新型抗-α5β1抗體及其應(yīng)用的制作方法【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供新型抗-α5β1抗體，包括所述抗體的組合物和試劑盒，以及制備和使用所述抗體的方法?！緦?zhuān)利說(shuō)明】新型抗-α5β1抗體及其應(yīng)用[0001]本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2010年3月23日、題為“新型抗_α5βI抗體及其應(yīng)用”的中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)N0.201080013817.2的分案申請(qǐng)。[0002]對(duì)相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用[0003]本申請(qǐng)要求于2009年3月25日提交的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?1/163241的利益，將其公開(kāi)內(nèi)容完全結(jié)合在本文作為參考以用于所有目的。發(fā)明領(lǐng)域[0004]本發(fā)明涉及新型Cij1抗體，包括所述抗體的組合物和試劑盒，以及使用所述抗體的方法。[0005]發(fā)明背景[0006]α5βI整合素是一種細(xì)胞膜糖蛋白，其通過(guò)其主要配體纖連蛋白介導(dǎo)細(xì)胞-ECM相互作用。α5βI整合素在細(xì)胞遷移、分化和存活中起作用。在腫瘤血管內(nèi)皮(例如，胃癌、結(jié)腸直腸癌、肝細(xì)胞癌、子宮宮頸癌、和乳腺癌)和其它血管源性血管中，αδβ?整合素水平升高。在血管發(fā)生過(guò)程中，α5βI整合素調(diào)節(jié)周細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的締合以及內(nèi)皮胞外基質(zhì)的裝配。因此，α5βI整合素是抑制血管發(fā)生和使細(xì)胞對(duì)VEGF拮抗劑的作用敏感的有效靶標(biāo)。[0007]因此，在本領(lǐng)域中存在對(duì)于靶向α5βI整合素的組合物和方法的需求。本發(fā)明滿足這一需求和其它的需求。[0008]發(fā)明概述[0009]本發(fā)明提供來(lái)源于單克隆抗體18C12的新型抗-Ci5P1抗體，包括所述新型抗-α5βi抗體的試劑盒和組合物，以及制備和/或使用它們的方法。[0010]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供一種抗-a5h抗體，所述抗體包括:VL結(jié)構(gòu)域，其包括含有TL-S/T-S/P/T-Q/N-H-F/S-T/1-Y-K/T-1-G/D/S(SEQIDNO:15)的CDR-Ll;含有L/1-N/T-S-D/H/S-G/S-S/L/T-H/Y-N/K/Q/1-K/T-G/A-D/S/V(SEQIDNO:16)的CDR-L2;含有G/A-S/A/Y-S/Y-Y-S/A/Y-S/Y/T-GY-V/I(SEQIDNO:17)的CDR-L3;和VH結(jié)構(gòu)域，其包括含有GFTFS-N/A-RW-1/V-Y(SEQIDNO:18)的CDR-Hl;含有GIKTKP-N/A/T-1/R-YAT-E/Q-YADSVKG(SEQIDNO:19)的CDR-H2;和含有L/V-TG-M/K-R/K-YFDY(SEQIDNO:20)的⑶R-H3。在一些實(shí)施方案中，所述抗-Q5P1抗體包括VL結(jié)構(gòu)域和VH結(jié)構(gòu)域，所述VL結(jié)構(gòu)域包括分別含有圖3列出的序列的⑶R-L1，⑶R-L2，和⑶R-L3，所述VH結(jié)構(gòu)域包括分別含有圖3列出的序列的⑶R-H1，⑶R-H2，和⑶R-H3，即，這樣的VL結(jié)構(gòu)域，其包括含有SEQIDNO:21，22，23，或24列出的序列的CDR-Ll，含有SEQIDNO:25，26，27，或28列出的序列的CDR-L2，和含有SEQIDNO:29，30，31，或32列出的序列的CDR-L3;和這樣的VH結(jié)構(gòu)域，其包括含有SEQIDNO:34或35列出的序列的CDR-Hl，含有SEQIDNO:36或37列出的序列的⑶R-H2，和含有SEQIDNO:38，39，或40列出的序列的⑶R-H3。在一些實(shí)施方案中，所述抗-α5βi抗體包括含有SEQIDNOS:3-8中任一項(xiàng)的VL結(jié)構(gòu)域和含有SEQIDN0S:11-14中任一項(xiàng)的VH結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述抗-Qj1抗體包括含有SEQIDN0:4的VL結(jié)構(gòu)域和含有SEQIDNO:11的VH結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述抗-CiJ1抗體包括含有SEQIDNO:5的VL結(jié)構(gòu)域和含有SEQIDNO:12的VH結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述抗-Q5P1抗體包括含有SEQIDN0:6的VL結(jié)構(gòu)域和含有SEQIDNO:13的VH結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述抗-Q5P1抗體包括含有SEQIDNO:7的VL結(jié)構(gòu)域和含有SEQIDNO:13的VH結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述抗-Qj1抗體包括含有SEQIDNO:8的VL結(jié)構(gòu)域和含有SEQIDNO:14的VH結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述抗-CiJ1抗體是人的、人源化的或嵌合的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗-Cij1抗體是單克隆抗體。在一些實(shí)施方案中，所述抗-α5βi抗體與18C12抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合α5βι整合素。在一些實(shí)施方案中，所述單克隆抗體是嵌合抗體。在一些實(shí)施方案中，所述抗-α5βi抗體是結(jié)合Cij1的抗體片段。在一些實(shí)施方案中，所述抗-α5βi抗體選自:Fab,Fab’，F(xiàn)(ab)’2,單鏈Fv(scFv),Fv片段；雙抗體和線性抗體。在一些實(shí)施方案中，所述抗-Cij1抗體是全長(zhǎng)IgGl或全長(zhǎng)IgG4。在一些實(shí)施方案中，所述抗-Cij1抗體是雙特異性抗體或多特異性抗體。在一些實(shí)施方案中，所述雙特異性抗體結(jié)合VEGF和α5βi，并且是VEGF拮抗劑。在一些實(shí)施方案中，所述抗-α5β:抗體具有改變的效應(yīng)子功能。在一些實(shí)施方案中，改變所述抗-α5β:抗體以減少或防止抗體依賴(lài)性細(xì)胞毒性(ADCC)或補(bǔ)體依賴(lài)性細(xì)胞毒性(⑶C)活性(例如，通過(guò)改變編碼抗體Fe部分的核酸序列)。在一些實(shí)施方案中，抗體的Fe部分包括N297A置換。在一些實(shí)施方案中，所述抗_α5βi抗體已被修飾，從而增加或減少其在人中的半衰期(例如，通過(guò)改變編碼抗體Fe部分的核酸序列)。在一些實(shí)施方案中，所述α5βi抗體是與另一種實(shí)體(例如，治療劑或可檢測(cè)的標(biāo)記)綴合的免疫綴合物的一部分。在一些實(shí)施方案中，所述治療實(shí)體是細(xì)胞毒性劑(例如，放射性同位素，毒素，生長(zhǎng)抑制劑，或化療劑)。在一些實(shí)施方案中，所述可檢測(cè)的標(biāo)記是熒光染料、放射性同位素、或酶。[0011]本發(fā)明的其它實(shí)施方案提供編碼本文所述的任一種抗-α5βi抗體的核酸分子，包括所述核酸的表達(dá)載體，和包括所述核酸的宿主細(xì)胞。本發(fā)明的另一些其它實(shí)施方案提供產(chǎn)生本文所述的任一種抗-α5βi抗體的方法，所述方法包括培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞，從而產(chǎn)生所述抗體。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括從所述宿主細(xì)胞回收所述抗體。[0012]本發(fā)明的另一些實(shí)施方案提供包括本發(fā)明的aJ1抗體和藥用載體的藥物組合物。在一些實(shí)施方案中，所述藥物組合物還包括至少一種、兩種、三種、四種、或多種附加劑，其包括，例如，VEGF拮抗劑。在`一些實(shí)施方案中，所述附加劑選自細(xì)胞毒性劑、化療劑、生長(zhǎng)抑制劑、或抗血管發(fā)生劑。在一些實(shí)施方案中，所述VEGF拮抗劑是抗-VEGF抗體。在一些實(shí)施方案中，所述抗-VEGF抗體是貝伐珠單抗(bevacizumab)。本發(fā)明還提供包括檢測(cè)α5β:(例如，在已經(jīng)用VEGF措抗劑治療的受試者中)的使用說(shuō)明的制品(articlesofmanufacture)和試劑盒。[0013]本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案提供治療患有包括異常血管發(fā)生、血管通透性或血管滲漏的疾病或病癥的受試者的方法。所述方法包括，向受試者施用治療有效量的本文所述的抗-α5βi抗體，由此治療所述疾病或病癥(例如，通過(guò)部分或完全抑制異常血管發(fā)生、血管通透性或血管滲漏)。在一些實(shí)施方案中，還向受試者施用VEGF拮抗劑。在一些實(shí)施方案中，所述VEGF拮抗劑和所述抗-Q5P1抗體同時(shí)給藥。在一些實(shí)施方案中，所述VEGF拮抗劑和所述抗-α5βi抗體相繼地給藥。在一些實(shí)施方案中，所述疾病或病癥響應(yīng)VEGF拮抗劑治療。在一些實(shí)施方案中，所述疾病或病癥選自:癌癥，免疫疾病或眼科疾病。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，所述疾病或病癥選自:實(shí)體瘤，轉(zhuǎn)移性腫瘤，軟組織腫瘤，具有眼睛新血管形成的疾病，具有異常血管發(fā)生的炎性病，在移植到受試者后引起的疾病和具有異常的纖維血管組織增生的疾病。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，所述癌癥選自:乳腺癌(breastcancer)(包括轉(zhuǎn)移性乳腺癌)，宮頸癌(cervicalcancer),結(jié)腸直腸癌(colorectalcancer)(包括轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌)，肺癌(lungcancer)(包括非小細(xì)胞肺癌(non-smallcelllungcancer)),非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinslymphoma)(NHL)，慢性淋巴細(xì)胞白血病(chroniclymphocyticleukemia)，腎細(xì)胞癌(renalcellcancer)，前列腺癌(prostatecancer)(包括激素拮抗性前列腺癌(homonerefractoryprostatecancer))，肝癌(livercancer),頭和頸癌(headandneckcancer)，黑素瘤(melanoma)，卵巢癌(ovariancancer)，間皮瘤(mesothelioma)，軟組織癌(soft^ssuecancer),胃腸基質(zhì)瘤(gastrointestinalstromaltumor)，多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤(glioblastomamultiforme)和多發(fā)性骨髓瘤(multiplemyeloma)?根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，所述疾病選自:視網(wǎng)膜病變(retinopathy)，年齡相關(guān)的黃斑變性(age-relatedmaculardegeneration)(例如，濕性AMD(wetAMD))，糖尿病性黃斑水腫(diabeticmacularedema)，視網(wǎng)膜靜脈閉塞(retinalveinocclusion)(RVO)，和干性AMD(dryAMD)/地理性萎縮(geographicatrophy)(用于預(yù)防濕性AMD進(jìn)展)發(fā)紅(rubeosis);銀屑病(psoriasis)，炎性腎病(inflammatoryrenaldisease)，溶血性尿毒癥綜合征(haemolyticuremicsyndrome)，糖尿病腎病(diabeticnephropathy)(例如，增生性糖尿病腎病(proliferativediabeticretinopathy))，關(guān)節(jié)炎(arthritis)(例如，銀屑病關(guān)節(jié)炎(psoriaticarthritis)，骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis)，類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoidarthritis))，炎性腸病(inflammatoryboweldisease)，慢性炎癥(chronicinflammation),慢性視網(wǎng)膜脫離(chronicretinaldetachment),慢性葡萄膜炎(chronicuveitis)，慢性玻璃體炎(chronicvitritis)，角膜移植排斥(cornealgraftrejection),角膜新血管形成(cornealneovascularization),角膜移植新血管形成(cornealgraftneovascularization),局限性回腸炎(Crohn，sdisease)，近視(myopia)，眼睛新血管病(ocularneovasculardisease)，佩吉特病(Pagetsdisease)，類(lèi)天皰瘡(pemphigoid)，多動(dòng)脈炎(polyarteritis)，激光放射狀角膜切開(kāi)術(shù)后(post-laserradialkeratotomy),視網(wǎng)`膜新血管形成(retinalneovascularization),Sogrens綜合征(Sogrenssyndrome),潰痕性大腸炎(ulcerativecolitis)，移植排斥(graftrejection),肺部炎癥(lunginflammation),腎病綜合征(nephroticsyndrome),水腫(edema)，與惡性病相關(guān)的腹水(ascitesassociatedwithmalignancies),中風(fēng)(stroke)，血管纖維瘤(angiofibroma)和新血管性青光眼(neovascularglaucoma)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法還包括向受試者施用額外的治療劑(例如，抗腫瘤劑、化療劑、生長(zhǎng)抑制劑、或細(xì)胞毒性劑)。[0014]本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供了治療受試者中癌癥的方法，所述方法包括:向受試者施用治療有效量的VEGF拮抗劑和抗-CiJ1抗體。在一些實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑和抗-CiJ1抗體同時(shí)施用。在一些實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑和抗-CiJ1抗體依次施用。在一些實(shí)施方案中，所述癌癥響應(yīng)VEGF拮抗劑療法。[0015]本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供了治療患有AMD的受試者中的年齡相關(guān)的黃斑變性(age-relatedmaculardegeneration,AMD)(包括，例如濕性年齡相關(guān)的黃斑變性(wetage-relatedmaculardegeneration))的方法,所述方法包括:向受試者提供治療有效量的VEGF拮抗劑和抗-α5βi抗體。在一些實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑和抗-α5βi抗體同時(shí)施用。在一些實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑和抗-Cij1抗體依次施用。在另一實(shí)施方案中，提供一種治療受試者的自身免疫病的方法，包括提供同時(shí)或依次施用治療有效量的VEGF拮抗劑和α5βI拮抗劑的步驟。[0016]在一些實(shí)施方案中，最初向欲治療的受試者施用VEGF措抗劑，隨后向該受試者施用抗-Q5P1抗體。在一些實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑和α5βι拮抗劑同時(shí)施用給受試者。在一些實(shí)施方案中，抗-α5β:抗體VEGF拮抗劑最初施用給欲治療的受試者，并且VEGF拮抗劑隨后施用給受試者。在一些實(shí)施方案中，用VEGF拮抗劑治療受試者直至受試者對(duì)VEGF拮抗劑治療無(wú)反應(yīng)，且隨后用抗-α5βi抗體治療受試者。在一特定實(shí)施方案中，當(dāng)癌癥為非侵襲性或早期時(shí)，用VEGF拮抗劑治療受試者，當(dāng)癌癥為侵襲性時(shí)，用抗-α5βi抗體治療受試者。在另一實(shí)施方案中，經(jīng)抗-α5βi抗體治療的受試者的患病組織中的Ci5P1水平與來(lái)自未患病的受試者的組織相比或非患病組織相比升高。在此情況下，所述方法可進(jìn)一步包括檢測(cè)受試者中(例如用VEGF拮抗劑治療后的患病組織中)的Cij1的步驟。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，侵襲性癌癥為轉(zhuǎn)移癌。根據(jù)另一實(shí)施方案，早期癌癥為借助輔助療法(例如化學(xué)療法或外科手術(shù)切除)治療的癌癥。[0017]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，將用抗-CiJ1抗體治療的受試者在VEGF拮抗劑治療后經(jīng)歷復(fù)發(fā)或者已變得難以用VEGF拮抗劑治療痊愈。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，將用抗-α5β:抗體及VEGF拮抗劑治療的受試者患轉(zhuǎn)移性癌癥或之前已經(jīng)用輔助療法治療。在一個(gè)實(shí)施方案中，候選患者對(duì)化療劑如伊立替康(irinotecan)具復(fù)發(fā)性、難治性或抗性。這些疾病的實(shí)例包括但不限于，轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌(metastaticcolorectalcancer)、復(fù)發(fā)性轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌(relapsedmetastaticcolorectalcancer)、轉(zhuǎn)移性乳腺癌(metastaticbreastcancer)、復(fù)發(fā)性轉(zhuǎn)移性乳腺癌(relapsedmetastaticbreastcancer)、轉(zhuǎn)移性HER2+乳腺癌(metastaticHER2+breastcancer)、輔助療法治療的乳腺癌(adjuvantbreastcancer)、輔助療`法治療的HER2+乳腺癌(adjuvantHER2+breastcancer)、轉(zhuǎn)移性胰腺癌(metastaticpancreaticcancer)、輔助療法治療的結(jié)腸癌(adjuvantcoloncancer)、輔助療法治療的非小細(xì)胞肺癌(adjuvantnon-smallcelllungcancer)、輔助療法治療的直腸癌(adjuvantrectalcancer)、輔助療法治療的非小細(xì)胞肺癌(adjuvantnonsmallcelllungcancer)、轉(zhuǎn)移性非小細(xì)胞肺癌(metastaticnonsmallcelllungcancer)、轉(zhuǎn)移性卵巢癌(metastaticovariancancer)、轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌(metastaticrenalcellcancer)及輔助療法治療的腎細(xì)胞癌(adjuvantrenalcellcancer)o[0018]根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，在用VEGF拮抗劑治療疾病后向患有本文中所述的疾病的受試者施用維持療法，其中所述維持療法為單獨(dú)施用Ci5P1拮抗劑或者依次或同時(shí)施用Qj1拮抗劑和VEGF拮抗劑。[0019]在一些實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑選自:抗體、免疫黏附素、肽體(peptibody)、小分子以及在嚴(yán)格條件下雜交編碼VEGF的核酸分子的核酸(例如核酶、siRNA及適配體(apatmer))。在一些實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑為抗體(例如單克隆抗體)。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，抗VEGF抗體能夠被Avastin?抗體競(jìng)爭(zhēng)性抑制與人類(lèi)VEGF的結(jié)合。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，抗VEGF抗體為人類(lèi)抗體、人源化抗體或嵌合抗體。根據(jù)一個(gè)特定實(shí)施方案，抗VEGF抗體為Avastill?抗體。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，抗VEGF抗體選自由Fab、Fab’、F(ab)’2、單鏈Fv(scFv)、Fv片段、雙抗體(diabody)和線性抗體組成的組。根據(jù)另一實(shí)施方案,VEGF拮抗劑為結(jié)合VEGF和α5βi的雙特異性抗體，并且是CiJ1的拮抗劑。[0020]本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供檢測(cè)懷疑含有Cij1蛋白的樣品中的Cij1蛋白的方法。所述方法包括:(I)使本文中所述的抗體與樣品接觸；及檢測(cè)抗-α5βi抗體與α5βI蛋白的復(fù)合體的形成。在一些實(shí)施方案中，樣品來(lái)自經(jīng)診斷患有特征為異常血管發(fā)生、異常血管通透性及/或血管滲漏疾病的患者。[0021]本發(fā)明的這些和其他實(shí)施方案進(jìn)一步描述在下文的發(fā)明詳述中。[0022]附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明[0023]圖1A和圖1B描繪下列輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的序列比對(duì):人類(lèi)λIII，倉(cāng)鼠18C12，嵌合18C12.V.1.l、hl8C12.v3、hl8C12.v6、hl8C12.v6.1.Lam3、hl8C12.v6.2Lam3和hl8C12.v6.1.5。[0024]圖2A和圖2B描繪下列重鏈可變結(jié)構(gòu)域的序列比對(duì):倉(cāng)鼠18C12、hl8C12.v3、hl8C12.v6、hl8C12.v6.1.Lam3、hl8C12.v6.2Lam3和hl8C12.v6.1.5。[0025]圖3描繪hl8C12.v3和hl8C12.v3的親和力成熟變體hl8C12.v6、hl8C12.v7、hl8C12.v9、hl8C12.vl5、hl8C12.vl6、hl8C12.v28、hl8C12.v30、hl8C12.v51、hl8C12.v54、hl8C12.v70和hl8C12.v78的CDR序列。[0026]圖4描繪展示hl8C12.v3親本克隆和18C12親和力成熟變體hl8C12.v6、hl8C12.v7、hl8C12.v9、hl8C12.vl5、hl8C12.vl6、hl8C12.v28、hl8C12.v30、hl8C12.v51、hl8C12.v54、hl8C12.v70和hl8C12.v78與人的α5βi整合素結(jié)合的噬菌體競(jìng)爭(zhēng)ELISA的結(jié)果。[0027]圖5描繪hl8C12.v3親本克隆和hl8C12.v3親和力成熟變體hl8C12.v6、hl8C12.vl5、hl8C12.v54和hl8C12.v70與人a5βI整合素結(jié)合的BIAC0RE:%v析的結(jié)果。[0028]圖6描繪嵌合18C12及hl8C12.v6.1.Lam3與人整合素結(jié)合的BIACOREu分析結(jié)果。[0029]圖7描繪hl8C12.v6.1克隆hl8C12.v6.1.1、hl8C12.v6.1.2、hl8C12.v6.1.3、hl8C12.v6.L0hl8C12.v6.1.5結(jié)合的BIACORE?分析的結(jié)果，并且列出各hl8C12.v6.1克隆在位置50a,50b,50c及50d處的CDR-L2序列。[0030]圖8描繪比較嵌合18C12與hl8C12.v6.1在干擾U937細(xì)胞與纖連蛋白結(jié)合方面的能力的纖連蛋白結(jié)合分析的結(jié)果。[0031]圖9描繪比較倉(cāng)鼠18C12與hl8C12.v6.1.5在干擾U937細(xì)胞與纖連蛋白結(jié)合方面的能力的纖連蛋白結(jié)合分析的結(jié)果。[0032]圖10描繪比較倉(cāng)鼠18C12與hl8C12.v6.1.5在干擾α5βi與纖連蛋白結(jié)合方面的能力的纖連蛋白結(jié)合分析的結(jié)果。[0033]圖11描繪比較嵌合18(:12與1118(:12.￥6.1在干擾!1爪^(:細(xì)胞在纖連蛋白上遷移方面的能力的HUVEC遷移分析的結(jié)果。[0034]圖12描繪測(cè)定hl8C12.v6.1.5+/-抗-VEGF在增強(qiáng)存活方面的能力的腫瘤異種移植研究的結(jié)果。[0035]圖13描繪測(cè)定hl8C12.v6.1.5+/-抗-VEGF在降低腫瘤負(fù)荷方面的能力的腫瘤異種移植研究的結(jié)果。[0036]發(fā)明詳述[0037]1.前言[0038]本發(fā)明基于結(jié)合α5βI整合素的新抗體的鑒別。α5βi抗體衍生自單克隆抗體18C12，并且可以用于多種治療和診斷方法中。舉例來(lái)說(shuō)，Cij1抗體可單獨(dú)使用或與其他藥劑組合使用來(lái)治療異常血管發(fā)生、瘤形成、眼疾病及自身免疫病。通過(guò)在患者中施用抗α5βI蛋白的抗體，并檢測(cè)來(lái)自患者的樣品(例如活體內(nèi)或先體外后體內(nèi)(exvivo))中的α5βi蛋白結(jié)合的抗-α5βi抗體，或者，通過(guò)使抗體與來(lái)自患者的樣品接觸并且定性或定量檢測(cè)與α5βi蛋白結(jié)合的抗-α5βi抗體，所述抗體也可以用來(lái)檢測(cè)患者或患者樣品中的α5β:蛋白。[0039]I1.定義[0040]“Alpha5betal”或“α5βI”或“a5bl”或“α5βi”為包含兩種不同蛋白質(zhì)(即亞基a5βI)的整合素。已經(jīng)表明α5βI結(jié)合至纖連蛋白、Ll-CAM和纖維蛋白原。α5β1整合素也被稱(chēng)作極遲活化-5(VeryLateActivation-5)、VLA-5、alpha5betal、CD49e/CD29、纖連蛋白受體、FNR和GPIc-1Ia。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，α5β1*、α5β1。[0041]“α5”在本文中可與CD49e、α5、整合素α5亞基、VLA-5α亞基、GPIc-1Ia的IC亞基及FNRa鏈互換使用，指的是Ci5P1整合素的一個(gè)亞基。a5具有四個(gè)由可變剪接產(chǎn)生并且其細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域不同的同工型(A-D)。人a5的同工型的氨基酸序列可分別以例如Genbank登錄號(hào)X07979、U33879、U33882及U33880發(fā)現(xiàn)。[0042]βI也稱(chēng)作CD29、β1、血小板GPIIaJLA-β鏈、β-1整合素鏈、0)29、？殿8、]\0^2、VLAB,GPIIA、MSK12以及VLA5B。人βI的氨基酸序列可以以例如Genbank登錄號(hào)Χ06256被發(fā)現(xiàn)。[0043]本文中所用的術(shù)語(yǔ)VEGF是指165氨基酸的人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子及相關(guān)121-、189-及206-氨基酸的人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(如Leung等人，Science(科學(xué))，246:1306(1989)和Houck等人，Mol.Endocrin.，5:1806(1991)所述)，以及其天然存在的等位基因及其經(jīng)過(guò)加工的形式。術(shù)語(yǔ)VEGF也指來(lái)自諸如小鼠、大鼠或靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物的非人類(lèi)物種的VEGF。有時(shí)來(lái)自特定物種的VEGF由諸如以下的術(shù)語(yǔ)表示:人VEGF用hVEGF；鼠VEGF用mVEGF等。