專利名稱：一種靜脈注射用的粉針及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療上呼吸道感染、肺炎，抗上呼吸道病毒的粉針。具體地說(shuō)是以中草藥為原料制備的粉針，同時(shí)涉及該藥物的制備方法。
背景技術(shù)：
在我國(guó)，咽炎、氣管炎等上呼吸道感染、肺炎、呼吸道病毒感染是一類常見(jiàn)病多發(fā)病。不但本身常遷延不愈，而且可以引起多種并發(fā)癥，危害人類健康。隨著工業(yè)社會(huì)的發(fā)展，空氣被不同程度地污染，使得鼻炎、咽炎等上呼吸道感染和肺炎類疾病的發(fā)病率增高。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為本病雖主要致病菌為鏈球菌，但細(xì)菌與病毒混合感染者并不少見(jiàn)，由此引發(fā)的急性淋巴炎、風(fēng)濕熱、腎炎等癥給患者帶來(lái)了巨大痛苦。因此將該病消滅在初期是十分必要的。
目前治療本病的首選藥物為抗生素，但青霉素類藥物有嚴(yán)重的過(guò)敏反應(yīng)，使對(duì)青霉素有過(guò)敏反應(yīng)的患者無(wú)法使用，且該藥對(duì)細(xì)菌和病毒混合感染者療效差、耐藥性強(qiáng)；中藥方面應(yīng)用較廣泛的是雙黃連輸液、粉針劑和各種銀黃制劑有口服液、含化片、沖劑等劑型。雙黃連輸液、粉針劑療效較確切但是其有效成分也不太明確，目前已有多起過(guò)敏反應(yīng)(《中國(guó)中藥雜志》1994年754頁(yè)、《現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)》1994年第十一卷第一期25頁(yè))、劇烈嘔吐(《武警醫(yī)學(xué)》1995年第六卷第二期110頁(yè))、血尿(《現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)》1995年12月第12卷第六期42頁(yè))等不良反應(yīng)的報(bào)道。大量研究表明其不良反應(yīng)主要由連翹苷引起。中國(guó)專利1398626和1424084公開(kāi)了靜脈注射用銀黃粉針劑及其制備方法和注射用銀黃粉針劑及其制備方法。它們和其它銀黃輸液一樣采用常規(guī)提取精制方法金銀花提取以綠原酸為指標(biāo)，而忽略了異綠原酸等有效成分的作用，且綠原酸含量太低，大量雜質(zhì)和無(wú)效成分對(duì)用藥的安全性、穩(wěn)定性造成很大威脅；黃芩的提取過(guò)程以黃芩苷為指標(biāo)，有的雖然純度較高但忽略了漢黃芩苷等有效成分的作用，反而影響了藥品的療效。常規(guī)制劑以提取物入藥，分別以綠原酸、黃芩苷為指標(biāo)，有效成分含量低，提取物中成分不明確，給藥品的安全性、穩(wěn)定性留下隱患。
因此，提供一種療效可靠，毒副作用低的藥物迫切需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療上呼吸道感染粉針，它從各有效組分入手，較全面研究了制劑中各組分及含量范圍和比例，有效成分含量高，雜質(zhì)和無(wú)效成分含量小，用藥安全、穩(wěn)定，療效可靠。除用于治療上呼吸道感染外，對(duì)肺炎、抗上呼吸道病毒感染也有較好療效。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供該藥物的制備方法。
為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案本發(fā)明所提供的粉針主要有效成分由以下成分組成綠原酸10-250mg/g、黃芩苷16-400mg/g，不含連翹苷、梔子苷。
如上所述主要活性成分及濃度優(yōu)選為綠原酸50-175mg/g、黃芩苷100-300mg/g。
其主要活性成分及濃度優(yōu)化為綠原酸100-140mg/g、黃芩苷170-230mg/g。
如上所述粉針還包含以下重量百分比的活性成分異綠原酸3-80mg/g、漢黃芩苷2-40mg/g，其濃度優(yōu)化為異綠原酸8-50mg/g、漢黃芩苷4-20mg/g。
