專(zhuān)利名稱(chēng)：心達(dá)康制劑的鑒別方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種心達(dá)康制劑的鑒別方法，屬于對(duì)藥品進(jìn)行質(zhì)量控制的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
心達(dá)康制劑是從植物沙棘(Hippophae L.)中提取的有效部位沙棘總黃酮與輔料 制備而成。沙棘總黃酮用于治療心腦血管疾病已得到了世界公認(rèn)，現(xiàn)代藥理學(xué)研究和臨床 應(yīng)用表明沙棘總黃酮具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加心腦組織供血量，降低心臟負(fù)荷，抑制血小 板聚集，改善微循環(huán)，防止血栓形成及動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，延緩衰 老等作用。其中的“心達(dá)康片”和“心達(dá)康膠囊”分別刊登在中國(guó)部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第 十四冊(cè)和新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)33冊(cè)上，并已在臨床上應(yīng)用多年，在治療心腦血管疾病方面取得了 較滿(mǎn)意的治療效果。但經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有心達(dá)康制劑存在著質(zhì)量控制方法不合理的缺點(diǎn)，如 現(xiàn)在市場(chǎng)上的心達(dá)康片，包括糖衣片和薄膜衣片，由于其制法、處方實(shí)際上一樣，只是包衣 不同，而卻實(shí)行兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(一個(gè)是WS3-B-2666-97，一個(gè)是WS3 — B — 2666-2002)，浪費(fèi)了 標(biāo)準(zhǔn)資源；另外在2005年版中國(guó)藥典附錄XVG對(duì)照品、對(duì)照藥材、對(duì)照提取物中已沒(méi)有收載 現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)中的仍在使用的標(biāo)準(zhǔn)品異鼠李素葡萄糖苷，這給產(chǎn)品的質(zhì)量控制帶來(lái)一定的難度； 現(xiàn)有心達(dá)康制劑存在質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)單，產(chǎn)品質(zhì)量不易控制的缺點(diǎn)，體現(xiàn)在因醋柳黃酮是 一類(lèi)黃酮物質(zhì)的總稱(chēng)，而對(duì)其的鑒別和含量控制均以單一的異鼠李素來(lái)進(jìn)行衡量，故不能 有效控制該制劑的質(zhì)量，從而影響其臨床療效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的，是提供一種心達(dá)康制劑的鑒別方法。本發(fā)明針對(duì)原有心達(dá)康制劑 質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)單，產(chǎn)品質(zhì)量不易控制的缺點(diǎn)，對(duì)本制劑的質(zhì)量控制方法進(jìn)行了研究，擬訂 了制劑中槲皮素、異鼠李素的薄層色譜鑒別，提高了心達(dá)康制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，該質(zhì)量標(biāo) 準(zhǔn)中的控制方法可有效地控制心達(dá)康制劑的質(zhì)量，從而保證了該制劑的臨床療效。本發(fā)明所述的心達(dá)康制劑是由沙棘總黃酮(醋柳黃酮)與輔料制備而成。其制法 為沙棘經(jīng)提取得醋柳黃酮，取醋柳黃酮50g(含總黃酮以異鼠李素計(jì)5g)，粉碎成細(xì)粉，加入 適量輔料按照常規(guī)方法制成包括片劑(包括含片、分散片、咀嚼片)、膠囊劑、軟膠囊劑、滴 丸劑在內(nèi)的不同制劑。本心達(dá)康制劑的鑒別方法，所述制劑包括片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、滴丸劑，所述鑒 別包括以槲皮素對(duì)照品、異鼠李素對(duì)照品為對(duì)照鑒別制劑中黃酮苷元的薄層色譜鑒別。槲 皮素、異鼠李素的鑒別方法是分別以槲皮素對(duì)照品和異鼠李素對(duì)照品為對(duì)照，以甲苯乙 酸乙酯甲酸=2 10 1 8 0. 1 1. 5的溶液為展開(kāi)劑的薄層色譜法。所述鑒別方法包括以下
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取本制劑或其內(nèi)容物，研細(xì)，加乙醇使溶解，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取槲 皮素和異鼠李素對(duì)照品，加乙醇制成混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典薄層色譜法 試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯乙酸乙 酯甲酸=2 10 1 8 0.1 1.5為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1 5%三氯化 鋁乙醇溶液，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏 色的熒光斑點(diǎn)。更具體的鑒別方法包括以下取本制劑或其內(nèi)容物，研細(xì)，取細(xì)粉2 20mg，加無(wú)水乙醇2 20ml，超聲處理 1 15分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取槲皮素和異鼠李素對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成 每Iml各含Img IOmg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜 法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各1 20ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠 G薄層板上，以甲苯乙酸乙酯甲酸=2 10 1 8 0. 1 1. 5為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取 出，晾干，噴以1 5%的三氯化鋁乙醇溶液，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在 與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。本心達(dá)康制劑的含量測(cè)定，包括制劑中總黃酮測(cè)定。本心達(dá)康制劑的含量測(cè)定，還包括對(duì)制劑中槲皮素、異鼠李素、山柰素總量的測(cè) 定，該測(cè)定方法是以異鼠李素、槲皮素、山柰素對(duì)照品為對(duì)照，以甲醇0.4%磷酸=30 60 30 60為流動(dòng)相的高效液相色譜法。