專利名稱：一種從動物糞便中提取激素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從動物糞便中提取激素的方法。
背景技術(shù)：
激素是機體內(nèi)的重要物質(zhì)，調(diào)節(jié)細胞的代謝，影響機體的生理活動。激素水平的測量通常使用血樣分析或尿樣分析，但兩者的采集都會對機體進行干擾，對機體內(nèi)的真實激素水平造成一定偏差，且對于動物而言，尤其是野外動物或者保護動物，取血或者取尿具有一定的難度，需要進行麻醉或限制，影響機體的激素水平。而糞便是機體的自然代謝產(chǎn)物， 能夠真實的反應(yīng)機體的激素水平變化，樣本的采集在不干擾機體的情況下很容易獲得，而且樣本可以在一段時間內(nèi)有規(guī)律的收集，可以在不影響機體內(nèi)分泌的狀態(tài)下，重復對同一個體取樣，測量在長時間內(nèi)動物對特殊環(huán)境或特定處理的短期激素水平變化。另外，糞便中激素水平的一段時間內(nèi)總的激素量，受激素分泌的波動影響較小，不因為應(yīng)激反應(yīng)而影響測量結(jié)果，可以精確地代表機體激素的水平狀態(tài)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種操作方便、快捷的糞便激素提取方法，利用糞便即可完成機體激素水平的檢測，在不能完成采血或采尿的情況下利用糞便反映出機體的激素水平，對機體也具有保護作用。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下
本發(fā)明的從動物糞便中提取激素的方法，包括下述步驟
(1)將糞便置于冷凍干燥機中干燥充分，將干燥糞樣研磨成粉末；
(2)用電子天平準確稱取樣品粉末lOOmg，置于5ml離心管A中；
(3)向離心管A中加無水乙醇和雙蒸水各1ml，渦旋振蕩IOmin后靜置2h；
(4)將離心管A再次渦旋震蕩2-3min，3000rpm離心8_12min，取上清液Iml置于5ml 的離心管B中；
(5)向A管中加2ml無水甲醇進行重提；
(6)將離心管A進行渦旋振蕩8-12min，3000rpm離心8_12min，取上清液2ml置于B管中混勻兩次所取上清液，取1.5ml裝于一只2ml的離心管中。60°C水浴干燥，置于4°C以待檢測。本發(fā)明的從糞便中提取激素的方法優(yōu)選為
(1)將糞便置于冷凍干燥機中處理24h，將干燥處理后的糞樣研磨成粉末；
(2)用萬級電子天平準確稱取樣品粉末lOOmg，置于5ml離心管A中；
(3)向離心管A中加無水乙醇和雙蒸水各1ml，渦旋振蕩IOmin后靜置2h；
(4)將離心管A再次潤旋震蕩2min,3000rpm離心lOmin,取上清液Iml置于5ml的離心管B中；
(5)向A管中加2ml無水甲醇進行重提；(6)將離心管A進行渦旋振蕩10min，3000rpm離心lOmin，取上清液2ml置于B管中混勻兩次所取上清液，取I. 5ml裝于一只2ml的離心管中。60°C水浴干燥，置于4°C以待檢測。本發(fā)明的技術(shù)關(guān)鍵在于該提取方法的優(yōu)點在于所需儀器、試劑較少。方法簡便， 快捷，操作性高。回收率高，安全可靠，能夠真實反應(yīng)機體的激素水平。


圖I是實施例I中的結(jié)果圖。圖2是實施例2中的結(jié)果圖。
具體實施例方式實施例I
(一)自然狀態(tài)下接收雌雄昆明小鼠雌雄各10只的糞便和對應(yīng)尿液。(二)應(yīng)用本實施例的方法對小白鼠糞便激素進行提取。(I)將糞便置于冷凍干燥機中處理24 h，將干燥糞樣研磨成粉末；
(2)用電子天平準確稱取樣品粉末lOOmg，置于5ml離心管A中；
(3)向離心管A中加無水乙醇和雙蒸水各1ml，渦旋振蕩IOmin后靜置2h；
(4)將離心管A再次渦旋震蕩2-3min，3000rpm離心8_12min，取上清液Iml置于5ml 的離心管B中；
(5)向A管中加2ml無水甲醇進行重提；
