專利名稱：一種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
流行性出血熱(EHF)又稱腎綜合征出血熱(hemorrhagic fever withrenal syndrome, HFRS ),是由布尼亞病毒科(Bunyaviridae)漢坦病毒屬(Hantavirus)中某些病毒引起，并以鼠類為主要傳染源的自然疫源性疾病。臨床上以發(fā)熱、休克、充血性出血和急性腎功能衰竭為主要表現(xiàn)，并常伴有腔道出血、中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥、肺水腫等多種并發(fā)癥。腎綜合征出血熱分布于全世界30多個(gè)國(guó)家，疫源地分布于五大洲70多個(gè)國(guó)家，已成為世界公共衛(wèi)生問題。我國(guó)是受腎綜合征出血熱危害最為嚴(yán)重的國(guó)家，年報(bào)告發(fā)病人數(shù)約為4 6萬，占世界報(bào)告病例總數(shù)的90%以上，高發(fā)疫區(qū)發(fā)病率在50/10萬左右，偶有暴發(fā)流行，病死率高達(dá)30%。該病在我國(guó)分布范圍廣、疫區(qū)類型復(fù)雜，是我國(guó)最嚴(yán)重的蟲媒傳染病之一 O漢坦病毒為分節(jié)段的負(fù)鏈RNA病毒，其基因組由大(L)、中(M)和小(S)三個(gè)RNA片段組成，分別編碼依賴RNA的RNA多聚酶、包膜糖蛋白(Gl和G2)和核殼體蛋白。漢坦病毒基因組RNA的5’端和3’端的15 30個(gè)堿基互補(bǔ)，這些互補(bǔ)序列可以保持RNA的穩(wěn)定性，并可能在轉(zhuǎn)錄或復(fù)制的過程中被RNA聚合酶識(shí)別，啟動(dòng)合成新的RNA。11個(gè)堿基的最末端序列“TAGTAGTAGAC”為所有漢坦病毒所共有，是漢坦病毒的重要基因特征之一，是區(qū)分漢坦病毒和布尼亞病毒科其它病毒的重要依據(jù)。漢坦屬病毒和布尼亞病毒科其它病毒在血清學(xué)上沒有交叉反應(yīng)。目前流行性出血熱病毒抗體傳統(tǒng)的檢測(cè)方法是采用血清學(xué)診斷方法，包括間接酶免吸附試驗(yàn)檢測(cè)EHF IgG抗體、膠體金法、免疫熒光試驗(yàn)檢測(cè)雙份血清IgG抗體等，這些方法均在一定程度上易出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性現(xiàn)象，給流行性出血熱的臨床診斷帶來一定干擾。ELISA法IgM捕獲法檢測(cè)EHF IgM抗體，若待測(cè)血清中含有流行性出血熱病毒，則流行性出血熱病毒IgM抗體即與EHF酶結(jié)合物、兔抗人-1gM單抗結(jié)合，并結(jié)合在微孔壁表面，通過底物作用顯色，用以特異性的檢測(cè)待測(cè)血清中的流行性出血熱IgM抗體，該檢測(cè)方法靈敏度高、特異性強(qiáng)。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型所要解決的技術(shù)問題是:提供一種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，應(yīng)用IgM捕獲ELISA法檢測(cè)EHF IgM抗體，以減少假陽(yáng)性或假陰性現(xiàn)象對(duì)臨床診斷帶來的干擾，并且使該試劑盒能夠?qū)α餍行猿鲅獰徇M(jìn)行快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)，同時(shí)誤差小、檢測(cè)靈敏度高、對(duì)檢測(cè)設(shè)備要求低。為解決上述技術(shù)問題，本實(shí)用新型的技術(shù)方案是:[0008]所述盒體內(nèi)設(shè)有EHF酶標(biāo)板、封板膜、EHF酶結(jié)合物溶液瓶、底物A溶液瓶、底物B溶液瓶、EHF陰性對(duì)照溶液瓶、EHF陽(yáng)性對(duì)照溶液瓶和終止液溶液瓶，所述盒體內(nèi)部設(shè)有一個(gè)橫向隔斷，使所述盒體分成一個(gè)上部的用于容納所述EHF酶結(jié)合物溶液瓶、底物A溶液瓶、底物B溶液瓶、EHF陰性對(duì)照溶液瓶、EHF陽(yáng)性對(duì)照溶液瓶的空腔和一個(gè)底部的用于容納所述EHF酶標(biāo)板的空腔；所述EHF酶標(biāo)板上設(shè)有至少5個(gè)具有抗人IgM單抗層的透明反應(yīng)孔。