利用穩(wěn)定同位素比值判定中藥白頭翁產(chǎn)地的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用穩(wěn)定同位素比值判定中藥白頭翁產(chǎn)地的方法，包括采用元素分析-穩(wěn)定同位素質(zhì)譜聯(lián)用技術測定白頭翁樣品中N％、C％、δ15N和δ13C值。主要步驟如下：通過測定不同產(chǎn)地來源的白頭翁樣品中N％、C％、δ15N和δ13C值，構建真實產(chǎn)地白頭翁樣品N％、C％、δ15N和δ13C數(shù)據(jù)庫；測定未知產(chǎn)地白頭翁樣品的N％、C％、δ15N和δ13C值；利用統(tǒng)計軟件進行Fisher判別分析，運行程序，判別未知產(chǎn)地白頭翁樣品的真實產(chǎn)地。本發(fā)明利用元素分析-穩(wěn)定同位素質(zhì)譜聯(lián)用技術建立了一種能夠準確鑒別白頭翁產(chǎn)地的方法，解決我國中藥產(chǎn)地溯源方面存在的技術難題，有利于保護消費者利益，促進中藥行業(yè)健康有序發(fā)展。
【專利說明】利用穩(wěn)定同位素比值判定中藥白頭翁產(chǎn)地的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥白頭翁產(chǎn)地溯源【技術領域】；具體涉及一種利用穩(wěn)定同位素比值判定中藥白頭翁產(chǎn)地的方法。
【背景技術】
[0002]白頭翁是常見的中藥材品種，藥用價值高，具有清熱解毒、涼血、明目、止痢等功效，根狀莖藥用，主治熱毒痢疾，鼻衄，血痔，帶下，陰癢，癰瘡，瘰疬。分布于遼寧、河北、吉林、河南、安徽、甘肅等地，古以安徽產(chǎn)者為地道藥材。不同產(chǎn)地的藥材因自然條件、生態(tài)環(huán)境不同，質(zhì)量有所差異，地道藥材較其他地區(qū)所產(chǎn)者品質(zhì)佳、療效好。現(xiàn)在市場上品種質(zhì)量真?zhèn)蝺?yōu)劣不一，因此有效鑒定白頭翁產(chǎn)地并控制原料藥材質(zhì)量，對規(guī)范中藥市場非常重要。白頭翁產(chǎn)地的傳統(tǒng)檢測方法多采用主觀和經(jīng)驗方法，通過觀察外形、顏色、植物形態(tài)、橫斷面形態(tài)和味道等性狀來鑒別區(qū)分，效果很差；方艷夕等通過HPLC方法檢測了不同產(chǎn)地白頭翁中白頭翁皂苷B4的含量，并建立了不同產(chǎn)地白頭翁的HPLC指紋圖譜，用于白頭翁藥材的鑒別，另外的一些檢測鑒定白頭翁的技術還有TLC、UV等。張振華曾報道用TLC、UV和HPLC的方法檢測鑒定白頭翁的產(chǎn)地。然而這些方法樣品前處理復雜，測試步驟較多，耗時較長。因此，開發(fā)一種簡易可行，能夠有效進行白頭翁產(chǎn)地溯源的技術方法對于維護消費者利益，促進我國中藥行業(yè)健康發(fā)展，具有十分重要的意義。
[0003]穩(wěn)定同位素質(zhì)譜技術，過去多應用于地質(zhì)領域，近年來在生態(tài)，農(nóng)業(yè)，食品等領域有應用，然而，中藥是我國所特有的，以前人們對中藥的研究大都是對其傳統(tǒng)方法的繼承和改善，而中藥的現(xiàn)代技術研究卻是剛剛起步。故穩(wěn)定同位素質(zhì)譜技術也就很少應用于中藥產(chǎn)地的鑒定；而且中藥的產(chǎn)地來源比較復雜，一種中藥材往往會有幾個甚至幾十個來源產(chǎn)地，而產(chǎn)地不同，其某些有效成分的含量也有所差別。鑒于中藥產(chǎn)地的鑒定本身具有特殊性，所以目前尚無利用穩(wěn)定同位素質(zhì)譜技術鑒定白頭翁產(chǎn)地的具體方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明目的在于針對白頭翁產(chǎn)地溯源方面存在的技術難題，提供一種利用穩(wěn)定同位素比值判定中藥白頭翁產(chǎn)地的方法，從而解決我國中藥材市場監(jiān)管存在的技術難題，規(guī)范市場行為，保護消費者利益，促進中藥材行業(yè)健康有序發(fā)展。
