專(zhuān)利名稱(chēng)：一種檢測(cè)人參皂苷總類(lèi)成分含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種檢測(cè)人參皂苷總類(lèi)成分含量的方法。
背景技術(shù)：
人參總皂苷具有擴(kuò)冠，強(qiáng)心，改善心功能，減輕心、腦缺血再灌注損傷，改善血液流變學(xué)參數(shù)，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等藥理作用，被廣泛應(yīng)用于藥物制劑中。目前人參皂苷總類(lèi)成分的含量測(cè)定方法主要是高氯酸-香草醛顯色法和硫酸-香草醛顯色法，上述方法專(zhuān)屬性差，部分雜質(zhì)同樣可以被顯色，存在明顯干擾，同時(shí)顯色過(guò)程容易受外界條件影響，使測(cè)定結(jié)果缺乏準(zhǔn)確性，不利于控制藥品質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種檢測(cè)人參皂苷總類(lèi)成分含量的方法，該方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，可有效消除雜質(zhì)干擾，獲得良好的檢測(cè)效果。
本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是按如下步驟實(shí)現(xiàn)(1)采用常規(guī)水解方法處理含人參總皂苷的樣品，制備人參皂苷元供試樣品。
(2)采用高效液相色譜法，檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，外標(biāo)法測(cè)定樣品中人參皂苷元含量。
(3)分別根據(jù)人參二醇組皂苷、人參三醇組皂苷和齊墩果酸組皂苷各自的加權(quán)平均分子量與相對(duì)應(yīng)的人參皂苷元分子量之比值，計(jì)算人參皂苷總類(lèi)成分含量，即得。
本發(fā)明所述含量檢測(cè)方法適用于符合指紋圖譜相關(guān)技術(shù)要求的含人參皂苷的藥材、提取物和藥物制劑。
本發(fā)明所述人參皂苷總類(lèi)成分可以是人參二醇組皂苷、人參三醇組皂苷、齊墩果酸組皂苷中的一類(lèi)或任意兩類(lèi)的混合物或三類(lèi)的總混合物。
本發(fā)明所述常規(guī)水解方法可以是酸水解法，也可以是堿水解法，還可以是Smith法。酸水解法的試劑可以是鹽酸、硫酸、硝酸、高氯酸、醋酸、磷酸、氫溴酸中的一種或其中任意多種組合，堿水解法的試劑可以是氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣中的一種或其中任意多種組合。
本發(fā)明所述人參二醇組皂苷的皂苷元可以是20(S)-原人參二醇，也可以是異構(gòu)化產(chǎn)物人參二醇；人參三醇組皂苷的皂苷元可以是20(S)-原人參三醇，也可以是異構(gòu)化產(chǎn)物人參三醇。
本發(fā)明所述加權(quán)平均分子量按如下步驟測(cè)定(1)采用高效液相色譜法，檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，根據(jù)人參二醇組中供含量測(cè)定用的人參皂苷對(duì)照品，外標(biāo)法測(cè)定人參皂苷總類(lèi)成分中相對(duì)應(yīng)皂苷的含量和響應(yīng)值，并計(jì)算平均響應(yīng)值。
(2)根據(jù)屬于人參二醇組的其余人參皂苷對(duì)照品，鑒別人參皂苷總類(lèi)成分的高效液相色譜圖中相對(duì)應(yīng)的人參皂苷色譜峰。
(3)根據(jù)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器對(duì)同系物的響應(yīng)值基本相同的原理，利用步驟(1)中的平均響應(yīng)值，計(jì)算屬于人參二醇組的其余皂苷的含量。
(4)按照步驟(1)～(3)，測(cè)定不少于10批符合指紋圖譜相關(guān)技術(shù)要求的含人參總皂苷的樣品，根據(jù)測(cè)定結(jié)果計(jì)算各種人參皂苷各自的平均含量。
(5)將人參二醇組皂苷中各種皂苷的組成比例設(shè)定為權(quán)數(shù)，按照下列公式計(jì)算加權(quán)平均分子量。
S＝aX+bY+…S代表加權(quán)平均分子量X、Y、…代表單體人參皂苷的分子量a、b、…代表權(quán)數(shù)，即對(duì)應(yīng)單體人參皂苷的組成百分比(6)同法測(cè)定人參三醇組皂苷和齊墩果酸組皂苷各自的加權(quán)平均分子量。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是①方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，有效消除了雜質(zhì)的干擾；②高效液相色譜響應(yīng)值高，檢測(cè)誤差小，精密度、穩(wěn)定性、回收率、重現(xiàn)性均較好，方法操作簡(jiǎn)便，穩(wěn)定可靠，實(shí)用性強(qiáng)，非常適合產(chǎn)品質(zhì)量的控制。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
實(shí)施例紅參提取物中總皂苷的含量測(cè)定1.材料及試劑紅參標(biāo)準(zhǔn)提取物共十批，編號(hào)I～X。待測(cè)紅參提取物共三批，編號(hào)1～3，均符合根據(jù)編號(hào)I～X提取物建立的指紋圖譜的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。
供含量測(cè)定用對(duì)照品Rb1、Rb2、Rb3、Rg3、Rh2、Re、Rg1、人參二醇、人參三醇；供鑒別測(cè)定用對(duì)照品Ra、Rc、Rd、Rh3、Rs1、Rg2、Rh1、Rf。
2.人參皂苷平均含量的測(cè)定采用高效液相色譜法，檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，流動(dòng)相為乙腈(A)和H2O(B)按不同體積比混合，梯度洗脫程序0～30min，19％A；30～31min，19％A～30％A；31～70min，30％A。結(jié)果見(jiàn)表1～2。
3.加權(quán)平均分子量計(jì)算根據(jù)表1～2結(jié)果，設(shè)定各種皂苷的組成比例設(shè)定為權(quán)數(shù)，計(jì)算得人參二醇組皂苷加權(quán)平均分子量為1062，人參三醇組皂苷加權(quán)平均分子量為840。
4.皂苷元的含量測(cè)定紅參提取物加含10％硫酸的50％乙醇液，于90℃水浴4h，放冷，用氫氧化鈉溶液中和至pH5～6，減壓回收乙醇，并用氯仿萃取，回收氯仿至干，殘?jiān)眉状既芙舛ㄈ?，制得供試品溶液。采用高效液相色譜法，檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，流動(dòng)相為甲醇-水(92∶8)，測(cè)定人參二醇和人參三醇的含量，結(jié)果見(jiàn)表3。
5.人參總皂苷含量計(jì)算根據(jù)人參二醇組皂苷和人參三醇組皂苷各自的加權(quán)平均分子量與相對(duì)應(yīng)的人參皂苷元分子量之比值，計(jì)算人參總皂苷含量，結(jié)果見(jiàn)表3。
表1 人參二醇組皂苷的平均含量