為保證凍干工藝的順利進(jìn)行，增加已干產(chǎn)品的復(fù)水效應(yīng)，藥液中我們?cè)谔砑恿颂砑觿┤缏然c、葡萄糖、山梨醇、甘露醇、PVP等，優(yōu)選為氯化鈉。添加劑的濃度在4％-25％之間，優(yōu)選為10％-15％，葡糖糖的濃度優(yōu)選為5％-10％。
本發(fā)明藥物粉針有效成分測(cè)定方法為綠原酸的測(cè)定方法為色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為10∶90的乙腈-0.4％磷酸溶液為流動(dòng)相檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備 取本品，研細(xì)，取約0.1g精密稱定，置具塞錐形瓶中，加50％的甲醇100ml，稱定重量，超聲30min，放冷，再稱定重量。用50％的甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過(guò)，取濾液適量加入棕色量瓶即得供試樣品溶液；測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；黃芩甙的測(cè)定方法色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 用十八烷基鍵合硅膠為填充材料以比例47∶53∶0.2的甲醇-水-磷酸為流動(dòng)相檢測(cè)波長(zhǎng)280nm對(duì)照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的黃芩苷適量，置50ml量瓶中，加甲醇溶解，搖勻，制成每1ml含60μg的溶液，即得；
供試品溶液的制備 取本品，研細(xì)，取約0.1g精密稱定，置50ml量瓶中，加50％甲醇50ml振搖，溶解，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液1ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)，濾過(guò)，即得；測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液10μl；本發(fā)明藥物粉針的制備方法是(1)綠原酸、異綠原酸的制備工藝取金銀花，4-20倍量40％-95％乙醇，回流提取1-5次，每次0.5-3小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至浸膏狀，放入真空干燥箱中干燥，干燥的金銀花提取物，溶于相當(dāng)于其重量1-20倍量體積的水中，水溶液用等量氯仿萃取1-5次，氯仿層棄去(回收氯仿)，水相再用0.5-3倍量異戊醇萃取1-5次，合并異戊醇層，減壓濃縮，真空干燥，取適量溶于40-90％乙醇溶液適量，拌入200克硅膠，水浴揮干(60℃)，作為柱層析分離樣品，稱取200-300目硅膠2000克，以氯仿-甲醇(40∶1-2∶1)為溶劑，濕法裝柱，干法上樣，用氯仿-甲醇(40∶1-2∶1)洗脫，等體積收集，每份500ml，梯度洗脫，每500ml加甲醇10ml，TLC追蹤檢查，合并相同部分，再經(jīng)小柱反復(fù)層析及結(jié)合重結(jié)晶技術(shù)，得到化合物綠原酸，化合物異綠原酸。
(2)黃芩苷、漢黃芩苷的制備工藝黃芩粗粉，加2-10倍量水，回流提取1-5次，每次0.5-3小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮，加入0.5-4mol/LHCl溶液適量調(diào)PH＝0.5～4.0，保溫0.5-3小時(shí)，放置8-24小時(shí)，濾過(guò)，沉淀加4-20倍量水，調(diào)PH＝5.0～10.0，再加入0.5-2倍乙醇，攪拌使溶解，濾過(guò)，濾液用HCl溶液調(diào)PH＝1.0～5.5，保溫0.5-3小時(shí)，放置8-24小時(shí)，濾過(guò)，沉淀用乙醇洗至PH＝5.0～10.0，真空干燥，取上述干燥物，拌以硅膠(200-300目)，硅膠濕法裝柱進(jìn)行層析分離，氯仿-甲醇(90∶1～1∶1)為洗脫劑，薄層檢查洗脫液，等量收集，每份500ml，合并相同部分后分為2大部分一(10∶1～90∶1)，B(10∶1～1∶1)，從一部分在氯仿-甲醇(10∶1)段的洗脫液中析出針狀結(jié)晶，進(jìn)一步重結(jié)晶得到化合物2；B部分經(jīng)過(guò)硅膠柱層析(200-300目)，葡聚糖凝膠(LH-20)柱層析分離得到化合物1；化合物1，黃芩苷；化合物2，漢黃芩苷，即得。
