白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑和白細(xì)胞分類方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑、對(duì)白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的方法和兩性離子表面活性劑的應(yīng)用。該白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑包含至少一種陽離子表面活性劑和至少一種兩性離子表面活性劑以及pH緩沖劑。其中，該兩性離子表面活性劑為文中通式I所示的結(jié)構(gòu)的兩性離子表面活性劑或?yàn)槟懼嵫苌镄蛢尚员砻婊钚詣?。本發(fā)明白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑能對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞進(jìn)行特異性處理，增強(qiáng)了嗜酸性粒細(xì)胞與中性粒細(xì)胞之間的差異，以達(dá)到增強(qiáng)嗜酸性粒細(xì)胞分類作用，使老化血中各個(gè)白細(xì)胞亞類分類效果與新鮮血的分類效果之間差異在可接受的范圍內(nèi)。該對(duì)白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的方法快速，準(zhǔn)確。
【專利說明】白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑和白細(xì)胞分類方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種細(xì)胞分類試劑和對(duì)細(xì)胞分類的方法，具體的涉及一種白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑和利用該試劑對(duì)血液中白細(xì)胞分類的方法以及一種兩性離子表面活性劑的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]人體血液中的白細(xì)胞可以分為單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞(包括嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞)五個(gè)亞類。正常健康人血液中白細(xì)胞各個(gè)亞類的比例是相對(duì)恒定的，當(dāng)人體出現(xiàn)某些疾病時(shí)，則會(huì)表現(xiàn)出某一類或幾類白細(xì)胞數(shù)量的增多或減少。其中嗜酸性粒細(xì)胞是在人全血中占比例很少的一種粒細(xì)胞，健康人血液中占白細(xì)胞比例為0.5?5%，臨床上出現(xiàn)過敏性疾病或寄生蟲感染等疾病時(shí)，嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)量會(huì)出現(xiàn)明顯的變化，因此在人全血檢測中嗜酸性粒細(xì)胞的準(zhǔn)確分類計(jì)數(shù)對(duì)這些疾病的正確診斷有直接的指導(dǎo)意義。
[0003]嗜酸性粒細(xì)胞大小與中性粒細(xì)胞接近，在非疾病人群的全血樣本中，即正常成熟的嗜酸性粒細(xì)胞，細(xì)胞中的顆粒已經(jīng)完全成熟，使其在前向高角度光散射的作用下，能夠與中性粒細(xì)胞得以區(qū)分。而在疾病條件下，尤其是寄生蟲感染的病人全血樣本中，由于病理性作用，脊髓中大量不成熟嗜酸性粒細(xì)胞進(jìn)入外周血中，使嗜酸性粒細(xì)胞在外周血中的所占比例急劇增加，并且不成熟嗜酸性粒細(xì)胞與中性粒細(xì)胞的區(qū)分程度也明顯降低，應(yīng)用現(xiàn)有技術(shù)的白細(xì)胞分類試劑不足以將不成熟嗜酸性粒細(xì)胞與中性粒細(xì)胞區(qū)分開，使得嗜酸性粒細(xì)胞的檢測準(zhǔn)確性明顯減低。
[0004]在醫(yī)院對(duì)病人血液樣本進(jìn)行分析處理時(shí)，從病人體內(nèi)采集新鮮抗凝血樣后,有時(shí)會(huì)放置一段時(shí)間后進(jìn)行分析，或會(huì)對(duì)放置較長時(shí)間的病人血樣進(jìn)行復(fù)檢(室溫條件下存儲(chǔ)48小時(shí)以內(nèi))。隨著放置時(shí)間的延長，各種細(xì)胞經(jīng)過新陳代謝，新鮮血樣逐漸老化，而同一血樣的新鮮血和老化血之間細(xì)胞形態(tài)會(huì)出現(xiàn)明顯變化，往往會(huì)造成老化血的白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)可信度降低，其中所占比例較少的嗜酸性粒細(xì)胞的分類準(zhǔn)確性降低的尤為嚴(yán)重。
[0005]目前，國內(nèi)外對(duì)白細(xì)胞分類相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行了研究，也出現(xiàn)了一下研究成果。在國外公開了一種用于測量血紅蛋白(HGB)和嗜酸性粒細(xì)胞(Eos)的試劑和方法。試劑含有聚氧乙烯結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的非離子表面活性劑，PH范圍3-11，通過阻抗法(DC)實(shí)現(xiàn)Eos分類計(jì)數(shù)。
