專利名稱：一種細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用分散組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物領(lǐng)域，特別涉及一種細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用分散組合物。
背景技術(shù)：
細(xì)菌內(nèi)毒素是G_菌細(xì)胞壁上的特有結(jié)構(gòu)，其主要成分是脂多糖，具很強(qiáng)的熱原活性。當(dāng)細(xì)菌內(nèi)毒素通過(guò)消化道進(jìn)入人體時(shí)并不產(chǎn)生危害，但內(nèi)毒素通過(guò)注射等方式進(jìn)入血液時(shí)，則可導(dǎo)致不同程度的內(nèi)毒素血癥。因此，對(duì)于注射劑及其生產(chǎn)中所用的原輔料都應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素的控制，以確保產(chǎn)品質(zhì)量，保障用藥安全。細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)常用方法是家兔熱原法和鱟試劑法，目前運(yùn)用較多的是鱟試劑法。采用該方法進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)之前，須進(jìn)行干擾實(shí)驗(yàn)，排除供試品對(duì)鱟試劑實(shí)驗(yàn)的干擾，確保該方法的準(zhǔn)確度。對(duì)于非水溶性供試品，由于其與細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用水不能互溶，混合后一段時(shí)間出現(xiàn)分層，導(dǎo)致難以有效檢測(cè)。目前多采用的方法是在分層以前取供試品與細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用水的混合物，或者通過(guò)離心取水相部分進(jìn)行干擾實(shí)驗(yàn)，但是取供試品與細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用水的混合物進(jìn)行干擾實(shí)驗(yàn)需要稀釋更大的倍數(shù)才能排除干擾甚至不能排除干擾；離心方法存在操作復(fù)雜、容易造成二次污染，出現(xiàn)假陽(yáng)性，同時(shí)不能確保油相中的細(xì)菌內(nèi)毒素完全溶解在水相中，在進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)時(shí)，容易出現(xiàn)假陰性等缺點(diǎn)。對(duì)于含有這類非水溶性原料的藥品，雖然能夠與水互溶，在采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用水稀釋時(shí)，仍然存在細(xì)菌內(nèi)毒素在供試品中分散不均勻?qū)е赂蓴_不能成立的情況。商君等，“油劑普魯卡因青霉素注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法的研究”，中國(guó)獸藥雜志2000,34 (1):20 22，采用在樣品中加入適量無(wú)菌、內(nèi)毒素合格的0.lmol/L氫氧化鈉、1%吐溫-80溶液，并用0.lmol/L鹽酸調(diào)節(jié)樣品液的pH值，解決了油劑普魯卡因青霉素注射液的溶解問(wèn)題，但是該方法操作復(fù)雜，并且經(jīng)研究，不能廣泛應(yīng)用于常用的非水溶性藥品。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種新的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用分散組合物。本發(fā)明細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用分散組合物，它包括如下配比的成分:甘油I 20體積份、陰離子表面活性劑0.5 5重量份，非離子表面活性劑I 10體積份。所述重量份/體積份為g/ml。其中,所述陰離子表面活性劑HLB值為I 20。優(yōu)選地,所述陰離子表面活性劑的HLB值為12 20。其中，所述陰離子表面活性劑包括油酸、油酸鈉或者油酸三乙醇胺中的一種或者多種。其中，所述非離子表面活性劑的HLB值為I 20。優(yōu)選地，所述非離子表面活性劑的HLB值為13.3 16 .7。其中，所述非離子表面活性劑包括聚山梨酯類系列中的一種或者多種。
優(yōu)選地，它包括如下配比的成分:甘油10體積份、陰離子表面活性劑I重量份，非離子表面活性劑10體積份。本發(fā)明細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用的分散液，它包括前述述細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用的分散組合物與注射用水或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，其中，甘油的濃度為0.1 2% (v/v)。本發(fā)明前述分散液的方法，它包括如下步驟:(I)取甘油，溶于注射用水或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水中，得甘油濃度為0.1% 2%(v/v)的溶液；(2)分別取陰離子表面活性劑和非離子表面活性劑溶于步驟(I)的溶液中，它們的濃度分別為0.1 0.4% (w/v)和0.1 1% (v/v)；(3)將步驟(2)得到的溶液用孔徑為IOOnm微孔濾膜過(guò)濾，即可。本發(fā)明細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用分散組合物使內(nèi)毒素均勻分散在水相中，有效排除非水溶性供試品對(duì)鱟試劑實(shí)驗(yàn)的干擾，提高內(nèi)毒素檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度，簡(jiǎn)化內(nèi)毒素檢測(cè)步驟。以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。·


圖1內(nèi)毒素檢測(cè)報(bào)告，其中，管號(hào)1-8:標(biāo)準(zhǔn)曲線；9_10:離心法制備供試品溶液；11-12:陽(yáng)性對(duì)照；13-14:實(shí)施例1分散液作為溶劑制備的供試品溶液I ;15-16:實(shí)施例1分散液對(duì)照樣品的制備I ;17_18:實(shí)施例2分散液作為溶劑制備的供試品溶液2 ； 19-20:實(shí)施例2分散液對(duì)照樣品2 ；21-22:實(shí)施例3分散液作為溶劑制備的供試品溶液3 ；23~24:實(shí)施例3分散液對(duì)照樣品3 ；25-26:實(shí)施例4分散液作為溶劑制備的供試品溶液4 ；27~28:實(shí)施例4分散液對(duì)照樣品4 ；29-30:實(shí)施例5分散液作為溶劑制備的供試品溶液5 ;31_32:實(shí)施例5分散液對(duì)照樣品5。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，指《中華人民共和國(guó)藥典》(2010版第二部附錄XI E)規(guī)定的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。實(shí)施例1本發(fā)明分散液的制備及應(yīng)用一、制備方法(I)試劑選擇陰離子表面活性劑選擇油酸鈉，其HBL值為18 ;非離子表面活性劑選擇聚山梨酯-80，其HBL值為15。(2)實(shí)驗(yàn)器具及試劑熱原的去除所有用的實(shí)驗(yàn)器具，包括碘量瓶、容量瓶、藥匙、燒杯在250°C下干烤2h，去除其中的熱原；油酸鈉放置于除去熱原的碘量瓶中，在150°C下干烤2h。