(6)將離心管A進行渦旋振蕩8-12min，3000rpm離心8_12min，取上清液2ml置于B管中混勻兩次所取上清液，取1.5ml裝于一只2ml的離心管中。60°C水浴干燥，置于4 °C以待檢測。(3)利用ELISA法對糞便提取的激素和尿液中的激素進行測定，測量睪酮、雌二醇的含量。(三)利用ELISA法對糞便提取的激素和尿液中的激素進行測量，測量睪酮、雌二醇的含量。(2)結(jié)果
結(jié)果見圖1，應(yīng)用本發(fā)明方法提取的激素和尿液中的激素含量無顯著差異，糞便激素提取方法安全可靠。實施例2
(一)自然狀態(tài)下接收雌雄獼猴雌雄各10只的糞便和對應(yīng)尿液。(二)應(yīng)用本實施例的方法對獼猴糞便激素進行提取。(I)將糞便置于冷凍干燥機中處理24 h，將干燥糞樣研磨成粉末；
(2)用電子天平準確稱取樣品粉末lOOmg，置于5ml離心管A中；
(3)向離心管A中加無水乙醇和雙蒸水各1ml，渦旋振蕩IOmin后靜置2h；
(4)將離心管A再次渦旋震蕩2-3min，3000rpm離心8_12min，取上清液Iml置于5ml 的離心管B中；
(5)向A管中加2ml無水甲醇進行重提；
(6)將離心管A進行渦旋振蕩8-12min，3000rpm離心8_12min，取上清液2ml置于B管中混勻兩次所取上清液，取I. 5ml裝于一只2ml的離心管中。60°C水浴干燥，置于4 °C以待檢測。(3)利用ELISA法對糞便提取的激素和尿液中的激素進行測定，測量睪酮、雌二醇的含量。(三)利用ELISA法對糞便提取的激素和尿液中的激素進行測量，測量睪酮、雌二醇的含量。(2)結(jié)果
結(jié)果見圖2，應(yīng)用本發(fā)明方法提取的激素和尿液中的激素含量無顯著差異，糞便激素提取方法安全可靠。本提取方法簡便快捷，對各種激素的提取率穩(wěn)定，回收率高，能夠真實反映機體的激素水平。且所需要的儀器試劑簡單，操作簡便。
權(quán)利要求
1.一種從動物糞便中提取激素的方法，其特征在于包括下述步驟(1)將糞便置于冷凍干燥機中干燥充分，將干燥處理后的糞樣研磨成粉狀；(2)用萬級電子天平精確稱取樣品粉末lOOmg，置于5ml離心管A中；(3)向離心管A中加無水乙醇和雙蒸水各1ml，渦旋振蕩lOmin，然后靜置2h；(4)將離心管A再次渦旋震蕩2-3min，3000rpm離心8_12min，取上清液Iml置于5ml 的離心管B中；(5)向A管中補加2ml無水甲醇進行重提；(6)將離心管A進行渦旋振蕩8-12min，3000rpm離心8_12min，取上清液2ml置于B管中混勻兩次所取上清液，取I. 5ml裝于一只2ml的離心管中；60°C水浴蒸干，置于4°C環(huán)境中以待檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的從動物糞便中提取激素的方法，其特征在于包括下述步驟:(I)將糞便置于冷凍干燥器干燥充分，將干燥糞樣研磨成粉末；(2)用電子天平準確稱取樣品粉末lOOmg，置于5ml離心管A中；(3)向離心管A中加無水乙醇和雙蒸水各1ml，渦旋振蕩IOmin后靜置2h；(4)將離心管A再次潤旋震蕩2min,3000rpm離心IOmin,取上清液Iml置于5ml的離心管B中；(5)向A管中加2ml無水甲醇進行重提；(6)將離心管A進行渦旋振蕩10min，3000rpm離心lOmin，取上清液2ml置于B管中混勻兩次所取上清液，取I. 5ml裝于一只2ml的離心管中，60°C水浴干燥，置于4°C以待檢測。
全文摘要
一種從動物糞便中提取激素的方法。將糞便冷凍干燥處理后研磨成粉末；經(jīng)無水乙醇和雙蒸水的混合溶液充分浸提后；取部分上清液；剩余部分用甲醇進行重提；取上清液，將兩次所取上清液混合后待測。本發(fā)明是以物理化學的方法提取糞便中的激素以便進行測定。本提取方法簡便快捷，安全可靠，為糞便中激素的測量提供了基礎(chǔ)。
文檔編號G01N1/34GK102607927SQ20121007121
公開日2012年7月25日 申請日期2012年3月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月19日
發(fā)明者任寶紅, 曾小宇, 王思敏, 王振龍, 趙林萍, 路紀琪, 魏卓 申請人:鄭州大學