術(shù)語(yǔ)VEGF也用作指包含165-氨基酸人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的氨基酸8至109或I至109的多肽的截短形式。在本申請(qǐng)中可以例如以“VEGF(8-109)”、“VEGF(1-109)”或“VEGF165”來(lái)表明對(duì)VEGF的任何此等形式的提及?！敖囟獭碧烊籚EGF的氨基酸位置如天然VEGF序列中所示進(jìn)行編號(hào)。比如，截短天然VEGF中的氨基酸位置17(甲硫氨酸)亦為天然VEGF中的位置17(甲硫氨酸)。截短天然VEGF具有與天然VEGF相當(dāng)?shù)膶?duì)KDR及Flt-1受體的結(jié)合親和力。根據(jù)一實(shí)施方案，VEGF為人VEGF。[0044]“VEGF拮抗劑”是指能夠中和、阻斷、抑制、消除、降低或干擾VEGF活性，包括其與VEGF或一種或多種VEGF受體或編碼其的核酸的結(jié)合的分子。VEGF拮抗劑優(yōu)選地結(jié)合VEGF或VEGF受體。VEGF拮抗劑包括抗VEGF抗體及其抗原結(jié)合片段、結(jié)合VEGF及VEGF受體并且阻斷配體-受體相互作用的多肽(例如免疫黏附素、肽體(P印tibody))、抗VEGF受體抗體及VEGF受體拮抗劑(如VEGFR酪氨酸激酶的小分子抑制劑)、結(jié)合VEGF的適合體(apatmer)和在嚴(yán)格條件下雜交編碼VEGF或VEGF受體的核酸序列的核酸(例如RNAi)。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，VEGF拮抗劑結(jié)合至VEGF并且體外抑制VEGF誘發(fā)的內(nèi)皮細(xì)胞增生。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，VEGF拮抗劑，以高于對(duì)非VEGF或非VEGF受體的親和力，結(jié)合至VEGF或VEGF受體。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，VEGF拮抗劑以介于IμM與IpM之間的Kd結(jié)合至VEGF或VEGF受體。根據(jù)另一實(shí)施方案，VEGF拮抗劑以500ηΜ至IpM與VEGF或VEGF受體結(jié)合。[0045]根據(jù)一實(shí)施方案，VEGF拮抗劑選自由例如抗體、肽體、免疫黏附素、小分子或適合體(Apatmer)的多肽組成的組。在一實(shí)施方案中，抗體為抗VEGF抗體，例如AVASTlNli抗體或抗VEGF受體抗體例如抗VEGFR2或抗VEGFR3抗體。VEGF拮抗劑的其他實(shí)例包括VEGF-Trap,Mucagen、PTK787、SUl1248、AG-013736、Bay439006(索拉非尼(sorafenib))、ZD-6474、CP632、CP-547632、AZD-2171、CDP-171、SU-14813、CHIR-258、AEE-788、SB786034、BAY579352、CDP-791、EG-3306、GW-786034、RWJ-417975/CT6758和KRN-633。[0046]“抗VEGF抗體”是以足夠的親和力和特異性結(jié)合至VEGF的抗體。優(yōu)選地，本發(fā)明的抗VEGF抗體可以用作用于靶向并且干擾涉及VEGF活性的疾病或狀況的治療劑?？筸VEGF抗體通常不會(huì)結(jié)合至例如VEGF-B或VEGF-C的其他VEGF同源物，也不會(huì)結(jié)合至諸如P1GF、TOGF或bFGF的其他生長(zhǎng)因子?？筕EGF抗體是與雜交瘤ATCCHB10709產(chǎn)生的單克隆抗VEGF抗體A4.6.1結(jié)合至相同抗原表位的單克隆抗體?？筕EGF抗體更優(yōu)選為根據(jù)Presta等人(1997)CancerRes(癌癥研究).57:4593-4599產(chǎn)生的重組人源化抗VEGF單克隆抗體，包括但不限于稱(chēng)作貝伐珠單抗(BV;Avastin?)的抗體。根據(jù)另一實(shí)施方案，可使用的抗VEGF抗體包括但不限于W02005/012359中所揭示的抗體。根據(jù)一實(shí)施方案，抗VEGF抗體包含W02005/012359的圖24、25、26、27和29中所揭示的任一抗體(例如G6、G6-23、G6-31、G6-23.1、G6-23.2、B20、B20-4和B20.4.1)的重鏈可變區(qū)及輕鏈可變區(qū)。在另一實(shí)施方案中，稱(chēng)作蘭尼單抗(ranibizumab)的抗VEGF抗體是施用于眼疾病,例如糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabeticretinopathy)及濕性AMD的VEGF拮抗劑。[0047]抗VEGF抗體“貝伐珠單抗(Bevacizumab,BV)”，也稱(chēng)作“rhuMAbVEGF”或“Avastin?”是根據(jù)Presta等人(1997)CancerRes(癌癥研究).57:4593-4599產(chǎn)生的重組人源化抗VEGF單克隆抗體。其包含突變的人類(lèi)IgGl構(gòu)架區(qū)和來(lái)自阻斷人類(lèi)VEGF與其受體結(jié)合的鼠抗hVEGF單克隆抗體A.4.6.1的抗原結(jié)合互補(bǔ)決定區(qū)。貝伐珠單抗的氨基酸序列的大約的93%，包括大部分構(gòu)架區(qū)，源自人類(lèi)IgGl，且序列的約7%來(lái)自鼠抗體A4.6.1。貝伐珠單抗的分子量為約149，000道爾頓(dalton)且經(jīng)糖基化。其他抗VEGF抗體包括美國(guó)專(zhuān)利第6，884，879號(hào)和W02005/044853中所描述的抗體。[0048]抗VEGF抗體蘭尼單抗(Ranibizumab)或LUCENT丨S?抗體或rhuFabV2是人源化的親和力成熟的抗人VEGFFab片段。蘭尼單抗通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)重組技術(shù)方法，在細(xì)菌發(fā)酵和大腸桿菌(E.coli)表達(dá)載體中產(chǎn)生。蘭尼單抗未經(jīng)糖基化且分子質(zhì)量為約48，000道爾頓。參見(jiàn)W098/45331及U.S.2003/0190317。[0049]可借助競(jìng)爭(zhēng)性抑制/結(jié)合分析來(lái)鑒別特征為與靶標(biāo)上的重疊或相似區(qū)域結(jié)合的分子，例如抗體。[0050]在一個(gè)實(shí)施方案中，競(jìng)爭(zhēng)性抑制測(cè)定中使用HUVEC或其他表達(dá)Cij1的細(xì)胞，并且使用FACS來(lái)評(píng)估兩種抗-α5βi抗體相對(duì)于彼此的結(jié)合位置。例如，可在錐形管中洗滌HUVEC細(xì)胞并且以1000rpm旋轉(zhuǎn)5分鐘。典型地洗滌沉淀兩次。隨后，可將細(xì)胞再懸浮，計(jì)數(shù)且保持于冰上直至使用?？上蚩字刑砑?00μI第一抗-α5βi抗體(例如以Iμg/ml濃度或更低濃度開(kāi)始)。接著，可向每一孔中添加100μI(例如20父105個(gè)細(xì)胞)細(xì)胞且于冰上孵育30分鐘。接著，可向各孔中添加100μI的結(jié)合生物素的抗-a5h抗體(5yg/ml儲(chǔ)備液)且于冰上孵育30分鐘。隨后洗滌細(xì)胞且在1000rpm下5分鐘形成沉淀。吸出上清液。將與鏈霉親和素(streptavidin)(Jackson016_l10-084)綴合的R-藻紅素(R-Phycoerythrin)添加至孔中(100μ1，以1:1000)。接著，以箔包裹板且于冰上孵育30分鐘。孵育后，可將沉淀洗滌且在1000rpm下5分鐘形成沉淀?？墒钩恋碓賾腋〔⑥D(zhuǎn)移至微量滴定管中進(jìn)行FACS分析。[0051]“血管發(fā)生因子或血管發(fā)生物”是參與刺激血管發(fā)育，例如促進(jìn)血管發(fā)生、內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)、血管穩(wěn)定性及/或血小管生成等的生長(zhǎng)因子或其受體。例如，血管發(fā)生因子包括但不限于，例如VEGF和VEGF家族成員及其受體(VEGF-B、VEGF-C,VEGF-D,VEGFRl、VEGFR2和VEGFR3)、P1GF、F1DGF家族、纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子家族(fibroblastgrowthfactorfamily,FGFs)、TIE配體(血管生成素(Angiopoietins)、ANGPTl、ANGPT2)、TIE1、TIE2、蝶素(ephrins)、Bv8、Delta樣配體4(DLL4)、Del_l、纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子(fibroblastgrowthfactor):(酸性(aFGF)和堿性(bFGF)、FGF4、FGF9、BMP9、BMP10、卵泡抑素(Follistatin)、粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、GM-CSF、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)/分散因子(SF)、白介素-8(IL-8)、CXCL12、瘦素(Leptin)、中期因子(Midkine)、神經(jīng)纖毛蛋白(neuropilins)>NRPUNRP2、胎盤(pán)生長(zhǎng)因子、血小板衍生的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(H)-ECGF)、血小板衍生的生長(zhǎng)因子，尤其PDGF-BB、PDGFR-α或PDGFR-β、多效生長(zhǎng)因子(Pleiotrophin，PTN)、前顆粒蛋白(Progranulin)、增殖蛋白(Proliferin)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-a(TGF-α)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、Alkl、CXCR4、Notchl、Notch4、Sema3A、Sema3C、Sema3F、Robo4等。其將進(jìn)一步包括促進(jìn)血管發(fā)生的因子，例如ESMl和珍珠素(Perlecan)。其也將包括加速創(chuàng)傷愈合的因子，例如生長(zhǎng)激素、類(lèi)胰島素生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)、VIGF、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、EGF樣結(jié)構(gòu)域7(EGF-likedomain,multiple?)(EGFL7)、CTGF及其家族成員，和TGF-α及`TGF-β。參見(jiàn)例如Klagsbrun和D’Amore(1991)Annu.Rev.Physiol.53:217-39、Streit及Detmar(2003)Oncogene(癌基因)22:3172-3179、Ferrara及Alitalo(1999)NatureMedicine(自然醫(yī)學(xué))5(12):1359-1364、Tonini等人，(2003)Oncogene(癌基因)22:6549-6556(例如列出了已知血管發(fā)生因子的表1);和Sato(2003)Int.J.Clin.0ncol.8:200—206。[0052]“抗血管發(fā)生劑”或“血管發(fā)生抑制劑”是指直接或間接地抑制血管發(fā)生、血小管生成或不當(dāng)?shù)难芡ㄍ感缘男》肿恿课镔|(zhì)、多核苷酸(包括例如抑制性RNA(RNAi或siRNA))、多肽、分離的蛋白、重組蛋白、抗體或其綴合物或融合蛋白。應(yīng)理解，抗血管發(fā)生劑包括結(jié)合血管發(fā)生因子或其受體并阻斷其血管發(fā)生活性的那些藥劑。例如，抗血管發(fā)生劑為如上所定義的血管發(fā)生劑的抗體或其他拮抗劑，例如VEGF-A或VEGF-A受體(例如KDR受體或Flt-1受體)的抗體、抗I3DGFR抑制劑、阻斷VEGF受體信號(hào)傳導(dǎo)的小分子(例如PTK787/ZK2284、SU6668、SUTENT?/SU11248(蘋(píng)果酸舒尼替尼(sunitinibmalate))、AMG706、或例如國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)W02004/113304中所描述的那些)?？寡馨l(fā)生劑包括，但不限于以下藥劑:VEGF抑制劑(例如VEGF特異性拮抗劑)、EGF抑制劑、EGFR抑制劑、Erbitux?(西妥昔單抗(cetuximab),ImCloneSystems,Inc.，Branchburg,N.J.)、Vectibix?(帕尼單抗(panitumumab)，Amgen,ThousandOaks,CA)、TIE2抑制劑、IGFlR抑制劑、COX-1I(環(huán)加氧酶II)抑制劑、MMP_2(基質(zhì)-金屬蛋白酶2)抑制劑、及MMP_9(基質(zhì)-金屬蛋白酶9)的抑制劑、CP-547,632(PfizerInc.，NY，USA)、阿西替尼(Axitinib)(PfizerInc.AG-013736),ZD-6474(AstraZeneca)、AEE788(Novartis)、AZD-2171、VEGFTrap(Regeneron/Aventis)、瓦他拉尼(Vatalanib)(也稱(chēng)作PTK-787、ZK_222584Novartis&ScheringAG)、Macugen(培加他尼八鈉(pegaptaniboctasodium)>NX-1838>EYE-001,PfizerInc./Gilead/Eyetech)、IM862(CytranInc.,Kirkland,Wash.,USA)、血管酶(angiozyme),一種來(lái)自Ribozyme(Boulder,Col0.)及Chiron(Emeryville,Calif.)的合成核酶，及其組合。其他血管發(fā)生抑制劑包括血小板反應(yīng)蛋白I(thrombospondinl)、血小板反應(yīng)蛋白2、膠原蛋白IV及膠原蛋白XVIII。VEGF抑制劑披露于美國(guó)專(zhuān)利第6，534，524號(hào)以及第6，235，764號(hào)中，兩者均出于所有目的全文并入本文中?？寡馨l(fā)生劑也包括天然血管發(fā)生抑制劑，例如血管抑制素(angiostatin)、內(nèi)皮抑制素(endostatin)等。參見(jiàn)例如Klagsbrun及D'Amore(1991)Annu.Rev.Physiol.53:217-39;Streit及Detmar(2003)Oncogene(癌基因)22:3172-3179(例如列出對(duì)惡性黑素瘤的抗血管發(fā)生療法的表3);Ferrara及Alitalo(1999)NatureMedicine(自然醫(yī)學(xué))5(12):1359-1364;Tonini等人，(2003)Oncogene(癌基因)22:6549-6556(例如列出已知抗血管發(fā)生因子的表2);及Sato(2003)Int.J.Clin.0ncol.8:200-206(例如列出臨床試驗(yàn)中使用的抗血管發(fā)生劑的表1)。[0053]術(shù)語(yǔ)“抗血管發(fā)生療法”是指適用于抑制血管發(fā)生的療法，其包含施用抗血管發(fā)生劑。[0054]在一實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗VEGF抗體的“Kd”或“Kd值”是通過(guò)測(cè)定Fab對(duì)VEGF的溶液結(jié)合親和力的以下分析來(lái)測(cè)定，以抗體的Fab形式和VEGF分子進(jìn)行的經(jīng)放射性標(biāo)記的VEGF結(jié)合測(cè)定(RIA)，或者通過(guò)在未經(jīng)標(biāo)記的滴度系列的VEGF存在下，使Fab與最小濃度的經(jīng)(125I)標(biāo)記的VEGF(109)分子平衡，隨后通過(guò)抗Fab抗體包被的板捕捉結(jié)合的VEGF來(lái)測(cè)定(Chen等人，(1999)J.MolBiol293:865-881)。為確立分析條件，將微量滴定板(microtiterplates)(Dynex)以含5ug/ml的捕捉抗Fab抗體(CappelLabs)的5OmM碳酸鈉(ρΗ9.6)包被過(guò)夜，隨后在室溫(約23°C)下以含2%(w/v)的牛血清白蛋白的PBS封閉兩小時(shí)至五小時(shí)。在非吸附性板`(Nunc#269620)中，將IOOpM或26pM[125I]VEGF(109)與相關(guān)Fab(例如Fab-12(Presta等人，(1997)CancerRes.(癌癥研究)57:4593-4599))的連續(xù)稀釋液混合。隨后孵育相關(guān)Fab過(guò)夜；然而，持續(xù)孵育65小時(shí)以確保達(dá)到平衡。此后，將混合物轉(zhuǎn)移至捕捉板中以在室溫下孵育I小時(shí)。接著去除溶液并用含0.l%Tween-20的PBS洗漆板8次。當(dāng)板干燥時(shí),添加每孔150ul閃爍體(MicroScint-20!Packard),且以TopcountyY計(jì)數(shù)器(Packard)對(duì)板計(jì)數(shù)10分鐘。選擇提供小于或等于20%最大結(jié)合的各Fab濃度用于競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定。根據(jù)另一實(shí)施方案，在25°C通過(guò)利用使用BIACore?-2000或BIAcore?-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)的表面等離子共振測(cè)定，使用約10響應(yīng)單位(RU)的固定靶標(biāo)分子hVEGF(8-109)CM5芯片來(lái)測(cè)定Kd或Kd值。簡(jiǎn)言之，根據(jù)供貨商的說(shuō)明書(shū)用N-乙基-N’-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧甲基化聚葡萄糖生物感應(yīng)芯片(CM5，BIAcoreInc.)0用IOmM乙酸鈉(pH4.8)將人VEGF稀釋至5μg/ml(約0.2μΜ)，接著以每分鐘5μI的流動(dòng)速率注射，以得到大約10個(gè)響應(yīng)單位(RU)的偶聯(lián)蛋白。注射人VEGF后，注射IM乙醇胺以阻斷未反應(yīng)的基團(tuán)。為進(jìn)行動(dòng)力學(xué)測(cè)量，在25°C下以大約25μΙ/min的流動(dòng)速率將Fab的兩倍連續(xù)稀釋液(0.78nM至500nM)注入含有0.05%Tween20的I3BS(PBST)中。使用簡(jiǎn)單的一對(duì)一朗繆耳結(jié)合模型(Langmuirbindingmodel)(BIAcore評(píng)估軟件3.2版)通過(guò)同時(shí)擬合結(jié)合與解離感應(yīng)圖(sensorgram)來(lái)計(jì)算結(jié)合速率(km)及解離速率U。以比率的形式計(jì)算平衡解離常數(shù)(Kd)。參見(jiàn)例如Chen，Y.等人，(1999)J.MolBiol293:865-881。若根據(jù)上文表面等離子共振測(cè)定的結(jié)合速率超過(guò)IO6M4S'則結(jié)合速率可通過(guò)使用熒光淬滅技術(shù)如使用光譜儀，例如裝備有終止-流動(dòng)的光譜儀(AvivInstruments)或具有攪拌光析管的8000系列SLM-Aminco分光光度計(jì)(ThermoSpectronic)，來(lái)測(cè)定在增加濃度的人VEGF截短形式(8-109)或小鼠VEGF存在下，在25°C下20nM抗VEGF抗體(Fab形式)的PBS溶液(pH7.2)的突光發(fā)射強(qiáng)度(激發(fā)=295nm,發(fā)射=340nm,16nm帶通)增加或減低?？蛇M(jìn)行類(lèi)似結(jié)合測(cè)定來(lái)測(cè)定抗ct5βIFab或使用α5βI作為祀標(biāo)的抗體的Kd。[0055]本文中所用的欲治療的受試者為哺乳動(dòng)物(例如人類(lèi)、非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物、大鼠、小鼠、牛、馬、豬、綿羊、山羊、狗、貓等)。受試者可為臨床患者、臨床試驗(yàn)志愿者、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物等。受試者可能懷疑患有癌癥、免疫疾病或具有異常血管發(fā)生的任何其他疾病，或具有患該等疾病的風(fēng)險(xiǎn)；可能經(jīng)診斷患有癌癥、免疫疾病或具有異常血管發(fā)生的任何其他疾病。本領(lǐng)域已知對(duì)于癌癥、免疫疾病或表現(xiàn)出異常血管發(fā)生的任何其他疾病的許多診斷方法的此類(lèi)疾病的臨床描述。根據(jù)一實(shí)施方案，根據(jù)本發(fā)明欲治療的受試者為人類(lèi)。[0056]“異常血管發(fā)生”發(fā)生在新血管過(guò)度生長(zhǎng)或在其他方面不當(dāng)生長(zhǎng)(例如根據(jù)醫(yī)學(xué)觀點(diǎn)，血管發(fā)生的位置、時(shí)序、程度或發(fā)生不當(dāng))時(shí)的患病狀態(tài)中或使產(chǎn)生患病狀態(tài)。在一些情況下，新血管生長(zhǎng)存在時(shí)，過(guò)度、不受控制或在其他方面不當(dāng)?shù)难馨l(fā)生發(fā)生促進(jìn)患病狀態(tài)惡化或造成患病狀態(tài)，例如在癌癥，尤其血管形成性實(shí)體腫瘤(vascularizedsolidtumors)及轉(zhuǎn)移性腫瘤(metastatictumors)(包括結(jié)腸(colon)癌、肺(lung)癌(尤其小細(xì)胞肺癌(small-celllungcancer))或前列腺癌(prostatecancer));由眼部新血管形成(ocularneo`vascularisation)引起的疾病，尤其糖尿病性失明(diabeticblindness)、視網(wǎng)膜病變(retinopathies,)、主要是糖尿病性視網(wǎng)膜病變(diabeticretinopathy)或年齡相關(guān)的黃斑變性(age-relatedmaculardegeneration)、脈絡(luò)膜新血管形成(choroidalneovascularization,CNV)、糖尿病性黃斑水腫(diabeticmacularedema)、病理性近視(pathologicalmyopia)、vonHippel-Lindau病、眼睛組織衆(zhòng)菌病(histoplasmosisoftheeye)、中樞視網(wǎng)膜靜脈阻塞(CentralRetinalVeinOcclusion,CRV0)、角膜新血管形成(cornealneovascularization)、視網(wǎng)膜新血管形成及虹膜紅變(retinalneovascularizationandrubeosis)、15屑_(psoriasis)、15屑生(psoriaticarthritis)、血管母細(xì)胞瘤(haemangioblastoma),如血管瘤(haemangioma)、炎性腎病(inflammatoryrenaldiseases),如腎小球腎炎(glomerulonephritis),尤其是腎小球膜增生性腎小球腎炎(mesangioproliferativeglomerulonephritis)、溶血性尿毒綜合征(haemolyticuremicsyndrome)、糖尿病性腎病(diabeticnephropathy)或高血壓腎硬化(hypertensivenephrosclerosis)、各種炎性疾病(imflammatorydiseases),例如關(guān)節(jié)炎(arthritis)尤其類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoidarthritis)、炎性腸病(inflammatoryboweldisease)、銀屑病(psorsasis)、結(jié)節(jié)病(sarcoidosis)、動(dòng)脈硬化(arterialarteriosclerosis)及移植后出現(xiàn)的疾病、子宮內(nèi)膜異位(endometriosis)或慢性哮喘(chronicasthma)及超過(guò)70種其他病狀中。新血管可供養(yǎng)患病組織，破壞正常組織，且在癌癥的情況下，新血管可允許腫瘤細(xì)胞逃逸至循環(huán)中且進(jìn)駐其他器官中(腫瘤轉(zhuǎn)移)。本發(fā)明涵蓋治療具有發(fā)生上述疾病的風(fēng)險(xiǎn)的那些患者。[0057]“異常血管通透性”發(fā)生在血管與血管外隔區(qū)之間的液體流、分子(例如離子和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì))以及細(xì)胞(例如淋巴細(xì)胞)的流動(dòng)過(guò)度或在其他方面不當(dāng)(例如，根據(jù)醫(yī)學(xué)觀點(diǎn)血管通透性位置、時(shí)序、程度或發(fā)作不當(dāng))時(shí)的患病狀態(tài)中或使產(chǎn)生患病狀態(tài)。異常血管通透性可導(dǎo)致離子、水、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或細(xì)胞通過(guò)血管結(jié)構(gòu)的“滲漏”過(guò)度或在其他方面不當(dāng)。在一些情況下，過(guò)度、不受控制或在其他方面不當(dāng)?shù)难芡ㄍ感曰蜓軡B漏加劇或誘發(fā)疾病狀態(tài)，包括例如與腫瘤相關(guān)的水腫，包括例如腦腫瘤、與惡性疾病相關(guān)的腹水、梅格斯綜合征(Meigs’syndrome)、肺部炎癥、腎病綜合征、心包積液、肋膜積液；與心血管疾病相關(guān)的通透性，例如心肌梗塞及中風(fēng)后的病狀及其類(lèi)似疾病。本發(fā)明涵蓋治療已發(fā)生與異常血管通透性或滲漏相關(guān)的疾病及病癥或具有患所述疾病及病癥的風(fēng)險(xiǎn)的那些患者。[0058]作為接受本發(fā)明的抗體或多肽的候選者的其他患者患有以下疾病或具有患以下疾病的風(fēng)險(xiǎn):纖維血管組織異常增生(fibrovasculartissue)、紅斑痤瘡(acnerosacea)、獲得性免疫缺陷綜合征(acquiredimmunedeficiencysyndrome)、動(dòng)脈阻塞(arteryocclusionbacterialulcers)、異位性角膜炎(atopickeratitis)、細(xì)菌性潰痕(Bechetsdisease)、白塞病(Bechetsdisease)、血源性腫瘤(bloodbornetumors)、頸動(dòng)脈阻塞性疾病(carotidobstructivedisease)、脈絡(luò)膜新血管形成(choroidalneovascularization)λ慢性炎癥(chronicinflammation)、慢性視網(wǎng)膜脫落(chronicretinaldetachment)、慢性葡萄膜炎(chronicuveitis)、慢性玻璃體炎(chronicvitritis)、接觸鏡過(guò)度磨損(contactlensoverwear)、角膜移植排斥(cornealgraftrejection)、角膜新血管形成(cornealneovascularization)、角膜移植新血管形成(cornealgraftneovascularization)、局限性回腸炎(Crohn，sdisease)、伊爾斯病(Ealesdisease)、流行性角膜結(jié)膜炎(epidemickeratoconjunctivitis)、真菌性潰痕(fungalulcers)、單純皰疫感染(Herpessimplexinfections)、帶狀皰疫感染(Herpeszosterinfections)、高粘度綜合`征(hyperviscositysyndrome)、卡波西肉瘤(Kaposi’ssarcoma)、白血病(leukemia)、脂質(zhì)變性(lipiddegeneration)、萊姆病(Lyme’sdisease)、邊緣性角質(zhì)層分離(marginalkeratolysis)、蠶食性角膜潰痕(Moorenulcer)、除麻風(fēng)病外的分枝桿菌(Mycobacteria)感染、近視(myopia)、眼部新血管性疾病(ocularneovasculardisease)、視窩(opticpits)、奧斯勒韋伯綜合征(Osler-Webersyndrome)、(Osler-Weber-Rendu、骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis)、派杰病(Pagetsdisease)、扁平部睫狀體炎(parsplanitis)、類(lèi)天皰瘡(pemphigoid)、皰性角結(jié)膜病(phylectenulosis)、多動(dòng)脈炎(polyarteritis)、激光后并發(fā)癥(post-lasercomplications)、原生動(dòng)物感染(protozoaninfections)、彈性纖維偽黃瘤(pseudoxanthomaelasticum)、翼狀裔肉(pterygium)、干性角膜炎(keratitissicca)、放射狀角膜切開(kāi)術(shù)(radialkeratotomy)、視網(wǎng)膜新血管形成(retinalneovascularization)、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變(retinopathyofprematurity)、晶狀體后纖維組織增生(retrolentalfibroplasias)、結(jié)節(jié)病(sarcoid)、鞏膜炎(scleritis)、鐮狀細(xì)胞貧血癥(sicklecellanemia)、舍格倫綜合征(Sogrenssyndrome)、實(shí)體腫瘤(solidtumors)、斯特格氏病(Stargartsdisease)、史蒂芬強(qiáng)生病(Steven’sJohnsondisease)、上邊緣角膜炎(superiorlimbickeratitis)、梅毒(syphilis)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemiclupus)、特荷安氏角膜邊緣變性(Terrien’smarginaldegeneration)、弓形體病(toxoplasmosis)、外傷(trauma)、尤文肉瘤(tumorsofEwingsarcoma)、神經(jīng)母細(xì)胞瘤(tumorsofneuroblastoma)、骨肉瘤(tumorsofosteosarcoma)、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(tumorsofretinoblastoma)、橫紋肌肉瘤(tumorsofrhabdomyosarcoma)、潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerativecolitis)、靜脈阻塞(veinocclusion)、維生素A缺乏(VitaminAdeficiency)及韋格納結(jié)節(jié)病(Wegenerssarcoidosis)、與糖尿病相關(guān)的不良血管發(fā)生(undesiredangiogenesisassociatedwithdiabetes)、寄生蟲(chóng)病(parasiticdiseases)、異常創(chuàng)傷愈合(abnormalwoundhealing)、外科手術(shù)后肥大(hypertrophyfollowingsurgery)、損傷或外傷(injury或trauma)、毛發(fā)生長(zhǎng)抑制、排卵及黃體形成抑制、植入抑制及子宮內(nèi)胚胎發(fā)育抑制。