專利名稱：一種簡單、快速檢測65%l-賴氨酸硫酸鹽成品中l(wèi)-賴氨酸含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及飼料添加劑的檢測方法，尤其是涉及一種簡單、快速檢測65% L-賴氨酸硫酸鹽成品中L-賴氨酸含量的方法。
背景技術(shù)：
隨著飼料添加行業(yè)快速發(fā)展，作為主要飼料添加劑的賴氨酸生產(chǎn)規(guī)模越來越大， 在賴氨酸產(chǎn)品中有98% L-賴氨酸鹽酸鹽和65% L-賴氨酸硫酸鹽等。由于65% L-賴氨酸 硫酸鹽具有成本低、節(jié)能且污染少等眾多優(yōu)點，目前已經(jīng)成為飼料添加賴氨酸的一個重要 方向。但是該產(chǎn)業(yè)發(fā)展的時間尚短，很多法規(guī)等還不是很完善，如目前并沒有國家標(biāo)準(zhǔn)作 為成品檢驗的依據(jù)，國內(nèi)各大廠家都施行企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。并且由于65% L-賴氨酸硫酸鹽產(chǎn)品的 特點，其L-賴氨酸含量不方便檢測，經(jīng)常造成質(zhì)量投訴糾紛。目前工業(yè)生產(chǎn)以及市場銷售和檢測部門都采用氨基酸分析儀來檢測65% L-賴氨 酸硫酸鹽成品中L-賴氨酸的含量，但是氨基酸分析儀價格昂貴、檢測費用高，造成普及率 低，不適合工業(yè)生產(chǎn)中大批量檢測樣品；而且氨基酸分析儀檢測樣品耗時長，很難快速反饋 檢測結(jié)果，因此對工業(yè)生產(chǎn)的指導(dǎo)作用較差；另外，氨基酸分析儀誤差值相對較高，一般相 對誤差值在4%左右，比較適合檢測低含量氨基酸或多種氨基酸濃度比較接近的樣品，但在 檢測高含量樣品時，氨基酸分析儀所帶來的儀器誤差較大，造成最終檢測結(jié)果誤差值較大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的主要是克服現(xiàn)有測定方法繁瑣、費用高且準(zhǔn)確率不高的缺點，提供 一種簡便、快速、準(zhǔn)確度高且所用費用較低的檢測65% L-賴氨酸硫酸鹽成品中L-賴氨酸含 量的方法。本發(fā)明通過如下方式實現(xiàn)一種簡單、快速檢測65% L-賴氨酸硫酸鹽成品中L-賴氨酸含量的方法，其特征 在于，該方法包括如下步驟首先將65% L-賴氨酸硫酸鹽成品顆粒溶解，分別取Iml溶解 后樣品溶液和Iml不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)L-賴氨酸溶液加入到不同試管中，再分別加入Iml顯色 液。95°C以上水浴IOmin后冷卻至室溫，再分別加入8ml蒸餾水稀釋，然后用分光光度計測 定吸光值。用標(biāo)準(zhǔn)L-賴氨酸溶液濃度和對應(yīng)的吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品吸光值換算 L-賴氨酸含量；所述的65% L-賴氨酸硫酸鹽成品溶解步驟為，將65% L-賴氨酸硫酸鹽成品研磨 后過大于或等于60目篩，取一定量研磨后樣品，加入蒸餾水后加熱超聲溶解，定容后制備 成樣品溶液；所述的超聲波功率為300-500W，超聲溫度為50_70°C，超聲時間為30min_60min ；所述的標(biāo)準(zhǔn)L-賴氨酸溶液濃度在0. lg/L-0. 8g/L之間；所述顯色液為pHl.5的用0. lmol/L檸檬酸鈉緩沖液溶解成的質(zhì)量體積比為茚三酮溶液。 本發(fā)明具有如下效果1)方法簡單、獨特本發(fā)明提供的檢測方法為首先將65% L-賴氨酸硫酸鹽成品溶 解制成溶液，分別取Iml的樣品溶液和Iml不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)L-賴氨酸溶液加入到不同試管 中，再在上述每個試管中分別加入Iml顯色液，95°C以上水浴IOmin后立即冷卻至室溫，再 在上述每個試管中加入8ml蒸餾水稀釋，搖勻后用分光光度計測定吸光值，用標(biāo)準(zhǔn)L-賴氨 酸溶液濃度和對應(yīng)的吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品吸光值換算樣品中L-賴氨酸的含量。