[0005]植物組織中的S13C都普遍小于大氣CO2中的S13C,表明CO2在通過光合作用形成植物組織的過程中，會產(chǎn)生碳同位素分餾，而這種分餾的大小與植物的光合作用類型、遺傳特性、生理特點、生長環(huán)境等因素密切相關，利用碳同位素技術可以區(qū)分C3、C4和CAM光合途徑植物。植物組織中的S 15N受氣候、環(huán)境、土壤等因素影響而發(fā)生自然分餾效應，導致不同產(chǎn)地的植物體內(nèi)的同位素自然豐度產(chǎn)生差異。所以，植物體的同位素豐度在一定程度上能夠反映植物的產(chǎn)地特征信息。本發(fā)明開拓性的發(fā)現(xiàn)白頭翁的特征體現(xiàn)在N%、C%、5C13和δ N15的結合，從而利用元素分析穩(wěn)定同位素質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測白頭翁的氮、碳百分含量，碳、氮穩(wěn)定同位素S13C、δ 15N實現(xiàn)準確地區(qū)分不同產(chǎn)地的白頭翁。[0006]本發(fā)明的目的是通過以下技術方案來實現(xiàn)的:[0007]本發(fā)明涉及一種利用穩(wěn)定同位素比值判定中藥白頭翁產(chǎn)地的方法，所述方法包括采用元素分析-穩(wěn)定同位素質(zhì)譜聯(lián)用技術測定白頭翁樣品中N%、C%、δ15Ν和S13C值。
[0008]優(yōu)選地，所述方法包括對已知真實產(chǎn)地和未知產(chǎn)地白頭翁樣品的N%、C%、δ 15N和S13C值進行比較，通過統(tǒng)計軟件進行Fisher判別分析對二者的N%、C%、δ 15N和S13C值四個變量進行顯著性差異分析來判斷未知產(chǎn)地樣品與已知真實樣品是否來自同一產(chǎn)地。若不存在顯著差異，貝1J表明未知產(chǎn)地樣品與已知真實樣品來自同一產(chǎn)地，反之則表明未知產(chǎn)地樣品與已知真實產(chǎn)地樣品來自不同的產(chǎn)地。
[0009]優(yōu)選地，所述方法包括如下步驟:
[0010]步驟一、通過測定不同已知產(chǎn)地來源的白頭翁樣品中N%、C%、δ15Ν和S13C值，構建真實產(chǎn)地白頭翁δ15Ν和S13C數(shù)據(jù)庫；
[0011]步驟二、測定未知產(chǎn)地白頭翁樣品的N%、C%、δ15Ν和S13C值；
[0012]步驟三、利用統(tǒng)計軟件(R軟件)進行Fisher判別分析，判斷未知產(chǎn)地白頭翁樣品的真實產(chǎn)地。
[0013]具體來說，測定未知產(chǎn)地白頭翁樣品的N%，C%，δ15Ν和S13C,然后將其與已建立的真實產(chǎn)地白頭翁的N%，C%，δ15Ν和S13C數(shù)據(jù)庫比較，如果待測樣品的N%，C%，δ15Ν和δ 13C落入所述區(qū)間，則可對應查找判斷出未知產(chǎn)地樣品的真實產(chǎn)地。
[0014]優(yōu)選地，所述δ 15Ν、δ 13C值分別為樣品的碳、氮同位素比值相對于標準物質(zhì)碳、氮同位素比值的千分差；對應公式為:δ (%0) = (Rsa / 1^^-1)父1000，其中，Rsa為樣品的同位素比值，Rst為標準物質(zhì)的同位素比值。
[0015]優(yōu)選地，所述元素分析-穩(wěn)定同位素質(zhì)譜聯(lián)用技術具體為:燃燒管溫度1150°C，氧化劑選用三氧化鎢，還原管溫度810°C，還原劑選用線狀銅，高純氦氣作為載氣和稀釋氣，高純二氧化碳、高純氮氣為參比氣。
[0016]優(yōu)選地，所述白頭翁樣品經(jīng)過預處理，所述預處理具體為:在測定前，取風干保存的白頭翁樣品根莖于烘箱中60°C加熱lh，冷卻后粉碎，過60目篩，待用。
[0017]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有如下有益效果:
[0018]1、本發(fā)明開拓性的發(fā)現(xiàn)白頭翁的特征體現(xiàn)在N%，C%，SC13和δ N15的結合，因此，可通過N%，C%，δ15Ν、S13C值來共同準確判定白頭翁的產(chǎn)地，若僅取任一值，則不能完全判斷產(chǎn)地，準確率急劇降低；
[0019]2、本發(fā)明在測定δ15Ν、S13C值的基礎上，進一步結合Ν%、(:％值；四組參數(shù)的結合可更好地體現(xiàn)白頭翁的特征，從而實現(xiàn)更準確地判定白頭翁的產(chǎn)地；
[0020]3、本發(fā)明的方法無需復雜的前處理，操作簡單，成本低，解決了中藥白頭翁的產(chǎn)地溯源的技術問題，對于維護消費者利益，促進我國中藥行業(yè)健康發(fā)展，具有十分重要的意義。