[0059]抗血管發(fā)生療法適用于下述各項(xiàng)的一般治療:移植排斥反應(yīng)(graftrejection)、肺部炎癥(lunginflammation)、腎病綜合征(nephroticsyndrome)、子癇前癥(preeclampsia)、心包積液(pericardialeffusion)例如與心包炎相關(guān)的心包積液、肋膜積液、特征為不良血管通透性或滲漏的疾病及病癥，例如與包括例如腦腫瘤的腫瘤相關(guān)的水腫、與惡性疾病相關(guān)的腹水、梅格斯綜合征(Meigs’syndrome)、肺部炎癥(lunginflammation)、腎病綜合征(nephroticsyndrome)、心包積液(pericardialeffusion)和肋膜積液(pleuraleffusion)、與心血管疾病例如心肌梗塞及中風(fēng)后病狀及其類(lèi)似疾病相關(guān)的通透性。[0060]根據(jù)本發(fā)明的其他血管發(fā)生相關(guān)性疾病包括血管纖維瘤(angiofibroma)(易于出血的異常血管)、新血管性青光眼(neovascularglaucoma)(眼中血管生長(zhǎng))、動(dòng)靜脈畸形(arteriovenousmalformations)(動(dòng)脈與靜脈之間異常連通)、不愈合骨折(nonunionfractures)(不會(huì)愈合的骨折)、動(dòng)脈粥樣硬化斑(atheroscleroticplaques)(動(dòng)脈硬化)、化膿性肉芽腫(pyogenicgranuloma)(由血管構(gòu)成的常見(jiàn)皮膚病變)、硬皮病(scleroderma)(結(jié)締組織疾病的一種形式)、血管瘤(hemangioma)(由血管構(gòu)成的腫瘤)、沙眼(trachoma)(第三世界中失明的主要誘因)、血友病性關(guān)節(jié)(hemophilicjoints)、血管黏著及肥厚性癥痕(vascularadhesionsandhypertrophicscars)(異常癥痕形成)。[0061]本文中所用的“治療”(及其語(yǔ)法變形如“treat”或“treating”)是指施用化合物或藥物組合物用于預(yù)防及/或治療目的?！爸委熂膊　被蛴糜凇爸委熜蕴幚怼笔侵赶蛞鸦技膊〉氖茉囌呤┯弥委熞愿纳剖茉囌叩牟?。理想的治療效果包括但不限于，預(yù)防疾病再發(fā)、減輕癥狀、減少疾病的任何直接或間接病理性后果、預(yù)防轉(zhuǎn)移、降低疾病進(jìn)展的速率、改善或減緩疾病狀態(tài)，及癥狀緩解或預(yù)后改良。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體用于延遲疾病的發(fā)展或減緩疾病的進(jìn)展。優(yōu)選地，基于對(duì)下文所述任何特征性癥狀的鑒別或使用本文中所述的診斷方法，診斷受試者患具有異常血管發(fā)生的疾病?！邦A(yù)防疾病”是指對(duì)于尚未生病、但易患特定疾病或具有患特定疾病風(fēng)險(xiǎn)的受試者的預(yù)防性處理。優(yōu)選地，使用本文中所述的診斷方法，確定受試者具有患具有異常血管發(fā)生的疾病的風(fēng)險(xiǎn)。[0062]“治療或改善”意指在病狀發(fā)作前或后改善病狀或病狀的癥狀。如由任何標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)所測(cè)定，比較等同的未經(jīng)治療的對(duì)照者，所述改善或治療程度為至少5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或100%。[0063]術(shù)語(yǔ)“再發(fā)”、“復(fù)發(fā)”或“復(fù)發(fā)性”是指癌癥或疾病在臨床評(píng)定疾病消失后重現(xiàn)。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或局部再發(fā)的診斷可視作復(fù)發(fā)。[0064]“難治性”是指疾病或病狀對(duì)于治療有抗性或無(wú)反應(yīng)(例如新生性漿細(xì)胞的數(shù)目即使在給予治療后也增加)。在某些實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)“難治性”是指對(duì)于任何先前治療，包括但不限于，VEGF拮抗劑、抗血管發(fā)生劑及化學(xué)療法治療有抗性或無(wú)反應(yīng)。在某些實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)“難治性”是指疾病或病狀對(duì)于任何先前治療，包含VEGF拮抗劑、抗血管發(fā)生劑及/或化學(xué)療法治療固有地?zé)o反應(yīng)。在某些實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑為抗VEGF抗體。[0065]“復(fù)發(fā)性”是指患者的疾病回歸至其先前患病狀態(tài)，尤其為在明顯恢復(fù)或部分恢復(fù)后的癥狀重現(xiàn)。在某些實(shí)施方案中，復(fù)發(fā)性狀態(tài)是指在先前治療，包括但不限于VEGF拮抗劑、抗血管發(fā)生劑及/或化學(xué)療法治療之前重現(xiàn)疾病的過(guò)程或重現(xiàn)疾病。在某些實(shí)施方案中，復(fù)發(fā)狀態(tài)是指在對(duì)癌癥療法，包含VEGF拮抗劑、抗血管發(fā)生劑及/或化學(xué)療法治療的初始強(qiáng)烈反應(yīng)的后重現(xiàn)疾病的過(guò)程或重現(xiàn)疾病。在某些實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑為抗VEGF抗體。[0066]術(shù)語(yǔ)“輔助療法”是指在主要療法，通常外科手術(shù)，后給予治療。癌癥或疾病的輔助療法可包括免疫療法、化學(xué)療法、放射療法或激素療法。[0067]術(shù)語(yǔ)“維持療法”是指給予的幫助維持先前治療效果的定期再治療。通常給予維持療法以幫助保持癌癥消退或延長(zhǎng)對(duì)特定療法的反應(yīng)，無(wú)論疾病是否進(jìn)展。[0068]術(shù)語(yǔ)“侵襲性癌癥”是指擴(kuò)散至組織層以外開(kāi)始進(jìn)入正常周?chē)M織中的癌癥。侵襲性癌癥可以是或也可以不是轉(zhuǎn)移性的。[0069]術(shù)語(yǔ)“非侵襲性`癌癥”是指極早期癌癥或未擴(kuò)散至起源組織以外的癌癥。[0070]腫瘤學(xué)中的術(shù)語(yǔ)“無(wú)進(jìn)展存活”是指在治療期間及治療后，癌不生長(zhǎng)的時(shí)間長(zhǎng)度。無(wú)進(jìn)展存活包括患者經(jīng)歷完全反應(yīng)或部分反應(yīng)的時(shí)間量，以及患者經(jīng)歷穩(wěn)定疾病的時(shí)間量。[0071]腫瘤學(xué)中的術(shù)語(yǔ)“進(jìn)展性疾病”可指自治療開(kāi)始起由于腫瘤質(zhì)量增加或腫瘤中的擴(kuò)散，腫瘤生長(zhǎng)超過(guò)20%。[0072]“病癥”是將受益于使用抗體治療的任何狀況。例如，哺乳動(dòng)物患有或需要預(yù)防異常血管發(fā)生(過(guò)度、不當(dāng)或不受控制的血管發(fā)生)或異常血管通透性或滲漏。包括慢性及急性病癥或疾病，包括使哺乳動(dòng)物易患所述病癥的那些病理性狀況。本文中欲治療的病癥的非限制性實(shí)例包括但不限于惡性及良性腫瘤、非白血病及淋巴惡性疾病、神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)、星形細(xì)胞、下丘腦及其他腺體、巨噬細(xì)胞、上皮、基質(zhì)及囊胚腔病癥；以及炎性、血管發(fā)生及免疫病癥。[0073]術(shù)語(yǔ)“癌癥”和“癌性”是指或描述特征通常為不受調(diào)節(jié)的細(xì)胞生長(zhǎng)的哺乳動(dòng)物生理學(xué)病狀。癌癥的實(shí)例包括但不限于，癌瘤(carcinoma)、淋巴瘤(lymphoma)、母細(xì)胞瘤(blastoma)、肉瘤(sarcoma)和白血病(leukemia)。這些癌癥的更具體實(shí)例包括鱗狀細(xì)胞癌(squamouscellcancer)、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤(glioblastoma)、子宮頸癌(cervicalcancer)>卵巢癌(ovariancancer)、肝癌(livercancer)、膀胱癌(bladdercancer)、肝細(xì)胞瘤(hepatoma)、乳腺癌(breastcancer)、結(jié)腸癌(coloncancer)、結(jié)腸直腸癌(colorectalcancer)、子宮內(nèi)膜癌(endometrialcarcinoma)、唾液腺癌(salivaryglandcarcinoma)、腎癌(kidneycancer)、腎臟癌(renalcancer)、前列腺癌(prostatecancer)、陰門(mén)癌(vulvalcancer)、甲狀腺癌(thyroidcancer)、肝癌(hepaticcarcinoma)、頭頸部癌(headandneckcancer)、直腸癌(rectalcancer)、結(jié)腸直腸癌(colorectalcancer)、月市癌(lungcancer)包括小細(xì)胞肺癌(small-celllungcancer)、非小細(xì)胞肺癌(non-smallcelllungcancer)、月市_(adenocarcinomaofthelung)月市(squamouscarcinomaofthelung)、鱗狀細(xì)胞癌(squamouscellcancer)(例如上皮鱗狀細(xì)胞癌(epithelialsquamouscellcancer))、前列腺癌(prostatecancer)、腹膜癌(canceroftheperitoneum)、月干細(xì)胞癌(hepatocellularcancer)、胃癌(gastricorstomachcancer)包括胃腸癌(gastrointestinalcancer)、膜腺癌(pancreaticcancer)、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤(glioblastoma)、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(retinoblastoma)、星形細(xì)胞瘤(astrocytoma)、卵泡膜細(xì)胞瘤(thecomas)、卵巢男胚瘤(arrhenoblastoma)、肝細(xì)胞瘤(hepatoma)、血液科惡性疾病(hematologicmalignancies)包括非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinslymphoma,NHL)、多發(fā)性骨髓瘤(multiplemyeloma)及急性血液科惡性疾病(acutehematologicmalignancies)、子宮內(nèi)膜癌(endometrial)或子宮癌(uterinecarcinoma)、子宮內(nèi)膜異位(endometriosis)、纖維肉瘤(fibrosarcomas)、線膜癌(choriocarcinoma)、唾液腺癌(salivaryglandcarcinoma)、陰門(mén)癌(vulvalcancer)、甲狀腺癌(thyroidcancer)、食道癌(esophagealcarcinomas)、月干癌(hepaticcarcinoma)、月工門(mén)癌(analcarcinoma)、1?^(penilecarcinoma)、鼻口因癌(nasopharyngealcarcinoma)、喉癌(laryngealcarcinomas)、卡波西肉瘤(Kaposi’ssarcoma)λ黑素瘤(melanoma)、皮膚癌(skincarcinomas)、神經(jīng)鞘瘤(Schwannoma)、少枝膠質(zhì)瘤(oligodendroglioma)、神經(jīng)母細(xì)胞瘤(neuroblastomas)、橫紋肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)、骨肉瘤(osteogenicsarcoma)、平滑肌肉瘤(leiomyosarcomas)、尿道癌(urinarytractcarcinomas)、甲狀腺癌(thyroidcarcinomas)、威爾姆斯腫瘤(Wilmistumor)，以及B細(xì)胞淋巴瘤(B-celllymphoma))(包括低級(jí)/濾泡性非霍奇金淋巴瘤(lowgrade/follicularnon-Hodgkin’slymphoma,NHL)、小淋巴球性(smalllymphocytic,SL)NHL、中級(jí)/濾泡性(intermediategrade/follicular)NHL、中級(jí)彌漫性(intermediategradediffuse)NHL、高級(jí)免疫母細(xì)胞(highgradeimmunoblastic)NHL、高級(jí)淋巴母細(xì)胞(highgradeimmunoblastic)NHL、高級(jí)小型無(wú)裂細(xì)胞(highgradesmallnon-cleavedcell)NHL、巨大腫瘤(bulkydisease)NHL、套細(xì)胞淋巴瘤(mantlecelllymphoma)、AIDS相關(guān)淋巴瘤和瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥(Waldenstrom’sMacroglobulinemia))、慢性淋巴球性白血病(chroniclymphocyticleukemiaCLL)、急性淋巴母細(xì)胞白血病(acutelymphoblasticleukemia，ALL)、毛細(xì)胞白血病(Hairycellleukemia)、慢性骨髓母細(xì)胞白血病(chronicmyeloblasticleukemia)和移植后淋巴組織增生病癥(post-transplantlymphoproliferativedisorder,PTLD)，以及與母斑細(xì)胞病相關(guān)的異常血管增生(abnormalvascularproliferationassociatedwithphakomatoses)，及梅格斯綜合征(Meigs’syndrome)。[0074]本文中所使用的“腫瘤”是指惡性或良性的所有新生性細(xì)胞生長(zhǎng)及增生，以及所有癌前及癌性細(xì)胞及組織。[0075]術(shù)語(yǔ)“抗腫瘤組合物(ant1-neoplasticcomposition)”或“抗腫瘤劑(ant1-neoplasticagent)”是指適用于治療癌癥的包含至少一種活性治療劑，例如“抗癌劑”的組合物。治療劑(抗癌劑)的實(shí)例包括但不限于，例如化療劑、生長(zhǎng)抑制劑、細(xì)胞毒性劑、放射療法中使用的藥劑、抗血管發(fā)生劑、細(xì)胞凋亡劑、抗微管蛋白劑、及治療癌癥的其他藥劑，例如抗HER-2抗體、抗CD20抗體、表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)拮抗劑(例如酪氨酸激酶抑制劑)、HER1/EGFR抑制劑(例如厄洛替尼(erlotinib)(Tarceva?))、血小板衍生的生長(zhǎng)因子抑制劑(例如Gleevec?(甲磺酸伊馬替尼(ImatinibMesylate)))、C0X-2抑制劑(例如塞來(lái)考昔(celecoxib))、干擾素、細(xì)胞激素、與一個(gè)或多個(gè)以下靶標(biāo)ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR-β、BAFF,BR3、APRIL、BCMA或VEGF受體結(jié)合的拮抗劑(例如中和抗體)、TRAIL/Apo2及其他生物活性及有機(jī)化學(xué)劑等。本發(fā)明中也涵蓋其組合。[0076]本文中使用的“生長(zhǎng)抑制劑”是指體外和/或體內(nèi)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)或增生的化合物或組合物。因此，生長(zhǎng)抑制劑可以是顯著減少S期細(xì)胞百分比的藥劑。生長(zhǎng)抑制劑的實(shí)例包括阻斷細(xì)胞周期進(jìn)程(S期外的其他時(shí)期)的藥劑，例如誘導(dǎo)Gl停滯和M期停滯的藥劑。經(jīng)典的M期阻斷劑包括長(zhǎng)春花屬(vincas)(長(zhǎng)春新堿(vincristine)及長(zhǎng)春堿(vinblastine))、TAXOL?.和topoII抑制劑例如多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、柔紅霉素(daunorubicin)、依托泊苷(etoposide)及博來(lái)霉素(bleomycin)。使Gl停滯的藥劑也連帶引起S期停滯，例如DNA烷化劑，比如他莫昔芬(tamoxifen)、潑尼松(prednisone)、達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)、氮芥(mechlorethamine)、順鉬(cisplatin)、甲氨蝶呤(metho-trexate)、5_氟尿嘧唳及ara_C。其他信息可見(jiàn)于TheMolecularBasisofCancer,Mendelsohn和Israel編，第I章，標(biāo)題“Cellcycleregulation,oncogenes,andantineoplasticdrugs”，Murakami等人，(WBSaunders:Philadelphia,1995)，尤其第13頁(yè)。[0077]本文中所用的術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞毒性劑”是指抑制或阻止細(xì)胞功能和/或引起細(xì)胞破壞的物質(zhì)。該術(shù)語(yǔ)意欲包括放射性同位素(例如I131、I125、Y9°及Re186)生長(zhǎng)抑制劑、化療劑和毒素例如細(xì)菌、真菌、植物或動(dòng)物來(lái)源的酶活性毒素，或其片段。[0078]“化療劑”是適用于治療癌癥的化合物?；焺┑膶?shí)例包括適用于治療癌癥的化合物?；焺┑膶?shí)例包括:烷化劑，例如塞替哌(thiot印a)和CYTOXAN?環(huán)磷酸胺(cyclosphosphamide),烷基橫`酸酯(alkylsulfonates)如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；BY丙卩定類(lèi)(aziridines),諸如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替哌(meturedopa)和烏瑞替哌(uredopa)；乙撐亞胺類(lèi)(ethylenimines)和甲基蜜胺類(lèi)(methylameIamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、曲他胺(triethylenemelamine)、三亞乙基磷酰胺(triethyIenephosphoramide)、三乙烯硫代憐酸胺(triethyIenethiophosphoramide)和三輕甲蜜胺(trimethylomelamine);acetogenins(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone));喜樹(shù)堿(camptothecin)(包括合成類(lèi)似物托泊替康(topotecan)；苔蘚抑素(bryostatin);callystatin;CC_1065(包括其阿多來(lái)新(adozelesin)、卡折來(lái)新(carzelesin)及比折來(lái)新(bizelesin)合成類(lèi)似物)；隱藻素類(lèi)(cryptophycin)(特別是隱藻素I和隱藻素8);多拉司他汀(dolastatin);倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成類(lèi)似物KW-2189及CB1-TM1);艾槽素(eleutherobin);pancratistatin;匍枝珊瑚醇(sarcodictyin);海綿素(spongistatin);氮芥(nitrogenmustards)例如苯丁酸氣芥(chlorambucil)、蔡氣芥(chlornaphazine)、膽憐酸胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環(huán)憐酸胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、鹽酸氧氮芥(mechlorethamineoxidehydrochloride)、美法侖(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥膽留醇(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲憐胺(trofosfamide)、尿啼卩定氮芥(uracilmustard);亞硝基服類(lèi)(nitrosoureas)例如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(1mustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine);抗生素類(lèi)，例如烯二炔類(lèi)(enediyne)抗生素(例如加利車(chē)霉素(calicheamicin)，尤其是加利車(chē)霉素YlI和加利車(chē)霉素ω--(參見(jiàn)例如Agnew，ChemIntl.Ed.Engl.,33:183-186(1994));烯二炔蒽環(huán)類(lèi)抗生素(dynemicin)，包括烯二炔蒽環(huán)類(lèi)抗生素A(dynemicinA);二膦酸鹽類(lèi)(bisphosphonates)，諸如氯膦酸鹽(clodronate);埃斯波霉素(esperamicin);以及新制癌菌素(neocarzinostatin)生色團(tuán)和相關(guān)色素蛋白烯二炔類(lèi)抗生素生色團(tuán))、阿克拉霉素(aclacinomysins)、放線菌素(actinomycin)、蒽霉素(anthramycin)、偶氮絲氨酸(azaserine)、博來(lái)霉素(bleomycins)、放線菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋紅霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycinis)、放線菌素D(dactinomycin)、柔紅霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6_重氮-5-氧代-L-正亮氨酸(6-diazo-5-oxo-L_norleucine)、ADRIAMYCIN?多柔比星(doxorubicin)(包括嗎啉代多柔比星(morpholino-doxorubicin)、氰基嗎啉代多柔比星(cyanomorphoIino-doxorubicin)、2_口比口各琳-多柔t(yī)匕星(2-pyrrolino-doxorubicin)和脫氧多柔比星(deoxydoxorubicin))、表柔比星、依索比星(esorubicin)、伊達(dá)比星(idarubicin)、馬塞羅霉素(marcellomycin)、絲裂霉素類(lèi)(mitomycins)諸如絲裂霉素C、麥考酌酸(mycophenolicacid)、諾拉霉素(nogalamycin)、橄欖霉素(olivomycins)、培洛霉素(peplomycin)、紫菜霉素(porfiromycin)、票呤霉素(puromycin)、三鐵阿霉素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑霉素(streptonigrin)、鏈佐星(streptozocin)、殺結(jié)核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、凈司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin);抗代謝物類(lèi)，諸如甲氨噪呤(methotrexate)和5_氟尿啼唳(5-FU);葉酸類(lèi)似物，諸如二甲葉酸(denopterin)、甲氨噪呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙`(trimetrexate)J票呤類(lèi)似物，諸如氟達(dá)拉濱(fludarabine)、6-疏基票呤(mercaptopurine)、硫咪票呤(thiamiprine)、硫鳥(niǎo)票呤(thioguanine);啼唳類(lèi)似物，諸如安西他濱(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6_氮尿苷(azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙脫氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifIuridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(f1xuridine);雄激素類(lèi)，諸如卡魯睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolonepropionate)、環(huán)硫雄醇(epitiostanol)、美雄焼(mepitiostane)、睪內(nèi)酯(testolactone);抗腎上腺藥(ant1-adrenals)，諸如氨魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane);葉酸補(bǔ)償劑，諸如亞葉酸(frolinicacid);醋葡醒內(nèi)酯(aceglatone)、aldophosphamideglycoside、5_氨基酮戊酸(aminolevulinicacid)；恩尿啼P定(eniluracil)；安口丫P定(amsacrine)；bestrabucil;比生群(bisantrene);依達(dá)曲沙(edatraxate);得弗伐胺(defofamine);秋水仙胺(demecolcine);地卩丫醌(diaziquone)；艾弗尼辛(elfornithine);依利醋銨(elliptiniumacetate)；epothilone;依托格魯(etoglucid);硝酸嫁(galliumnitrate);羥基服(hydroxyurea);香燕多糖(Ientinan)；氯尼達(dá)明(1nidainine);美坦生類(lèi)化合物(maytansinoids)，諸如美坦生(maytansine)和安絲菌素(ansamitocins);米托胍腙(mitoguazone);米托蒽酉昆(mitoxantrone)；莫哌達(dá)醇(mopidanmol);尼曲卩丫P定(nitraerine);噴司他丁(pentostatin)；異丙嗪(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin);洛索蒽醌(1soxantrone);鬼臼酸(podophyllinicacid);2-乙基酉先月井(2-ethylhydrazide);丙卡巴月井(procarbazine)；PSK?多糖復(fù)合物(JHS天然產(chǎn)物，Eugene,OR);雷佐生(razoxane);利索新(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran);錯(cuò)螺胺(spirogermanium);細(xì)交鏈抱菌酮酸(tenuazonicacid)；三亞月安酉昆(triaziquone);2，2’，2"_三氣三乙月安(2，2，2”-trichlorotriethyIamine)；單端孢霉烯族毒素(trichothecenes)(尤其T-2毒素、韋拉庫(kù)林A(verracurinA)、桿孢菌素A(roridinA)及anguidine);烏拉坦(urethan);長(zhǎng)春地辛(vindesine);達(dá)卡巴曝(dacarbazine);甘露莫司汀(mannomustine);二漠甘露醇(mitobronitol);二漠衛(wèi)矛醇(mitolactol);哌泊溴焼(pipobroman);gacytosine;阿糖胞苷(arabinoside)(“Ara-C”)；環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)；塞替哌(thiotepa);紫杉焼類(lèi)化合物(taxoids)，例如TAXOL?