[0006]國外還公開了一種用含有聚氧乙烯-9-月桂醚對(duì)血樣進(jìn)行處理后對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類的方法。這種方法在酸性介質(zhì)下適于區(qū)分嗜堿性粒細(xì)胞，在堿性介質(zhì)下適用于區(qū)分嗜酸性粒細(xì)胞。
[0007]上述兩種現(xiàn)有技術(shù)均是從白細(xì)胞中單獨(dú)分離出嗜酸性粒細(xì)胞，但不能同時(shí)對(duì)其他類型的白細(xì)胞進(jìn)行分類。
[0008]另外，國外公開了一種白細(xì)胞分類的試劑，該試劑包括至少一種離子表面活性劑，可以是陽離子或兩性表面活性劑中一種，至少含一種帶陰離子的有機(jī)化合物，一種非離子表面活性劑和用來調(diào)整PH值的緩沖劑。檢測方法為激光散射法。
[0009]國外還公開了一種白細(xì)胞五分類的試劑，通過兩種試劑，第一試劑為稀釋血樣的高滲溶液，第二試劑為含陰離子表面活性劑和非離子表面活性劑的溶液，檢測方法為直流阻抗和射頻法。
[0010]在國外另一專利中公開了一種白細(xì)胞五分類的方法和試劑系統(tǒng)。溶血?jiǎng)┯蓛煞N試劑組成，第一試劑含烷基磺酸的堿金屬鹽類、有機(jī)酸、無機(jī)酸或其混合物及非離子表面活性劑。第二試劑含聚氧乙烯或聚氧丙烯的共聚物類表面活性劑、十二烷基磺酸鈉的高深堿性溶液。檢測方法為直流阻抗和射頻法。
[0011]在國內(nèi)公開了一種通過兩種試劑完成白細(xì)胞五分類的方法。該兩種試劑除都含有非離子表面活性劑和緩沖液外，第一種試劑至少含有一種離子表面活性劑和一種帶陰離子的有機(jī)化合物，將血細(xì)胞分為淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞以及嗜堿性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞四類，第二種試劑至少含有一種離子表面活性劑，將血細(xì)胞分成嗜堿性粒細(xì)胞和其他細(xì)胞類群。檢測方法為激光散射法。國內(nèi)還公開了一種白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑，該試劑包含陽離子、兩性表面活性劑以及其組合，包含苯環(huán)或者雜環(huán)的有機(jī)化合物，調(diào)節(jié)PH值的緩沖液。檢測方法為激光散射法。
[0012]以上現(xiàn)有技術(shù)的分類試劑以及方法中，溶血?jiǎng)┤芙馊獦颖局械募t細(xì)胞，并對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行非特異性作用，結(jié)合檢測方法通過各種類型白細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)進(jìn)行區(qū)分，其中嗜酸性粒細(xì)胞是作為其中一個(gè)類群進(jìn)行分類和計(jì)數(shù)。由于現(xiàn)有技術(shù)并不含有針對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞特異性處理的成分，因此對(duì)于含有高嗜酸的全血樣本或老化血樣中嗜酸性粒細(xì)胞的分類準(zhǔn)確性不夠理想。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種能夠快速溶解紅細(xì)胞，能增強(qiáng)嗜酸性粒細(xì)胞分類作用，使新鮮全血樣本和室溫存儲(chǔ)48小時(shí)的老化全血樣本的白細(xì)胞分類結(jié)果更為準(zhǔn)確的白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑。
[0014]本發(fā)明另一目的是提 供一種方便、快捷，且能準(zhǔn)確對(duì)新鮮全血樣本和室溫存儲(chǔ)48小時(shí)以內(nèi)的老化全血樣本中的白細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)的方法。
[0015]本發(fā)明又一目的是提供一種兩性離子表面活性劑在制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑中的用途。
[0016]為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0017]一種白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑，包括
[0018](I)表面活性劑溶液，所述表面活性劑溶液能夠溶解紅細(xì)胞，使白細(xì)胞膜部分損傷，穩(wěn)定嗜酸性粒細(xì)胞和老化細(xì)胞的細(xì)胞膜，所述表面活性劑溶液含有至少一種陽離子表面活性劑和至少一種兩性離子表面活性劑；
[0019]所述兩性表面活性劑具有通式I所示的結(jié)構(gòu)
[0020]
【權(quán)利要求】
1.一種白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑，包括 (1)表面活性劑溶液，所述表面活性劑溶液能夠溶解紅細(xì)胞，使白細(xì)胞膜部分損傷，穩(wěn)定嗜酸性粒細(xì)胞和老化細(xì)胞的細(xì)胞膜，所述表面活性劑溶液含有至少一種陽離子表面活性劑和至少一種兩性離子表面活性劑； 所述兩性表面活性劑為具有通式I所示結(jié)構(gòu)的兩性表面活性劑，