表2 樣品人參三醇組皂苷的平均含量

表3 人參總皂苷的含量

權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)人參皂苷總類(lèi)成分含量的方法，其特征是按如下步驟測(cè)定(1)采用常規(guī)水解方法處理含人參總皂苷的樣品，制備人參皂苷元供試品。(2)采用高效液相色譜法，檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，外標(biāo)法測(cè)定樣品中人參皂苷元含量。(3)分別根據(jù)人參二醇組皂苷、人參三醇組皂苷和齊墩果酸組皂苷各自的加權(quán)平均分子量與相對(duì)應(yīng)的人參皂苷元分子量之比值，計(jì)算人參皂苷總類(lèi)成分含量，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)人參皂苷總類(lèi)成分含量的方法，其特征是適用于符合指紋圖譜技術(shù)要求的含人參皂苷的藥材、提取物和藥物制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)人參皂苷總類(lèi)成分含量的方法，其特征是人參皂苷總類(lèi)成分可以是人參二醇組皂苷、人參三醇組皂苷、齊墩果酸組皂苷中的一類(lèi)或任意兩類(lèi)的混合物或三類(lèi)的總混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)人參皂苷總類(lèi)成分含量的方法，其特征是常規(guī)水解方法可以是酸水解法，也可以是堿水解法，還可以是Smith法，酸水解法的試劑可以是鹽酸、硫酸、硝酸、高氯酸、醋酸、磷酸、氫溴酸中的一種或其中任意多種組合，堿水解法的試劑可以是氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣中的一種或其中任意多種組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)人參皂苷總類(lèi)成分含量的方法，其特征是人參二醇組皂苷的皂苷元可以是20(S)-原人參二醇，也可以是異構(gòu)化產(chǎn)物人參二醇；人參三醇組皂苷的皂苷元可以是20(S)-原人參三醇，也可以是異構(gòu)化產(chǎn)物人參三醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)人參皂苷總類(lèi)成分含量的方法，其特征是加權(quán)平均分子量按如下步驟測(cè)定(1)采用高效液相色譜法，檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，根據(jù)人參二醇組中供含量測(cè)定用的人參皂苷對(duì)照品，外標(biāo)法測(cè)定人參皂苷總類(lèi)成分中相對(duì)應(yīng)皂苷的含量和響應(yīng)值，并計(jì)算平均響應(yīng)值。(2)根據(jù)屬于人參二醇組的其余人參皂苷對(duì)照品，鑒別人參皂苷總類(lèi)成分的高效液相色譜圖中相對(duì)應(yīng)的人參皂苷色譜峰。(3)根據(jù)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器對(duì)同系物的響應(yīng)值相同的原理，利用步驟(1)中的平均響應(yīng)值，計(jì)算屬于人參二醇組的其余皂苷的含量。(4)按照步驟(1)～(3)，測(cè)定不少于10批符合指紋圖譜相關(guān)技術(shù)要求的含人參總皂苷的樣品，根據(jù)測(cè)定結(jié)果計(jì)算各種人參皂苷各自的平均含量。(5)將人參二醇組皂苷中各種皂苷的組成比例設(shè)定為權(quán)數(shù)，按照下列公式計(jì)算加權(quán)平均分子量。S＝aX+bY+…S代表加權(quán)平均分子量X、Y、…代表單體人參皂苷的分子量a、b、…代表權(quán)數(shù)，即對(duì)應(yīng)單體人參皂苷的組成百分比(6)同法測(cè)定人參三醇組皂苷和齊墩果酸組皂苷各自的加權(quán)平均分子量。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)人參皂苷總類(lèi)成分含量的方法，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域?，F(xiàn)有技術(shù)檢測(cè)方法專(zhuān)屬性差，雜質(zhì)干擾明顯，檢測(cè)誤差較大。本發(fā)明先采用高效液相色譜方法測(cè)定人參皂苷元含量，后分別根據(jù)人參二醇組皂苷、人參三醇組皂苷和齊墩果酸組皂苷各自的加權(quán)平均分子量與相對(duì)應(yīng)皂苷元分子量之比值，計(jì)算人參皂苷總類(lèi)成分含量。該方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，可有效消除雜質(zhì)干擾，獲得良好的檢測(cè)效果。
文檔編號(hào)G01N33/15GK1963494SQ200610022399
公開(kāi)日2007年5月16日 申請(qǐng)日期2006年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月4日
發(fā)明者羅益民, 蔡煒 申請(qǐng)人:羅益民