(3)該制劑的制備工藝為將投料量的綠原酸、黃芩苷等溶于適量的注射用水中，使?jié)舛葹榫G原酸0.1％-25mg/ml、黃芩苷1-40mg/ml，加等滲調(diào)節(jié)劑，控制藥液的PH值。用注射用水補(bǔ)至適量，調(diào)節(jié)藥液的PH值，使成品的PH值在4.0～9.0的范圍內(nèi)，質(zhì)檢，灌裝、冷凍干燥，包裝，即得。
本綠原酸、異綠原酸的制備工藝中所使用的藥材為任意含綠原酸、異綠原酸的藥材如金銀花、杜仲等，優(yōu)選為金銀花。
本發(fā)明還區(qū)別與以往制劑體現(xiàn)在以下方面①提高藥物有效成分的純度，有增加制劑穩(wěn)定性、減少毒性、減少服用量、便于制備現(xiàn)代化制劑等重要作用。在以往的制劑和工藝中金銀花多以綠原酸為指標(biāo)，而忽略了異綠原酸等其它成分，綠原酸的純度也較低多在20％以下，本發(fā)明金銀花以總有機(jī)酸和綠原酸為指標(biāo)，提高藥物療效的同時(shí)提高了總有機(jī)酸的純度。傳統(tǒng)工藝黃芩苷的純度達(dá)90％以上，卻忽略了漢黃芩苷等有效成分的作用，本發(fā)明以黃芩總黃酮和黃芩苷為指標(biāo)，提高了藥物療效。
②藥材提取物中各組分的組成與比例對(duì)制劑的穩(wěn)定性、療效等有密切聯(lián)系，我們通過(guò)研究分出金銀花提取物中綠原酸、異綠原酸等組分，并對(duì)各組分的含量比例作界定；從黃芩總黃酮中分出了黃芩苷、漢黃芩苷、等組分并通過(guò)指紋圖譜界定了各組分的含量。同時(shí)對(duì)藥物粉針中綠原酸、異綠原酸、黃芩苷、漢黃芩苷等組分做了含量界定，提高了藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保證了制劑的安全性、穩(wěn)定性和有效性。
③注射液適宜的PH值能減少藥液對(duì)肌體的不良反應(yīng)、增加粉針的穩(wěn)定性、加速藥物的吸收，所以注射液必須有適當(dāng)?shù)腜H值。黃芩苷等黃酮類成分易溶于堿液，酸性條件下易結(jié)晶析出；綠原酸等有機(jī)酸類在甲醇、乙醇、70％乙醇、丙酮中易溶，在乙酸乙酯、水中溶解。我們通過(guò)大量試驗(yàn)證明本發(fā)明pH值范圍在4.0～9.0之間當(dāng)pH值小于5.0時(shí)黃芩苷等黃酮類成分有結(jié)晶析出；綠原酸為咖啡酸奎尼酸酯，因而既能被酸也能被堿催化水解，當(dāng)pH值大于8.0時(shí)綠原酸等有機(jī)酸類成分很不穩(wěn)定，易發(fā)生顏色變化。
④由綠原酸、黃芩苷制成的很多制劑作為一種治療咽炎、氣管炎等上呼吸道感染的常用藥物為廣大醫(yī)務(wù)工作者和患者接受。我單位經(jīng)過(guò)仔細(xì)研究和長(zhǎng)期試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明還有治療肺炎、抗呼吸道病毒作用，療效確切，值得推廣應(yīng)用。綠原酸和異綠原酸對(duì)多種致病菌和病毒有較強(qiáng)的抑制和殺滅作用。綠原酸對(duì)急性咽喉炎癥及皮膚病有明顯療效，臨床上用于治療急性細(xì)菌性感染疾病及放、化療所致的白細(xì)胞減少癥，綠原酸還有降壓利膽作用。研究表明上述有機(jī)酸組合物對(duì)多種致病菌，如痢疾桿菌、傷寒桿菌、副傷寒桿菌、肺炎球菌等有一定抑制作用。黃芩苷體外對(duì)乙肝病毒(HBV)的三種抗原均有顯著的抑制作用；黃芩苷對(duì)正常體溫大鼠無(wú)致低溫作用，而對(duì)發(fā)熱大鼠有顯著的解熱作用，并呈一定量效關(guān)系；黃芩苷、漢黃芩苷等組合物對(duì)過(guò)氧化脂質(zhì)的生成具有明顯的抑制作用，對(duì)流感病毒PRs有一定抑制作用，對(duì)豚鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)及離體小腸、氣管對(duì)抗原所致的過(guò)敏性收縮反應(yīng)均有抑制作用，能抑制肥大細(xì)胞釋放組織胺，還能抑制環(huán)加氧酶和脂加氧酶的活性，阻斷前列腺素及白三烯的合成，從而發(fā)揮抗炎、抗過(guò)敏作用。