經(jīng)研究申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)，采用以下質(zhì)量控制方法將更容易控制這種制劑的質(zhì)量，更有 利于保證制劑的臨床療效性狀對(duì)于片劑內(nèi)容物為棕黃色至棕色，味微苦；對(duì)于膠囊劑內(nèi)容物為淺黃褐色至灰褐色的顆粒及粉末；氣微，味微苦；對(duì)于軟膠囊劑內(nèi)容物為含有少量懸浮固體浸膏的黃色油狀液體；氣微，味微苦；對(duì)于滴丸劑本品為棕色的滴丸；氣微，味微苦；鑒別取本制劑1片或1粒，研細(xì)，加乙醇5ml或10ml，超聲處理5分鐘，制成lmg/ml的 溶液，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取槲皮素和異鼠李素對(duì)照品，加乙醇制成每Iml各含 Img的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩 種溶液各1 2ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯 乙酸乙酯甲酸=5 4 0.5為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1 3%三氯化鋁乙醇溶 液，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色 的熒光斑點(diǎn)。檢查應(yīng)符合中國(guó)藥典一部附錄中片劑、膠囊劑、軟膠囊劑或滴丸劑項(xiàng)下各有關(guān)規(guī)定。含量測(cè)定(1)總黃酮對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取采用P2O5干燥12小時(shí)以上的異鼠李素對(duì)照品，加無(wú) 水乙醇制成每Iml含異鼠李素20ug的溶液，即得；
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備精密量取對(duì)照品溶液l、2、3、4、5、6ml，分別置IOml量瓶中，加 1 3%三氯化鋁無(wú)水乙醇溶液1. 0ml，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置10分鐘，以相應(yīng) 的試劑為空白，照紫外_可見(jiàn)分光光度法(中國(guó)藥典一部附錄VA)，在430nm的波長(zhǎng)處測(cè)定 吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；測(cè)定法本制劑取片劑20片、取10 20粒膠囊劑、滴丸劑內(nèi)容物，精密稱(chēng)定，研細(xì) 混勻，取約0. lg，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，加無(wú)水乙醇適量，于80°C水浴中加熱回流15 分鐘，放冷，移置IOOml量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取 續(xù)濾液10ml，置25ml量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取3ml，置IOml量瓶中， 加1 ％三氯化鋁無(wú)水乙醇溶液1. 0ml，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液 ’另 取未加顯色劑的同樣量供試品溶液作空白，照上述標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備項(xiàng)下的方法，自“放置10 分鐘”起，照紫外_可見(jiàn)分光光度法(中國(guó)藥典一部附錄VA)，在430nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光 度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中讀出供試品中異鼠李素的重量(ug)，計(jì)算，即得；本制劑含總黃酮(以異鼠李素計(jì))為5mg時(shí)，含醋柳黃酮以異鼠李素(C16H12O7) 計(jì)，片劑每片應(yīng)為標(biāo)示量的90. 0 110. 0%、膠囊劑和軟膠囊劑每粒應(yīng)為標(biāo)示量的90. 0 110. 0%、滴丸劑每丸應(yīng)為標(biāo)示量的90. 0 110. 0%。本制劑含總黃酮(以異鼠李素計(jì))為IOmg時(shí)，含醋柳黃酮以異鼠李素(C16H12O7) 計(jì)，片劑每片應(yīng)為標(biāo)示量的90. 0 110. 0%、膠囊劑和軟膠囊劑每粒應(yīng)為標(biāo)示量的90. 0 110. 0%、滴丸劑每丸應(yīng)為標(biāo)示量的90. 0 110. 0%、(2)槲皮素、異鼠李素、山柰素采用高效液相色譜法測(cè)定色譜柱為C18柱；以甲 醇0.4%磷酸=50 50為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為370nm;理論塔板數(shù)按異鼠李素峰計(jì)算應(yīng) 不低于3000 ；精密稱(chēng)取以P2O5為干燥劑減壓干燥12小時(shí)以上異鼠李素、山柰素、120°C干 燥4小時(shí)的槲皮素對(duì)照品適量，加甲醇制成每Iml分別含異鼠李素20ug、山柰素2ug、槲皮 素25ug的混合溶液，即得對(duì)照品溶液；本制劑取片劑20片除去包衣、取10粒膠囊劑、滴丸 劑內(nèi)容物，精密稱(chēng)定，研細(xì)混勻，取相當(dāng)于總黃酮10mg，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加 入甲醇25ml，稱(chēng)定重量，超聲處理(功率135W，頻率59kHz) 30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲 醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液5ml，置具塞錐形瓶中，加甲醇 15ml，鹽酸(1 — 2) 5ml，置水浴中加熱回流30分鐘，迅速冷卻，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用甲醇 稀釋至刻度，搖勻，用0. 45um微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；分別精密吸取對(duì) 照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本制劑含總黃酮(以異鼠李素計(jì))為5mg時(shí)，各劑型含槲皮素(C15HltlO7)、異鼠李 素(C16H12O7)、山柰素(C15HltlO6)的總量片劑每片應(yīng)不少于標(biāo)示量的80%、膠囊劑和軟膠囊 劑每粒每粒應(yīng)不少于標(biāo)示量的80%、滴丸劑每丸應(yīng)不少于標(biāo)示量的80%。本制劑含總黃酮(以異鼠李素計(jì))為IOmg時(shí)，各劑型含槲皮素(C15HltlO7)、異鼠李 素(C16H12O7)、山柰素(C15HltlO6)的總量片劑每片應(yīng)不少于標(biāo)示量的80%、膠囊劑和軟膠囊 劑每粒每粒應(yīng)不少于標(biāo)示量的80%、滴丸劑每丸應(yīng)不少于標(biāo)示量的80%。