紫杉醇(paclitaxel)(Bristol-MyersSquibbOncology,Princeton,N.J.)、無(wú)克列莫佛(Cremophor)的ABRAXANETM、紫杉醇的白蛋白改造的納米顆粒制劑(AmericanPharmaceuticalPartners,Schaumberg，Illinois)、及TAXOTERE?多西他賽(doxetaxel)(Rhone-PoulencRorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥(chloranbucil);GEMZAR?Λ.I兒?他濱(gemcitabine);6_硫鳥(niǎo)票呤(thioguanine);疏票呤(mercaptopurine);甲氨蝶呤(methotrexate);鉬類(lèi)似物，例如順鉬和卡鉬(carboplatin);長(zhǎng)春堿；鉬；依托泊苷(etoposide，VP-16);異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；長(zhǎng)春新堿(vincristine)；NAVELBINE?長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine);諾安托(novantrone);替尼泊苷(teniposide);依達(dá)曲沙(edatrexate);道諾霉素(daunomycin);胺基票呤(aminopterin);希羅達(dá)(xeloda)；伊班膦酸鹽(ibandronate)`;伊立替康(Camptosar，CPT-11)(包括伊立替康與5-FU及亞葉酸(leucovOTin)的治療方案)；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑RFS2000;二氟甲基鳥(niǎo)氨酸(difluorometlhylornithine)(DMFO);維甲類(lèi)(retinoids)如視黃酸(retinoicacid)、卡培他濱(capecitabine)、考布他汀(combretastatin)、亞葉酸(LV);奧沙利鉬(oxaliplatin)，包括奧沙利鉬治療方案(FOLFOX);降低細(xì)胞增生的PKC-α、Raf.H-Ras和EGFR的抑制劑(例如厄洛替尼(TarcevaTM))及任何上述物質(zhì)的藥學(xué)上可接受的鹽、酸或衍生物。[0079]化療劑也包括用以調(diào)控或抑制對(duì)腫瘤的激素作用的抗激素劑，例如抗雌激素及選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERMs)，包括例如他莫昔芬(包括NOLVADEX?他莫昔芬)、雷諾昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4_羥基他莫昔芬(4-hydroxytamoxifen)、曲沃昔芬(trioxifene)、keoxifene、LY117018、奧那司酮(onapristone)和法樂(lè)通.托瑞米芬(FAREST0N.toremifene)抑制調(diào)控腎上腺中的雌激素產(chǎn)生的芳香酶的芳香酶抑制劑，例如4(5)-咪唑、氨魯米特(aminoglutethimide)、MEGASE?醋酸甲地孕酮(megestrolacetate)、AROMASIN?依西美坦(exemestane)、福美坦(formestanie)、法倔唑(fadrozole)、RIVISOR?伏氯唑(vorozole)、FEMARA?.來(lái)曲唑(Ietrozole)及ARIMIDEX?|叫那曲唑(anastrozole)及抗雄激素，例如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、亮丙立德(Ieuprolide)及戈舍瑞林(goserelin)以及曲沙他濱(troxacitabine)(I,3_二氧戍環(huán)核苷胞喃唳類(lèi)似物)；反義寡核苷酸,尤其那些抑制異常細(xì)胞增生所涉及的信號(hào)傳導(dǎo)路徑中的基因表達(dá)的，例如PKC-α、Raf及H-Ras核酶，例如VEGF表達(dá)抑制劑(例如ANGIOZYME?核酶)及HER2表達(dá)抑制劑；疫苗，例如基因療法疫苗，例如ALLOVECTIN?疫iV[；LEUVECT1N?疫苗及VAX丨D?疫苗；PROLEUKIN?rIL-2;LURTOTECAN?拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑；ABAREL丨X?rmRH;長(zhǎng)春瑞濱(Vinorelbine)及Esperamicins(參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利第4，675，187號(hào))；及任何上述物質(zhì)的藥學(xué)上可接受的鹽、酸或衍生物。[0080]本申請(qǐng)中所使用的術(shù)語(yǔ)“前藥”指藥物活性物質(zhì)的前體或衍生物形式(例如小分子)，該形式比起母體藥物對(duì)患病細(xì)胞的細(xì)胞毒性小，且能夠酶促活化或轉(zhuǎn)化成更具活性的母體形式。參見(jiàn)例如Wilman,“ProdrugsinCancerChemotherapy”BiochemicalSocietyTransactions,14,第375-382頁(yè)，615thMeetingBelfast(1986)及Stella等人，^Prodrugs:AChemicalApproachtoTargetedDrugDelivery,，，DirectedDrugDelivery,Borchardt等人(編)，第247-267頁(yè)，HumanaPress(1985)。本發(fā)明的前藥包括但不限于，含磷酸酯基的前藥、含硫代磷酸酯基的前藥、含硫酸酯基的前藥、含肽的前藥、D-氨基酸修飾的前藥、糖基化前藥、含內(nèi)酯胺的前藥、含視情況經(jīng)取代的苯氧基乙酰胺的前藥或含視情況經(jīng)取代的苯基乙酰胺的前藥、5-氟胞嘧啶及其他5-氟尿苷前藥，其可轉(zhuǎn)化成更具活性的無(wú)細(xì)胞毒性藥物?？裳苌捎糜诒景l(fā)明的前藥形式的細(xì)胞毒性藥物的實(shí)例，包括但不限于，上文所述的那些化療劑。[0081]“分離的”在用于描述本文中所披露的各種多肽時(shí)意指多肽已經(jīng)鑒別且從表達(dá)其的細(xì)胞或細(xì)胞培養(yǎng)物中分離和/或回收。其天然環(huán)境的污染組分是通常會(huì)干擾多肽的診斷或治療用途的物質(zhì)，可包括酶、激素及其他蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)溶質(zhì)。在實(shí)施方案中，多肽應(yīng)純化至:(1)足以通過(guò)使用旋轉(zhuǎn)杯測(cè)序儀獲得N末端或內(nèi)部氨基酸序列的至少15個(gè)殘基的程度；或(2)使用考馬斯亮藍(lán)(Coomassieblue),或優(yōu)選地,銀染色劑在非還原或還原條件下通過(guò)SDS-PAGE獲得均一性。由于多肽天然環(huán)境的至少一種組份將不存在，所以經(jīng)分離的多肽包括重組細(xì)胞內(nèi)的原位多肽。然而，通常經(jīng)分離多肽將由至少一個(gè)純化步驟來(lái)制備。[0082]“分離”的編碼多肽的核酸或其他編碼多肽的核酸是經(jīng)過(guò)鑒別并且自至少一種污染核酸分子分尚的核酸分子，其在編碼多肽的核酸的天然來(lái)源中通常與污染核酸分子相締合。經(jīng)分離的編碼多肽的核酸分子不同于自然界中所見(jiàn)的形式或定位。因此將經(jīng)分離的編碼多肽的核酸分子與天然細(xì)胞中所存在的特定的編碼多肽的核酸分子相區(qū)分。然而，經(jīng)分離的編碼多肽的核酸分子包括包含在通常表達(dá)多肽的細(xì)胞中的編碼多肽的核酸分子，其中例如核酸分子位于不同于天然細(xì)胞中的染色體位置的位置。[0083]術(shù)語(yǔ)“控制序列”是指在特定宿主生物體內(nèi)表達(dá)的可操作地連接的編碼序列所需的DNA序列。適于原核生物的控制序列例如包括啟動(dòng)子、視情況存在的操縱序列和核糖體結(jié)合位點(diǎn)。已知真核細(xì)胞利用啟動(dòng)子、聚腺苷酸化信號(hào)及增強(qiáng)子。[0084]當(dāng)核酸與另一核酸序列功能相關(guān)時(shí)，其即經(jīng)是“可操作地連接”。比如，若前序列或分泌性前導(dǎo)序列的DNA表達(dá)為參與多肽分泌的前體蛋白，則其與所述多肽的DNA可操作地連接；若啟動(dòng)子或強(qiáng)化子影響編碼序列的轉(zhuǎn)錄，則其與該序列可操作地連接；或若核糖體結(jié)合位點(diǎn)為了便于翻譯而定位，則其與編碼序列可操作地連接。一般而言，“可操作地連接”指所連接的DNA序列為相鄰的，且在分泌性前導(dǎo)序列的情況下為相鄰的且處于閱讀框中。然而，增強(qiáng)子不必須是相鄰的。連接通過(guò)在合適限制性位點(diǎn)處的連接來(lái)實(shí)現(xiàn)。若這些位點(diǎn)不存在，則根據(jù)常規(guī)操作使用合成寡核苷酸銜接子(adaptors)或接頭(linkers)。[0085]本文中所定義的“嚴(yán)格條件”或“高嚴(yán)格條件”可由以下來(lái)鑒別:(I)采用低離子強(qiáng)度及高溫進(jìn)行洗滌，例如在50°C下，0.015M氯化鈉/0.0015M檸檬酸鈉/0.1%十二烷基硫酸鈉；(2)在雜交期間采用例如甲酰胺的變性劑，例如在42°C下，50%(v/v)含有0.1%牛血清白蛋白的甲酰胺/0.l%Ficoll/0.1%聚乙烯吡咯啶酮/含有750mM氯化鈉、75mM檸檬酸鈉的50mM磷酸鈉緩沖液(ρΗ6.5);或(3)在42°C下在采用50%甲酰胺、5XSSC(0.75MNaCl、0.075M檸檬酸鈉)、50mM磷酸鈉(ρΗ6.8)、0.1%焦磷酸鈉、5X丹哈特氏溶液(Denhardt'ssolution)、聲波處理的鮭魚(yú)精DNA(50μg/ml)、0.1%SDS及10%硫酸聚葡萄糖的溶液中雜交過(guò)夜，其中在42°C下于0.2XSSC(氯化鈉/檸檬酸鈉)中洗滌10分鐘，接著在55°C下由含有EDTA的0.1XSSC組成的洗滌液中高嚴(yán)格洗滌10分鐘。[0086]除非另有說(shuō)明，否則本文中所述的氨基酸序列為相鄰氨基酸序列。[0087]本文中所用的術(shù)語(yǔ)“免疫黏附素”表示具有異源蛋白(一種“黏附素”)的結(jié)合特異性與免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域的效應(yīng)子功能的抗體樣分子。在結(jié)構(gòu)上，免疫黏附素包含具有所需結(jié)合特異性的不被抗體的抗原識(shí)別及結(jié)合位點(diǎn)的(也即為“異源”)氨基酸序列與免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域序列的融合。免疫黏附素分子的黏附部分通常是至少包含受體或配體(例如VEGFR或纖連蛋白配體)的結(jié)合位點(diǎn)的相鄰氨基酸序列。免疫黏附素中的免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域序列可獲自任何免疫球蛋白，例如IgG-Ι、IgG-2、IgG-3或IgG_4亞型、IgA(包括IgA-1及IgA-2)、IgE、IgD或IgM。通常，包含衍生自與免疫球蛋白的Fe部分融合的進(jìn)行噬菌體展示選擇所獲得的特異結(jié)合靶標(biāo)的序列的肽體，可被看作是本文中的免疫黏附素。[0088]術(shù)語(yǔ)“抗體”是以其最廣義使用，且特定涵蓋例如單一的單克隆抗體(包括激動(dòng)劑、拮抗劑及中和抗體)、具有多抗原表位特異性的抗體組合物、多克隆抗體、單鏈抗抗體、及抗體片段(參見(jiàn)下文)，只要其特異性結(jié)合天然多肽和/或表現(xiàn)本發(fā)明的生物活性或免疫學(xué)活性即可。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，抗體結(jié)合至靶蛋白的寡聚形式，例如三聚形式。根據(jù)另一實(shí)施方案，抗體特異性結(jié)合蛋白質(zhì)，該結(jié)合可由本發(fā)明的單克隆抗體(例如本發(fā)明的保藏抗體等)抑制。短語(yǔ)抗體的“功能性片段或類(lèi)似物”是具有與所提及抗體相同的定性生物活性的化合物。比如，本發(fā)明的抗體的功能性片段或類(lèi)似物可以是可特異性結(jié)合至VEGF或α5βI的。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體可阻止或基本上降低VEGF誘導(dǎo)細(xì)胞增生的能力。[0089]“經(jīng)分離抗體”為已經(jīng)鑒別并且從其天然環(huán)境的組份分離和/或回收的抗體。其天然環(huán)境的污染組份是會(huì)干擾抗體的診斷或治療用途的物質(zhì)，且可包括酶、激素和其他蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)溶質(zhì)。在實(shí)施方案中，抗體應(yīng)純化至:(1)如通過(guò)Lowry法測(cè)定，以重量計(jì)大于95%的抗體，且優(yōu)選以重量計(jì)大于99%；(2)足以通過(guò)使用旋轉(zhuǎn)杯測(cè)序儀獲得N末端或內(nèi)部氨基酸序列的至少15個(gè)殘基的程度；或(3)使用考馬斯亮藍(lán)或優(yōu)選地銀染色劑在還原或非還原條件下通過(guò)SDS-PAGE獲得均一性。由于抗體的天然環(huán)境的至少一種組份將不存在，所以經(jīng)分離抗體包括重組細(xì)胞內(nèi)的原位抗體。然而，經(jīng)分離抗體通常將通過(guò)至少一個(gè)純化步驟來(lái)制備。[0090]基本4鏈抗體單元是由兩條相同輕(L)鏈和兩條相同重(H)鏈組成的異四聚體糖蛋白(IgM抗體由5個(gè)基本異四聚體單元和被稱(chēng)為J鏈的另一多肽組成，因此含有10個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，而分泌型IgA抗體可聚合形成包含2-5個(gè)基本4鏈單元以及J鏈的多價(jià)集合體)。對(duì)于IgGs，4鏈單元通常為約150，000道爾頓。各L鏈通過(guò)一個(gè)共價(jià)二硫鍵連接至H鏈，而根據(jù)H鏈同種型不同，兩條H鏈通過(guò)一或多個(gè)二硫鍵彼此連接。各H鏈及L鏈也具有規(guī)則間隔的鏈內(nèi)二硫鍵。各H鏈在N端具有可變結(jié)構(gòu)域(Vh)，其后為各α鏈及y鏈的三個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域(Ch)及μ和ε同型的四個(gè)Ch結(jié)構(gòu)域。各L鏈在N端具有可變結(jié)構(gòu)域(')，其后是位于其另一端的恒定結(jié)構(gòu)域(CJ。'與Vh比對(duì)且Q與重鏈的第一恒定結(jié)構(gòu)域(ChI)比對(duì)。認(rèn)為特定氨基酸殘基在輕鏈與重鏈可變結(jié)構(gòu)域之間形成界面。Vh與'的配對(duì)共同形成單一抗原結(jié)合位點(diǎn)。關(guān)于不同種類(lèi)抗體的結(jié)構(gòu)及特性，參見(jiàn)例如BASICANDCLINICALIMMUNOLOGY(基礎(chǔ)和臨床免疫學(xué))，第8版，DanielP.Stites,Abba1.Terr和TristramG.Parslow(編),Appleton&Lange,Norwalk,CT,1994,第71頁(yè)及第6章。[0091]來(lái)自任何脊椎動(dòng)物物種的L鏈可基于其恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列歸為被稱(chēng)作K及λ的兩個(gè)明顯不同類(lèi)型之一。根據(jù)重鏈恒定結(jié)構(gòu)域(Ch)的氨基酸序列不同，免疫球蛋白可歸于不同種類(lèi)或同型。存在五種免疫球蛋白IgA、IgD、IgE、IgG及IgM分別具有稱(chēng)為α，δ，Υ，ε和μ的重鏈?；贑h序列及功能的相對(duì)較小的差異，將Y及α類(lèi)進(jìn)一步分成亞類(lèi)，例如人類(lèi)呈現(xiàn)以下亞類(lèi)IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl及IgA2。[0092]術(shù)語(yǔ)“可變”是指在抗體中某些可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段在序列上極其不同。V結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)抗原結(jié)合，并且界定特定抗體對(duì)其特定抗原的特異性。然而，可變性并非均勻分布在可變結(jié)構(gòu)域的110個(gè)氨基酸范圍上。而是V區(qū)由15-30個(gè)氨基酸的相對(duì)不變段(稱(chēng)作構(gòu)架區(qū)(FRs))由長(zhǎng)度各為9-12個(gè)氨基酸的具有極大可變性的較短區(qū)域(稱(chēng)作“高變區(qū)”)間隔組成。天然重鏈合輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域各包含四個(gè)FRs，主要采用β桶構(gòu)象，由三個(gè)高變區(qū)連接，其形成環(huán)連接，且在一些情況下形成β折疊結(jié)構(gòu)的一部分。各鏈中的高變區(qū)通過(guò)FRs緊密保持在一起，并且與其他鏈的高變區(qū)一起促進(jìn)抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)的形成(參見(jiàn)Kabat等人，SEQUENCESOFPROTEINSOFIMMUNOLOGICALINTEREST(免疫學(xué)目的的蛋白質(zhì)序列)，第5版PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.(1991))。雖然恒定結(jié)構(gòu)域并不直接涉及于抗體與抗原的結(jié)合，但其展現(xiàn)各種效應(yīng)子功能，例如使抗體參與抗體依賴(lài)性細(xì)胞毒性(ADCC)。[0093]本文中所使用的術(shù)語(yǔ)“高變區(qū)”是指負(fù)責(zé)抗原結(jié)合的抗體氨基酸殘基。高變區(qū)一般包含來(lái)自“互補(bǔ)決定區(qū)”或“⑶R”的氨基酸殘基(例如Vl中大約殘基24-34(LI)、50_56(L2)及89-97(L3)和丫11中大約殘基31-35B(H1)、50-65(H2)及95-102(H3)(在一實(shí)施方案中，Hl為大約31-35)；Kabat等人，同上)和/或來(lái)自“高變環(huán)”的那些殘基(例如Vl中的殘基26-32(LI)、50-52(L2)及91-96(L3)及Vh中的殘基26-32(Hl)、53-55(H2)及96-101(H3)；Chothia及Lesk，J.Mol.Biol.(分子生物學(xué)雜志)196:901-917(1987))。[0094]在本說(shuō)明書(shū)及權(quán)利要求范圍內(nèi)，當(dāng)提及可變結(jié)構(gòu)域中的殘基時(shí)，一般使用Kabat編號(hào)系統(tǒng)(大約輕鏈中的殘基1-107及重鏈中的殘基1-113)(例如Kabat等人，同上(1991))。當(dāng)提及免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)中的殘基時(shí)，一般使用“EU編號(hào)系統(tǒng)“或”EU指數(shù)“(例如Kabat等人，同上(1991)中所報(bào)道的EU指數(shù)，該文獻(xiàn)以引用的方式明確并入本文中)。除非本文中另有說(shuō)明，否則提及抗體可變結(jié)構(gòu)域中的殘基編號(hào)意思是通過(guò)Kabat編號(hào)系統(tǒng)的殘基編號(hào)。除非本文中另有說(shuō)明，否則提及抗體恒定結(jié)構(gòu)域中的殘基編號(hào)意謂通過(guò)EU編號(hào)系統(tǒng)的殘基編號(hào)。[0095]本文中所用的術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”是指自實(shí)質(zhì)上均一的抗體群落獲得的抗體，也即構(gòu)成所述群體的個(gè)別抗體除可少量存在的可能天然存在的突變外是相同的。單克隆抗體具有高特異性，是針對(duì)單一抗原位點(diǎn)。此外，與包括針對(duì)不同決定簇(抗原表位)的不同抗體的多克隆抗體制劑相比，各單克隆抗體是針對(duì)抗原上的單一決定簇。除特異性之外，單克隆抗體的優(yōu)勢(shì)還在于其可在不受其他抗體污染的情況下合成。修飾語(yǔ)“單克隆”不應(yīng)理解為需要通過(guò)任何特定方法制造抗體。舉例來(lái)說(shuō)，適用于本發(fā)明中的單克隆抗體可通過(guò)首先由Kohler等人，Nature(自然)，256=495(1975)描述的雜交瘤方法來(lái)制備，或可使用重組DNA方法在細(xì)菌、真核動(dòng)物或植物細(xì)胞中制得(參見(jiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利第4，816，567號(hào))。也可以使用Clackson等人,Nature(自然)，352:624-628(1991);Marks等人,J.Mol.Biol.(分子生物學(xué)雜志)，222:581-597(1991)中所述的技術(shù)或使用下文實(shí)施例中所描述的方法由噬菌體抗體文庫(kù)分離“單克隆抗體”。[0096]本文中的單克隆抗體包括“嵌合”抗體，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與源自特定物種或?qū)儆谔囟贵w種類(lèi)或亞類(lèi)的抗體中的相應(yīng)序列一致或同源，而所述鏈的其余部分與源自另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w種類(lèi)或亞類(lèi)的抗體中的相應(yīng)序列一致或同源；以及這些抗體的片段，只要其表現(xiàn)出本發(fā)明的生物活性即可(參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利第4，816，567號(hào)；和Morrison等人，PNASUSA，81:6851-6855(1984))。本文中的相關(guān)嵌合抗體包括“靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物化”抗體，其包含源自非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物(例如舊世界猴(OldWorldMonkey)、猿等)的可變結(jié)構(gòu)域抗原結(jié)合序列，和人類(lèi)恒定區(qū)序列。[0097]“親和力成熟”抗體是在一或多個(gè)⑶R中具有一或多種變化的抗體，與不具有那些變化的親本抗體相比，那些變化使得抗體對(duì)抗原的親和力改善。優(yōu)選親和力成熟抗體將對(duì)靶抗原具有納摩爾或甚至皮摩爾親和力。親和力成熟抗體是由本領(lǐng)域中已知的程序制備。Marks等人,Bio/Technology10:779-783(1992)描述通過(guò)VH及VL結(jié)構(gòu)域改組(shuffling)獲得的親和力成熟。CDR和/或構(gòu)架`區(qū)殘基的隨機(jī)突變于下列文獻(xiàn)中描述:Barbas等人，PNASUSA91:3809-3813(1994)；Schier等人，Gene(基因)169:147-155(1995)；Yelton等人，J.1mmunol.(免疫學(xué)雜志)155:1994-2004(1995)，Jackson等人，J.1mmunol.(免疫學(xué)雜志)154(7):3310-9(1995)；及Hawkins等人，J.Mol.Biol.(分子生物學(xué)雜志)226:889-896(1992)。[0098]“阻斷性”抗體或“拮抗性”抗體是抑制或降低所結(jié)合抗原的生物活性的抗體。舉例來(lái)說(shuō)，阻斷型或拮抗劑抗-α5βI抗體通過(guò)結(jié)合α5βI而部分或完全地抑制血管發(fā)生。[0099]“激動(dòng)性”抗體是增強(qiáng)或增加所結(jié)合抗原的生物活性的抗體。舉例來(lái)說(shuō)，激動(dòng)劑抗體抗-α5βI抗體通過(guò)結(jié)合α5βI而增強(qiáng)血管發(fā)生。[0100]“完整”抗體是包含抗原結(jié)合位點(diǎn)以及Q及至少重鏈恒定結(jié)構(gòu)域Ch1、Ch2及Ch3的抗體。恒定結(jié)構(gòu)域可以是天然序列恒定結(jié)構(gòu)域(例如人類(lèi)天然序列恒定結(jié)構(gòu)域)或其氨基酸序列變體。完整抗體優(yōu)選具有一或多種效應(yīng)子功能。[0101]“抗體片段”包含完整抗體的一部分，優(yōu)選是完整抗體的抗原結(jié)合區(qū)或可變區(qū)?？贵w片段的實(shí)例包括Fab、Fab’、F(ab’)2&Fv片段；雙抗體；線性抗體(參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利第5，641，870號(hào)，實(shí)施例2;Zapata等人，ProteinEng.8(10):1057-1062[1995]);單鏈抗體分子；及由抗體片段形成的多特異性抗體。[0102]表述“線性抗體”一般是指Zapata等人，ProteinEng.，8(10):1057-1062(1995)中所述的抗體。簡(jiǎn)言之，這些抗體包含一對(duì)串聯(lián)Fd區(qū)段(VH-CH1-VH-CH1)，其與互補(bǔ)輕鏈多肽一起形成一對(duì)抗原結(jié)合區(qū)。線性抗體可以是雙特異性或單特異性的。[0103]用木瓜蛋白酶消化抗體產(chǎn)生兩個(gè)稱(chēng)為“Fab”片段的相同抗原結(jié)合片段；和一個(gè)殘余“Fe”片段，該命名反映的容易結(jié)晶的能力。Fab片段由完整L鏈連同H鏈的可變區(qū)域(Vh)及一個(gè)重鏈的第一恒定結(jié)構(gòu)域(ChI)組成。各Fab片段對(duì)于抗原結(jié)合來(lái)說(shuō)是單價(jià)的，也即其具有單一抗原結(jié)合位點(diǎn)。用胃蛋白酶處理抗體產(chǎn)生單一的大F(ab’)2片段，其大致對(duì)應(yīng)于具有二價(jià)抗原結(jié)合活性的兩個(gè)二硫鍵連接的Fab片段并且仍能夠與抗原交聯(lián)。Fab’片段不同于Fab片段之處在于，其在ChI結(jié)構(gòu)域的羧基端具有包括一個(gè)或多個(gè)來(lái)自抗體鉸鏈區(qū)的半胱氨酸的數(shù)個(gè)額外殘基。Fab’-SH在本文中指代恒定結(jié)構(gòu)域半胱氨酸殘基帶有游離硫醇基的Fab’。F(ab’)2片段最初是中間具有鉸鏈半胱氨酸的Fab’片段對(duì)的形式產(chǎn)生的。也已經(jīng)知道抗體片段的其他的化學(xué)偶合。[0104]Fe片段包含通過(guò)二硫鍵保持在一起的兩個(gè)H鏈的羧基端部分。抗體的效應(yīng)子功能是由Fe區(qū)中的序列決定的，該區(qū)也是在某些類(lèi)型細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)的Fe受體(FcR)識(shí)別的部分。[0105]“變異Fe區(qū)”包含由于至少一種如本文中所定義的“氨基酸修飾”而與天然序列Fe區(qū)的序列不同的氨基酸序列。優(yōu)選地，與天然序列Fe區(qū)或親本多肽的Fe區(qū)相比較，變異Fe區(qū)具有至少一個(gè)氨基酸置換，例如天然序列Fe區(qū)或親本多肽的Fe區(qū)中約I至約10個(gè)氨基酸置換且優(yōu)選約I至約5個(gè)氨基酸置換。在一個(gè)實(shí)施方案中，本文中的變異Fe區(qū)將與天然序列Fe區(qū)至少約80%同源、`至少約85%同源、至少約90%同源、至少約95%同源、或至少約99%同源。根據(jù)另一實(shí)施方案，本文中的變異Fe區(qū)將與親本多肽的Fe區(qū)至少約80%同源、至少約85%同源、至少約90%同源、至少約95%同源或至少約99%同源。[0106]術(shù)語(yǔ)“包含F(xiàn)e區(qū)的多肽”是指例如抗體或免疫黏附素，包含F(xiàn)e區(qū)的多肽(參見(jiàn)下文定義)。例如，在純化多肽期間或通過(guò)重組工程改造編碼多肽的核酸來(lái)移除Fe區(qū)的C端賴(lài)氨酸(根據(jù)EU編號(hào)系統(tǒng)殘基447)。因此，包含本發(fā)明的具有Fe區(qū)的多肽(包括抗體)的組合物可包含移除所有K447殘基的多肽群體、未移除K447殘基的多肽群體或包含有K447殘基與無(wú)K447殘基的多肽的混合物的多肽群體。[0107]“Fv”是含有完整抗原識(shí)別位點(diǎn)及抗原結(jié)合位點(diǎn)的最小抗體片段。該片段由一個(gè)重鏈可變區(qū)域與一個(gè)輕鏈可變區(qū)域緊密、非共價(jià)締合的二聚體組成。由者這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域的折疊產(chǎn)生6個(gè)高變環(huán)(H鏈及L鏈各產(chǎn)生3個(gè)環(huán))，所述高變環(huán)促進(jìn)了氨基酸殘基用于抗原結(jié)合并且賦予抗體以抗原結(jié)合特異性。然而，即使單一可變結(jié)構(gòu)域(或僅包含三個(gè)對(duì)抗原特異的CDR的半個(gè)Fv)也具有識(shí)別及結(jié)合抗原的能力，但其親和力比完整結(jié)合位點(diǎn)低。