優(yōu)選的，所述EHF酶標(biāo)板上設(shè)有5 95個(gè)反應(yīng)孔。更進(jìn)一步優(yōu)選的,所述EHF酶標(biāo)板上設(shè)有48個(gè)反應(yīng)孔。優(yōu)選的，所述EHF酶標(biāo)板包括板架和多個(gè)可拆卸安裝在所述板架上的反應(yīng)板條，所述反應(yīng)孔設(shè)置在所述反應(yīng)板條上。優(yōu)選的，所述盒體上部的空腔設(shè)有還一個(gè)縱向隔斷，所述底物A溶液瓶和底物B溶液瓶放入其中的一個(gè)空腔，所述EHF酶結(jié)合物溶液瓶、EHF陰性對(duì)照溶液瓶、EHF陽(yáng)性對(duì)照溶液瓶和終止液溶液瓶放置于另一個(gè)空腔。采用上述技術(shù)方案后，本實(shí)用新型的有益效果是:由于本實(shí)用新型采用ELISA法IgM捕獲法檢測(cè)EHF IgM抗體，與ELISA法間接法等其他方法相比，本實(shí)用新型靈敏度高、特異性強(qiáng)，實(shí)驗(yàn)操作僅需一步即可出結(jié)果，因此，本實(shí)用新型不但減少了假陽(yáng)性或假陰性現(xiàn)象對(duì)臨床診斷帶來的干擾，使該試劑盒能夠?qū)α餍行猿鲅獰徇M(jìn)行快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)，而且誤差小、檢測(cè)靈敏度高、對(duì)檢測(cè)設(shè)備要求低。

圖1為本實(shí)用新型實(shí)施例打開后俯視圖；圖2為本實(shí)用新型實(shí)施例內(nèi)部正視示意圖；圖3為本實(shí)用新型實(shí)施例酶標(biāo)板的示意圖；其中，1、盒體；2、EHF酶結(jié)合物溶液瓶；3、底物A溶液瓶；4、底物B溶液瓶；5、EHF陰性對(duì)照溶液瓶；6、EHF陽(yáng)性對(duì)照溶液瓶；7、終止液溶液瓶；8、透明反應(yīng)孔；9、板架；10、反應(yīng)板條；11、橫向隔斷；12、縱向隔斷。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1一種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒如圖1、圖2和圖3所示，本實(shí)施例試劑盒包括盒體1，盒體I內(nèi)設(shè)有EHF酶標(biāo)板(如圖3所示)、封板膜、EHF酶結(jié)合物溶液瓶2、底物A溶液瓶3、底物B溶液瓶4、EHF陰性對(duì)照溶液瓶5、EHF陽(yáng)性對(duì)照溶液瓶6和終止液溶液瓶7 ；EHF酶標(biāo)板上設(shè)有多個(gè)包被有固相兔抗人IgM單克隆抗體的透明反應(yīng)孔8 ；EHF酶標(biāo)板上設(shè)有48個(gè)反應(yīng)孔。EHF酶標(biāo)板包括板架9和多個(gè)可拆卸安裝在板架9上的反應(yīng)板條10，透明反應(yīng)孔8設(shè)置在反應(yīng)板條10上。盒體I內(nèi)部設(shè)有一個(gè)橫向隔斷11，使盒體分成一個(gè)上部用于容納溶液瓶的空腔和一個(gè)底部用于容納板架9的空腔，橫向隔斷11為硬質(zhì)材料，盒體I上部空腔設(shè)有還一個(gè)縱向隔斷12，底物A溶液瓶3和底物B溶液瓶4放入其中的一個(gè)空腔，其他溶液瓶放置于另一個(gè)空腔。實(shí)施例2—種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒本實(shí)施例中:EHF酶標(biāo)板上設(shè)有5個(gè)反應(yīng)孔。其余同實(shí)施例1。實(shí)施例3一種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒本實(shí)施例中:EHF酶標(biāo)板上設(shè)有95個(gè)反應(yīng)孔。其余同實(shí)施例1。本實(shí)用新型試劑盒的性能指標(biāo)檢測(cè):(I)陰性參考品符合率:用10份該試劑陰性參考品檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果全部成陰性。(2)陽(yáng)性參考品符合率:用10份該試劑陽(yáng)性參考品檢測(cè)(包括強(qiáng)、中、弱)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果全部成陽(yáng)性。