本質(zhì)量控制方法是對(duì)現(xiàn)有心達(dá)康制劑產(chǎn)品的質(zhì)量控制方法進(jìn)行的改進(jìn)，其改進(jìn)方 法包括將現(xiàn)有心達(dá)康片糖衣片和薄膜衣片兩種產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)合并；對(duì)合并產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)性狀進(jìn)行 調(diào)整；對(duì)原鑒別項(xiàng)的總黃酮的化學(xué)反應(yīng)顯色鑒別刪除代之以醋柳黃酮中槲皮素、異鼠李素 的專(zhuān)屬性鑒別；含量測(cè)定項(xiàng)中對(duì)照品異鼠李素按藥典新要求采用P2O5干燥法；增加用高效液相色譜法測(cè)定槲皮素、異鼠李素、山柰素總含量。由于本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，增加了槲皮素、異鼠李素的薄層色譜鑒別和采用高 效液相色譜法測(cè)定制劑中槲皮素、異鼠李素、山柰素的總含量，所采用的方法專(zhuān)屬于性強(qiáng)、 精密度高，重現(xiàn)性好，回收率高，提高了原心達(dá)康制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，從而保證了該制劑 的質(zhì)量和臨床療效。為了確保本發(fā)明的質(zhì)量控制方法科學(xué)、合理、可行，本申請(qǐng)人對(duì)方法中的鑒別和含 量測(cè)定方法進(jìn)行了研究，具體試驗(yàn)資料如下鑒別經(jīng)試驗(yàn)，采用槲皮素和異鼠李素作對(duì)照鑒別心達(dá)康制劑，其陰性無(wú)干擾，斑 點(diǎn)清晰。點(diǎn)樣量采用10ul，斑點(diǎn)有點(diǎn)拖尾，調(diào)整點(diǎn)樣量為1 2ul。采用不同生產(chǎn)廠(chǎng)家的硅膠G薄層板，以上述薄層色譜條件展開(kāi)，均可得到滿(mǎn)意的 分離結(jié)果。檢查應(yīng)符合中國(guó)藥典片劑(中國(guó)藥典一部附錄ID)、膠囊劑、軟膠囊劑(中國(guó)藥 典一部附錄IL)或滴丸劑(中國(guó)藥典一部附錄IK)項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定。含量測(cè)定總黃酮同原標(biāo)準(zhǔn)方法，僅對(duì)異鼠李素對(duì)照品的干燥方式進(jìn)行了研究， 結(jié)果見(jiàn)表1。表 1 (心達(dá)康片樣品批號(hào)060301，規(guī)格5mg/片)以上結(jié)果表明采用兩種方式干燥異鼠李素對(duì)照品后，測(cè)總黃酮的含量無(wú)明顯差 異，故異鼠李素對(duì)照品改為采用P2O5干燥12h以上，以更符合藥典對(duì)對(duì)照品干燥條件的要 求。槲皮素、異鼠李素、山柰素新增加的采用高效液相色譜法測(cè)定心達(dá)康片中的槲皮 素、異鼠李素、山柰素總量的含量測(cè)定方法。方法參照中國(guó)藥典一部沙棘項(xiàng)下收載的高效液 相色譜法測(cè)定異鼠李素的方法，對(duì)心達(dá)康制劑中槲皮素、異鼠李素、山柰素進(jìn)行含量測(cè)定。1.最大吸收波長(zhǎng)選擇取槲皮素、異鼠李素、山柰素對(duì)照品，分別用甲醇制成對(duì)照品溶液，于200-600nm 波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，槲皮素在371nm處有最大吸收波長(zhǎng)，異鼠李素在369. 5nm處有最大吸收波 長(zhǎng)，山柰素在366. 5nm處有最大吸收波長(zhǎng)。參照中國(guó)藥典2005年版一部沙棘項(xiàng)下異鼠李素 的檢測(cè)波長(zhǎng)，故將槲皮素、異鼠李素、山奈素檢測(cè)波長(zhǎng)選擇為370nm。2.流動(dòng)相的選擇中國(guó)藥典2005年版一部沙棘項(xiàng)下異鼠李素的含量測(cè)定項(xiàng)下流動(dòng)相為甲 醇0.4%磷酸=58 42，銀杏葉片中槲皮素、異鼠李素、山柰素的含量測(cè)定項(xiàng)下流動(dòng)相為甲醇0.4%磷酸=50 50，本品為單味藥制劑，故參照中國(guó)藥典，確定流動(dòng)相最佳為甲 醇0. 4%磷酸=50 50。3.色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)流動(dòng)相甲醇0.4%磷酸=50 50色譜柱迪馬公司DiamonsilC18(5um 250X4. 6mm)流速lml/s，柱溫35°C ；此條件下樣品中槲皮素、異鼠李素、山柰素能與其它組分達(dá)到基線(xiàn)分離，與相鄰的 色譜峰分離度符合要求。理論塔板數(shù)按異鼠李素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。4.供試品溶液的制備方法研究心達(dá)康制劑的主要成分為沙棘總黃酮，是由異鼠李素-3-蕓香糖苷、異鼠李 素-3-鼠李糖苷、槲皮素-3-葡萄糖苷、山柰素-3-葡萄糖苷等多種黃酮苷類(lèi)化合物組成， 所述成份較難直接測(cè)定，而其苷元主要為槲皮素、異鼠李素、山柰素，故采用加酸水解使黃 酮苷轉(zhuǎn)化成黃酮苷元后進(jìn)行含量測(cè)定。由于槲皮素、異鼠李素、山柰素均能溶解于甲醇，參照心達(dá)康膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中供試 品溶液的制備方法，以甲醇25ml為提取溶劑進(jìn)行提取。取本品20片，除去包衣，精密稱(chēng)定， 研細(xì)，取適量(相當(dāng)于總黃酮IOmg)，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱(chēng)定 重量，超聲處理(功率135W，頻率59kHz)，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻， 濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液5ml，置具塞錐形瓶中，加甲醇15ml，鹽酸，置水浴中加 熱回流，迅速冷卻，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45um)濾 過(guò)，取續(xù)濾液，即得。采用上述色譜條件，進(jìn)行測(cè)定。4. 1提取時(shí)間研究20 (30或40)分鐘。4. 2加酸量的研究加鹽酸(1 — 2) 3 (5或7)ml。4. 3水解時(shí)間的考察水浴中加熱回流20 (30或40)分鐘。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。表2 結(jié)果通過(guò)試驗(yàn)比較，確定供試液制備方法為取本品20片，除去包衣，精密稱(chēng) 定，研細(xì)，取適量(相當(dāng)于總黃酮10mg)，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml， 稱(chēng)定重量，超聲處理(功率135W，頻率59kHz) 30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失 的重量，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液5ml，置具塞錐形瓶中，加甲醇15ml，鹽酸 (1 — 2) 5ml，置水浴中加熱回流30分鐘，迅速冷卻，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻 度，搖勻，用微孔濾膜(0. 45um)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。5.專(zhuān)屬性試驗(yàn)用缺醋柳黃酮的心達(dá)康片陰性樣品，按供試品處理方法處理后，進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果在 槲皮素、異鼠李素、山柰素峰的位置上無(wú)干擾。