[0108]“單鏈Fv”(也縮寫(xiě)為“sFv”或“scFv”)是包含連接成單一多肽鏈的Vh及Vl抗體結(jié)構(gòu)域的抗體片段。sFv多肽優(yōu)選在Vh與\結(jié)構(gòu)域之間進(jìn)一步包含多肽連接子，使得sFv能夠形成抗原結(jié)合所需的結(jié)構(gòu)。關(guān)于sFv的評(píng)述，參見(jiàn)Pluckthun,ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies(單克隆抗體藥學(xué))，第113卷，Rosenburg和Moore編，Springer-Verlag,NewYork,第269-315頁(yè)(1994);Borrebaeckl995,同下。[0109]術(shù)語(yǔ)“雙抗體”是指通過(guò)在Vh結(jié)構(gòu)域與'結(jié)構(gòu)域之間使用短連接子(約5-10個(gè)殘基)建構(gòu)sFv片段(參見(jiàn)先前段落)以使得V結(jié)構(gòu)域鏈之間而不是鏈內(nèi)配對(duì)從而產(chǎn)生二價(jià)片段，也即具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段，而制得的小抗體片段。雙特異性雙抗體是兩個(gè)“交叉”sFv片段的異二聚體，其中兩個(gè)抗體的\及\結(jié)構(gòu)域存在于不同多肽鏈上。雙抗體于例如EP404，097;W093/11161及Hollinger等人，PNASUSA,90:6444-6448(1993)中有更詳盡地描述。[0110]“人源化”抗體是非人類(lèi)(例如嚙齒動(dòng)物)抗體形式，其是含有源自非人類(lèi)抗體的最小序列的嵌合抗體。在極大程度上，人源化抗體是來(lái)自接受者的高變區(qū)的殘基經(jīng)由具有所需抗體特異性、親和力和能力的來(lái)自例如小鼠、大鼠、兔或非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物的非人類(lèi)物種(供體抗體)的高變區(qū)的殘基置換的人類(lèi)免疫球蛋白(接受者抗體)。在一些情況下，人類(lèi)免疫球蛋白的構(gòu)架區(qū)(FR)殘基經(jīng)相應(yīng)的非人類(lèi)殘基置換。此外，人源化抗體可以包含接受者抗體或供體抗體中未發(fā)現(xiàn)的殘基。進(jìn)行這些修飾以進(jìn)一步改善抗體效能。一般而言，人源化抗體將包含實(shí)質(zhì)上所有的至少一個(gè)且通常兩個(gè)可變結(jié)構(gòu)域，其中所有的或者實(shí)質(zhì)上所有的高變環(huán)對(duì)應(yīng)于非人類(lèi)免疫球蛋白的高變環(huán)，并且所有的或?qū)嵸|(zhì)上所有的FR是人類(lèi)免疫球蛋白序列的FR。人源化抗體視情況也將包含免疫球蛋白恒定區(qū)(Fe)的至少一部分，通常人類(lèi)免疫球蛋白恒定區(qū)的至少一部分。關(guān)于其他細(xì)節(jié)，參見(jiàn)Jones等人，Nature(自然)321:522-525(1986);Riechmann等人，Nature(自然)332:323-329(1988)和Presta,Curr.0p.Struct.Biol.2:593-596(1992)。[0111]“物種依賴(lài)性抗體”是對(duì)來(lái)自第一哺乳動(dòng)物物種的抗原的結(jié)合親和力比其對(duì)與其同源物一來(lái)自第二哺乳動(dòng)物物種的結(jié)合親和力強(qiáng)的抗體。通常，物種依賴(lài)性抗體“特異性結(jié)合”至人類(lèi)抗原(也即，結(jié)合親和力(Kd)值不超過(guò)約1父101、不超過(guò)約1父101或不超過(guò)約IX10_9M)，但對(duì)來(lái)自第二非人類(lèi)哺乳動(dòng)物物種的該抗原同源物的結(jié)合親和力比其對(duì)人類(lèi)抗原的結(jié)合親和力弱至`少約50倍或至少約500倍或至少約1000倍。物種依賴(lài)性抗體可以是如上定義的各種類(lèi)型抗體中的任一種，但優(yōu)選是人源化或人類(lèi)抗體。[0112]在這些實(shí)施方案中，如由流式細(xì)胞分選(FACS)分析或放射免疫沉淀(RIA)測(cè)定，多肽、抗體、拮抗劑或組合物與“非靶”蛋白的結(jié)合程度將比多肽、抗體、拮抗劑或組合物與其特定靶蛋白的結(jié)合程度小約10%。關(guān)于多肽、抗體、拮抗劑或組合物與靶分子的結(jié)合，術(shù)語(yǔ)“特異性結(jié)合”或“特異性結(jié)合至”特定多肽或特定多肽靶標(biāo)上的抗原表位或者對(duì)特定多肽或特定多肽靶標(biāo)上的抗原表位“具特異性”是指結(jié)合與非特異性相互作用具有可測(cè)量程度的差異?？梢岳?，通過(guò)與對(duì)照分子，一般是不具有結(jié)合活性的類(lèi)似結(jié)構(gòu)的分子的結(jié)合的比較，來(lái)測(cè)定分子的結(jié)合進(jìn)而測(cè)量特異性結(jié)合。舉例來(lái)說(shuō)，可通過(guò)與類(lèi)似于靶標(biāo)的對(duì)照分子(例如過(guò)量的未經(jīng)標(biāo)記靶標(biāo))競(jìng)爭(zhēng)來(lái)測(cè)定特異性結(jié)合。在此情況下，若經(jīng)標(biāo)記靶標(biāo)與探針的結(jié)合由過(guò)量未經(jīng)標(biāo)記靶標(biāo)競(jìng)爭(zhēng)性抑制，則指示特異性結(jié)合。如本文中所用的術(shù)語(yǔ)“特異性結(jié)合”或“特異性結(jié)合至”特定多肽或特定多肽靶標(biāo)上的抗原表位或?qū)μ囟ǘ嚯幕蛱囟ǘ嚯陌袠?biāo)上的抗原表位“其特異性”可由例如分子對(duì)靶標(biāo)的Kd是至少約10_4M、至少約10_5M、至少約10-6Μ、至少約10-7Μ、至少約10-8Μ、至少約10-9Μ、或者至少約ΙΟ,Μ、至少約10-ηΜ、至少約KT12M或更高來(lái)表現(xiàn)。在一實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)“特異性結(jié)合”是指分子結(jié)合至特定多肽或特定多肽上的抗原表位而實(shí)質(zhì)上不結(jié)合至任何其他多肽或多肽抗原表位的結(jié)合。[0113]抗體“效應(yīng)子功能”是指可歸因于抗體的Fe區(qū)(天然序列Fe區(qū)或氨基酸序列變異Fe區(qū))的那些生物活性，且其隨抗體同種型而變化?？贵w效應(yīng)子功能的實(shí)例包括Clq結(jié)合及補(bǔ)體依賴(lài)性細(xì)胞毒性Fe受體結(jié)合；抗體依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC);吞噬作用；細(xì)胞表面受體的下調(diào)'及B細(xì)胞活化。“天然序列Fe區(qū)”包含與自然界中發(fā)現(xiàn)的Fe區(qū)的氨基酸序列一致的氨基酸序列。Fe序列的實(shí)例于例如，但不限于，Kabat等人，同上(1991)中描述。[0114]關(guān)于本文中所鑒別的多肽及抗體序列的“氨基酸序列一致性百分比(%)”或“同源性”定義是在將任何保守性置換視作序列一致性的一部分對(duì)序列進(jìn)行比對(duì)之后，候選序列中與經(jīng)比較的多肽的氨基酸殘基一致的氨基酸殘基百分比。為測(cè)定氨基酸序列一致性百分比而進(jìn)行的比對(duì)可以用本領(lǐng)域中的多種方式達(dá)成，例如使用可公開(kāi)獲得的計(jì)算機(jī)軟件，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟件。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定用于測(cè)量比對(duì)的適合參數(shù)，包括在所比較序列的全長(zhǎng)上實(shí)現(xiàn)最大比對(duì)所需的任何算法。然而，為達(dá)成本文的目的，氨基酸序列一致性百分比值是使用序列比較計(jì)算機(jī)程序ALIGN-2產(chǎn)生。ALIGN-2序列比較計(jì)算機(jī)程序是由Genentech,Inc.編寫(xiě)且源代碼已經(jīng)與使用者文件一起歸檔于美國(guó)版權(quán)辦公室(U.S.CopyrightOffice,WashingtonD.C.，20559)，在其中其是以美國(guó)版權(quán)登記號(hào)第TXU510087號(hào)登記。ALIGN-2程序可以通過(guò)Genentech,Inc.(SouthSanFrancisco,California)公開(kāi)獲得。ALIGN-2程序應(yīng)經(jīng)編譯以用于UNIX操作系統(tǒng)，優(yōu)選數(shù)字UNIXV4.0D。所有序列比較參數(shù)由ALIGN-2程序設(shè)定且不改變。[0115]術(shù)語(yǔ)“Fe受體”或“FcR”是用于描述與抗體的Fe區(qū)結(jié)合的受體。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的FcR是結(jié)合IgG抗體的FcR(y受體)并且包括FeyR1、FeYRII及FcyRIII亞類(lèi)的受體，包括這些受體的等位基因變體及可變剪接形式。FcyRII受體包括FeYRIIA(“活化受體”)及FeYRIIB(“抑制受體”)，其主要差異在其細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域的相似氨基酸序列。活化受體FeYRIIA的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域中含有基于免疫受體酪氨酸的活化基兀(immunoreceptortyrosine-basedactivationmotif,ITAM)。抑制受體FeYRIIB的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域中含有基于免疫受體酪氨酸的抑制基元(immunoreceptortyrosine-basedinhibitionmotif,ITIM)(參見(jiàn)評(píng)述M.1nDaeroil?Annu.Rev.Tmmunol.(免疫學(xué)年度綜述)15:203-234(1997))。該術(shù)語(yǔ)包括異型，例如FeYRIIIA異型FeYRIIIA-Phe158、FeYRIIIA-Vall58,FeyRIIA-R131和/或FcyRIIA_H131。FcR于Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Tmmunol(免疫學(xué)年度綜述)9:457-92(1991)；CapeI等人，Immunomethods(免疫方法)4:25-34(1994);和deHaas等人，J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)中評(píng)述。本文中的術(shù)語(yǔ)“FcR”涵蓋其他FcR包括將來(lái)鑒別的那些FcR。該術(shù)語(yǔ)也包括新生兒受體FcRn，其負(fù)責(zé)將母體IgG轉(zhuǎn)移至胎兒(Guyer等人，J.1mmunol.(免疫學(xué)雜志)117:587(1976)及Kim等人，J.1mmunol.(免疫學(xué)雜志)24:249(1994))。[0116]術(shù)語(yǔ)”FcRn”是指新生兒Fe受體(FcRn)。FcRn在結(jié)構(gòu)上與主要組織相容性復(fù)合物(MHC)類(lèi)似且由非共價(jià)結(jié)合至β2-微球蛋白的α鏈組成。新生兒Fe受體FcRn的多種功能于Ghetie及Ward(2000)Annu.Rev.Tmmunol.(免疫學(xué)年度綜述)18,739-766中評(píng)述。FcRn在免疫球蛋白IgG自母體至幼體的被動(dòng)傳遞及血清IgG水平的調(diào)控中發(fā)揮作用。FcRn可充當(dāng)救助受體，以完整形式結(jié)合并轉(zhuǎn)運(yùn)在細(xì)胞內(nèi)以及橫跨細(xì)胞的胞飲IgG，且通過(guò)默認(rèn)的降解途徑將其援救。[0117]W000/42072(Presta)和Shields等人，J.Biol.Chem.(生物化學(xué)雜志)9(2):6591-6604(2001)描述與FcR的結(jié)合改善或減少的抗體變體。那些公開(kāi)的內(nèi)容特定地以引用的方式并入本文中。[0118]人類(lèi)IgGFe區(qū)的“CH1結(jié)構(gòu)域”(也稱(chēng)作“H1”結(jié)構(gòu)域的“Cl”)通常從約氨基酸118延伸至約氨基酸215(EU編號(hào)系統(tǒng))。[0119]“鉸鏈區(qū)”一般定義是從人類(lèi)IgGl的Glu216延伸至Pro230(Burton,Molec.1mmunol.(分子免疫學(xué))22:161-206(1985))。通過(guò)將形成重鏈間S-S鍵的第一個(gè)和最后一個(gè)的半胱氨酸殘基置于相同位置可使其他IgG同種型的鉸鏈區(qū)與IgGl序列比對(duì)。[0120]Fe區(qū)的“下部鉸鏈區(qū)”通常定義為與鉸鏈區(qū)的C端緊鄰的殘基段，也即Fe區(qū)的殘基233至239。在先前的報(bào)道中，F(xiàn)cR結(jié)合一般是由于IgGFe區(qū)下部鉸鏈區(qū)中的氨基酸殘基。[0121]人類(lèi)IgGFe區(qū)的“CH2結(jié)構(gòu)域”(也稱(chēng)作“H2”結(jié)構(gòu)域的“C2”)通常自約氨基酸231延伸至約氨基酸340。CH2結(jié)構(gòu)域的獨(dú)特之處在于其并不與另一結(jié)構(gòu)域緊密配對(duì)。而是兩個(gè)N連接的分支糖鏈插入完整的天然IgG分子的兩個(gè)CH2結(jié)構(gòu)域之間。已推測(cè)糖類(lèi)可提供結(jié)構(gòu)域_結(jié)構(gòu)域配對(duì)的替代并且?guī)椭€(wěn)定CH2結(jié)構(gòu)域。Burton,Molec.1mmunol.(分子免疫學(xué))22:161-206(1985)。[0122]“CH3結(jié)構(gòu)域”(也稱(chēng)作“C2”或“H3”結(jié)構(gòu)域)包含F(xiàn)e區(qū)中CH2結(jié)構(gòu)域C端的殘基段(也即約氨基酸殘基341至抗體序列的C端，通常在IgG的氨基酸殘基446或447處)。[0123]“功能性Fe區(qū)”具有天然序列Fe區(qū)的效應(yīng)子功能”。示例性的“效應(yīng)子功能”包括Clq結(jié)合；補(bǔ)體依賴(lài)性細(xì)胞毒性；Fc受體結(jié)合；抗體依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細(xì)胞表面受體(例如B細(xì)胞受體；BCR)的下調(diào)等。這些效應(yīng)子功能一般需要Fe區(qū)與結(jié)合結(jié)構(gòu)域(例如抗體可變結(jié)構(gòu)域)組合并且可以例如使用如本文中所揭示的各種測(cè)定來(lái)評(píng)定。[0124]“Clq”是包括免疫球蛋白的Fe區(qū)的結(jié)合位點(diǎn)的多肽。Clq與兩種絲氨酸蛋白酶Clr及Cls—起形成復(fù)合物Cl，其是補(bǔ)體依賴(lài)性細(xì)胞毒性(⑶C)途徑的第一組份。人類(lèi)Clq可購(gòu)自例如Quidel,SanDiego,CA。[0125]術(shù)語(yǔ)“結(jié)合結(jié)構(gòu)域”是指結(jié)合至另一分子的多肽區(qū)域。在FcR的情況下，結(jié)合結(jié)構(gòu)域可包含負(fù)責(zé)結(jié)合Fe區(qū)的其多肽鏈(例如其α鏈)的一部分。一種有用的結(jié)合結(jié)構(gòu)域是FcRa鏈的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。[0126]具有擁有“改變”的FcR結(jié)合親和力或ADCC活性的變異IgGFe的抗體或肽體是與親本多肽或包含天然序列Fe區(qū)的多肽相比，具有增強(qiáng)或減低的FcR結(jié)合活性(例如FcyR或FcRn)和/或ADCC活性的抗體或肽體。“表現(xiàn)增加的結(jié)合”至FcR的變體的Fe以高于親本多肽或天然序列IgGFe的親和力(例如表觀Kd或IC50值較低)結(jié)合至少一種FcR。根據(jù)一些實(shí)施方案，與親本多肽相比，結(jié)合提高約3倍，優(yōu)選約5倍、10倍、25倍、50倍、60倍、100倍、150倍、200倍、250倍、300倍、350倍、400倍、450倍或500倍，或結(jié)合提高約25%至1000%。“表現(xiàn)減少的結(jié)合”至FcR的多肽變體以低于親本多肽的親和力(例如表觀Kd或IC50值較高)結(jié)合至少一種FcR。與親本多肽相比，結(jié)合減少可以是約5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%或更多的結(jié)合減少。[0127]“抗體依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性”或“ADCC”指一種細(xì)胞毒性形式，其中分泌Ig與存在于某些細(xì)胞毒性細(xì)胞(例如自然殺傷(NK)細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞)上的Fe受體(FcR)結(jié)合，使這些細(xì)胞毒性效應(yīng)細(xì)胞能夠特異性結(jié)合至帶有抗原的靶細(xì)胞，并且隨后以細(xì)胞毒素殺死靶細(xì)胞?？贵w“配備”細(xì)胞毒性細(xì)胞且絕對(duì)是該殺傷所需的。用于介導(dǎo)ADCC的初級(jí)細(xì)胞、NK細(xì)胞僅表達(dá)FeYRIII，而單核細(xì)胞表達(dá)FeYR1、FcYRII及FeYRIII。FcR在造血細(xì)胞上的表達(dá)總結(jié)于Ravetch和Kinet,Annu.Rev.1mmunol(免疫學(xué)年度綜述)9:457-92(1991)第464頁(yè)上的表3中。為評(píng)價(jià)相關(guān)分子的ADCC活性，可進(jìn)行體外ADCC測(cè)定，例如美國(guó)專(zhuān)利第5，500,362號(hào)或第5，821，337號(hào)或下文實(shí)施例中所述的測(cè)定。適用于這些測(cè)定的效應(yīng)細(xì)胞包括外周血單核細(xì)胞(PBMC)及自然殺傷(NK)細(xì)胞?；蛘?，或另外，可體內(nèi)，例如在例如Clynes等人，PNAS(USA)95:652-656(1998)中所揭示的動(dòng)物模型中評(píng)價(jià)相關(guān)分子的ADCC活性。[0128]當(dāng)測(cè)定中具有變異Fe區(qū)的多肽與具有野生型Fe區(qū)的多肽(或親本多肽)的量基本上相同時(shí)，與具有野生型IgGFe的多肽或親本多肽相比，在人類(lèi)效應(yīng)細(xì)胞存在下“表現(xiàn)增加的ADCC”或更有效介導(dǎo)抗體依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)的包含變異Fe區(qū)的多肽，是體外或體內(nèi)實(shí)質(zhì)上更有效介導(dǎo)ADCC的多肽。一般而言，這些變體將使用如本文中所揭示的體外ADCC測(cè)定來(lái)鑒別，但涵蓋例如在動(dòng)物模型等中測(cè)定ADCC活性的其他測(cè)定或方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，優(yōu)選變體在介導(dǎo)ADCC方面比野生型Fe(或親本多肽)有效約5倍至約100倍，例如約25倍至約50倍。[0129]“補(bǔ)體依賴(lài)性細(xì)胞毒性”或“CDC”是指在補(bǔ)體存在下溶解靶細(xì)胞。經(jīng)典補(bǔ)體活化途徑是通過(guò)補(bǔ)體系統(tǒng)的第一組份(Clq)結(jié)合至與其同源抗原結(jié)合的(適當(dāng)亞類(lèi)的)抗體起始。為評(píng)定補(bǔ)體活化，可進(jìn)行⑶C測(cè)定,例如如Gazzano-Santoro等人，J.1mmunol.Methods(免疫學(xué)方法雜志)202:163(1996)中所述。[0130]具有已變化的Fe區(qū)氨基酸序列和增加或降低的Clq結(jié)合能力的多肽變體描述于美國(guó)專(zhuān)利第6，194,551號(hào)及TO99/51642中。那些專(zhuān)利公開(kāi)的內(nèi)容特定地以引用的方式并入本文中。也參見(jiàn)Idusogie等人，J.1mmunol.(免疫學(xué)雜志)164:4178-4184(2000)。[0131]“人類(lèi)效應(yīng)細(xì)胞”是表達(dá)一個(gè)或多個(gè)FcR且執(zhí)行效應(yīng)子功能的白細(xì)胞。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，所述細(xì)胞至少表達(dá)FeYRIII，并且執(zhí)行ADCC效應(yīng)子功能。介導(dǎo)ADCC的人類(lèi)白細(xì)胞的實(shí)例包括外周血單核細(xì)胞(PBMC)、自然殺傷(NK)細(xì)胞、單核細(xì)胞、細(xì)胞毒性T細(xì)胞及嗜中性粒細(xì)胞；其中PBMC及NK細(xì)胞較佳。效應(yīng)細(xì)胞可自其天然來(lái)源分離，例如自如本文中所述的血液或PBMC分離。[0132]測(cè)量與FcRn的結(jié)合的方法是已知的(參見(jiàn)例如Ghetiel997，Hinton2004)。人類(lèi)FcRn高親和力結(jié)合多肽與人類(lèi)FcRn的體內(nèi)結(jié)合以及血清半衰期，可例如在表達(dá)人類(lèi)FcRn的轉(zhuǎn)基因小鼠或轉(zhuǎn)染人類(lèi)細(xì)胞系中測(cè)定，或在經(jīng)施用Fe變異多肽的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中測(cè)定。在一個(gè)實(shí)施方案中，特定的具有變異IgGFe的本發(fā)明抗-α5βI抗體，與具有野生型IgGFe的多肽相比，表現(xiàn)出對(duì)人類(lèi)FcRn的結(jié)合親和力增加至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少100倍、至少125倍、至少150倍。在一特定實(shí)施方案中，對(duì)人類(lèi)FcRn的結(jié)合親和力增加約170倍。[0133]在一個(gè)實(shí)施方案中，關(guān)于對(duì)FcRn的結(jié)合親和力，多肽的EC50或表觀Kd(在ρΗ6.0)小于IμΜ，優(yōu)選地小于或等于ΙΟΟηΜ，更優(yōu)選小于或等于10nM。在一實(shí)施方案中，關(guān)于對(duì)FcyRIII(F158，也即低親和力同種型)增加的結(jié)合親和力，EC50或表觀Kd小于或等于IOnM且對(duì)于FeYRIII(V158;高親和力同種型)，EC50或表觀Kd小于或等于3nM。根據(jù)另一實(shí)施方案，若測(cè)試抗體與對(duì)照抗體結(jié)合曲線的中點(diǎn)處吸光值的比率(例如A45Clnm(ft#)/A450nm(對(duì)照抗體))小于或等于40%，則相對(duì)于對(duì)照抗體(例如Herceptin?抗體)，抗體與Fe受體結(jié)合的降低可看作相對(duì)于對(duì)照抗體顯著。根據(jù)另一實(shí)施方案，若測(cè)試抗體與對(duì)照抗體結(jié)合曲線的中點(diǎn)處吸光值的比率(例如A45(lnm(_)/A45(lnmWM_))大于或等于125%,則相對(duì)于對(duì)照抗體(例如Herceptin?抗體)，抗體與Fe受體結(jié)合的增加可視作相對(duì)于對(duì)照抗體顯著。[0134]“親本多肽”或“親本抗體”是包含滿足以下的氨基酸序列的多肽或抗體:自該氨基酸序列產(chǎn)生的變異多肽或抗體，并且針對(duì)該氨基酸序列對(duì)變異多肽或抗體進(jìn)行比較。通常親本多肽或親本抗體缺乏一個(gè)或多個(gè)本文中所揭示的Fe區(qū)修飾，且與本文中所揭示的多肽變體效應(yīng)子功能不同。親本多肽可包含天然序列Fe區(qū)或具有預(yù)先存在的氨基酸序列修飾(例如添加、缺失和/或置換)的Fe區(qū)。[0135]本發(fā)明抗體可源自噬菌體展示。本文中所用“文庫(kù)”是指復(fù)數(shù)個(gè)抗體或抗體片段序列，或編碼這些序列的核酸，所述序列在根據(jù)本發(fā)明方法引入這些序列中的變異氨基酸的組合方面不同。[0136]“噬菌體展示”是使變異多肽以與衣殼蛋白的至少一部分以融合蛋白的形式展示于噬菌體(例如絲狀噬菌體)顆粒表面上的技術(shù)。噬菌體展示的效用在于可從隨機(jī)化蛋白質(zhì)變體的龐大文庫(kù)中快速且有效地分選那些以高親和力結(jié)合至靶抗原的序列。在噬菌體上的展示肽和蛋白質(zhì)文庫(kù)已經(jīng)用來(lái)在數(shù)百萬(wàn)多肽中篩選具有特異性結(jié)合性質(zhì)的多肽。多價(jià)噬菌體展示方法已用于通過(guò)與絲狀噬菌體的基因III或基因VIII融合來(lái)展示小隨機(jī)肽和小蛋白質(zhì)。Wells及Lowman,Curr.0pin.Struct.Biol.(當(dāng)前結(jié)構(gòu)生物學(xué)觀點(diǎn))3:355-362(1992)及其中所引用的參考文獻(xiàn)。在單價(jià)噬菌體展示中，使蛋白質(zhì)或肽文庫(kù)融合至基因III或其一部分，在野生型基因III蛋白質(zhì)存在下，以低程度表達(dá)，使得噬菌體顆粒展示融合蛋白的一個(gè)拷貝或不展示。相對(duì)于多價(jià)噬菌體而言，親和力作用降低，因此分選基于固有配體親和力，并`且使用簡(jiǎn)化了DNA操作的噬菌粒載體。Lowman及Wells,Methods:AcompaniontoMethodsinEnzymology(方法:酶學(xué)方法手冊(cè))，3:205-0216(1991)。[0137]“噬菌?！笔蔷哂欣鏑olEl的細(xì)菌復(fù)制起點(diǎn)及噬菌體的基因區(qū)拷貝的質(zhì)粒載體。噬菌?？捎糜谌魏我阎氖删w，包括絲狀噬菌體和人字形噬菌體。質(zhì)粒一般也將含有抗生素抗性的可篩選標(biāo)志。克隆至這些載體中的DNA區(qū)段可以以質(zhì)粒復(fù)制。當(dāng)含有這些載體的細(xì)胞具有產(chǎn)生噬菌體顆粒所需的所有基因時(shí)，質(zhì)粒的復(fù)制模式變?yōu)闈L環(huán)復(fù)制(rollingcirclereplication)以產(chǎn)生質(zhì)粒DNA的一條鏈的拷貝，且包裝卩遼菌體顆粒。卩遼菌?？尚纬筛腥拘曰蚍歉腥拘允删w顆粒。該術(shù)語(yǔ)包括含有噬菌體衣殼蛋白基因或其片段的連接至異源多肽基因形成融合體，以使得所述異源多肽展示于噬菌體顆粒表面上的噬菌粒。[0138]術(shù)語(yǔ)“噬菌體載體”是指含有異源基因并且能夠復(fù)制的噬菌體的雙鏈復(fù)制形式。噬菌體載體具有允許噬菌體復(fù)制及噬菌體顆粒形成的噬菌體復(fù)制起點(diǎn)。噬菌體優(yōu)選是絲狀噬菌體，例如M13、fl、fd、Pf3噬菌體或其衍生物；或λ形噬菌體，例如λ、21、phi80、phi81、82、424、434等或其衍生物。[0139]多肽，例如肽體、免疫黏附素、抗體和短肽，的共價(jià)修飾包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。共價(jià)修飾的一種類(lèi)型包括使多肽的靶向氨基酸殘基與有機(jī)衍生物反應(yīng)，該有機(jī)衍生物能夠與多肽的所選的側(cè)鏈或N端或C端殘基反應(yīng)。以雙功能劑衍生適用于，例如將多肽和用于純化抗體的方法中的水不溶性持基質(zhì)或表面交聯(lián)，并且反之亦然。常用交聯(lián)劑包括例如1，1-雙(重氮乙?；?-2-苯基乙烷、戊二醛、N-羥基-琥珀酰亞胺酯，例如與4-疊氮基水楊酸形成的酯)、同質(zhì)雙官能酰亞胺酯，包括二琥珀酰亞胺基酯，例如3，3’-二硫代雙(琥珀酰亞胺基丙酸酯)、雙官能順丁烯二酰亞胺，例如雙-N-順丁二烯二酰亞胺基-1，8-辛烷)及例如甲基-3-[(對(duì)疊氮基苯基)二硫基]丙酰亞胺酯的試劑。[0140]其他修飾包括谷氨酰胺?；疤於０孵；鶜埢謩e脫酰胺化成相應(yīng)谷氨?；疤於滨；鶜埢桓彼峒百?lài)氨酸的羥化；絲氨酰基或蘇氨?；鶜埢慕?jīng)基的磷酸化；賴(lài)氨酸、精氨酸及組氨酸側(cè)鏈的α-氨基的甲基化[Τ.Ε.Creighton,Proteins:StructureandMolecularProperties(蛋白質(zhì):結(jié)構(gòu)矛口分子特十牛),W.H.Freeman&C0.，SanFrancisco，第79-86頁(yè)(1983)];N端氨的乙?；?；及任何C端羧基的酰胺化。[0141]其他修飾包括毒素與拮抗劑綴合，例如美坦生及美坦生類(lèi)化合物、加利車(chē)霉素及其他細(xì)胞毒性劑。[0142]多肽的共價(jià)修飾的另一類(lèi)型包含以美國(guó)專(zhuān)利第4，640，835號(hào)、第4，496，689號(hào)、第4，301，144號(hào)、第4，670，417號(hào)、第4，791，192號(hào)或第4，179，337號(hào)中所述的方式使多肽連接至多種非蛋白質(zhì)聚合物，例如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇或聚環(huán)氧烷之一。[0143]如果有利，也可以形成包含與另一異源多肽或氨基酸序列(例如免疫黏附素或肽體)融合的多肽的嵌合分子的方式來(lái)修飾本發(fā)明多肽。