另外，本發(fā)明雖然比雙黃連粉針少了連翹苷，但療效并沒(méi)有下降，反而大多都有了提高。
本發(fā)明，療效好、毒副作用少。為表明本發(fā)明藥物的治療作用和毒副作用，我們做了大量的實(shí)驗(yàn)研究，下面實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。
本發(fā)明粉針對(duì)2，4-二硝基苯酚致大鼠發(fā)熱的解熱作用一、試驗(yàn)?zāi)康谋景l(fā)明粉針為北京福瑞康正醫(yī)藥技術(shù)研究所研制的7類中藥新藥，本試驗(yàn)旨在觀察本發(fā)明粉針對(duì)化學(xué)刺激物-2，4-二硝基苯酚所致大鼠發(fā)熱模型的解熱作用，以評(píng)價(jià)該藥的解熱療效。
二、試驗(yàn)材料1.受試藥物本發(fā)明粉針，由北京福瑞康正醫(yī)藥技術(shù)研究所提供。臨床擬用劑量1-2次/日，0.4-0.8g/次，臨床最大用量為X生藥/Mg)。
2.試劑氯化鈉注射劑，500ml/瓶，由北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)030415322；2，4-二硝基苯酚，規(guī)格25g，由中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供，批號(hào)860419。
3.動(dòng)物及飼料Wistar大鼠，102只，雄性，購(gòu)進(jìn)后進(jìn)行3天預(yù)飼養(yǎng)，用于試驗(yàn)時(shí)體重150～200g(體重差異小于30g)，購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK-(軍)2002-001。飼養(yǎng)條件群養(yǎng)5只/籠，標(biāo)準(zhǔn)顆粒鼠飼料喂養(yǎng)，自由飲水，室溫18～22℃，濕度50％～70％。實(shí)驗(yàn)設(shè)施合格證醫(yī)動(dòng)字第01-2049號(hào)。
4.器材DT-1TB數(shù)字式電子體溫計(jì)，購(gòu)自上海華辰醫(yī)用儀表有限公司。
三、試驗(yàn)方法(一)試驗(yàn)前的準(zhǔn)備1.供試用大鼠處于同一溫度的環(huán)境預(yù)飼養(yǎng)3天，實(shí)驗(yàn)室的溫度在17～25℃，在試驗(yàn)全部過(guò)程中，室溫變化不得大于3℃，避免噪音干擾。
2.試驗(yàn)期間，每次抓取大鼠的動(dòng)作要輕柔，體溫計(jì)插入大鼠肛門(mén)的深度和時(shí)間相同，每只大鼠固定體溫計(jì)，固定檢測(cè)人員；3.體溫預(yù)測(cè)試驗(yàn)前3日用電子體溫計(jì)測(cè)正常體溫，每日2次，連續(xù)3日；4.當(dāng)日使用的大鼠，正常體溫應(yīng)在36.6～38.3℃的范圍內(nèi)。每隔30分鐘測(cè)量體溫一次，測(cè)量三次的平均值作為大鼠的正常體溫。
5.2，4-二硝基苯酚溶液的配制精密稱取2，4-二硝基苯酚300mg，置于80ml左右生理鹽水中，滴加5mol/LNaOH溶液，不斷攪拌，待藥液澄明變?yōu)榱咙S色，再加入氯化鈉注射劑至100ml備用。
(二)試驗(yàn)方法1.試驗(yàn)藥物本發(fā)明高劑量組本發(fā)明中劑量組本發(fā)明低劑量組雙黃連對(duì)照組600mg/10ml/kg；模型組10ml生理鹽水/kg；正常對(duì)照組10ml生理鹽水/kg。
2.方法102只大鼠稱重后隨機(jī)分為本發(fā)明粉針低劑量組、中劑量組和高劑量組、模型組、雙黃連對(duì)照組和正常對(duì)照組6組。各組按上述給藥量靜脈給藥0.5小時(shí)后，每鼠于背部皮下注射化學(xué)致熱物——2，4-二硝基苯酚33mg/11ml/kg，正常動(dòng)物對(duì)照組以相同體積的生理鹽水來(lái)代替2，4-二硝基苯酚。致熱后每30分鐘測(cè)量體溫1次，連續(xù)測(cè)定3h。