6.標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備精密稱(chēng)取槲皮素對(duì)照品20. 69mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖 勻，作為對(duì)照品貯備液。精密稱(chēng)取山柰素對(duì)照品3. 23mg，置IOml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋 至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密稱(chēng)取異鼠李素對(duì)照品8. 46mg，置25ml量瓶中，加甲 醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。分別精密量取槲皮素對(duì)照品貯備液10ml、 山柰素對(duì)照品貯備液1ml、異鼠李素對(duì)照品貯備液IOml于同一 50ml量瓶中，用甲醇稀釋 至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品溶液。再分別精密量取混合對(duì)照品溶液l、2、4、6、8、10ml于 IOml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，吸取IOul進(jìn)樣。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐 標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。計(jì)算回歸方程。槲皮素回歸方程:A= 4636757. 285C-18655. 16986 (r2 = 0. 999989135)山柰素回歸方程:A = 4025498. 961C-4063. 736986 (r2 = 0. 999377663)異鼠李素回歸方程:A= 4551361C-22470. 2(r2 = 0. 999995)結(jié)果表明在上述色譜條件下，槲皮素在0.08276-0. 8276ug之間，樣品進(jìn)樣量與 峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好，山柰素在0. 00646-0. 0646ug之間，樣品進(jìn)樣量與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良 好，異鼠李素在0. 06768-0. 6768ug之間，樣品進(jìn)樣量與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好。7.精密度試驗(yàn)7. 1儀器精密度精密吸取槲皮素、山柰素、異鼠李素混合對(duì)照品溶液各10ul，在上 述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果見(jiàn)表3。表3儀器精密度試驗(yàn) 7. 2重復(fù)性試驗(yàn)平行取同批心達(dá)康片樣品6份，按“含量測(cè)定”項(xiàng)下供試液制備方法試驗(yàn)，采用上 述色譜條件，測(cè)定槲皮素、山柰素、異鼠李素含量。結(jié)果見(jiàn)表4。表4重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果 以上結(jié)果表明槲皮素，山奈素，異鼠李素含量具有較好的重現(xiàn)性8、準(zhǔn)確度(加樣回收率試驗(yàn))精密量取槲皮素對(duì)照品溶液(濃度0. 9348mg/ml) 3ml、山柰酚對(duì)照品溶液(濃度 0. 2196mg/ml) 1ml、異鼠李素對(duì)照品溶液(濃度0. 54mg/ml) 3ml，共6份，分別置6個(gè)具塞錐 形瓶中，水浴上蒸干溶劑，備用。取已知含槲皮素19.07mg/g、山柰素1.40mg/g、異鼠李素 11. 60mg/g的樣品，精密稱(chēng)定，置上述具塞錐形瓶中，按擬定測(cè)定槲皮素、山柰素、異鼠李素 總量方法進(jìn)行加樣回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表5、表6、表7。表5槲皮素加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 表6山柰素加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 表7異鼠李素加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 以上結(jié)果試驗(yàn)表明該方法具有較好的回收率，準(zhǔn)確度好。9、耐用性實(shí)驗(yàn)9. 1穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液于制備后0、1、3、6、12、24小時(shí)后測(cè)定含量，其結(jié)果 見(jiàn)表8。表8穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 以上結(jié)果表明供試品在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性較好。9. 2流動(dòng)相比例變化的試驗(yàn)取樣品，按上述確定的供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，流動(dòng)相分別 為①甲醇-0.4%磷酸(45 55))；②甲醇-0.4%磷酸(50 50)；③甲醇-0. 4%磷酸 (55 45)。在其他色譜條件不變，只改變流動(dòng)相的情況下，對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行考察。按上述 色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表9。表9流動(dòng)相比例變化的考察 根據(jù)以上測(cè)定結(jié)果，RSD為1. 3%，流動(dòng)相比例的較小變化對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)影響。9. 3不同品牌色譜柱的考察取同批樣品，按上述確定的供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，色譜柱分 別 為(I)Kromasil. 200X4. 6mmID，5um ； (2)Dickma 250X4. mmID 5um ； (3)phenomemex 150X4. 6ID 5um。在流動(dòng)相及其他色譜條件不變，只改變所使用的色譜柱，對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行考察。按上述色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表10。表10不同品牌色譜柱的考察 根據(jù)以上測(cè)定結(jié)果，RSD為1. 