[0144]在一個(gè)實(shí)施方案中，該嵌合分子包含多肽與蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的融合體，其使用例如人類(lèi)免疫缺陷病毒TAT蛋白的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域靶向多肽以傳遞至多個(gè)組織，并且更特定的穿過(guò)腦血障壁(Sc`hwarze等人，1999,Science(科學(xué))285:1569-72)。[0145]在另一實(shí)施方案中，該嵌合分子包含多肽與標(biāo)簽多肽的融合體，標(biāo)簽多肽提供了抗標(biāo)簽抗體能夠選擇性結(jié)合的抗原表位。一般將抗原表位標(biāo)簽置于多肽的氨基端或羧基端?？墒褂冕槍?duì)標(biāo)簽多肽的抗體檢測(cè)多肽的這些表位標(biāo)簽形式的存在。又，提供抗原表位標(biāo)簽使得多肽能夠輕易地使用抗標(biāo)簽抗體或另一類(lèi)型的結(jié)合至抗原表位標(biāo)簽的親和力基質(zhì)通過(guò)親和純化純化。本領(lǐng)域中已知多種標(biāo)簽多肽及其相應(yīng)抗體。實(shí)例包括聚-組氨酸(poly-His)或聚-組氨酸-甘氨酸(poly-His-gly)；fluHA標(biāo)簽多肽及其抗體12CA5[Field等人，Mol.Cell.Biol.(分子和細(xì)胞生物學(xué))，8:2159-2165(1988)]；c-myc標(biāo)簽及其8F9、3C7、6E10、G4、B7及9E10抗體[Evan等人，MolecularandCellularBiology(分子和細(xì)胞生物學(xué))，5:3610-3616(1985)];及單純性皰疹病毒糖蛋白D(gD)標(biāo)簽及其抗體[Paborsky等人，ProteinEngineering(蛋白質(zhì)工程),3(6):547-553(1990)]。其他標(biāo)簽多肽包括Flag-肽[Hopp等人，BioTechnology(生物技術(shù))，6:1204-1210(1988)]；KT3抗原表位肽[Martin等人，Science(科學(xué)),255:192-194(1992)];α-微管蛋白抗原表位肽[Skinner等人，J.Biol.Chem.(生物化學(xué)雜志),266:15163-15166(1991)];及T7基因10蛋白肽標(biāo)簽[Lutz-Freyermuth等人，PNASUSA，87:6393-6397(1990)]。[0146]在一替代實(shí)施方案中，嵌合分子可包含多肽與免疫球蛋白或免疫球蛋白的特定區(qū)域的融合體。對(duì)于嵌合分子(例如“免疫黏附素”)的二價(jià)形式而言，該融合體可以是與IgG分子的Fe區(qū)的融合體。本發(fā)明的Ig融合體包括包含大約或僅人類(lèi)殘基94-243、殘基33-53或殘基33-52替代Ig分子內(nèi)的至少一個(gè)可變區(qū)的多肽。在一特定實(shí)施方案中，免疫球蛋白融合體包括IgGl分子的鉸鏈、CH2及CH3區(qū)，或鉸鏈、CH1、CH2及CH3區(qū)。關(guān)于免疫球蛋白融合體的制備，也參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利第5，428，130號(hào)。[0147]本發(fā)明提供抑制或預(yù)防復(fù)發(fā)性腫瘤生長(zhǎng)或復(fù)發(fā)性癌細(xì)胞生長(zhǎng)的方法及組合物。在各種實(shí)施方案中，癌癥是復(fù)發(fā)性腫瘤生長(zhǎng)或復(fù)發(fā)性癌細(xì)胞生長(zhǎng)，其中癌細(xì)胞數(shù)目未顯著減少或已增多，或腫瘤尺寸未顯著減小或已增大，或癌細(xì)胞尺寸未能有任何進(jìn)一步減小或癌細(xì)胞數(shù)目未能有任何進(jìn)一步減少?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域中已知用于測(cè)定對(duì)癌細(xì)胞治療的有效性的任何方法體內(nèi)或體外確定癌細(xì)胞是否是復(fù)發(fā)性腫瘤生長(zhǎng)或復(fù)發(fā)性癌細(xì)胞生長(zhǎng)。對(duì)抗-VEGF治療有抗性的腫瘤是復(fù)發(fā)性腫瘤生長(zhǎng)的例子。[0148]本文中所揭示的多肽、抗體、拮抗劑或者組合物的“有效量”是足以實(shí)施特定的聲稱(chēng)的目的的量?！坝行Я俊笨筛鶕?jù)經(jīng)驗(yàn)及通過(guò)關(guān)于所述目的的已知方法確定。[0149]術(shù)語(yǔ)“治療有效量”是指本發(fā)明的抗體、多肽或拮抗劑可有效“治療”哺乳動(dòng)物(aka患者)的疾病或病癥的量。在癌癥的情況下，治療有效量的藥物可減少癌細(xì)胞的數(shù)目減小腫瘤尺寸或重量；抑制(也即，在一定程度上減緩且優(yōu)選終止)癌細(xì)胞浸潤(rùn)至周邊器官中；抑制(也即，在一定程度上減緩且優(yōu)選終止)腫瘤轉(zhuǎn)移；在一定程度上抑制腫瘤生長(zhǎng)；和/或在一定程度上緩解與癌癥相關(guān)的一或多種癥狀。對(duì)于藥物可防止現(xiàn)有癌細(xì)胞生長(zhǎng)和/或殺死現(xiàn)有癌細(xì)胞的程度而言，藥物可以是細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑和/或細(xì)胞毒性劑。在一實(shí)施方案中，治療有效量是生長(zhǎng)抑制量。在另一實(shí)施方案中，治療有效量是延長(zhǎng)患者存活期的量。在另一實(shí)施例中，治療有效量是改善患者的無(wú)進(jìn)展存活的量。[0150]在創(chuàng)傷愈合的情況下，術(shù)語(yǔ)“有效量”或“治療有效量”是指可以有效加速或改善受試者創(chuàng)傷愈合的藥物量。治療劑量是對(duì)患者表現(xiàn)治療作用的劑量，并且低于治療劑量(sub-therapeuticdose)是對(duì)所治療患者不表現(xiàn)治療作用的劑量。[0151]“慢性創(chuàng)傷”是指不愈合的創(chuàng)傷。參見(jiàn)例如Lazarus等人，Definitionsandguidelinesforassessmentofwoundsandevaluationofhealing(評(píng)估創(chuàng)傷和評(píng)價(jià)愈合的定義和指南)，Arch.Dermatol.130:489-93(1994)。慢性創(chuàng)傷包括,但不限于,例如動(dòng)脈潰瘍(arterialulcers)、糖尿病性潰瘍(diabeticulcers)、壓力性潰瘍(pressureulcers)、靜脈潰瘍(venousulcers)等。急性創(chuàng)傷可發(fā)展成慢性創(chuàng)傷。急性創(chuàng)傷包括，但不限于，由例如熱損傷、外傷、外科手術(shù)、大范圍皮膚癌切除、深度真菌及細(xì)菌感染、血管炎(vasculitis)、硬皮病(scleroderma)、天皰瘡(pemphigus)、中毒性表皮壞死溶解(toxicepidermalnecrolysis)等引起的創(chuàng)傷。參見(jiàn)例如Buford,WoundHealingandPressureSores(創(chuàng)傷愈合和壓力性疼痛)，Healingffel1.com,出版于2001年10月24日?！捌胀▌?chuàng)傷”是指經(jīng)歷普通創(chuàng)傷愈合修復(fù)的創(chuàng)傷。[0152]本發(fā)明多肽、抗體、拮抗劑或是組合物的“生長(zhǎng)抑制量”是能夠體外或體內(nèi)抑制細(xì)胞，尤其腫瘤，例如癌細(xì)胞生長(zhǎng)的量。可根據(jù)經(jīng)驗(yàn)及通過(guò)已知方法或通過(guò)本文中所提供的實(shí)例來(lái)確定為抑制新生性細(xì)胞生長(zhǎng)的本發(fā)明多肽、抗體、拮抗劑或組合物的“生長(zhǎng)抑制量”。[0153]本發(fā)明多肽、抗體、拮抗劑或組合物的“細(xì)胞毒性量”是能夠體外或體內(nèi)引起細(xì)胞、尤其腫瘤例如癌細(xì)胞破壞的量。可根據(jù)經(jīng)驗(yàn)及通過(guò)本領(lǐng)域中已知的方法來(lái)確定為抑制新生性細(xì)胞生長(zhǎng)的本發(fā)明多肽、抗體、拮抗劑或組合物的“細(xì)胞毒性量”。[0154]本文中的“自身免疫病”是由受試者自身組織產(chǎn)生且針對(duì)受試者自身組織的疾病或病癥，或其共分離(co-segregate)或表現(xiàn)形式或由其產(chǎn)生的病狀。自身免疫病或病癥的例子包括，但不限于:關(guān)節(jié)炎(arthritis)(類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoidarthritis)，例如急性關(guān)節(jié)炎(acutearthritis)、慢性類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(chronicrheumatoidarthritis)、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(goutyarthritis)、急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(acutegoutyarthritis)、慢性炎性關(guān)節(jié)炎(chronicinflammatoryarthritis)、退行性關(guān)節(jié)炎(degenerativearthritis)、感染性關(guān)節(jié)炎(infectiousarthritis)、萊姆關(guān)節(jié)炎(Lymearthritis)、增生性關(guān)節(jié)炎(proliferativearthritis)、銀屑病性關(guān)節(jié)炎(psoriaticarthritis)、椎骨關(guān)節(jié)炎(vertebralarthritis)、及青少年發(fā)作型類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(juvenile-onsetrheumatoidarthritis)、骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis)、慢性漸進(jìn)性關(guān)節(jié)炎(arthritischronicaprogrediente)、變形性關(guān)節(jié)炎(arthritisdeformans)、慢性原發(fā)性多發(fā)性關(guān)節(jié)炎(polyarthritischronicaprimaria)、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎(reactivearthritis)、及僵直性脊椎炎(ankylosingspondylitis)、炎性過(guò)增生性皮膚疾病(infIammatoryhyperproliferativeskindiseases)、銀屑病(psoriasis)例如斑塊銀屑病(plaquepsoriasis)、滴狀銀屑病(gutattepsoriasis)、胺皰性銀屑病(pustularpsoriasis)、及指甲銀屑病(psoriasisofthenails)、皮炎(dermatitis)包括接觸性皮炎(contactdermatitis)、慢性接觸性皮炎(chroniccontactdermatitis)、變應(yīng)性皮炎(allergicdermatitis)、變應(yīng)性接角蟲(chóng)性皮炎(allergiccontactdermatitis)、皰疫樣皮炎(dermatitisherpetiformis)及特應(yīng)性皮炎(atopicdermatitis)、x連鎖高IgM綜合征(χ-linkedhyperIgMsyndrome)、蕁麻疫(urticaria)例如慢性特發(fā)性蕁麻疫(chronicidiopathicurticaria)，包括慢性白身免疫性蕁麻疫(chronicautoimmuneurticaria)、多發(fā)性肌炎(polymyositis)/皮肌炎(dermatomyositis)、青少年皮肌炎(juveniledermatomyositis)、中毒性表皮壞死松解癥(toxicepidermalnecrolysis)、硬皮病(scleroderma)包括系統(tǒng)性硬皮病(systemicscleroderma)、硬化癥(sclerosis)例如系統(tǒng)性硬化癥(systemicsclerosis)、多發(fā)性硬化癥(multiplesclerosis)(MS)例如脊髓-視覺(jué)(spino-optical)MS、原發(fā)性進(jìn)行性(primaryprogressive)MS及復(fù)發(fā)緩解型(relapsingremitting)MS、進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥(progressivesystemicsclerosis)、動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclero`sis)、動(dòng)脈硬化(arteriosclerosis)、播散性硬化癥(sclerosisdisseminata)及共濟(jì)失調(diào)性硬化癥(ataxicsclerosis)、炎性腸病(inflammatoryboweldisease)(IBD)(例如局限性回腸炎(Crohn’sdisease)、結(jié)腸炎(colitis)例如潰痕性結(jié)腸炎(ulcerativecolitis)、潰痕性結(jié)腸炎(colitisulcerosa)、微觀結(jié)腸炎(microscopiccolitis)、膠原性結(jié)腸炎(collagenouscolitis)、息肉狀結(jié)腸炎(colitispolyposa)、壞死性小腸結(jié)腸炎(necrotizingenterocolitis)及透壁性結(jié)腸炎(transmuralcolitis)、及自身免疫性炎性腸病(autoimmuneinflammatoryboweldisease))、壞疽性胺皮病(pyodermagangrenosum)、結(jié)節(jié)性紅斑(erythemanodosum)、原發(fā)性硬化性膽管炎(primarysclerosingcholangitis)、鞏膜外層炎(episcleritis)、呼吸窘迫綜合征(respiratorydistresssyndrome)包括成人或急性呼吸窘迫綜合征(adultoracuterespiratorydistresssyndrome)(ARDS)、腦膜炎(meningitis)、葡萄膜全部或部分發(fā)炎(inflammationofallorpartoftheuvea)、虹膜炎(iritis)、脈絡(luò)膜炎(choroiditis)、自身免疫性血液病癥(autoimmunehematologicaldisorder)、類(lèi)風(fēng)濕性脊椎炎(rheumatoidspondylitis)、突發(fā)性聽(tīng)力損失(suddenhearingloss)、IgE介導(dǎo)的疾病，例如過(guò)敏反應(yīng)(anaphylaxis)及變應(yīng)性和特異性鼻炎(allergicandatopicrhinitis)、腦炎(encephalitis)，例如拉斯穆森氏腦炎(Rasmussen’sencephalitis)及邊緣葉和/或腦干腦炎(limbicand/orbrainstemencephalitis)、葡萄膜炎(uveitis)，例如前葡萄膜炎(anterioruveitis)、急性前葡萄膜炎(acuteanterioruveitis)、肉芽腫性葡萄膜炎(granulomatousuveitis)、非肉芽腫性葡萄膜炎(nongranulomatousuveitis)、晶體狀抗原性葡萄膜炎(phacoantigenicuveitis)、后葡萄膜炎(posterioruveitis)或自身免疫性葡萄膜炎(autoimmuneuveitis)、伴有及不伴有腎病綜合征的腎小球腎炎(glomerulonephritis(GN)withandwithoutnephroticsyndrome)，例如慢性或急性腎小球腎炎(chronicoracuteglomerulonephritis)，例如原發(fā)性(primary)GN、免疫介導(dǎo)的(immune-mediated)GN、膜性(membranous)GN(膜性腎病)(membranousnephropathy)λ特發(fā)性膜性(idiopathicmembranous)GN、膜性增生性(membranousproIiferative)GN(MPGN)(包括I型及11型)及快速進(jìn)行性(rapidlyprogressive)GN)、過(guò)敏性病狀(allergicconditions)、過(guò)敏反應(yīng)(allergicreaction)、濕疫(eczema)，包括過(guò)敏性或異位性濕疫(allergicoratopiceczema)、哮喘(asthma)，例如支氣管哮喘(asthmabronchiale,bronchialasthma)及自身免疫性哮喘(auto-1mmuneasthma)、涉及T細(xì)胞浸潤(rùn)及慢性發(fā)炎反應(yīng)的病狀、慢性肺部發(fā)炎疾病(chronicpulmonaryinflammatorydisease)、自身免疫性心肌炎(autoimmunemyocarditis)、白細(xì)胞黏附缺乏(leukocyteadhesiondeficiency)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemiclupuserythematosus(SLE)orsystemiclupuserythematodes)(SLE)，例如皮膚(cutaneous)SLE、亞急性皮膚紅斑狼瘡(subacutecutaneouslupuserythematosus)、新生兒狼瘡綜合征(neonatallupussyndrome)(NLE)、播散性紅斑狼瘡(lupuserythematosusdisseminatus)、狼瘡(lupus)(包括腎炎性(nephritis)、大腦炎性(cerebritis)、兒童性(pediatric)、非腎臟性(non-renal)、圓盤(pán)狀(discoid)、脫發(fā)性(alopecia))、青少年發(fā)作型(juvenileonset)(I型)糖尿病(diabetesmellitus)，包括兒童胰島素依賴(lài)性糖尿病(pediatricinsulin-dependentdiabetesmellitus)(IDDM))、成人發(fā)作型糖尿病(adultonsetdiabetesmellitus)(II型糖尿病)、自身免疫性糖尿病(autoimmunediabetes)、特發(fā)性尿崩癥(idiopathicdiabetesinsipidus)、與由細(xì)胞激素及T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的急性及遲發(fā)超敏性相關(guān)的免疫應(yīng)答(immuneres`ponsesassociatedwithacuteanddelayedhypersensitivitymediatedbycytokinesandT-lymphocytes)、結(jié)核病(tuberculosis)、結(jié)節(jié)病(sarcoidosis)、肉芽腫病(granulomatosis)，包括淋巴瘤樣肉芽腫病(lymphomatoidgranulomatosis)、韋格納氏肉芽腫(Wegener’sgranulomatosis)、顆粒性白細(xì)胞缺乏癥(agranulocytosis)、血管病(vasculitides)，包括血管炎(vasculitis)，包括大血管血管炎(largevesselvasculitis)包括風(fēng)濕性多肌痛及巨細(xì)胞(polymyalgiarheumaticaandgiantcell)(高安(Takayasuis))動(dòng)脈炎)、中等血管血管炎(mediumvesselvasculitis)(包括川崎病(Kawasaki’sdisease)及結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎(polyarteritisnodosa)、微觀多動(dòng)脈炎(microscopicpolyarteritis)、CNS血管炎(vasculitis)、壞死性血管炎(necrotizing)、皮膚血管炎(cutaneous)或超敏性血管炎(hypersensitivityvasculitis)、系統(tǒng)性壞死性血管炎(systemicnecrotizingvasculitis)及ANCA相關(guān)血管炎(ANCA-associatedvasculitis),例如丘-施(Churg-Strauss)血管炎或綜合征(Churg-Straussvasculitisorsyndrome)(CSS))、顳動(dòng)脈炎(temporalarteritis)、再生障礙性貧血(aplasticanemia)、自身免疫性再生障石辱性貧血(autoimmuneaplasticanemia)、Coombs陽(yáng)性貧血(Coombspositiveanemia)、戴-布貧血(DiamondBlackfananemia)、溶血性貧血(hemolyticanemia)或免疫溶血性貧血(immunehemolyticanemia)(包括自身免疫性溶血性貧血(autoimmunehemolyticanemia)(AIHA)、惡性貧血(perniciousanemia(anemiaperniciosa))、艾迪生病(Addison’sdisease)、單純紅細(xì)胞性貧血(pureredcellanemia)或發(fā)育不全(aplasia)(PRCA))、因子VIII缺乏(FactorVIIIdeficiency)、A型血友病(hemophiliaA)、自身免疫性嗜中性粒細(xì)胞減少癥(autoimmuneneutropenia)、全血球減少癥(pancytopenia)、白細(xì)胞減少癥(leukopenia)、涉及白細(xì)胞滲出(leukocytediapedesis)的疾病、CNS炎性病癥(inflammatorydisorders)、多器官損傷綜合征(multipleorganinjurysyndrome)例如因敗血病(septicemia)、外傷或出血(traumaorhemorrhage)繼發(fā)的多器官損傷綜合征、抗原-抗體復(fù)合物介導(dǎo)的疾病、抗腎小球基底膜疾病(ant1-glomerularbasementmembranedisease)、抗憐月旨抗體綜合征(ant1-phospholipidantibodysyndrome)、變應(yīng)性神經(jīng)炎(allergicneuritis)、白塞病(Bechet’s/Behcet’sdisease)、卡斯?fàn)柭C合征(Castlemanissyndrome)、古德帕斯丘綜合征(Goodpasture，ssyndrome)ΛReynaudis綜合征(Reynaud，ssyndrome)、舍格倫綜合征(Sjogren，ssyndrome)、斯-約二氏綜合征(Stevens-Johnsonsyndrome)、類(lèi)天皰瘡(pemphigoid)，例如大皰性類(lèi)天皰瘡(pemphigoidbullous)及皮膚類(lèi)天皰瘡(skinpemphigoid)、天皰瘡(pemphigus)(包括尋常型天皰瘡(pemphigusvulgaris)、落葉型天皰瘡(pemphigusfoliaceus)、黏膜類(lèi)天皰瘡(pemphigusmucus-membranepemphigoid)及紅斑性天皰瘡(pemphiguserythematosus))、自身免疫性多內(nèi)分泌病(autoimmunepolyendocrinopathies)、萊特爾(Reiter’s)疾病或綜合征、免疫復(fù)合物腎炎(immunecomplexnephritis)、抗體介導(dǎo)性腎炎(antibody-mediatednephritis)、慢性神經(jīng)病(chronicneuropathy),例如IgM多發(fā)性神經(jīng)病(IgMpolyneuropathies)或IgM介導(dǎo)性神經(jīng)病(IgMnediatedneuropathy)、血小板減少癥(thrombocytopenia)(例如由心肌梗塞(myocardialinfarction)患者發(fā)展而來(lái))(包括血栓性血小板減少性紫癡(thromboticthrombocytopenicpurpura)(TTP)及自身免疫或免疫介導(dǎo)性血小板減少癥(autoimmuneorimmune-mediatedthrombocytopenia)，例如特發(fā)性血小板減少性紫癜(diopathicthrombocytopenicpurpura)(ITP)(包括慢性或急性ITP))、睪丸及卵巢的自身免疫病，包括自身免疫性睪丸炎及卵巢炎(autoimuneorchitisandoophoritis)、原發(fā)性甲狀腺功能低下(primaryhypothyroidism)、副甲狀腺低能癥(hypoparathyroidism)、自身免疫性?xún)?nèi)分泌疾病，包括甲狀腺炎(thyroiditis)例如自身免疫性甲狀腺炎(autoimmunethyroiditis)、橋本病(Hashimoto’sdisease)、慢性甲狀腺炎(chronicthyroiditis)(橋本甲狀腺炎(Hashimoto，sthyroiditis))、或亞急性甲狀腺炎(subacutethyroiditis)、自身免疫性甲狀腺疾病(autoimmunethyroiddisease)、特發(fā)性甲狀腺功能低下(idiopathichypothyroidism)、格雷夫斯病(Grave，sdisease)、多腺體綜合征(polyglandularsyndromes)例如自身免疫性多腺體綜合征(或多腺體內(nèi)分泌病綜合征)、副腫瘤綜合征(paraneoplasticsyndromes),包括神經(jīng)性副腫瘤綜合征(neurologicparaneoplasticsyndromes),例如蘭伯特-伊頓肌無(wú)力綜合征(Lambert-Eatonmyasthenicsyndrome)或伊頓-蘭伯特綜合征(Eaton-Lambertsyndrome))、僵人綜合征(stiff-manorstiff-personsyndrome)、腦脊髓炎(encephalomyelitis),例如變應(yīng)性腦脊髓炎(allergicencephalomyelitisorencephalomyelitisallergica)及實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性腦脊髓炎(experimentalallergicencephalomyelitis)(EAE)、重癥肌無(wú)力(myastheniagravis)、小腦變性(cerebellardegeneration)、神經(jīng)性肌強(qiáng)直(neuromyotonia)、眼陣攣-肌陣攣綜合征(opsoclonusoropsoclonusmyoclonussyndrome)(OMS)，及感覺(jué)神經(jīng)病(sensoryneuropathy)、希恩綜合征(Sheehan，ssyndrome)、自身免疫性肝炎(autoimmunehepatitis)、慢性肝炎(chronichepatitis)、狼瘡狀肝炎(lupoidhepatitis)、巨細(xì)胞肝炎(giantcellhepatitis)、慢性活動(dòng)性肝炎(chronicactivehepatitis)或自身免疫性慢性活動(dòng)性肝炎(autoimmunechronicactivehepatitis)、淋巴間質(zhì)月市炎(lymphoidinterstitialpneumonitis)、阻塞性細(xì)支氣管炎(非移植)對(duì)NSIP(bronchiolitisobliterans(non-transplant)vsNSIP)、吉蘭-巴雷綜合征(GuiIIain-Barresyndrome)、貝格爾病(Berger’sdisease)(IgA腎病)、特發(fā)性IgA腎病(idiopathicIgAnephropathy)、線性IgA皮膚病(linearIgAdermatosis)、原發(fā)性膽汁性月干硬化(primarybiliarycirrhosis)、肺硬變(pneumonocirrhosis)、自身免疫性腸病綜合征(autoimmuneenteropathysyndrome)、乳靡灣(Celiacdisease)、腹腔疾病(Coeliacdisease)、乳靡?寫(xiě)(麩質(zhì)性腸病)(celiacsprue(glutenenteropathy))、難治性口炎性腹灣(refractorysprue)、特發(fā)性口炎性腹?寫(xiě)(idiopathicsprue)、冷球蛋白血癥(cryoglobulinemia)、肌萎縮性側(cè)索硬化(amylotrophiclateralsclerosis)(ALS;盧?