(3)分散液的配制稱取已經(jīng)在150°C干烤2h的油酸鈉0.lg，用細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用水配制的1%甘油溶液在已經(jīng)去除熱原的燒杯中溶解，配制成濃度為0.1%的油酸鈉溶液，然后加入1%聚山梨酯-80，使得整個(gè)體系各原料的配比為:油酸鈉0.1% (w/v)，甘油1% (v/v)、聚山梨酯-801%(v/v),最后用細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用水配制的0.lmol/L HCl溶液調(diào)節(jié)pH在6_8左右。(4)分散液溶液的內(nèi)毒素去除將得到的溶液用孔徑為IOOnm微孔濾膜將溶液過(guò)濾到已除熱原的碘量瓶中。(5)分散液溶液細(xì)菌內(nèi)毒素驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)按照細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用水的要求將該分散液溶液的細(xì)菌內(nèi)毒素限值定為0.015EU/ml。采用兩個(gè)不同生產(chǎn)廠家的鱟試劑對(duì)該溶液進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素干擾實(shí)驗(yàn)，建立該分散液細(xì)菌內(nèi)毒素驗(yàn)證方法為采用靈敏度為0.015EU/ml的鱟試劑對(duì)該溶液進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)。a、細(xì)菌內(nèi)毒素限值的確定按照細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用水的要求將該分散液溶液的細(xì)菌內(nèi)毒素限值定為0.015EU/ml。b、供試品的干擾試驗(yàn)鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)按《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄XI E “細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”，對(duì)所用兩個(gè)廠家鱟試劑的靈敏度進(jìn)行復(fù)核。根據(jù)鱟試劑靈敏度的標(biāo)示值(X )，將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水溶解，在旋渦混合器上混勻15分鐘，然后制成2入、A ,0.5A ,0.25 A四個(gè)濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，每稀釋一步均在旋渦混合器上混勻30秒鐘。按檢查法項(xiàng)下試驗(yàn)，每一濃度平行做4支，同時(shí)，用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水做2支陰性對(duì)照管，如最大濃度2.0 A管均為陽(yáng)性，最低濃度0.25 X管均為陰性，陰性對(duì)照管均為陰性，按下式計(jì)算反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何均值，即為鱟試劑靈敏度的測(cè)定值(、C)。A c=lg_1( E X/4)式中X為反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對(duì)數(shù)值(lg)。反應(yīng)終點(diǎn)濃度是系列濃度遞減的內(nèi)毒素溶液中最后一個(gè)呈陽(yáng)性結(jié)果的濃度。復(fù)核結(jié)果見(jiàn)表I。表I鱟試劑靈敏度復(fù)核結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用分散組合物，其特征在于:它包括如下配比的成分:甘油I 20體積份、陰尚子表面活性劑0.5 5重量份,非尚子表面活性劑I 10體積份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述分散組合物，其特征在于:所述陰離子表面活性劑HLB值為I 20。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述分散組合物，其特征在于:所述陰離子表面活性劑的HLB值為12 20。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述分散組合物，其特征在于:所述陰離子表面活性劑包括油酸、油酸鈉或者油酸三乙醇胺中的一種或者多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述分散組合物，其特征在于:所述非離子表面活性劑的HLB值為I 20。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述分散組合物，其特征在于:所述非離子表面活性劑的HLB值為13.3 16.7。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述分散組合物，其特征在于:所述非離子表面活性劑包括聚山梨酷類系列中的一種或者多種。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述分散組合物，其特征在于:它包括如下配比的成分:甘油10體積份、陰離子表面活性劑I重量份，非離子表面活性劑10體積份。
9.一種細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用分散液，其特征在于:它包括權(quán)利要求1 7任意一項(xiàng)所述細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用的分散組合物與注射用水或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，其中，甘油的濃度為0.1 2% (v/v)0
10.一種制備權(quán)利要求9所述分散液的方法，其特征在于:它包括如下步驟: (1)取甘油，溶于注射用水或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水中，得甘油濃度為0.1% 2% (v/v)的溶液； (2)分別取陰離子表面活性劑和非離子表面活性劑溶于步驟(I)的溶液中，它們的濃度分別為 0.1 0.4% (w/v)和 0.1 1% (v/v)； (3)將步驟(2)得到的溶液用孔徑為IOOnm微孔濾膜過(guò)濾，即可。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用分散組合物，它包括如下配比的成分甘油1～20體積份、陰離子表面活性劑0.5～5重量份，非離子表面活性劑1～10體積份。本發(fā)明還公開(kāi)了一種細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用分散液及其制備方法。本發(fā)明細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用分散組合物可以有效提高內(nèi)毒素檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度，簡(jiǎn)化內(nèi)毒素檢測(cè)步驟，具有良好的經(jīng)濟(jì)效益。
文檔編號(hào)G01N33/579GK103245786SQ20131011698
公開(kāi)日2013年8月14日 申請(qǐng)日期2013年4月7日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月7日
發(fā)明者楊秋艷, 朱雪梅, 楊軍, 王利春, 王晶翼, 梁隆, 沈鑫, 程志鵬 申請(qǐng)人:四川科倫藥業(yè)股份有限公司