09%，不同品牌的色譜柱對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯影響。根據(jù)以上的試驗(yàn)結(jié)果可知，該方法的耐用性較好。10、樣品含量測(cè)定按擬定的心達(dá)康制劑槲皮素、山奈素、異鼠李素含量測(cè)定方法，對(duì)原長(zhǎng)期留樣的心 達(dá)康片和市售產(chǎn)品進(jìn)行了含量測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表11、表12、表13。表11五批心達(dá)康片(規(guī)格5mg)含量測(cè)定結(jié)果 表12三批心達(dá)康片(規(guī)格10mg)含量測(cè)定結(jié)果 表13三批心達(dá)康片(規(guī)格5mg)含量測(cè)定結(jié)果 從以上結(jié)果可以看出，采用高效液相色譜法測(cè)定心達(dá)康片中槲皮素、山柰素、異鼠 李素總含量相當(dāng)于其總黃酮標(biāo)示量的81. 6% 98. 0%?？紤]到本標(biāo)準(zhǔn)只是對(duì)已有產(chǎn)品進(jìn) 行含量測(cè)定，因此暫以測(cè)得的最低數(shù)據(jù)為其限度標(biāo)準(zhǔn)。即采用高效液相色譜法測(cè)定心達(dá)康 片中槲皮素、山柰素、異鼠李素總量，應(yīng)不低于標(biāo)示量的80.0%。
具體實(shí)施例方式以下通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但并不作為對(duì)本發(fā)明的限制，本發(fā)明的質(zhì)量 控制方法也可以用于以下其它心達(dá)康劑型藥品的質(zhì)量控制。實(shí)施例一所述片劑質(zhì)量控制方法包括性狀本品為糖衣片或薄膜衣片，除去包衣后顯棕黃色至棕色，味微苦。鑒別取本品1片，除去包衣，研細(xì)，加乙醇每5ml(5mg)或IOml (IOmg)，超聲處理 5分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取槲皮素和異鼠李素對(duì)照品，加乙醇制成每Iml各含 Img的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上 述兩種溶液各1 2ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲 苯乙酸乙酯甲酸=5 4 0.5為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁乙醇溶 液，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色 的熒光斑點(diǎn)。檢查應(yīng)符合片劑項(xiàng)下有關(guān)的各規(guī)定(中國(guó)藥典一部附錄ID)。含量測(cè)定(1)總黃酮對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取異鼠李素對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每Iml含異鼠李 素20ug的溶液，即得。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備精密量取對(duì)照品溶液l、2、3、4、5、6ml，分別置IOml量瓶中，加 三氯化鋁無(wú)水乙醇溶液1. 0ml，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置10分鐘，以相應(yīng)的試
劑為空白，照紫外_可見(jiàn)分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)，在430nm的波長(zhǎng)處 測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。測(cè)定法取本片劑20片，除去包衣，精密稱(chēng)定，研細(xì)，取0. lg，精密稱(chēng)定，置具塞錐 形瓶中，加無(wú)水乙醇適量，于800C水浴中加熱回流15分鐘，放冷，移置IOOml量瓶中，用無(wú)水
12乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液10ml，置25ml量瓶中，用無(wú)水乙 醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取3ml，置IOml量瓶中，加1 %三氯化鋁無(wú)水乙醇溶液1. Oml， 用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取未加顯色劑的同樣量供試品溶液作空 白，照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備項(xiàng)下的方法，自“放置10分鐘”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中讀出 供試品中異鼠李素的重量(ug)，計(jì)算，即得。本片劑每片含醋柳黃酮以異鼠李素(C16H12O7)計(jì)，應(yīng)為標(biāo)示量的90. 0 % 110. 0%。本片劑每片含總黃酮(以異鼠李素計(jì))①5mg、②10mg。(2)槲皮素、異鼠李素、山柰素照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄 VID)測(cè)定色譜柱為C18柱，流速為lml/s，柱溫為35°C，以甲醇0. 4%磷酸=50 50為流 動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為370nm ；理論塔板數(shù)按異鼠李素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取以P2O5為干燥劑減壓干燥12小時(shí)以上異鼠李素、山 柰素、120°C干燥4小時(shí)的槲皮素對(duì)照品適量，加甲醇制成每Iml分別含異鼠李素20ug、山柰 素2ug、槲皮素25ug的混合溶液，即得。供試品溶液的制備取本品20片，除去包衣，精密稱(chēng)定，研細(xì)，取適量(相當(dāng)于總黃 酮IOmg)，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱(chēng)定重量，超聲處理(功率135W， 頻率59kHz) 30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液， 精密量取續(xù)濾液5ml，置具塞錐形瓶中，加甲醇15ml，鹽酸(1 — 2) 5ml，置水浴中加熱回流 30分鐘，迅速冷卻，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45um)濾 過(guò)，取續(xù)濾液，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定， 即得。本片劑每片含槲皮素(C15HltlO7)、異鼠李素(C16H12O7)、山柰素(C15HltlO6)的總量不少 于總黃酮標(biāo)示量的80.0% ；功能與主治補(bǔ)益心氣，化瘀通脈，消痰運(yùn)脾。用于心氣虛弱，心脈瘀阻，痰濕困脾 所致心慌、心悸、心痛，氣短胸悶，血脈不暢，咳累等癥。用法與用量口服，一次10mg，一日3次，三個(gè)月為一療程。規(guī)格每片含總黃酮(以異鼠李素計(jì))①5mg②IOmg貯臧密封，置干燥處。