一種基于發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)單一獸藥的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種基于發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)單一獸藥的方法，包括以下幾步：（1）用0.5mlNaCl無(wú)菌溶液將保存于-20℃的發(fā)光細(xì)菌凍干粉溶解，迅速轉(zhuǎn)入100ml發(fā)光細(xì)菌培養(yǎng)液中，22℃下培養(yǎng)20h，連續(xù)培養(yǎng)3代后，取1ml菌液涂布于固體平板，22℃培養(yǎng)20h后，備用；（2）將步驟（1）中培養(yǎng)的發(fā)光細(xì)菌用5mlNaCl無(wú)菌溶液制成菌懸液，備用；（3）配置一系列濃度的獸藥溶液2.0ml加入專用檢測(cè)杯中，同時(shí)以2.0mlNaCl無(wú)菌溶液做空白對(duì)照，每個(gè)濃度梯度和空白均設(shè)3個(gè)重復(fù)，取10μL發(fā)光細(xì)菌的菌懸液分別加入樣品和對(duì)照杯中，充分振蕩均勻，15min后測(cè)定發(fā)光細(xì)菌的發(fā)光強(qiáng)度。本發(fā)明的檢測(cè)結(jié)果完全能夠滿足對(duì)磺胺類獸藥殘留檢測(cè)，該方法前處理簡(jiǎn)單、成本低廉且可對(duì)獸藥等物質(zhì)實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)。
【專利說(shuō)明】一種基于發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)單一獸藥的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及獸藥檢測(cè)方法，具體而言，涉及一種基于發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)單一獸藥的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來(lái)，隨著農(nóng)牧業(yè)的發(fā)展，獸藥、農(nóng)藥和添加劑的濫用造成畜產(chǎn)品有害物質(zhì)殘留嚴(yán)重超標(biāo)，不僅給消費(fèi)者身體健康帶來(lái)潛在危害，還影響畜牧業(yè)發(fā)展，獸藥殘留的檢測(cè)技術(shù)也越來(lái)越受到關(guān)注。目前，國(guó)內(nèi)外多采用液相、液質(zhì)聯(lián)用等技術(shù)來(lái)檢測(cè)獸藥殘留，但是這些技術(shù)存在操作復(fù)雜、時(shí)間長(zhǎng)、檢測(cè)成本較高等不足，而且不適宜在線檢測(cè)。
[0003]為了解決上述問(wèn)題，現(xiàn)在采用發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)法，采用發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)的前處理簡(jiǎn)單，成本低廉，對(duì)獸藥的檢測(cè)速度較快，同時(shí)也可對(duì)大氣、土壤、水環(huán)境、食物等進(jìn)行綜合生物毒性評(píng)價(jià)?，F(xiàn)在常用費(fèi)氏弧菌作為毒性測(cè)試菌種，但是該類發(fā)光菌檢測(cè)存在局限性，檢測(cè)前需向淡水樣品添加NaCl，而有些樣品因?yàn)樘砑恿?NaCl導(dǎo)致生物毒性發(fā)生改變，使檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明解決了現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種前處理簡(jiǎn)單、成本低廉且可快速檢測(cè)獸藥殘留的方法。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案為:一種基于發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)單一獸藥的方法，包括以下幾步: (O發(fā)光細(xì)菌培養(yǎng):用0.5mlNaCl無(wú)菌溶液將保存于_20°C的發(fā)光細(xì)菌凍干粉溶解，迅
速轉(zhuǎn)入IOOml發(fā)光細(xì)菌培養(yǎng)液中，22°C下培養(yǎng)20h，連續(xù)培養(yǎng)3代后，取Iml菌液涂布于固體平板，22 °C培養(yǎng)20h后，備用；
(2)菌液制備:將步驟(I)中培養(yǎng)的發(fā)光細(xì)菌用5mlNaCl無(wú)菌溶液制成菌懸液，備用；
(3)配置一系列濃度的獸藥溶液2.0ml加入專用檢測(cè)杯中，同時(shí)以2.0mlNaCl無(wú)菌溶液做空白對(duì)照，每個(gè)濃度梯度和空白均設(shè)3個(gè)重復(fù)，取10 μ L發(fā)光細(xì)菌的菌懸液分別加入樣品和對(duì)照杯中，充分振蕩均勻，15min后測(cè)定發(fā)光細(xì)菌的發(fā)光強(qiáng)度。