【具體實施方式】
[0021]下面結合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。以下實施例將有助于本領域的技術人員進一步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。應當指出的是，對本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進。這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0022]以下各實施例中，樣品(Sample)的同位素比值Rsa與一標準物質(zhì)(Standard)的同位素比值(Rst)作比較，比較結果稱為樣品的δ值。其定義為:δ (%0) = (Rsa /Rst-DXlOOO即樣品的同位素比值相對于標準物質(zhì)同位素比值的千分差。
[0023]實施例1
[0024]1.1真實產(chǎn)地白頭翁樣品N%，C%，δ 15N和δ 13C測定
[0025]I)分別從白頭翁主要產(chǎn)地黑龍江、遼寧、安徽、河南、甘肅等地挖掘真實白頭翁樣品;
[0026]2)取白頭翁樣品根莖，風干保存；
[0027]3)穩(wěn)定同位素質(zhì)譜測定前，取少量樣品于烘箱中60°C加熱lh，冷卻后粉碎，過60目篩，待測;
[0028]4)將樣品包裹于錫箔舟中，應用元素分析一穩(wěn)定同位素質(zhì)譜聯(lián)用進行δ15Ν、δ 13C、N%、C%測定；測定結果如表1所示:
[0029]表1
[0030]
【權利要求】
1.一種利用穩(wěn)定同位素比值判定中藥白頭翁產(chǎn)地的方法，其特征在于，所述方法包括采用元素分析-穩(wěn)定同位素質(zhì)譜聯(lián)用技術測定白頭翁樣品中N%、C%、δ15Ν和S13C值。
2.根據(jù)權利要求1所述的利用穩(wěn)定同位素比值判定中藥白頭翁產(chǎn)地的方法，其特征在于，所述方法包括對已知真實產(chǎn)地和未知產(chǎn)地白頭翁樣品的N%、C%、δ 15N和S13C值進行比較，通過對二者的N%、C%、δ15Ν和S13C值進行顯著性差異分析來判斷未知產(chǎn)地樣品與已知真實樣品是否來自同一產(chǎn)地。
3.根據(jù)權利要求1所述的利用穩(wěn)定同位素比值判定中藥白頭翁產(chǎn)地的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟: 步驟一、通過測定不同已知產(chǎn)地來源的白頭翁樣品中N%、C%、δ15Ν和S13C值，構建真實產(chǎn)地白頭翁δ15Ν和S13C數(shù)據(jù)庫; 步驟二、測定未知產(chǎn)地白頭翁樣品的N%、C%、δ15Ν和S13C值； 步驟三、利用R軟件進行Fisher判別分析，判斷未知產(chǎn)地白頭翁樣品的真實產(chǎn)地。
4.根據(jù)權利要求1~3中任一項所述的利用穩(wěn)定同位素比值判定中藥白頭翁產(chǎn)地的方法，其特征在于，所述δ15Ν、S13C值分別為樣品的碳、氮同位素比值相對于標準物質(zhì)碳、氮同位素比值的千分差；對應公式為:δ (%0) = (Rsa / 1^^-1)父1000，其中，Rsa為樣品的同位素比值，Rst為標準物質(zhì)的同位素比值。
5.根據(jù)權利要求1~3中任一項所述的利用穩(wěn)定同位素比值判定中藥白頭翁產(chǎn)地的方法，其特征在于，所述元素分析-穩(wěn)定同位素質(zhì)譜聯(lián)用技術具體為:燃燒管溫度1150°C，氧化劑選用三氧化鎢，還原管溫度810°C，還原劑選用線狀銅，高純氦氣作為載氣和稀釋氣，高純二氧化碳、高純氮氣為參比氣。
6.根據(jù)權利要求1~3中任一項所述的利用穩(wěn)定同位素比值判定中藥白頭翁產(chǎn)地的方法，其特征在于，所述白頭翁樣品經(jīng)過預處理，所述預處理具體為:在測定前，取風干保存的白頭翁樣品根莖于烘箱中60°C加熱lh，冷卻后粉碎，過60目篩，待用。
【文檔編號】G01N27/62GK103675083SQ201310561120
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年11月12日 優(yōu)先權日:2013年11月12日
【發(fā)明者】張莉, 陳劍, 梁莉莉, 梁齊 申請人:上海交通大學