實(shí)施例二 所述膠囊劑質(zhì)量控制方法包括性狀內(nèi)容物為淺黃褐色至灰褐色的顆粒及粉末；氣微，味微苦。鑒別取本膠囊劑內(nèi)容物5mg或10mg，加乙醇5ml或10ml，超聲處理5分鐘，制成 lmg/ml的溶液，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取槲皮素和異鼠李素對(duì)照品，加乙醇制成每 Iml各含Img的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜 法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各1 2ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G 薄層板上，以甲苯乙酸乙酯甲酸=5 4 0.5為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以3% 三氯化鋁乙醇溶液，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置 上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
檢查應(yīng)符合膠囊劑項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定(中國(guó)藥典2005年版一部附錄IL)。。含量測(cè)定(1)總黃酮對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取異鼠李素對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每Iml含異鼠李 素20ug的溶液，即得；標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備精密量取對(duì)照品溶液l、2、3、4、5、6ml，分別置IOml量瓶中，加 3%三氯化鋁無(wú)水乙醇溶液1. 0ml，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置10分鐘，以相應(yīng)的試 劑為空白，照紫外_可見(jiàn)分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)，在430nm的波長(zhǎng)處 測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。測(cè)定法取本膠囊劑10 20粒內(nèi)容物，精密稱(chēng)定，研細(xì)，混勻，取0. lg，精密稱(chēng)定， 置具塞錐形瓶中，加無(wú)水乙醇適量，于80°C水浴中加熱回流15分鐘，放冷，移置IOOml量瓶 中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液10ml，置25ml量瓶 中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取3ml，置IOml量瓶中，加3%三氯化鋁無(wú)水乙醇 溶液1.0ml，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取未加顯色劑的同樣量供 試品溶液作空白，照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備項(xiàng)下的方法，自“放置10分鐘”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo) 準(zhǔn)曲線(xiàn)中讀出供試品中異鼠李素的重量(ug)，計(jì)算，即得；本膠囊劑含醋柳黃酮以異鼠李素(C16H12O7)計(jì)，應(yīng)為標(biāo)示量的90. 0% 110. 0%。本膠囊劑每粒含黃酮(以異鼠李素計(jì))①5mg、②10mg。(2)槲皮素、異鼠李素、山柰素照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄 VID)測(cè)定。色譜柱為C18柱，流速為lml/s，柱溫為35°C，以甲醇0. 4%磷酸=50 50為流 動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為370nm。理論塔板數(shù)按異鼠李素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取以P2O5為干燥劑減壓干燥12小時(shí)以上異鼠李素、山 柰素、120°C干燥4小時(shí)的槲皮素對(duì)照品適量，加甲醇制成每Iml分別含異鼠李素20ug、山柰 素2ug、槲皮素25ug的混合溶液，即得；供試品溶液的制備取總黃酮含量測(cè)定項(xiàng)下內(nèi)容物適量(相當(dāng)于總黃酮IOmg)， 精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱(chēng)定重量，超聲處理(功率135W，頻率 59kHz) 30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量 取續(xù)濾液5ml，置具塞錐形瓶中，加甲醇15ml，鹽酸(1 — 2) 5ml，置水浴中加熱回流30分鐘， 迅速冷卻，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45um)濾過(guò)，取續(xù) 濾液，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。本膠囊劑每粒含槲皮素(C15HltlO7)、異鼠李素(C16H12O7)、山柰素(C15HltlO6)的總量不 少于總黃酮標(biāo)示量的80. 0%。實(shí)施例三本軟膠囊劑質(zhì)量控制方法包括性狀內(nèi)容物為含有少量懸浮固體浸膏的黃色油狀液體；氣微，味微苦。鑒別取本膠囊劑內(nèi)容物5mg或10mg，加乙醇5ml或10ml，超聲處理5分鐘，制成 lmg/ml的溶液，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取槲皮素和異鼠李素對(duì)照品，加乙醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜 法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各1 2ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G 薄層板上，以甲苯乙酸乙酯甲酸=5 4 0.5為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以3% 三氯化鋁乙醇溶液，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置 上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。檢查應(yīng)符合膠囊劑項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定(中國(guó)藥典2005年版一部附錄IL)。含量測(cè)定(1)總黃酮對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取異鼠李素對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每Iml含異鼠李 素20ug的溶液，即得；標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備精密量取對(duì)照品溶液l、2、3、4、5、6ml，分別置IOml量瓶中，加 3%三氯化鋁無(wú)水乙醇溶液1. 