[0006]本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，所述發(fā)光細(xì)菌為明亮發(fā)光桿菌T3。
[0007]本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，制備所述的發(fā)光細(xì)菌培養(yǎng)液的步驟如下:稱取5g酵母膏、5g胰蛋白胨、30gNaCl、5gNa2HP、5gKH2P04、3g甘油、1000ml蒸懼水,混合均勻調(diào)節(jié)pH至7±0.5°C，在121°C下高壓滅菌15min，制成發(fā)光細(xì)菌的培養(yǎng)液。
[0008]本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，所述NaCl無(wú)菌溶液的濃度為30g/L。
[0009]本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，所述菌懸液的OD值為0.8?1.0。
[0010]本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，所述一系列濃度的獸藥溶液為3000、300、30、3、0.3、0.03、0.003mg/L。
[0011]本發(fā)明的一個(gè)較佳實(shí)施例中，進(jìn)一步包括，所述獸藥為磺胺類的磺胺間甲氧嘧啶鈉。[0012]本發(fā)明的解決了現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，具有以下有益效果:
本發(fā)明的方法中，在常溫下，不同濃度磺胺間甲氧嘧啶鈉與明亮發(fā)光桿菌T3接觸后，隨著磺胺間甲氧嘧啶鈉質(zhì)量濃度降低，明亮發(fā)光桿菌T3相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度增強(qiáng)，表明磺胺間甲氧嘧啶鈉質(zhì)量濃度降低，對(duì)明亮發(fā)光桿菌T3發(fā)光抑制性越弱。本發(fā)明的檢測(cè)結(jié)果完全能夠滿足對(duì)磺胺類獸藥殘留檢測(cè)，該方法前處理簡(jiǎn)單、成本低廉且可對(duì)獸藥等物質(zhì)實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)。
【具體實(shí)施方式】
[0013]為了使本【技術(shù)領(lǐng)域】的人員更好地理解本發(fā)明，并使本發(fā)明的上述優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。
實(shí)施例
[0014](I)制備發(fā)光細(xì)菌培養(yǎng)液的步驟如下:稱取5g酵母膏、5g胰蛋白胨、30gNaCl、5gNa2HP、5gKH2P04、3g甘油、1000ml蒸餾水，混合均勻調(diào)節(jié)pH至7±0.5°C，在121°C下高壓滅菌15min，制成發(fā)光細(xì)菌的培養(yǎng)液。
[0015](2)發(fā)光細(xì)菌培養(yǎng):用0.5ml30g/L NaCl無(wú)菌溶液將保存于_20°C的明亮發(fā)光桿菌T3凍干粉溶解，迅速轉(zhuǎn)入IOOml發(fā)光細(xì)菌培養(yǎng)液中，22°C下培養(yǎng)20h，連續(xù)培養(yǎng)3代后，取Iml菌液涂布于固體平板,22°C培養(yǎng)20h后,備用。
[0016](3)菌液制備:將步驟(2)中培養(yǎng)的明亮發(fā)光桿菌T3用5mlNaCl無(wú)菌溶液制成OD值為0.8?1.0菌懸液，備用。
[0017](4)配置3000、300、30、3、0.3,0.03,0.003mg/L 一系列濃度的磺胺間甲氧嘧啶鈉溶液2.0ml加入專用檢測(cè)杯中，同時(shí)以2.0ml30g/L NaCl無(wú)菌溶液做空白對(duì)照，每個(gè)濃度梯度和空白均設(shè)3個(gè)重復(fù)，取IOyL明亮發(fā)光桿菌T3的菌懸液分別加入樣品和對(duì)照杯中，充分振蕩均勻，15min后測(cè)定明亮發(fā)光桿菌T3的發(fā)光強(qiáng)度。
[0018]檢測(cè)結(jié)果
在常溫下，明亮發(fā)光桿菌T3的菌懸液與一系列濃度磺胺間甲氧嘧啶鈉溶液接觸15min，測(cè)定明亮發(fā)光桿菌T3的發(fā)光強(qiáng)度，計(jì)算出相對(duì)廣發(fā)強(qiáng)度。重復(fù)組的標(biāo)準(zhǔn)偏差低于10%。
[0019]3000、300、30、3、0.3,0.03,0.003mg/L 一系列濃度的磺胺間甲氧嘧啶鈉溶液對(duì)應(yīng)的相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度分別為:0%、4%、27%、73%、89%、100%、100%。如結(jié)果所示，隨著磺胺間甲氧嘧啶鈉質(zhì)量濃度降低，明亮發(fā)光桿菌T3相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度增加，說(shuō)明磺胺間甲氧嘧啶鈉質(zhì)量濃度越低，對(duì)明亮發(fā)光桿菌T3發(fā)光抑制性越弱。