四、試驗(yàn)結(jié)果在本試驗(yàn)條件下，皮下注射化學(xué)致熱物-2，4-二硝基苯酚，大鼠的體溫開(kāi)始升高，在1h時(shí)出現(xiàn)發(fā)熱高峰，3h仍未恢復(fù)至基礎(chǔ)體溫；本發(fā)明粉針各個(gè)比例及雙黃連非常明顯的降低2，4-二硝基苯酚致發(fā)熱大鼠的體溫(p＜0.001)(結(jié)果詳見(jiàn)表1)表1 本發(fā)明粉針對(duì)2，4-二硝基苯酚所致大鼠發(fā)熱的影響正常 給予2，4-二硝基苯酚后體溫升高值/℃組別 體重/kg體溫/℃ 30min 60min90min 120min150min 180min正常組 37.49±0.4037.49±0.400.13±0.290.03±0.290.00±0.300.07±0.360.01±0.39-0.03±0.33模型組 37.42±0.292.53±0.323.17±0.482.73±0.392.18±0.431.88±0.67 1.55±0.58高劑量組37.56±0.331.91±0.541.79±0.431.50±0.581.34±0.601.04±0.55 0.73±0.42中劑量組37.60±0.281.35±0.591.51±0.671.12±0.780.74±0.680.54±0.52 0.43±0.52低劑量組37.55±0.351.54±0.701.95±0.651.72±0.641.35±0.621.02±0.55 0.90±0.43雙黃連 37.59±0.321.22±0.551.93±0.781.64±0.561.30±0.530.82±0.62 0.55±0.38五、試驗(yàn)結(jié)論在本試驗(yàn)條件下，本發(fā)明粉針原料各比例均可非常明顯的降低2，4-二硝基苯酚所致發(fā)熱大鼠的體溫；中劑量組的效果最好，優(yōu)于雙黃連及其他比例組。
本發(fā)明粉針對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素致兔發(fā)熱的解熱作用一、試驗(yàn)?zāi)康谋景l(fā)明粉針由北京福瑞康正醫(yī)藥技術(shù)研究所提供，本試驗(yàn)旨在觀察本發(fā)明粉針對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素所致兔發(fā)熱的解熱作用，以評(píng)價(jià)該藥的解熱療效。
二、試驗(yàn)材料1.受試藥物本發(fā)明粉針，由北京福瑞康正醫(yī)藥技術(shù)研究所提供。臨床擬用劑量1-2次/日，0.4-0.8g/次，臨床最大用量為Xg生藥/Mml。
2.試劑氯化鈉注射劑，500ml/瓶，由北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)030415322；細(xì)菌內(nèi)毒素由中國(guó)藥品生物制品研究所提供，效價(jià)每支含9000EU，批號(hào)981。
3.動(dòng)物及飼料大耳白兔54只，雄性，由北京科宇動(dòng)物養(yǎng)殖中心提供，合格證號(hào)SCXK京2002-005，購(gòu)進(jìn)后進(jìn)行1周預(yù)飼養(yǎng)，用于試驗(yàn)時(shí)體重1.6～2.2kg。飼養(yǎng)條件金屬兔籠單籠飼養(yǎng)，自由飲水，給予標(biāo)準(zhǔn)顆粒兔飼料，室溫18～22℃，濕度50％～70％。實(shí)驗(yàn)設(shè)施合格證醫(yī)動(dòng)字第01-2049號(hào)。
4.器材DT-1TB數(shù)字式電子體溫計(jì)，購(gòu)自上海華辰醫(yī)用儀表有限公司。
三、試驗(yàn)方法(一)試驗(yàn)前的準(zhǔn)備1.供試用家兔處于同一溫度的環(huán)境預(yù)飼養(yǎng)1周，實(shí)驗(yàn)室的溫度在17～25℃，在試驗(yàn)全部過(guò)程中，室溫變化不得大于3℃，避免噪音干擾；2.試驗(yàn)期間，每次抓取兔的動(dòng)作要輕柔，體溫計(jì)插入各兔肛門(mén)的深度和時(shí)間相同，每只兔子固定體溫計(jì)，固定檢測(cè)人員；3.體溫預(yù)測(cè)試驗(yàn)前2日用電子體溫計(jì)測(cè)正常體溫，每日2次，連續(xù)2日；4.當(dāng)日使用的兔，正常體溫應(yīng)在38.0～39.6℃的范圍內(nèi)，且各兔間正常體溫之差不得超過(guò)1℃。每隔30分鐘測(cè)量體溫一次，測(cè)量?jī)纱危瑑纱误w溫之差不得超過(guò)0.2℃，以此二次體溫的平均值作為該兔的正常體溫。