2.如權(quán)利要求1的白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑，其特征在于，所述n為3，和/或R2和R3各自獨(dú)立選自羥乙基或甲基。
3.如權(quán)利要求1的白細(xì) 胞分類計(jì)數(shù)試劑，其特征在于，所述m為3，和/或X為磺酸基。
4.如權(quán)利要求1的白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑，其特征在于，所述R2和R3為乙氧基，或所述R2和R3為羥丙基。
5.如權(quán)利要求1的白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑，其特征在于，所述n為3，所述X為磺酸基，所述R2和R3各自獨(dú)立選自羥丙基。
6.如權(quán)利要求1的白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑，其特征在于，所述兩性離子表面活性劑選自癸基酰胺丙基甜菜堿、月桂基酰胺丙基甜菜堿、椰油酰胺丙基甜菜堿、硬脂基酰胺丙基甜菜堿、月桂基二羥乙基甜菜堿、十四烷基二羥乙基甜菜堿、硬脂基二羥乙基甜菜堿、月桂基磺基甜菜堿、十四烷基磺基甜菜堿、十六烷基磺基甜菜堿、十八烷基磺基甜菜堿、十二烷基乙氧基磺基甜菜堿、十四烷基乙氧基磺基甜菜堿、十六烷基乙氧基磺基甜菜堿、十八烷基乙氧基橫基甜菜喊、十二烷基輕丙基橫基甜菜喊、十四烷基輕丙基橫基甜菜喊、十TK烷基輕丙基磺基甜菜堿、十八烷基羥丙基磺基甜菜堿、月桂酰胺丙基羥丙基磺基甜菜堿、椰油酰胺丙基羥丙基磺基甜菜堿、十四烷基酰胺丙基羥丙基磺基甜菜堿、十六烷基酰胺丙基羥丙基磺基甜菜堿、十八烷基酰胺丙基羥丙基磺基甜菜堿、3- [ (3-膽烷酰胺丙基)-二甲基銨]-1-丙磺酸鹽、3-[(3-膽烷酰胺基丙基)_ 二甲基銨]-2-羥-1-丙磺酸鹽中的至少一種。
7.如權(quán)利要求1的白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑，其特征在于，所述陽離子表面活性劑為具有通式II結(jié)構(gòu)的季銨鹽陽離子表面活性劑:
8.如權(quán)利要求1的白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑，其特征在于，所述試劑還包括帶陰離子基團(tuán)的有機(jī)化合物，所述帶陰離子基團(tuán)的有機(jī)化合物優(yōu)選8-苯胺基-1-萘磺酸、8-苯胺基-1-萘磺酸鹽、6-(對(duì)甲苯胺基)-2-萘磺酸、6-(對(duì)甲苯胺基)-2-萘磺酸鹽、鉻變酸、萘磺酸中的至少一種。
9.如權(quán)利要求1的白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑，其特征在于，還包含助溶劑，所述助溶劑優(yōu)選醇、環(huán)糊精、環(huán)糊精衍生物中的至少一種；所述醇優(yōu)選甲醇、乙醇、乙二醇、丙三醇、苯氧乙醇、異丙醇中的至少一種；所述環(huán)糊精優(yōu)選a -環(huán)糊精、^ -環(huán)糊精中的至少一種；所述環(huán)糊精衍生物優(yōu)選二甲基-(6-環(huán)糊精、羥乙基-(6-環(huán)糊精、羥丙基-(6-環(huán)糊精、羧甲基-(6-環(huán)糊精中的至少一種。
10.一種對(duì)白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的方法，包括如下步驟: 將權(quán)利要求1~9任一所述的白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑與待測血樣混合反應(yīng)，溶解紅細(xì)胞和血小板，損傷白細(xì)胞； 檢測所述白細(xì)胞的至少兩種光信號(hào)，得到所述白細(xì)胞的形態(tài)和大小信息； 根據(jù)所述白細(xì)胞的形態(tài)和大小信息，將所述白細(xì)胞分為淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞相對(duì)應(yīng)的3個(gè)集團(tuán)以及與中性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞相對(duì)應(yīng)的I個(gè)集團(tuán)共4個(gè)集團(tuán)，并對(duì)所述各集團(tuán)中所含細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行計(jì)數(shù)。
11.如權(quán)利要求10所述的用于白細(xì)胞分類的方法，其特征在于，采用測定角度為2~6度的低角度散射光來測定白細(xì)胞的大小信息，采用測定角度為6~20度的高角度散射光測定白細(xì)胞的形態(tài)信息。
12.—種具有通式I所示結(jié)構(gòu)的兩性離子表面活性劑在制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)試劑中的用途，
【文檔編號(hào)】G01N21/47GK103575702SQ201210264108
【公開日】2014年2月12日 申請(qǐng)日期:2012年7月27日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月27日
【發(fā)明者】喬巖梅, 許文娟, 張華利, 張鵬 申請(qǐng)人:深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司