(3)精密性:用I份精密性參考品做10個(gè)測(cè)試，CV值不高于10%。(4)臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果:用本試劑盒檢測(cè)已確診的臨床樣本1000例(其中EHF陽(yáng)性50例)，檢測(cè)結(jié)果顯示，陰性符合率100%，陽(yáng)性符合率100%，總符合率100%。檢測(cè)實(shí)例:共檢測(cè)臨床血清樣本1000例(其中EHF陽(yáng)性50例)，使用本實(shí)用新型方法進(jìn)行檢測(cè)，其特異性和敏感性均為100%。表I本實(shí)用新型EHF試劑盒檢測(cè)結(jié)果與臨床診斷結(jié)果比較
權(quán)利要求1.一種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，包括盒體，其特征在于:所述盒體內(nèi)設(shè)有EHF酶標(biāo)板、封板膜、EHF酶結(jié)合物溶液瓶、底物A溶液瓶、底物B溶液瓶、EHF陰性對(duì)照溶液瓶、EHF陽(yáng)性對(duì)照溶液瓶和終止液溶液瓶，所述盒體內(nèi)部設(shè)有一個(gè)橫向隔斷，使所述盒體分成一個(gè)上部的用于容納所述EHF酶結(jié)合物溶液瓶、底物A溶液瓶、底物B溶液瓶、EHF陰性對(duì)照溶液瓶、EHF陽(yáng)性對(duì)照溶液瓶的空腔和一個(gè)底部的用于容納所述EHF酶標(biāo)板的空腔；所述EHF酶標(biāo)板上設(shè)有至少5個(gè)具有抗人IgM單抗層的透明反應(yīng)孔。
2.如權(quán)利要求1所述的流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述EHF酶標(biāo)板上設(shè)有5 95個(gè)反應(yīng)孔。
3.如權(quán)利要求2所述的流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述EHF酶標(biāo)板上設(shè)有48個(gè)反應(yīng)孔。
4.如權(quán)利要求1所述的流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述EHF酶標(biāo)板包括板架和多個(gè)可拆卸安裝在所述板架上的反應(yīng)板條，所述反應(yīng)孔設(shè)置在所述反應(yīng)板條上。
5.如權(quán)利要求1所述的流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述盒體上部的空腔設(shè)有還一個(gè)縱向隔斷，所述底物A溶液瓶和底物B溶液瓶放入其中的一個(gè)空腔，所述EHF酶結(jié)合物溶液瓶、EHF陰性對(duì)照溶液瓶、EHF陽(yáng)性對(duì)照溶液瓶和終止液溶液瓶放置于另一個(gè)空腔。
專利摘要本實(shí)用新型公開了一種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，包括盒體，所述盒體內(nèi)設(shè)有EHF酶標(biāo)板、封板膜、EHF酶結(jié)合物溶液瓶、底物A溶液瓶、底物B溶液瓶、EHF陰性對(duì)照溶液瓶、EHF陽(yáng)性對(duì)照溶液瓶和終止液溶液瓶。本實(shí)用新型采用IgM捕獲ELISA法檢測(cè)EHF IgM抗體，以減少假陽(yáng)性或假陰性現(xiàn)象對(duì)臨床診斷帶來的干擾，并且使該試劑盒能夠?qū)α餍行猿鲅獰徇M(jìn)行快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)，同時(shí)誤差小、檢測(cè)靈敏度高、對(duì)檢測(cè)設(shè)備要求低。
文檔編號(hào)G01N33/577GK203011926SQ20122072607
公開日2013年6月19日 申請(qǐng)日期2012年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月24日
發(fā)明者楊致亭, 楊愛香, 王春光, 沈孝功, 劉發(fā)新, 劉海波, 邱香廷, 宋玉翠 申請(qǐng)人:濰坊市康華生物技術(shù)有限公司