蓋里格病(LouGehrig’sdisease))、冠狀動(dòng)脈疾病(coronaryarterydisease)、自身免疫性?xún)?nèi)耳疾病(autoimmuneinnereardisease)(AIED)、或自身免疫性聽(tīng)力損失(autoimmunehearingloss)、眼陣擎肌陣擎綜合征(opsoclonusmyoclonussyndrome)(OMS)、多軟骨炎(polychondritis)，例如難治性或復(fù)發(fā)性多軟骨炎、肺泡蛋白沉積癥(pulmonaryalveolarproteinosis)、淀粉樣變性(amyloidosis)、鞏膜炎(scleritis)、非癌性淋巴細(xì)胞增多癥(non-cancerouslymphocytosis)、原發(fā)性淋巴細(xì)胞增多癥(primarylymphocytosis)，其包括單克隆B細(xì)胞淋巴細(xì)胞增多癥(monoclonalBcelllymphocytosis)(例如良性單克隆丙種球蛋白病(benignmonoclonalgammopathy`)和意義未明的單克隆丙種球蛋白病(monoclonalgarnmopathyofundeterminedsignificance)(MGUS))、外周神經(jīng)病(peripheralneuropathy)λ副腫瘤綜合征(paraneoplasticsyndrome)、離子通道病(channelopathies),例如癥痛癥(epilepsy)、偏頭痛(migraine)、心律不齊(arrhythmia)、肌肉病癥(musculardisorders)、耳聾(deafness)、失明(blindness)、周期性麻瘦(periodicparalysi)及CNS離子通道病(channelopathies)、自閉癥(autism)、炎性肌病(inflammatorymyopathy)、局部區(qū)段性腎小球硬化(focalsegmentalglomerulosclerosis)(FSGS)、內(nèi)分泌眼病(endocrineophthalmopathy)、葡萄膜視網(wǎng)膜炎(uveoretinitis)、脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎(chorioretinitis)、自身免疫性肝臟科病癥(autoimmunehepatologicaldisorder)、肌肉纖維疼痛(fibromyalgia)、多發(fā)性?xún)?nèi)分泌衰竭(multipleendocrinefailure)、施密特綜合征(Schmidt’ssyndrome)、腎上腺炎(adrenalitis)、胃萎縮(gastricatrophy)、初老期癡呆(preseniledementia)、脫髓鞘病(demyelinatingdiseases)，例如自身免疫性脫髓鞘病(autoimmunedemyelinatingdiseases)、糖尿病性腎病(diabeticnephropathy)、心肌梗死后綜合征(Dressier，ssyndrome)、斑秀(alopeciaareata)、CREST綜合征(鈣質(zhì)沉著癥(calcinosis)、雷諾現(xiàn)象(Raynaud’sphenomenon)、食道螺動(dòng)異常(esophagealdysmotility)、指端硬化(sclerodactyly)及毛細(xì)管擴(kuò)張(telangiectasia))、男性及女性自身免疫性不孕癥(maleandfemaleautoimmuneinfertility)、混合結(jié)締組織疾病(mixedconnectivetissuedisease)、恰加斯病(Chagas，disease)、風(fēng)濕熱(rheumaticfever)、反復(fù)流產(chǎn)(recurrentabortion)、農(nóng)民肺(farmer，slung)、多形性紅斑(erythemamultiforme)、心切開(kāi)術(shù)后綜合征(post-cardiotomysyndrome)、庫(kù)欣綜合征(Cushing’ssyndrome)、鳥(niǎo)愛(ài)好者肺(bird-fancier，slung)、變應(yīng)性肉芽腫性血管炎(allergicgranulomatousangiitis)、良性淋巴細(xì)胞血管炎(benignlymphocyticangiitis)、奧爾波特綜合征(Alport’ssyndrome)、肺泡炎(alveolitis)，例如過(guò)敏性肺泡炎(allergicalveolitis)及纖維化肺泡炎(fibrosingalveolitis)、間質(zhì)肺病(interstitiallungdisease)、輸血反應(yīng)(transfusionreaction)、麻風(fēng)病(leprosy)、痢疾(malaria)、利什曼體病(leishmaniasis)、維蟲(chóng)病(kypanosomiasis)、血吸蟲(chóng)病(schistosomiasis)、蟲(chóng)回蟲(chóng)病(ascariasis)、曲霉病(aspergillosis)、薩姆普特氏綜合征(Sampter’ssyndrome)、卡布蘭綜合征(Caplan’ssyndrome)、登革熱(dengue)、心內(nèi)膜炎(endocarditis)、心內(nèi)膜心肌纖維化(endomyocardialfibrosis)、彌漫性間質(zhì)性肺纖維化(diffuseinterstitialpulmonaryfibrosis)、間質(zhì)性肺纖維化(interstitiallungfibrosis)、特發(fā)性肺纖維化(idiopathicpulmonaryfibrosis)、囊腫性纖維化(cysticfibrosis)、眼內(nèi)炎(endophthalmitis)、持久性隆起性紅斑(erythemaelevatumetdiutinum)、胎兒紅血球母細(xì)胞增多癥(erythroblastosisfetalis)、嗜酸性筋膜炎(eosinophilicfaciitis)、舒爾曼綜合征(Shulman’ssyndrome)、費(fèi)爾蒂氏綜合征(Felty’ssyndrome)、絲蟲(chóng)病(flariasis)、睫狀體炎(cyclitis)，例如慢性睫狀體炎(chroniccyclitis)、異時(shí)性睫狀體炎(heterochronicc`yclitis)、蟲(chóng)工膜睫狀體炎(iridocyclitis)或富克斯睫狀體炎(Fuchiscyclitis)、亨諾赫-舍恩萊茵紫癜(Henoch-Schonleinpurpura)、人類(lèi)免疫缺乏病毒(HIV)感染、艾柯病毒感染(echovirusinfection)、心肌病(cardiomyopathy)、阿爾茨海默病(Alzheimer’sdisease)、小病毒感染(parvovirusinfection)、風(fēng)疫病毒感染(rubellavirusinfection)、疫苗接種后綜合征(post-vaccinationsyndromes)、先天性風(fēng)疫感染(congenitalrubellainfection)、埃巴病毒感染(Epstein-Barrvirusinfection)、流行性腿炎(mumps)、埃文斯綜合征(Evan’ssyndrome)、自身免疫性性腺衰竭(autoimmunegonadalfailure)、西登哈姆氏舞蹈病(Sydenham’schorea)、鏈球菌感染后腎炎(post-streptococcalnephritis)、阻塞血栓性血管炎(thromboangitisubiterans)、甲狀腺中毒癥(thyrotoxicosis)、脊髓癆(tabesdorsalis)、脈絡(luò)膜炎(chorioiditis)、巨細(xì)胞多肌痛(giantcellpolymyalgia)、內(nèi)分泌眼病(endocrineophthamopathy)、慢性過(guò)敏性肺炎(chronichypersensitivitypneumonitis)、干燥性角膜結(jié)膜炎(keratoconjunctivitissicca)、流行性角膜結(jié)膜炎(epidemickeratoconjunctivitis)、特發(fā)性腎臟綜合征(idiopathicnephriticsyndrome)、微小腎病變(minimalchangenephropathy)、良性家族性及局部缺血再灌注損傷(benignfamilialandischemia-reperfusioninjury)、視網(wǎng)膜自身免疫性(retinalautoimmunity)、關(guān)節(jié)炎癥(jointinflammation)、支氣管炎(bronchitis)、慢性阻塞性氣管疾病(chronicobstructiveairwaydisease)、娃月市(silicosis)、口瘡(aphthae)、阿弗他性口腔炎(aphthousstomatitis)、動(dòng)脈硬化病癥(arterioscleroticdisorders)、無(wú)精子產(chǎn)生癥(aspermiogenese)、自身免疫性溶血(autoimmunehemolysis)、結(jié)節(jié)病(Boeckisdisease)、冷球蛋白血癥(cryoglobulinemia)、迪皮特朗擎縮(Dupuytreniscontracture)、晶狀體過(guò)敏性眼內(nèi)炎(endophthalmiaphacoanaphylactica)、過(guò)敏性腸炎(enteritisallergica)、麻風(fēng)結(jié)節(jié)性紅斑(erythemanodosumleprosum)、特發(fā)性面神經(jīng)麻瘦(idiopathicfacialparalysis)、慢性疲勞綜合征(chronicfatiguesyndrome)、風(fēng)濕熱(febrisrheumatica)、哈-里綜合征(Hamman-Rich’sdisease)、感覺(jué)神經(jīng)性聽(tīng)力損失(sensoneuralhearingloss)、陣發(fā)性血紅素尿(haemoglobinuriaparoxysmatica)、性腺低能癥(hypogonadism)、區(qū)域性回腸炎(ileitisregionalis)、白細(xì)胞減少癥(leucopenia)、傳染性單核細(xì)胞增多癥(mononucleosisinfectiosa)、橫斷性脊髓炎(traversemyelitis)、原發(fā)性特發(fā)性黏液水腫(primaryidiopathicmyxedema)、腎病(nephrosis)、交感性眼炎(ophthalmiasymphatica)、肉芽腫性睪丸炎(orchitisgranulomatosa)、膜腺炎(pancreatitis)、急性多神經(jīng)根炎(polyradiculitisacuta)、壞疽性膜皮病(pyodermagangrenosum)、奎漢氏甲狀腺炎(Quervain’sthyreoiditis)、后天性脾萎縮(acquiredspenicatrophy)、歸因于抗精子抗體的不孕癥(infertilityduetoantispermatozoanantobodies)、非惡性胸腺瘤(non-malignantthymoma)、白斑病(vitiligo)、SCID及埃巴病毒相關(guān)疾病(SCIDandEpstein-Barrvirus-associateddiseases)、獲得性免疫缺陷綜合征(acquiredimmunedeficiencysyndrome)(AIDS)、寄生蟲(chóng)疾病(parasiticdiseases)，例如利什曼原蟲(chóng)病(Lesihmania)、中毒性休克綜合征(toxic-shocksyndrome)λ食物中毒(foodpoisoning)、涉及T細(xì)胞浸潤(rùn)的病狀(conditionsinvolvinginfiltrationofTcells)、白細(xì)胞黏附缺乏(leukocyte-adhesiondeficiency)、與由細(xì)胞因子及T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的急性及遲發(fā)過(guò)敏性相關(guān)的免疫反應(yīng)、涉及白細(xì)胞滲出(leukocytediapedesis)的疾病、多器官損傷綜合征(multipleorganinjurysyndrome)、抗原-抗體復(fù)合物介導(dǎo)的疾病、抗腎小球基底膜疾病(antiglomerularbasementmembranedisease)、變應(yīng)性神經(jīng)炎(allergicneuritis)、自身免疫性多內(nèi)分泌病(autoimmunepolyendocrinopathies)、卵巢炎(oophoritis)、原發(fā)性黏液水腫(primarymyxedema)、自身免疫性萎縮性胃炎(autoimmuneatrophicgastritis)、交感性眼炎(sympatheticophthalmia)、風(fēng)、濕病(rheumaticdiseases)、混合結(jié)締組織疾病(mixedconnectivetissuedisease)、腎病綜合征(nephroticsyndrome)、胰島炎(insulitis)、多發(fā)性?xún)?nèi)分泌衰竭(polyendocrinefailure)、外周神經(jīng)病(peripheralneuropathy)、I型自身免疫性多腺綜合征(autoimmunepolyglandularsyndrometypeI)、成人發(fā)作型特發(fā)性副甲狀腺低能癥(adult-onsetidiopathichypoparathyroidism)(AOIH)、全頭秀(alopeciatotalis)、擴(kuò)張型心肌病(dilatedcardiomyopathy)、后天性表皮分解性水皰癥(epidermolisisbullosaacquisita)(EBA)、血色素沉著癥(hemochromatosis)、心肌炎(myocarditis)、腎病綜合征(nephroticsyndrome)、原發(fā)性硬化性膽管炎(primarysclerosingcholangitis)、化膿性或非化膿性竇炎(purulentornonpurulentsinusitis)、急性或慢性竇炎(acuteorchronicsinusitis)、篩竇、額竇、上頜竇或蝶竇的竇炎(ethmoid、frontal、maxiIIary、orsphenoidsinusitis)、嗜酸性粒細(xì)胞相關(guān)病癥(eosinophil-relateddisorder)，例如嗜酸性細(xì)胞增多癥(eosinophilia)、肺浸潤(rùn)嗜酸細(xì)胞增多癥(pulmonaryinfiltrationeosinophilia)、嗜酸細(xì)胞增多-肌痛綜合征(eosinophilia-myalgiasyndrome)、呂弗勒綜合征(Lofflerissyndrome)、慢性嗜酸細(xì)胞性肺炎(chroniceosinophilicpneumonia)、熱帶肺部嗜酸細(xì)胞增多癥(tropicalpulmonaryeosinophilia)、支氣管肺炎曲霉病(bronchopneumonicaspergillosis)、曲霉腫(aspergilloma)或含有嗜酸粒細(xì)胞的肉芽腫(granulomascontainingeosinophils)、過(guò)敏反應(yīng)(anaphylaxis)、血清反應(yīng)陰性的脊椎關(guān)節(jié)病(seronegativespondyloarthritides)、多發(fā)性?xún)?nèi)分泌自身免疫病(polyendocrineautoimmunedisease)、硬化性膽管炎(sclerosingcholangitis)、鞏膜、鞏膜外層、慢性粘膜皮膚念珠菌病(sclera，episclera，chronicmucocutaneouscandidiasis)、布魯頓綜合征(Bruton’ssyndrome)、嬰兒期暫時(shí)性低丙種球蛋白血癥(transienthypogammaglobulinemiaofinfancy)、維斯科特-奧爾德里奇綜合征(Wiskott-Aldrichsyndrome)、共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)管擴(kuò)張癥(ataxiatelangiectasia)、與膠原病有關(guān)的自身免疫性病癥、風(fēng)濕(rheumatism)、神經(jīng)性疾病(neurologicaldisease)、局部缺血性再灌注病癥(ischemicre-perfusiondisorder)、血壓降低反應(yīng)(reductioninbloodpressureresponse)、血管功能障礙(vasculardysfunction)、血管擴(kuò)張(antgiectasis)、組織損傷(tissueinjury)、心血管缺血(cardiovascularischemia)、痛覺(jué)過(guò)敏(hyperalgesia)、大腦缺血(cerebralischemia)、及伴隨有血管形成的疾病(diseaseaccompanyingvascularization)λ過(guò)敏性病癥(allergichypersensitivitydisorders)、腎小球腎炎(glomerulonephritides)、再灌注損傷(reperfusioninjury)、心肌或其他組織的再灌注損傷(reperfusioninjuryofmyocardialorothertissues)、具有急性發(fā)炎成分的皮膚病(dermatoseswithacuteinflammatorycomponents)、急性化胺性腦膜炎(acutepurulentmeningitis)或其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性病癥(centralnervoussysteminflammatorydisorders)、粒細(xì)胞輸血相關(guān)綜合征(granulocytetransfusion-associatedsyndromes)、細(xì)胞因子誘發(fā)的毒t4(cytokine-1nducedtoxicity)、急性重度炎癥(acuteseriousinflammation)、慢性難治性炎癥(chronicintractableinflammation)、腎孟炎(pyelitis)、月市硬變(pneumonocirrhosis)、糖尿病性視網(wǎng)膜病變(diabeticretinopathy)、糖尿病性大動(dòng)脈病癥(diabeticlarge-arterydisorder)、動(dòng)脈內(nèi)增生(endarterialhyperplasia)、消化性潰痕(pepticulcer)、辧膜炎(valvulitis)及子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis)。[0155]術(shù)語(yǔ)“檢測(cè)”意欲包括測(cè)定物質(zhì)的存在與否或?qū)ξ镔|(zhì)的量進(jìn)行定量。因此該術(shù)語(yǔ)是指使用本發(fā)明的材料、組合物及方法來(lái)進(jìn)行定性和定量測(cè)定。一般來(lái)說(shuō)，用于檢測(cè)的特定技術(shù)對(duì)于本發(fā)明的實(shí)施并不關(guān)鍵。[0156]舉例來(lái)說(shuō)，根據(jù)本發(fā)明“檢測(cè)”可包括:觀察α5基因產(chǎn)物、βI基因產(chǎn)物(例如mRNA分子)，或“α5”或“α5βI”多肽存在與否；“α5”或“α5βI”多肽水平或與靶標(biāo)結(jié)合量的變化；α5或α5βI多肽生物功能/活性的變化。在一些實(shí)施方案中，“檢測(cè)”可包括檢測(cè)野生型α5或α5βI水平(例如mRNA或多肽水平)。檢測(cè)可以包括定量任何值與對(duì)照相比較時(shí)至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%或更多的變化(例如增加或降低)。檢測(cè)可包括定量任何值的至少約2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更高，例如20倍、30倍、4-倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍或更高的變化。[0157]本文中所使用的“標(biāo)記物”是指直接或間接結(jié)合至抗體的可檢測(cè)化合物或組合物。標(biāo)記物自身可通過(guò)其自身檢測(cè)(例如放射性同位素標(biāo)記物或熒光標(biāo)記物)，或在酶促標(biāo)記物的情況下，可以催化底物化合物或組合物的可檢測(cè)的化學(xué)變化。[0158]II1.抗_α5β1抗體[0159]本文中提供可結(jié)合人類(lèi)α5β1且競(jìng)爭(zhēng)性抑制抗α5β118C12抗體與人類(lèi)α5β1的結(jié)合的抗體。因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供了包含SEQIDN0S:2、3、4、5、6、7或8中任一個(gè)可變輕鏈(VL)序列和SEQIDN0S:9,10、11、12、13或14中任一個(gè)可變重鏈(VH)序列的抗體。也涵蓋本文中所述抗-α5βI抗體的人類(lèi)或嵌合(包括例如人源化)形式抗體。[0160]根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，抗體以介于500ηΜ與IpM之間的Kd結(jié)合人類(lèi)α5βI。在某些實(shí)施方案中，本文中所提供的抗體具有≤ΙμΜ、≤ΙΟΟηΜ、≤ΙΟηΜ、≤InM、≤0.1nM,≤0.01nM或≤0.0OlnM(例如10_8M或以下，例如10-8Μ至10_13M，例如10-9Μ至I(T13M)的解離常數(shù)(Kd)。根據(jù)另一實(shí)施方案，抗體不結(jié)合ανβ3或ανβ5或ανβ?。根據(jù)另一實(shí)施方案，抗體包含人類(lèi)IgG，例如人類(lèi)IgGl或人類(lèi)IgG4的Fe序列。在另一實(shí)施方案中，F(xiàn)e序列已經(jīng)改變或變化以使得其缺乏抗體依賴(lài)性細(xì)胞毒性(ADCC)效應(yīng)子功能，其通常與其與Fe受體(FcRs)的結(jié)合有關(guān)。存在許多可以改變效應(yīng)子功能的Fe序列變化或突變的實(shí)例。舉例來(lái)說(shuō)，W000/42072及Shields等人，J.Biol.Chem.(生物化學(xué)雜志)9(2):6591-6604(2001)描述與FcR的結(jié)合提高或降低的抗體變體。那些公開(kāi)的內(nèi)容特定地以引用的方式并入本文中。抗體可以是Fab、Fab’、F(ab)’2、單鏈Fv(scFv)、Fv片段，以及雙抗體和線性抗體形式。又，抗體可以結(jié)合至α5βI且是α5βI拮抗劑，但也結(jié)合一種或多種其他靶標(biāo)并抑制其功能(例如VEGF)的多特異性抗體，或是結(jié)合至α5βI上的兩個(gè)或兩個(gè)以上不同位點(diǎn)的多特異性抗體?？贵w可偶聯(lián)治療劑(例如細(xì)胞毒性劑、放射性同位素及化療劑)或結(jié)合通過(guò)成像檢測(cè)患者樣品中或體內(nèi)的α5βI的標(biāo)記物(例如放射性同位素、熒光染料和酶)。[0161]也涵蓋編碼抗-α5βI抗體的核酸分子、包含編碼一個(gè)或兩個(gè)可變結(jié)構(gòu)域的核酸分子的表達(dá)載體和包含所述核酸分子的細(xì)胞。這些抗體可用于本文中所述的療法中并且用以檢測(cè)患者樣品中(例如使用FACS、免疫組織化學(xué)(IHC)、ELISA測(cè)定)或患者體內(nèi)的α5βI蛋白。[0162]Α.單克隆抗體[0163]單克隆抗體可例如使用雜交瘤方法(例如Kohler及Milstein,Nature(自然)，256:495(1975)所述的方法)制備，或可通過(guò)重組DNA方法(美國(guó)專(zhuān)利第4，816，567號(hào))制得，或可通過(guò)下文實(shí)例中的本文所述方法產(chǎn)生。在雜交瘤方法中，倉(cāng)鼠、小鼠或其他適當(dāng)宿主動(dòng)物通常經(jīng)免疫劑(例如單獨(dú)或與適合載體組合的α5、βI或α5βI多肽)免疫以引出產(chǎn)生或能夠產(chǎn)生將特異性結(jié)合至該免疫劑的抗體的淋巴細(xì)胞?；蛘撸馨图?xì)胞可經(jīng)體外免疫。[0164]免疫劑典型地包括相關(guān)蛋白質(zhì)的多肽或融合蛋白或包含該蛋白質(zhì)的組合物。一般而言，若需要人類(lèi)來(lái)源的細(xì)胞，則使用外周血淋巴細(xì)胞(“PBLs”)；或若需要非人類(lèi)哺乳動(dòng)物來(lái)源，則使用脾細(xì)胞或淋巴細(xì)胞。隨后使用合適的融合劑，例如聚乙二醇，將淋巴細(xì)胞與永生細(xì)胞系融合以形成雜交瘤細(xì)胞。Goding，MONOCLONALANTIBODIES:PRINCIPLESANDPRACTICE(單克隆抗體:原理和實(shí)踐)(NewYork:AcademicPress,1986),第59-103頁(yè)。永生細(xì)胞系通常是經(jīng)轉(zhuǎn)化的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，尤其是嚙齒動(dòng)物、牛及人類(lèi)來(lái)源的骨髓瘤細(xì)胞。通常采用大鼠或小鼠骨髓瘤細(xì)胞系。可將雜交瘤細(xì)胞在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其優(yōu)選含有一種或多種抑制未融合的永生細(xì)胞生長(zhǎng)或存活的物質(zhì)。舉例來(lái)說(shuō)，若親本細(xì)胞缺乏酶——次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤焦磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT或HPRT)，則雜交瘤的培養(yǎng)基通常將包括次黃嘌呤、氨基蝶呤及胸苷(“HAT培養(yǎng)基”)，該物質(zhì)阻止HGPRT缺陷細(xì)胞的生長(zhǎng)。[0165]優(yōu)選的永生細(xì)胞系是有效融合、支持通過(guò)所選擇的抗體產(chǎn)生細(xì)胞穩(wěn)定地高水平表達(dá)抗體，并且對(duì)例如HAT培養(yǎng)基的培養(yǎng)基敏感的細(xì)胞系。更優(yōu)選的永生細(xì)胞系是鼠骨髓瘤細(xì)胞系，其可獲自例如SalkInstituteCellDistributionCenter,SanDiego,California及美國(guó)菌種保存中心(AmericanTypeCultureCollection,Manassas,Virginia)。用于產(chǎn)生人類(lèi)單克隆抗體的人類(lèi)骨髓瘤及小鼠-人類(lèi)融合骨髓瘤細(xì)胞系也已經(jīng)被描述。Kozber,J.1mmunol.(免疫學(xué)雜志)，133:3001(1984)；Brodeur等人M0N0CL0NALANTIB0DYPRODUCTIONTECHNIQUESANDAPPLICATIONS(單克隆抗體產(chǎn)生技術(shù)和應(yīng)用)(MarcelDekker,Inc.:NewYork,1987),第51-63頁(yè)。[0166]隨后可在培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)基中測(cè)定針對(duì)多肽的單克隆抗體的存在?？赏ㄟ^(guò)免疫沉淀或通過(guò)體外結(jié)合測(cè)定，例如放射免疫測(cè)定(RIA)或酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)測(cè)定由雜交瘤細(xì)胞所產(chǎn)生的單克隆抗體的結(jié)合特異性。本領(lǐng)域中這些技術(shù)和測(cè)定是已知的?？衫缤ㄟ^(guò)Munson及Pollard,Anal.Biochem.，107:220(1980)的Scatchard分析來(lái)測(cè)定單克隆抗體的結(jié)合親和力。[0167]在鑒別出所需雜交瘤細(xì)胞之后，可通過(guò)有限稀釋法使克隆形成亞克隆并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法使其生長(zhǎng)。Goding，同上。適合于實(shí)現(xiàn)此目的的培養(yǎng)基包括例如杜貝卡氏改良依格爾培養(yǎng)基(Dulbecco'sModifiedEagle’sMedium)和RPM1-1640培養(yǎng)基。或者，可使雜交瘤細(xì)胞在哺乳動(dòng)物體內(nèi)以腹水形式進(jìn)行體內(nèi)生長(zhǎng)。[0168]由亞克隆分泌的單克隆抗體可通過(guò)例如蛋白A-瓊脂糖、羥基磷灰石層析、凝膠電泳、透析或親和層析等常規(guī)免疫球蛋白純化程序自培養(yǎng)基或腹水中分離或純化。[0169]也可通過(guò)例如美國(guó)專(zhuān)利第4，816，567號(hào)中描述的重組DNA方法制得單克隆抗體?？墒褂贸Ｒ?guī)程序(例如通過(guò)使用能夠與編碼鼠類(lèi)抗體的重鏈和輕鏈的基因特異性結(jié)合的寡核苷酸探針)輕易地分離并測(cè)序編碼本發(fā)明單克隆抗體的DNA。本發(fā)明的雜交瘤細(xì)胞作為該DNA的優(yōu)選來(lái)源。經(jīng)分離后，可將DNA置于表達(dá)載體中，隨后將表達(dá)載體轉(zhuǎn)染至不另外產(chǎn)生免疫球蛋白的宿主細(xì)胞(例如猿COS細(xì)胞、中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞或骨髓瘤細(xì)胞)中，以在重組宿主細(xì)胞內(nèi)獲得單克隆抗體的合成。也可以例如通過(guò)以人類(lèi)重鏈和輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域的編碼序列替代同源鼠序列(美國(guó)專(zhuān)利第4，816，567號(hào)Morrison等人，同上)，或通過(guò)將非免疫球蛋白多肽的編碼序列的全部或一部分共價(jià)結(jié)合至免疫球蛋白編碼序列來(lái)修飾DNA。該非免疫球蛋白多肽可替代本發(fā)明抗體的恒定結(jié)構(gòu)域，或可替代本發(fā)明抗體的一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的可變結(jié)構(gòu)域以產(chǎn)生嵌合二價(jià)抗體。[0170]抗體可以是單價(jià)抗體。本領(lǐng)域中已經(jīng)知曉制備單價(jià)抗體的方法。舉例來(lái)說(shuō)，一種方法涉及免疫球蛋白輕鏈和經(jīng)修飾重鏈的重組表達(dá)。一般重鏈在Fe區(qū)中的任一點(diǎn)截短以防止重鏈交聯(lián)?；蛘?，相關(guān)半胱氨酸殘基經(jīng)另一氨基酸殘基置換或缺失以防止交聯(lián)。[0171]體外方法也適于制備單價(jià)抗體。可使用但不限于，本領(lǐng)域中已知的技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)抗體的消化來(lái)制備其片段，尤其Fab片段。[0172]B.