2)方法準(zhǔn)確度高，誤差值小本發(fā)明提供的方法采用的顯色液為PH1.5的用 0. lmol/L檸檬酸鈉緩沖液溶解成的質(zhì)量體積比為茚三酮溶液，茚三酮在高溫下可與氨 基酸反應(yīng)形成絡(luò)合物，該絡(luò)合物濃度可通過分光光度計進(jìn)行檢測。本方法利用茚三酮在pH 值為1.5左右時可專一性的與賴氨酸反應(yīng)的特點，利用超聲波儀高效溶解樣品，溶解后樣 品和標(biāo)準(zhǔn)賴氨酸溶液分別與茚三酮溶液反應(yīng)后用分光光度計進(jìn)行比色。通過標(biāo)準(zhǔn)賴氨酸濃 度與對應(yīng)吸光值來計算樣品中賴氨酸的含量。3)測定方法快速本發(fā)明提供的方法檢測樣品時間較短，每個樣品檢測時間在 2. 5小時左右，可快速反饋檢測結(jié)果。而氨基酸分析儀在樣品前處理、上機檢測及數(shù)據(jù)分析 通常需要40h左右。4)該測定方法簡單，操作步驟少，對化驗員要求不高。該方法涉及到的步驟較簡 單，容易掌握，即使操作者進(jìn)行該項工作的時間較短、學(xué)歷水平不高，也可以較快掌握。5)檢測費用低，本方法所需設(shè)備、儀器等皆為實驗室常備設(shè)備。試劑也為實驗室常 用的分析純試劑，每個樣品檢測所消耗的試劑及儀器損耗費用在10元以內(nèi)，而氨基酸分析 儀每個樣品檢測費用在250元左右，因此本方法具有較大的成本優(yōu)勢。6)結(jié)果準(zhǔn)確度較高，本方法在檢測65% L-賴氨酸硫酸鹽成品時絕對誤差值在 左右，而氨基酸分析儀檢測該類樣品時絕對誤差值在1. 5-2%。7)所用儀器簡單，本方法所用的儀器如超聲波清洗儀、水浴鍋和分光光度計皆為 價格較低、實驗室常備的儀器。而氨基酸分析儀價格昂貴，普及率較差，其價格一般在60萬 至120萬不等。8)方法穩(wěn)定性好，通過本公司的大量實驗及前期應(yīng)用，該方法的穩(wěn)定性好，檢測差 錯率非常低。而氨基酸分析儀由于儀器精密、各種配件繁多，經(jīng)常由于各種原因出現(xiàn)錯樣現(xiàn)象。
具體實施例方式實施例一一種簡單、快速檢測65% L-賴氨酸硫酸鹽成品中L-賴氨酸含量的方 法，該方法包括如下步驟稱取具有代表性的樣品10g，研磨后過60目篩，稱取過篩后樣 品0. 25g，用200ml蒸餾水溶解，然后放入加熱到55°C左右的超聲波清洗儀中，500W超聲 30min，超聲結(jié)束后冷卻定容至500ml。分別取0. 15g/L、0. 3g/L、0. 45g/L、0. 6g/L的L-賴氨 酸標(biāo)準(zhǔn)溶液Iml以及定容后的樣品溶液Iml加入到不同試管中，再分別加入顯色液1ml，放 入96°C水浴中l(wèi)Omin，水浴后立即冷取至室溫，分別加入8ml蒸餾水后在470nm下用分光光 度計比色。利用標(biāo)準(zhǔn)L-賴氨酸溶液的濃度和對應(yīng)的吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后將樣品吸光 值帶入計算樣品溶液濃度，最終換算出樣品含量。
實施例二 一種簡單、快速檢測65% L-賴氨酸硫酸鹽成品中L-賴氨酸含量的方 法，該方法包括如下步驟稱取具有代表性的樣品10g，研磨后過80目篩，稱取過篩后樣 品0. 25g，用200ml蒸餾水溶解，然后放入加熱到60°C左右的超聲波清洗儀中，400W超聲 40min，超聲結(jié)束后冷卻定容至500ml。分別取0. 15g/L、0. 25g/L、0. 35g/L、0. 45g/L的L-賴 氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液Iml以及定容后的樣品溶液Iml加入到不同試管中，再分別加入顯色液1ml， 放入98°C水浴中l(wèi)Omin，水浴后立即冷取至室溫，分別加入8ml蒸餾水后在478nm下用分光 光度計比色。