0ml，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置10分鐘，以相應(yīng)的試 劑為空白，照紫外_可見(jiàn)分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)，在430nm的波長(zhǎng)處 測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。測(cè)定法取本制劑10 20粒內(nèi)容物，精密稱(chēng)定，混勻，取0. lg，精密稱(chēng)定，置具塞 錐形瓶中，加無(wú)水乙醇適量，于800C水浴中加熱回流15分鐘，放冷，移置IOOml量瓶中，用無(wú) 水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液10ml，置25ml量瓶中，用無(wú)水 乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取3ml，置IOml量瓶中，加3 %三氯化鋁無(wú)水乙醇溶液1. Oml， 用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取未加顯色劑的同樣量供試品溶液作空 白，照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備項(xiàng)下的方法，自“放置10分鐘”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中讀出 供試品中異鼠李素的重量(ug)，計(jì)算，即得；本軟膠囊劑含醋柳黃酮以異鼠李素(C16H12O7)計(jì)，應(yīng)為標(biāo)示量的90. 0 % 110. 0%。本軟膠囊劑每粒含黃酮(以異鼠李素計(jì))①5mg、②10mg。(2)槲皮素、異鼠李素、山柰素照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄 VID)測(cè)定。色譜柱為C18柱，流速為lml/s，柱溫為35°C，以甲醇0. 4%磷酸=50 50為流 動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為370nm ；理論塔板數(shù)按異鼠李素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取以P2O5為干燥劑減壓干燥12小時(shí)以上異鼠李素、山 柰素、120°C干燥4小時(shí)的槲皮素對(duì)照品適量，加甲醇制成每Iml分別含異鼠李素20ug、山柰 素2ug、槲皮素25ug的混合溶液，即得；供試品溶液的制備取總黃酮測(cè)定項(xiàng)下內(nèi)容物適量(相當(dāng)于總黃酮IOmg)，精密稱(chēng) 定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱(chēng)定重量，超聲處理(功率135W，頻率59kHz) 30 分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液 5ml，置具塞錐形瓶中，加甲醇15ml，鹽酸(1 — 2) 5ml，置水浴中加熱回流30分鐘，迅速冷 卻，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0. 45um)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即 得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定， 即得。
本軟膠囊劑每粒含槲皮素(C15HltlO7)、異鼠李素(C16H12O7)、山柰素(C15HltlO6)的總量 不少于總黃酮標(biāo)示量的80. 0%。實(shí)施例四本滴丸劑質(zhì)量控制方法包括性狀內(nèi)容物為淺黃褐色至灰褐色的顆粒及粉末；氣微，味微苦。鑒別取本滴丸劑內(nèi)容物5mg或10mg，加乙醇5ml或10ml，超聲處理5分鐘，制成 lmg/ml的溶液，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取槲皮素和異鼠李素對(duì)照品，加乙醇制成每 Iml各含Img的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB薄層色譜 法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各1 2ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G 薄層板上，以甲苯乙酸乙酯甲酸=5:4: 0.5為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以
三氯化鋁乙醇溶液，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置 上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。檢查應(yīng)符合滴丸劑項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定(中國(guó)藥典2005年版一部附錄IK)。含量測(cè)定(1)總黃酮對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取異鼠李素對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每Iml含異鼠李 素20ug的溶液，即得；標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備精密量取對(duì)照品溶液l、2、3、4、5、6ml，分別置IOml量瓶中，加 三氯化鋁無(wú)水乙醇溶液1. 0ml，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置10分鐘，以相應(yīng)的試
劑為空白，照紫外_可見(jiàn)分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)，在430nm的波長(zhǎng)處 測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。測(cè)定法本制劑10 20粒內(nèi)容物，精密稱(chēng)定，混勻，取0. lg，精密稱(chēng)定，置具塞錐 形瓶中，加無(wú)水乙醇適量，于80 V水浴中加熱回流15分鐘，放冷，移置IOOml量瓶中，用無(wú)水 乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液10ml，置25ml量瓶中，用無(wú)水乙 醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取3ml，置IOml量瓶中，加三氯化鋁無(wú)水乙醇溶液1.0ml， 用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取未加顯色劑的同樣量供試品溶液作空 白，照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備項(xiàng)下的方法，自“放置10分鐘”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中讀出 供試品中異鼠李素的重量(ug)，計(jì)算，即得；本滴丸劑含醋柳黃酮以異鼠李素(C16H12O7)計(jì)，應(yīng)為標(biāo)示量的90. 