人類(lèi)抗體[0173]在某些實(shí)施方案中，本文中所提供的抗體是人類(lèi)抗體。可使用本領(lǐng)域中已知的各種技術(shù)來(lái)制備人類(lèi)抗體。人類(lèi)抗體一般描述于vanDijk和vandeWinkel,Curr.0pin.Pharmacol.(當(dāng)前藥學(xué)觀點(diǎn))5:368-74(2001)以及Lonberg,Curr.0pin.1mmunol.(當(dāng)前免疫學(xué)觀點(diǎn))20:450-459(2008)。[0174]可通過(guò)向已經(jīng)經(jīng)過(guò)修飾因而對(duì)于抗原攻擊刺激產(chǎn)生完整人類(lèi)抗體或具有人類(lèi)可變區(qū)的完整抗體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物施用免疫原，來(lái)制備人類(lèi)抗體。這些動(dòng)物通常含有全部或一部分人類(lèi)免疫球蛋白基因座，其替代了內(nèi)源免疫球蛋白基因座，或存在于染色體外或隨機(jī)整合于動(dòng)物染色體內(nèi)。在這些轉(zhuǎn)基因小鼠中，內(nèi)源免疫球蛋白基因座一般已經(jīng)不活化。關(guān)于從轉(zhuǎn)基因動(dòng)物獲得人類(lèi)抗體的方法的綜述，參見(jiàn)Lonberg,Nat.Biotech.(自然生物技術(shù))23:1117-1125(2005)。也參見(jiàn)例如描述XEN0M0USE?技術(shù)的美國(guó)專(zhuān)利第6，075,181號(hào)及第6，150，584號(hào)；描述HUMAB?技術(shù)的美國(guó)專(zhuān)利第5，770，429號(hào)；描述K-MMOUSE?技術(shù)的美國(guó)專(zhuān)利第7，041，870號(hào)；及描述VELOCIMOUSE?技術(shù)的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)文本第US2007/0061900號(hào)。這些動(dòng)物產(chǎn)生的完整抗體的人類(lèi)可變區(qū)可進(jìn)一步修飾，例如通過(guò)與不同人類(lèi)恒定區(qū)組合。[0175]人類(lèi)抗體也可通過(guò)基于雜交瘤的方法制得。用于產(chǎn)生人類(lèi)單克隆抗體的人類(lèi)骨髓瘤及小鼠-人類(lèi)融合骨髓瘤細(xì)胞系已經(jīng)描述。(參見(jiàn)例如KozborJ.1mmunol.(免疫學(xué)雜志)，I33:3OOl(I984)Brodeur等人，MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications(單克隆抗體產(chǎn)生技術(shù)及應(yīng)用)，第51-63頁(yè)(MarcelDekker,Inc.,NewYork,1987);和Boerner等人，J.1mmunol.(免疫學(xué)雜志),147:86(1991))通過(guò)人類(lèi)B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生的人類(lèi)抗體也在Li等人，PNAS.USA,103:3557-3562(2006)中描述。其他方法包括例如美國(guó)專(zhuān)利第7，189,826號(hào)(描述由雜交瘤細(xì)胞系產(chǎn)生單克隆人類(lèi)IgM抗體)及Ni，XiandaiMianyixue，26(4):265-268(2006)(描述人類(lèi)-人類(lèi)雜交瘤)中所述的那些方法。人類(lèi)雜交瘤技術(shù)(Trioma技術(shù))也于Vollmers和Brandlein,HistologyandHistopathology(組織學(xué)和組織病理學(xué))，20(3):927-937(2005)；及Vollmers和Brandlein,MethodsandFindingsinExperimentalandClinicalPharmacology(實(shí)驗(yàn)和臨床藥學(xué)方法和發(fā)現(xiàn))，27(3):185-91(2005)中描述。[0176]也可通過(guò)分離選自源自人類(lèi)噬菌體展示文庫(kù)的Fv克隆可變結(jié)構(gòu)域序列產(chǎn)生人類(lèi)抗體。隨后可將這些可變結(jié)構(gòu)域序列與所需人類(lèi)恒定結(jié)構(gòu)域組合。下文描述自抗體文庫(kù)選擇人類(lèi)抗體的技術(shù)。[0177]C.源自文庫(kù)的抗體。[0178]可通過(guò)在組合文庫(kù)中篩選具有所需活性的抗體來(lái)分離本發(fā)明抗體。舉例來(lái)說(shuō)，本領(lǐng)域中已知多種用于產(chǎn)生噬菌體展示文庫(kù)并且在這些文庫(kù)中篩選具有所需結(jié)合特征的抗體的方法。這些方法于例如Hoogenboom等人，MethodsinMolecularBiology(分子生物學(xué)方法)178:1-37(0’Brien等人編，HumanPress,Totowa,NJ,2001)中評(píng)述，并且進(jìn)一步于例如McCafferty等人，Nature(自然)348:552-554；Clackso等人，Nature(自然)352:624-628(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.(分子生物學(xué)雜志)222:581-597(1992);Marks及Bradbury,MethodsinMolecularBiology(分子生物學(xué)方法)248:161-175(Lo編，HumanPress,Totowa,NJ,2003)；Sidhu等人，J.Mol.Biol.(分子生物學(xué)雜志)338(2):299-310(2004);Lee等人，J.Mol.Biol.(分子生物學(xué)雜志)340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,PNASUSAlOl(34):12467-12472(2004)和Lee等人，J.1mmunol.Methods(免疫學(xué)方法雜志)284(1-2):119-132(2004)中描述。[0179]在某些卩遼菌體展示方法中，VH及VL基因庫(kù)(repertoire)是通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)分別克隆并且隨機(jī)重組于卩遼菌體文庫(kù)中，隨后可如Winter等人，Ann.Rev.1mmunol.(免疫學(xué)年度綜述)，12:433-455(1994)中所述在其中篩選抗原結(jié)合噬菌體。噬菌體通常呈現(xiàn)單鏈Fv(ScFv)片段或Fab片段形式的抗體片段。來(lái)自免疫來(lái)源的文庫(kù)無(wú)需構(gòu)建雜交瘤即可提供免疫原的高親和力抗體。或者，天然庫(kù)可經(jīng)克隆(例如自人類(lèi))以在無(wú)任何免疫的情況下提供針對(duì)多種非自體抗原以及自體抗原的抗體單一來(lái)源，如Griffiths等人,EMBOJ，12:725-734(1993)所述。最后，也可以通過(guò)從干細(xì)胞克隆未重排的V基因區(qū)段，并且使用含有隨機(jī)序列的PCR引物來(lái)編碼高變性CDR3區(qū)，并且實(shí)現(xiàn)體外重排來(lái)合成制得天然文庫(kù)，如Hoogenboom及Winter，J.Mol.Biol.(分子生物學(xué)雜志)，227:381-388(1992)所述。描述人類(lèi)抗體噬菌體文庫(kù)的專(zhuān)利公開(kāi)物包括例如:美國(guó)專(zhuān)利第5，750，373號(hào)，及美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)第2005/0079574號(hào)、第2005/0119455號(hào)、第2005/0266000號(hào)、第2007/0117126號(hào)、第2007/0160598號(hào)、第2007/0237764號(hào)、第2007/0292936號(hào)和第2009/0002360號(hào)。[0180]從人類(lèi)抗體文庫(kù)分離的抗體或抗體片段被視為本文的人類(lèi)抗體或人類(lèi)抗體片段。[0181]D.嵌合及人源化抗體[0182]在某些實(shí)施方案中，本文中所提供的抗體是嵌合抗體。某些嵌合抗體于例如美國(guó)專(zhuān)利第4，816，567號(hào)；及Morrison等人，PNASUSA，81:6851-6855(1984)中描述。在一個(gè)實(shí)例中，嵌合抗體包含非人類(lèi)可變區(qū)(例如源自小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠、兔或例如猴的非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物的可變區(qū))及人類(lèi)恒定區(qū)。在另一實(shí)例中，嵌合抗體是種類(lèi)或亞類(lèi)已經(jīng)自親本抗體的種類(lèi)或亞類(lèi)發(fā)生變化的“種類(lèi)轉(zhuǎn)變”抗體。嵌合抗體包括其抗原結(jié)合片段。[0183]在某些實(shí)施方案中，嵌合抗體是人源化抗體。通常，非人類(lèi)抗體經(jīng)人源化以降低對(duì)人類(lèi)的免疫原性，同時(shí)保持親本非人類(lèi)抗體的特異性及親和力。一般而言，人源化抗體包含一個(gè)或多個(gè)可變結(jié)構(gòu)域，其中HVRs，例如CDRs(或其部分)源自非人類(lèi)抗體，且FRs(或其部分)是源自人類(lèi)抗體序列。人源化抗體視情況也將包含人類(lèi)恒定區(qū)的至少一部分。在一些實(shí)施方案中，人源化抗體中的一些FR殘基經(jīng)來(lái)自非人類(lèi)抗體(例如HVR殘基所源自的抗體)的相應(yīng)殘基置換，例如以恢復(fù)或提高抗體特異性或親和力。[0184]人源化抗體及其制備方法于例如Almagro和Fransson,Front.Biosc1.13:1619-1633(2008)中評(píng)述，且進(jìn)一步于例如Riechmann等人，Nature(自然)332:323-329(1988)；Queen等人，PNASUSA86:10029-10033(1989)美國(guó)專(zhuān)利第5，821，337號(hào)、第7，527，791號(hào)、第6，982，321號(hào)和第7，087，409號(hào)；Kashmiri等人，Methods(方法)36:25-34(2005)(描述SDR(a_CDR)移植)Padlan，Mol.1mmunol.(分子免疫學(xué))28:489-498(1991)(描述“表面重整”);Dall’Acqua等人，Methods36:43_60(2005)(描述“FR重組(shuffling)”)及Osbourn等人，Methods(方法)36:61-68(2005)和Klimka等人，Br.J.Cancer(英國(guó)癌癥雜志)，83:252-260(2000)(描述FR重組(shuffling)的“導(dǎo)向選擇”方法)中描述。[0185]可用于人源化的人類(lèi)構(gòu)架區(qū)包括，但不限于，使用“最佳擬合”法選擇的構(gòu)架區(qū)(參見(jiàn)例如Sims等人，J.1mmunol.(免疫學(xué)雜志)151:2296(1993));源自特定亞群的輕鏈或重鏈可變區(qū)的人類(lèi)抗體共同序列的構(gòu)架區(qū)(參見(jiàn)例如Carter等人，PNASUSA,89:4285(1992)及Presta等人，J.1mmunol.(免疫學(xué)雜志)，151:2623(1993));人類(lèi)成熟(體細(xì)胞突變)構(gòu)架區(qū)或人類(lèi)生殖系構(gòu)架區(qū)(參見(jiàn)例如Almagro及Fransson,Front.Biosc1.13:1619-1633(2008));及源自篩選FR文庫(kù)的構(gòu)架區(qū)(參見(jiàn)例如Baca等人，J.Biol.Chem.(生物化學(xué)雜志)272:10678-10684(1997)及Rosok等人，J.Biol.Chem.(生物化學(xué)雜志)271:22611-22618(1996))。[0186]E.多特異性抗體[0187]在某些實(shí)施方案中，本文中所提供的抗體是多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體是對(duì)至少兩個(gè)不同位點(diǎn)具有結(jié)合特異性的單克隆抗體。在某些實(shí)施方案中，一種結(jié)合特異性是針對(duì)α5βI而另一種是針對(duì)任何其他抗原(例如VEGF)。在某些實(shí)施方案中，雙特異性抗體可結(jié)合至α5βI的兩個(gè)不同抗原表位。雙特異性抗體也可用于將細(xì)胞毒性劑定位于表達(dá)α5β1的細(xì)胞。雙特異性抗體可制成全長(zhǎng)抗體或抗體片段形式。[0188]制造多特異性抗體的技術(shù)包括，但不限于，具有不同特異性的兩個(gè)免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(duì)的重組共表達(dá)(參見(jiàn)Milstein及Cuello，Nature(自然)305:537(1983)；W093/08829；及Traunecker等人，EMBOJ.10:3655(1991)),及“凸起-入-孔洞(knob-1n-hole)”工程改造(參見(jiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利第5，731，168號(hào))。也可通過(guò)以下方法制得多特異性抗體:工程改造用于制備抗體Fe-異二聚體的靜電導(dǎo)引作用(W02009/089004A1)；將兩種或兩種以上抗體或片段交聯(lián)(參見(jiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利第4，676，980號(hào)，及Brennan等人Science(科學(xué))，229:81(1985));使用亮氨酸拉鏈來(lái)產(chǎn)生雙特異性抗體(參見(jiàn)例如Kostelny等人，J.1mmunol.(免疫學(xué)雜志)，148(5):1547-1553(1992));使用“雙抗體”技術(shù)來(lái)制得雙特異性抗體片段(參見(jiàn)例如Hollinger等人，PNASUSA,90:6444-6448(1993))；及使用單鏈Fv(sFv)二聚體(參見(jiàn)例如Gruber等人，J.1mmunol.(免疫學(xué)雜志)，152:5368(1994))及如例如Tutt等人，J.1mmunol.(免疫學(xué)雜志)147:60(1991)中所述制備三特異性抗體。[0189]本文中也包括具有三個(gè)或三個(gè)以上功能性抗原結(jié)合位點(diǎn)的經(jīng)工程改造抗體，包括“章魚(yú)抗體(Octopusantibodies)”(參見(jiàn)例如US2006/0025576A1)。本文中的抗體或片段也包括包含結(jié)合至α5β1以及另一不同抗原的抗原結(jié)合位點(diǎn)的“雙重作用FAb或“DAF”(例如參見(jiàn)US2008/0069820)。[0190]F.抗體變體[0191]在某些實(shí)施方案中，涵蓋本文中所提供抗體的氨基酸序列變體。舉例來(lái)說(shuō)，可能需要其來(lái)提高抗體的結(jié)合親和力和/或其他生物特性?？赏ㄟ^(guò)在編碼抗體的核苷酸序列中引入適當(dāng)修飾或通過(guò)肽合成來(lái)制備抗體的氨基酸序列變體。這些修飾包括例如抗體氨基酸序列內(nèi)的殘基缺失和/或插入其中和/或?qū)ζ溥M(jìn)行置換。可進(jìn)行缺失、插入和置換的任何組合以獲得最終構(gòu)建體，其限制條件是最終構(gòu)建體具有所需特征，例如抗原結(jié)合。[0192]1.置換、插入和缺失變體[0193]在某些實(shí)施方案中，提供具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸置換的抗體變體。用于置換性誘變的相關(guān)位點(diǎn)包括HVRs和FRs的保守性置換列于表1中的“保守性置換”的標(biāo)題下。更多實(shí)質(zhì)性變化于表1中的“示例性置換”的標(biāo)題下提供且如下文關(guān)于氨基酸側(cè)鏈種類(lèi)進(jìn)一步描述?？蓪被嶂脫Q引入相關(guān)抗體中并篩選具有所需活性，例如保持/提高的抗原結(jié)合、降低的免疫原性、或提高的ADCC或CDC的產(chǎn)物。[0194]表1[0195]【權(quán)利要求】1.一種抗-α5βI抗體，其含有:包含CDR-Ll、CDR-L2、CDR-L3的VL結(jié)構(gòu)域和包含CDH-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH結(jié)構(gòu)域，所述CDR-Ll含有TL-S/T-S/P/T-Q/N-H-F/S-T/1-Υ-Κ/Τ-Ι-G/D/S(SEQIDNO:15)；所述CDR-L2含有L/1-N/T-S-D/H/S-G/S-S/L/T-H/Y-N/K/Q/1-K/T-G/A-D/S/V(SEQIDNO:16);所述CDR-L3含有G/A-S/A/Y-S/Y-Y-S/A/Y-S/Y/T-GY-V/I(SEQIDNO:17);并且所述CDH-Hl含有GFTFS-N/A-RW-1/V-Y(SEQIDNO:18);所述CDR-H2含有GIKTKP-N/A/T-1/R-YAT-E/Q-YADSVKG(SEQIDNO:19);并且所述CDR-H3含有L/V-TG-M/K-R/K_YFDY(SEQIDNO:20)。2.權(quán)利要求1所述的抗體，其中所述VL結(jié)構(gòu)域包含:CDR-LI，所述CDR-Ll包含選自由SEQIDNO:21、22、23和24組成的組的氨基酸序列；CDR_L2，所述CDR-L2包含選自由SEQIDNO:25、26、27和28組成的組的氨基酸序列；和CDR-L3，所述CDR-L3包含選自由SEQIDNO:29、30、31、32和33組成的組的氨基酸序列，并且所述VH結(jié)構(gòu)域包含:⑶R-H1，所述⑶R-Hl包含選自由SEQIDNO:34和35組成的組的氨基酸序列KDR-H2，所述⑶R-H2包含選自由SEQIDNO:36和37組成的組的氨基酸序列；和⑶R-H3，所述⑶R-H3包含選自由SEQIDNO:38、39和40組成的組的氨基酸序列。3.權(quán)利要求1所述的抗-α5βI抗體，其中所述VL結(jié)構(gòu)域包含SEQIDΝΟ:3_8中任一個(gè)，并且所述VH結(jié)構(gòu)域包含SEQIDNO:11-14中任一個(gè)。4.權(quán)利要求3所述的抗體，其中所述VL結(jié)構(gòu)域包含SEQIDNO:8，并且所述VH結(jié)構(gòu)域包含SEQIDNO:14。5.—種抗_α5βI抗體，其含有:包含CDR-Ll、CDR-L2、CDR-L3的VL結(jié)構(gòu)域和包含CDH-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH結(jié)構(gòu)域，所述CDR-Ll包含TLSSQHSTYTIG(SEQIDNO:21)，所述CDR-L2包含LNSDSSHNKGS(SEQIDΝΟ:8的殘基50-60);所述CDR-L3包含AAYYAYGYV(SEQIDNO:30);并且所述CDR-Hl包含GFTFSARWIY(SEQIDNO:14的殘基26-35)；所述CDR-H2包含GIKTKPAIYATEYADSVKG(SEQIDNO:14的殘基50-68);并且所述CDR-H3包含LTGMKYFDY(SEQIDNO:14的殘基101-109)。6.—種抗_α5βI抗體，其含有:包含CDR-Ll、CDR-L2、CDR-L3的VL結(jié)構(gòu)域和包含CDH-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH結(jié)構(gòu)域，所述CDR-Ll包含SEQIDNO:21;所述CDR-L2包含SEQIDNO:8的殘基49-61;所述CDR-L3包含SEQIDNO:30；所述CDR-Hl包含SEQIDNO:14的殘基26-35;所述CDR-H2包含SEQIDNO:14的殘基50-65;并且所述CDR-H3包含SEQIDNO:14的殘基95-102。7.—種抗_α5βI抗體，其含有:包含CDR-Ll、CDR-L2、CDR-L3的VL結(jié)構(gòu)域和包含CDH-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH結(jié)構(gòu)域，所述CDR-Ll包含TL-S/T-S/P/T-Q/N-H-F/S-T/1-Υ-Κ/Τ-Ι-G/D/S(SEQIDNO:15)；所述CDR-L2包含L/1-N/T-S-D/H/S-G/S-S/L/T-H/Y-N/K/Q/1-K/T-G/A-D/S/V(SEQIDNO:16);所述CDR-L3包含G/A-S/A/Y-S/Y-Y-S/A/Y-S/Y/T-GY-V/I(SEQIDNO:17);并且所述CDH-Hl包含GFTFS-N/A-RW-1/V-Y(SEQIDNO:18);所述CDR-H2包含GIKTKP-N/A/T-1/R-YAT-E/Q-YADSVKG(SEQIDNO:19);并且所述CDR-H3包含L/V-TG-M/K-R/K_YFDY(SEQIDNO:20),或是在一個(gè)或多個(gè)所述CDR結(jié)構(gòu)域中具有一個(gè)或多個(gè)改變的變體。8.權(quán)利要求7所述的抗-α5βI抗體,其中所述抗-α5βI抗體是在一個(gè)或多個(gè)所述CDR結(jié)構(gòu)域中具有一個(gè)或多個(gè)改變的變體。9.權(quán)利要求8所述的抗-α5βI抗體，其中所述變體在所述CDR結(jié)構(gòu)域中的一個(gè)中具有一個(gè)改變。10.權(quán)利要求9所述的抗-α5βI抗體，其中所述改變是保守置換。11.權(quán)利要求10所述的抗-α5βI抗體，其中所述改變是N至Q的置換。12.權(quán)利要求8所述的抗-α5βI抗體，其中所述改變導(dǎo)致對(duì)α5βI的親和力提高。13.一種抗-α5βI抗體，其含有包含⑶R-L3的VL結(jié)構(gòu)域和包含⑶R-H3的VH結(jié)構(gòu)域，所述CDR-L3包含G/A-S/A/Y-S/Y-Y-S/A/Y-S/Y/T-GY-V/I(SEQIDNO:17);所述CDR-H3包含L/V-TG-M/K-R/K-YFDY(SEQIDNO:20)。14.權(quán)利要求13所述的抗-α5βI抗體，其中所述抗-α5βI抗體含有包含⑶R-L1、CDR-L2的VL結(jié)構(gòu)域和包含CDH-Hl、CDR-H2的VH結(jié)構(gòu)域，所述CDR-Ll包含TL-S/T-S/P/T-Q/N-H-F/S-T/1-y-Κ/Τ-Ι-G/D/S(SEQIDNO:15);所述CDR-L2包含L/1-N/T-S-D/H/S-G/S-S/L/T-H/Y-N/K/Q/1-K/T-G/A-D/S/V(SEQIDNO:16);所述CDH-H1包含GFTFS-N/A-Rff-1/V-Y(SEQIDNO:18);所述CDR-H2包含GIKTKP-N/A/T-1/R-YAT-E/Q-YADSVKG(SEQIDNO:19)；或是在一個(gè)或多個(gè)所述CDR結(jié)構(gòu)域中具有一個(gè)或多個(gè)改變的變體。15.權(quán)利要求13所述的抗體，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含SEQIDNO:14。16.一種包含VL結(jié)構(gòu)域和VH結(jié)構(gòu)域的抗-α5βI抗體，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含:CDH-Hl，所述CDH-Hl包含GFTFS-N/A-RW-1/V-Y(SEQIDNO:18);CDR_H2，所述CDR-H2包含GIKTKP-N/A/T-1/R-YAT-E/Q-YADSVKG(SEQIDNO:19);和CDR-H3，所述CDR-H3包含L/V-TG-M/K-R/K-YFDY(SEQIDNO:20)。17.權(quán)利要求16所述的抗體，其中所述VH結(jié)構(gòu)域包含:⑶H-Hl，所述⑶H-Hl包含GFTFSARWIY;CDR_H2，所述CDR-H2包含GIKTKPAIYATEYADSVKG;和CDR-H3，所述CDR-H3包含LTGMKYFDY。18.權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的抗體，其是人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、雙特異性抗體或多特異性抗體。19.權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的抗體，其是與α5βI結(jié)合的抗體片段。20.權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的抗體，其是全長(zhǎng)IgGl抗體。21.權(quán)利要求20所述的抗體，其中所述抗體含有包含Ν297Α置換的Fe部分。22.—種分離的核酸分子，其編碼權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的抗體。23.—種宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求22所述的核酸。24.一種產(chǎn)生抗-α5βI抗體的方法，其包括培養(yǎng)權(quán)利要求23所述的宿主細(xì)胞從而產(chǎn)生所述的抗體。25.一種免疫綴合物，其包含權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的抗體和細(xì)胞毒性劑。26.—種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的抗體和藥學(xué)上可接受的載體。27.權(quán)利要求26所述的藥物組合物，其還包含VEGF拮抗劑。28.權(quán)利要求27所述的藥物組合物，其中所述VEGF拮抗劑是抗-VEGF抗體。29.權(quán)利要求28所述的藥物組合物，其中所述抗-VEGF抗體為貝伐珠單抗。30.權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的抗體，其還包含可檢測(cè)標(biāo)記。31.權(quán)利要求30所述的抗體，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記是選自由放射性同位素、熒光染料和酶組成的組的成員。32.權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的抗體在制備藥物中的用途。33.權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的抗體在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療患有涉及異常血管發(fā)生和/或血管通透性或滲漏的疾病或病癥的個(gè)體。34.權(quán)利要求33所述的用途，其中所述疾病是癌癥、眼病或自身免疫病。35.權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的抗體在制備藥物中的用途，所述藥物用于抑制血管發(fā)生。36.一種檢測(cè)懷疑含有α5βI蛋白質(zhì)的樣品中的α5βI蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括:(a)使權(quán)利要求29所述的抗體與所述樣品接觸；和(b)檢測(cè)抗_α5βI抗體與所述α5βI蛋白質(zhì)之間的復(fù)合體的形成。37.權(quán)利要求36所述的方法，其中所述樣品來(lái)自診斷患有涉及異常血管發(fā)生和/或血管通透性或滲漏的疾病的患者。38.權(quán)利要求34所述的用途，其中所述癌癥選自由結(jié)腸直腸癌、肺癌、乳腺癌、腎細(xì)胞癌和成膠質(zhì)細(xì)胞瘤組成的組。39.權(quán)利要求33所述的藥物組合物，其中所述疾病或病癥是選自由視網(wǎng)膜病變、年齡相關(guān)的黃斑變性、角膜新血管形成、角膜移植新血管形成、視網(wǎng)膜新血管形成和新生血管性青光眼組成的組的成員。40.權(quán)利要求33所述的用途，其中所述藥物與VEGF拮抗劑組合施用。41.權(quán)利要求40所述的用途，其中所述VEGF拮抗劑是抗-VEGF抗體。42.權(quán)利要求41所述的用途，其中所述抗-VEGF抗體是貝伐珠單抗。43.權(quán)利要求40所述的用途，其中所述VEGF拮抗劑是在抗-α5βI抗體之前施用。44.權(quán)利要求40所述的用途，其中所述藥物與所述VEGF拮抗劑同時(shí)施用。45.權(quán)利要求40所述的用途，其中將所述VEGF拮抗劑施用到所述個(gè)體直至所述個(gè)體對(duì)VEGF拮抗劑無(wú)反應(yīng)，然后將所述藥物施用到所述個(gè)體。46.權(quán)利要求40所述的用途，其中將所述藥物和所述VEGF拮抗劑進(jìn)一步與選自由抗腫瘤劑、化療劑、生長(zhǎng)抑制劑和細(xì)胞毒性劑組成的組的治療劑組合施用。47.一種用于檢測(cè)已經(jīng)用VEGF拮抗劑治療的受試者中的α5β1的試劑盒，所述試劑盒包含:(a)權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的抗-α5βI抗體；和(b)使用說(shuō)明書(shū)?！疚臋n編號(hào)】G01N33/68GK103755808SQ201310636812【公開(kāi)日】2014年4月30日申請(qǐng)日期:2010年3月23日優(yōu)先權(quán)日:2009年3月25日【發(fā)明者】梁偉慶,格雷戈里·D·普洛曼,吳巖,葉蔚藍(lán)申請(qǐng)人:霍夫曼-拉羅奇有限公司