[0020]相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度(％)=樣品發(fā)光強(qiáng)度X 100%/對(duì)照發(fā)光強(qiáng)度。
[0021]當(dāng)磺胺間甲氧嘧啶鈉的質(zhì)量濃度低于0.lmg/L時(shí)，明亮發(fā)光桿菌T3相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度在100%左右，說(shuō)明低濃度磺胺間甲氧嘧啶鈉對(duì)明亮發(fā)光桿菌T3無(wú)抑制作用?？梢缘贸雒髁涟l(fā)光桿菌T3檢測(cè)磺胺間甲嘧啶鈉最小檢出限為lOOyg/L，滿足對(duì)磺胺類獸藥檢測(cè)的要求。
[0022]以上所述，僅為本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】，本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到的變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。因此，本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)該以權(quán)利要求所界定的保護(hù)范圍為準(zhǔn)。
【權(quán)利要求】
1.一種基于發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)單一獸藥的方法，其特征在于，包括以下幾步: (O發(fā)光細(xì)菌培養(yǎng):用0.5mlNaCl無(wú)菌溶液將保存于_20°C的發(fā)光細(xì)菌凍干粉溶解，迅速轉(zhuǎn)入IOOml發(fā)光細(xì)菌培養(yǎng)液中，22°C下培養(yǎng)20h，連續(xù)培養(yǎng)3代后，取Iml菌液涂布于固體平板，22 °C培養(yǎng)20h后，備用； (2)菌液制備:將步驟(I)中培養(yǎng)的發(fā)光細(xì)菌用5mlNaCl無(wú)菌溶液制成菌懸液，備用； (3)配置一系列濃度的獸藥溶液2.0ml加入專用檢測(cè)杯中，同時(shí)以2.0mlNaCl無(wú)菌溶液做空白對(duì)照，每個(gè)濃度梯度和空白均設(shè)3個(gè)重復(fù)，取10 μ L發(fā)光細(xì)菌的菌懸液分別加入樣品和對(duì)照杯中，充分振蕩均勻，15min后測(cè)定發(fā)光細(xì)菌的發(fā)光強(qiáng)度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)單一獸藥的方法，其特征在于，所述發(fā)光細(xì)菌為明亮發(fā)光桿菌T3。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的一種基于發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)單一獸藥的方法，其特征在于，制備所述的發(fā)光細(xì)菌培養(yǎng)液的步驟如下:稱取5g酵母膏、5g胰蛋白胨、30gNaCl、5gNa2HP、5gKH2P04、3g甘油、1000ml蒸餾水，混合均勻調(diào)節(jié)pH至7±0.5°C，在121°C下高壓滅菌15min，制成發(fā)光細(xì)菌的培養(yǎng)液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)單一獸藥的方法，其特征在于，所述NaCl無(wú)菌溶液的濃度為30g/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)單一獸藥的方法，其特征在于，所述菌懸液的OD值為0.8?1.0。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)單一獸藥的方法，其特征在于，所述一系列濃度的獸藥溶液為 3000、300、30、3、0.3,0.03,0.003mg/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種基于發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)單一獸藥的方法，其特征在于，所述獸藥為磺胺類的磺胺間甲氧嘧啶鈉。
【文檔編號(hào)】G01N1/28GK103499568SQ201310456189
【公開(kāi)日】2014年1月8日 申請(qǐng)日期:2013年9月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月30日
【發(fā)明者】楊晶晶 申請(qǐng)人:蘇州國(guó)環(huán)環(huán)境檢測(cè)有限公司