0% 110. 0%。本滴丸每丸含黃酮(以異鼠李素計(jì))①5mg、②10mg。(2)槲皮素、異鼠李素、山柰素照高效液相色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VID)測(cè)定。色譜柱為C18柱，流速為lml/s，柱溫為35°C，以甲醇0. 4%磷酸=50 50為流 動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為370nm。理論塔板數(shù)按異鼠李素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取以P2O5為干燥劑減壓干燥12小時(shí)以上異鼠李素、山 柰素、120°C干燥4小時(shí)的槲皮素對(duì)照品適量，加甲醇制成每Iml分別含異鼠李素20ug、山柰 素2ug、槲皮素25ug的混合溶液，即得；供試品溶液的制備取總黃酮測(cè)定項(xiàng)下的內(nèi)容物適量(相當(dāng)于總黃酮IOmg)，精密 稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱(chēng)定重量，超聲處理(功率135W，頻率59kHz) 30 分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液 5ml，置具塞錐形瓶中，加甲醇15ml，鹽酸(1 — 2) 5ml，置水浴中加熱回流30分鐘，迅速冷卻，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0. 45um)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，即 得。本滴丸劑每丸含槲皮素(C15HltlO7)、異鼠李素(C16H12O7)、山柰素(C15HltlO6)的總量不少于 總黃酮標(biāo)示量的80.0%。
權(quán)利要求
一種心達(dá)康制劑的鑒別方法，所述制劑包括片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、滴丸劑，其特征在于所述鑒別包括以槲皮素對(duì)照品、異鼠李素對(duì)照品為對(duì)照鑒別制劑中黃酮苷元的薄層色譜鑒別，鑒別方法是以槲皮素對(duì)照品和異鼠李素對(duì)照品為對(duì)照，以甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝2～10∶1～8∶0.1～1.5的溶液為展開(kāi)劑的薄層色譜鑒別法。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述心達(dá)康制劑的鑒別方法，其特征在于所述鑒別方法包括以下取本制劑或其內(nèi)容物，研細(xì)，加乙醇使溶解，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取槲皮素和異鼠李素對(duì)照品，加乙醇制成混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典薄層色譜法試驗(yàn)，吸 取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯乙酸乙酯甲酸 =2 10 1 8 0.1 1.5為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1 5%三氯化鋁乙醇溶 液，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光 斑點(diǎn)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述心達(dá)康制劑的鑒別方法，其特征在于更具體的鑒別方法包括 以下取本制劑或其內(nèi)容物，研細(xì)，取細(xì)粉2 20mg，加無(wú)水乙醇2 20ml，超聲處理1 15 分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取槲皮素和異鼠李素對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每Iml 各含Img IOmg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)， 吸取上述兩種溶液各1 20ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板 上，以甲苯乙酸乙酯甲酸=2 10 1 8 0.1 1.5為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干， 噴以1 5%的三氯化鋁乙醇溶液，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品 色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述心達(dá)康制劑的鑒別方法，其特征在于更進(jìn)一步具體的鑒別方 法包括以下取本制劑1片或1粒，研細(xì)，加乙醇5ml或10ml，超聲處理5分鐘，制成lmg/ml的溶液， 濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取槲皮素和異鼠李素對(duì)照品，加乙醇制成每Iml各含Img的 混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液 各1 2ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯乙酸乙 酯甲酸=5 4 0.5為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1 3%三氯化鋁乙醇溶液，置 365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光 斑點(diǎn)。
全文摘要
本發(fā)明是申請(qǐng)?zhí)枮?00610022691.0的發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)的分案。是涉及一種心達(dá)康制劑的鑒別方法，所述鑒別方法包括對(duì)制劑中槲皮素、異鼠李素的薄層色譜鑒別。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明增加了槲皮素、異鼠李素的薄層色譜鑒別，所采用的方法專(zhuān)屬性強(qiáng)、精密度高，重現(xiàn)性好，回收率高，提高了原心達(dá)康制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，從而保證了該制劑的臨床療效。
文檔編號(hào)G01N30/90GK101879198SQ20101014581
公開(kāi)日2010年11月10日 申請(qǐng)日期2006年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月29日
發(fā)明者周娟, 朱林波, 李彥, 秦方云 申請(qǐng)人:四川美大康藥業(yè)股份有限公司