利用標(biāo)準(zhǔn)L-賴氨酸溶液的濃度和對應(yīng)的吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后將樣品吸 光值帶入計算樣品溶液濃度，最終換算出樣品含量。實施例三一種簡單、快速檢測65% L-賴氨酸硫酸鹽成品中L-賴氨酸含量的方 法，該方法包括如下步驟稱取具有代表性的樣品10g，研磨后過60目篩，稱取過篩后樣 品0. 25g，用200ml蒸餾水溶解，然后放入加熱到55°C左右的超聲波清洗儀中，500W超聲 30min，超聲結(jié)束后冷卻定容至500ml。分別取0. 2g/L、0. 3g/L、0. 4g/L、0. 5g/L的L-賴氨酸 標(biāo)準(zhǔn)溶液以及定容后的樣品溶液Iml加入到不同試管中，再分別加入顯色液1ml，放入96°C 水浴中l(wèi)Omin，水浴后立即冷取至室溫，分別加入8ml蒸餾水后在490nm下用分光光度計比 色。利用標(biāo)準(zhǔn)L-賴氨酸溶液的濃度和對應(yīng)的吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后將樣品吸光值帶入 計算樣品溶液濃度，最終換算出樣品含量。實施例四一種簡單、快速檢測65% L-賴氨酸硫酸鹽成品中L-賴氨酸含量的方 法，該方法包括如下步驟稱取具有代表性的樣品10g，研磨后過60目篩，稱取過篩后樣 品0. 25g，用250ml蒸餾水溶解，然后放入加熱到60°C左右的超聲波清洗儀中，500W超聲 30min，超聲結(jié)束后冷卻定容至500ml。分別取0. 12g/L、0. 24g/L、0. 36g/L、0. 48g/L的L-賴 氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液以及定容后的樣品溶液Iml加入到不同試管中，再分別加入顯色液1ml，放入 96°C水浴中l(wèi)Omin，水浴后立即冷取至室溫，分別加入8ml蒸餾水后在458nm下用分光光度 計比色。利用標(biāo)準(zhǔn)L-賴氨酸溶液的濃度和對應(yīng)的吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后將樣品吸光值 帶入計算樣品溶液濃度，最終換算出樣品含量。實施例五一種簡單、快速檢測65% L-賴氨酸硫酸鹽成品中L-賴氨酸含量的方 法，該方法包括如下步驟稱取具有代表性的樣品10g，研磨后過80目篩，稱取過篩后樣 品0. 25g，用250ml蒸餾水溶解，然后放入加熱到60°C左右的超聲波清洗儀中，300W超聲 60min，超聲結(jié)束后冷卻定容至500ml。分別取0. 10g/L、0. 25g/L、0. 40g/L、0. 55g/L的L-賴 氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液Iml以及定容后的樣品溶液Iml加入到不同試管中，在分別加入顯色液1ml， 放入98°C水浴中l(wèi)Omin，水浴后立即冷取至室溫，分別加入8ml蒸餾水后在500nm下用分光 光度計比色。利用標(biāo)準(zhǔn)L-賴氨酸溶液的濃度和對應(yīng)的吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后將樣品吸 光值帶入計算樣品溶液濃度，最終換算出樣品含量。實施例六一種簡單、快速檢測65% L-賴氨酸硫酸鹽成品中L-賴氨酸含量的方 法，該方法包括如下步驟稱取具有代表性的樣品10g，研磨后過60目篩，稱取過篩后樣 品0. 25g，用250ml蒸餾水溶解，然后放入加熱到50°C左右的超聲波清洗儀中，500W超聲 30min，超聲結(jié)束后冷卻定容至500ml。分別取0. 2g/L、0. 4g/L、0. 6g/L、0. 8g/L的L-賴氨酸 標(biāo)準(zhǔn)溶液Iml以及定容后的樣品溶液Iml加入到不同試管中，在分別加入顯色液1ml，放入 95°C水浴中l(wèi)Omin，水浴后立即冷取至室溫，分別加入8ml蒸餾水后在440nm下用分光光度 計比色。利用標(biāo)準(zhǔn)L-賴氨酸溶液的濃度和對應(yīng)的吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后將樣品吸光值帶入計算樣品溶液濃度，最終換算出樣品含量。 上述顯色液為pHl.5的用0. lmol/L檸檬酸鈉緩沖液溶解成的質(zhì)量體積比為茚
