量及反應(yīng)速度具有至關(guān)重要的影 響，采用上述配比產(chǎn)量高，且反應(yīng)速度快。
[0028] 優(yōu)選地，所述食品為固態(tài)時(shí)，在所述皂化之前還包括：冷凍干燥處理12h以上。
[0029] 冷凍干燥處理既不會破壞被檢測成分，又可以去除食品中水，起到富集的作用，還 可以減少后期皂化提取的工作量。
[0030] 優(yōu)選地，所述超高效合相色譜儀檢測時(shí)：波長補(bǔ)償范圍為350-450nm;該條件可以 降低基線噪音干擾，得到的峰型對稱性好、選擇性強(qiáng)、干擾少。
[0031] 優(yōu)選地，備壓為1800psi;發(fā)現(xiàn)該范圍的備壓，可以提高維生素E的柱效，此時(shí)分離 效果最佳，峰型分離度好。
[0032] 優(yōu)選地，流速為2mL/min。該條件下分離效果更佳，靈敏度更高。
[0033] 優(yōu)選地，進(jìn)樣體積為0. 8-1. 2yL，可以保證峰面積在比較合理的范圍，從而保證在 儀器的檢測范圍內(nèi)。
[0034] 優(yōu)選地，食品為固體時(shí)，在皂化之前進(jìn)行打漿處理，以便將其中的檢測成分釋放出 來。
[0035] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：
[0036] (1)能快速將食品中維生素E的八種異構(gòu)體分離出來。
[0037] (2)能分別定量檢測出食品中八種維生素E異構(gòu)體的含量，并且還具有分離度高、 靈敏度高、再現(xiàn)性好、檢測時(shí)間短、有機(jī)溶劑用量少、采樣量少等優(yōu)點(diǎn)。
[0038] (3)提高了食品中維生素E的提取率。
【附圖說明】
[0039] 為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，以下將對實(shí)施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。
[0040] 圖1為實(shí)施例1中維生素E對照品的譜圖；
[0041] 圖2為實(shí)施例1中樣品的譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0042] 下面將結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會 理解，下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體 條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為 可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0043] 實(shí)施例1
[0044] -種超高效合相色譜法測定食品中維生素E含量的方法：
[0045] -、提取：
[0046] 取新鮮番木瓜，快速打漿，避光真空冷凍干燥處理12h，然后迅速研磨。準(zhǔn)確稱取 12.Og粉狀樣品于150mL棕色皂化瓶，依次加入30mL乙醇、5mL維生素C(10%，即0.lg/mL) 和IOmL氫氧化鉀（50%，即0. 5g/mL)溶液，沸水浴中回流皂化30min，每隔8-10min振搖一 次。
[0047] 待皂化后的溶液冷卻至室溫，加入85mL的乙醚進(jìn)行萃取操作，密封后劇烈振蕩 2min，待靜置分層，將上層液體轉(zhuǎn)移至200mL棕色分液漏斗中，用25mL乙醚進(jìn)行二次提取， 合并提取液，并用超純水洗滌提取液，直至洗出液不顯堿性，棄去下層水相，加入適量無水 硫酸鈉進(jìn)行干燥，雙層濾紙過濾，然后于50°C水浴中進(jìn)行減壓蒸餾并回收乙醚。將提取物充 分溶解于2.OmL乙醇，再離心3min，取上清液，再用針式濾器過濾上清液，得到的濾液即為 超高效合相色譜儀檢測所用的提取液。
[0048] 二、超高效合相色譜儀測定標(biāo)準(zhǔn)曲線：
[0049]取a、P、丫、S生育酚和a、0、丫、S三稀生育酚的對照品，配制一系列濃度梯 度（0.1-1.Omg/mL)的混標(biāo)溶液，在以下檢測條件下測定含量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0050] 檢測條件：
[0051]色譜柱的直徑為3.Omm、柱長為100mm、填料粒徑為I. 7ym，填料為2-乙基[!比 啶；流動相為超臨界二氧化碳和甲醇/異丙醇（1:1)的混合液；采用梯度洗脫，其中，超 臨界二氧化碳在不同時(shí)間段的體積百分比為：0-2.Omin為90 % -100 %，2. 0-6.Omin為 75% -85%，6. 0-6. 2min為 90% -100% ;柱溫：50°C;備壓：1800psi;進(jìn)樣量：1yL;流速： 2.OmL/min;檢測波長為294nm，波長補(bǔ)償范圍為350_450nm。
[0052] 三、超高效合相色譜儀測定樣品：
[0053]采用與第二步相同的檢測條件檢測提取液，得到a、P、Y、S生育酚和a、0、 T、S三烯生育酚的峰值，分別代入各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出濃度，再通過公式（質(zhì)量濃度 *V) /m計(jì)算食品所含維生素E異構(gòu)體的量。
[0054] 四、評價(jià)分析方法：
[0055] 采用相同的樣品評價(jià)上述測定方法的重現(xiàn)性、再現(xiàn)性、加樣回收率。
[0056] 該實(shí)施例的檢測結(jié)果如下。
[0057](一）八種維生素E異構(gòu)體色譜圖（標(biāo)準(zhǔn)樣品）和標(biāo)準(zhǔn)曲線分別如圖1和表1所 不。
[0058]圖1中，標(biāo)號所對應(yīng)的異構(gòu)體的種類及含量為：1-a生育酚（0. 999mg/mL)，2-S 生育酚（0? 955mg/mL)，3-y生育酚（0? 475mg/mL)，4-P生育酚（0? 999mg/mL)，5-a三烯生 育酚（0? 4935mg/mL)，6-P三烯生育酚（0? 485mg/mL)，7-S三烯生育酚（〇? 497mg/mL)，8-y 三烯生育酚（〇?