三酮溶液。
權(quán)利要求
一種簡單、快速檢測65％L-賴氨酸硫酸鹽成品中L-賴氨酸含量的方法，其特征在于該方法包括如下步驟首先將65％L-賴氨酸硫酸鹽成品溶解制成溶液，分別取1ml的樣品溶液和1ml不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)L-賴氨酸溶液加入到不同試管中，再在上述每個試管中分別加入1ml顯色液，95℃以上水浴10min后立即冷卻至室溫，再在上述每個試管中加入8ml蒸餾水稀釋，搖勻后用分光光度計測定吸光值，用標(biāo)準(zhǔn)L-賴氨酸溶液濃度和對應(yīng)的吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品吸光值換算樣品中L-賴氨酸的含量。
2.如權(quán)利要求1所述的一種簡單、快速檢測65%L-賴氨酸硫酸鹽成品中L-賴氨酸含 量的方法，其特征在于所述65% L-賴氨酸硫酸鹽成品溶解成溶液的步驟為將65% L-賴 氨酸硫酸鹽成品研磨后過大于或等于60目篩，稱量約0. 25g研磨后樣品，加入200ml蒸餾 水后加熱超聲溶解，定容后制備成樣品溶液。
3.權(quán)利要求2所述的一種簡單、快速檢測65%L-賴氨酸硫酸鹽成品中L-賴氨酸含量 的方法，其特征在于所述超聲溶解的超聲波功率為300-500W，超聲溫度為50-70°C，超聲 時間為 30min-60min。
4.如權(quán)利要求1所述的一種簡單、快速檢測65%L-賴氨酸硫酸鹽成品中L-賴氨酸含 量的方法，其特征在于所述選取的標(biāo)準(zhǔn)L-賴氨酸溶液濃度在0. lg/L-0. 8g/L之間。
5.如權(quán)利要求1所述的一種簡單、快速檢測65%L-賴氨酸硫酸鹽成品中L-賴氨酸含 量的方法，其特征在于所述顯色液為PH1. 5的用0. lmol/L檸檬酸鈉緩沖液溶解成的質(zhì)量 體積比為質(zhì)量體積比茚三酮溶液。
6.如權(quán)利要求1所述的一種簡單、快速檢測65%L-賴氨酸硫酸鹽成品中L-賴氨酸含 量的方法，其特征在于所述分光光度計測定吸光值時，檢測波長為440-500nm。
全文摘要
本發(fā)明涉及飼料添加劑的檢測方法，尤其是涉及一種簡單、快速檢測65％L-賴氨酸硫酸鹽成品中L-賴氨酸含量的方法，該方法包括如下步驟首先將65％L-賴氨酸硫酸鹽成品溶解制成溶液，分別取1ml的樣品溶液和1ml不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)L-賴氨酸溶液加入到不同試管中，再在上述每個試管中分別加入1ml顯色液，95℃以上水浴10min后立即冷卻至室溫，再在上述每個試管中加入8ml蒸餾水稀釋，搖勻后用分光光度計測定吸光值，用標(biāo)準(zhǔn)L-賴氨酸溶液濃度和對應(yīng)的吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品吸光值換算樣品中L-賴氨酸的含量；本發(fā)明提供的方法簡便、快速、準(zhǔn)確度高且所用費用較低。
文檔編號G01N1/28GK101806724SQ20101014792
公開日2010年8月18日 申請日期2010年4月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月16日
發(fā)明者劉多濤, 翟艷玲, 邱智杰, 馬吉銀 申請人:寧夏伊品生物科技股份有限公司