(二)試驗(yàn)方法1.試驗(yàn)藥物本發(fā)明高劑量組本發(fā)明中劑量組本發(fā)明低劑量組
雙黃連對(duì)照組600mg/5ml/kg；模型組5ml生理鹽水/kg；正常對(duì)照組5ml生理鹽水/kg。
2.方法54只大耳白兔試驗(yàn)前每隔0.5h測(cè)量一次體溫，測(cè)量2次，2次體溫的平均值作為該兔的正常體溫。體溫合格的大耳白兔隨機(jī)分為本發(fā)明粉針高劑量組、中劑量組和低劑量組、雙黃連組、模型組和正常對(duì)照組6組，每組9只，各組耳緣靜脈分別給予溫浴至38℃的相對(duì)應(yīng)的藥液，給藥40min時(shí)耳緣靜脈注射內(nèi)毒素1200EU/ml/kg，給予內(nèi)毒素后1h、2h、3h、4h與5h各測(cè)量一次肛溫。
四、試驗(yàn)結(jié)果在本試驗(yàn)條件下，靜脈注射內(nèi)毒素后，兔體溫開(kāi)始升高，在1h與3h時(shí)分別出現(xiàn)發(fā)熱峰的雙峰熱。5h時(shí)仍未恢復(fù)至基礎(chǔ)體溫。給予內(nèi)毒素1h時(shí)，雙黃連、本發(fā)明粉針低劑量與高劑量對(duì)體溫的升高有明顯的降低作用，且降溫效果優(yōu)于中劑量組，中劑量組的體溫升高值有降低的趨勢(shì)。
給予內(nèi)毒素2h時(shí)，與模型組比較，雙黃連、本發(fā)明粉針三個(gè)給藥組對(duì)體溫的升高有降低作用；本發(fā)明粉針高劑量組動(dòng)物體溫比雙黃連組有降低的趨勢(shì)，二者的降溫效果優(yōu)于本發(fā)明粉針低劑量與中劑量。
給予內(nèi)毒素3h，與模型組比較，雙黃連、本發(fā)明粉針三個(gè)給藥組對(duì)體溫的升高有降低作用；本發(fā)明粉針高劑量的降溫效果優(yōu)于雙黃連、該藥低劑量與中劑量。
給予內(nèi)毒素4h，與模型組比較，雙黃連、本發(fā)明粉針三個(gè)給藥組對(duì)體溫的升高有降低作用；本發(fā)明高劑量的降溫效果優(yōu)于本發(fā)明粉針低劑量與中劑量，該組體溫升高值比雙黃連組有降低的趨勢(shì)。
給予內(nèi)毒素5h，與模型組比較，雙黃連、本發(fā)明粉針三個(gè)給藥組對(duì)體溫的升高有降低作用本發(fā)明粉針中劑量組的效果優(yōu)于低劑量組。(結(jié)果詳見(jiàn)表2)表2本發(fā)明粉針對(duì)內(nèi)毒素所致兔發(fā)熱的影響正常 給予內(nèi)毒素后體溫升高值/℃組別 體重/kg體溫/℃1h 2h 3h 4h 5h模型組 1.80±0.1539.0±0.37 1.44±0.35 1.64±0.24 1.87±0.15 1.44±0.27 1.12±0.53雙黃連 1.77±0.1338.8±0.25 1.09±0.26 0.77±0.10 1.31±0.18 0.84±0.12 0.53±0.23高劑量組1.74±0.1138.8±0.23 1.46±0.19 1.46±0.11 1.76±0.53 1.23±0.52 0.68±0.40中劑量組1.77±0.1138.9±0.32 1.32±0.19 1.15±0.15 1.53±0.20 0.96±0.35 0.29±0.31低劑量組1.77±0.1339.0±0.28 1.33±0.14 1.17±0.28 1.67±0.35 1.59±0.17 0.71±0.24
正常組 1.88±0.2638.8±0.31 -0.04±0.08 -0.03±0.11 -0.02±0.14 -0.08±0.13 -0.08±0.14五、試驗(yàn)結(jié)論在本試驗(yàn)條件下，本發(fā)明粉針各個(gè)組對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素所致兔發(fā)熱均有解熱作用中劑量組治療效果好。
本發(fā)明粉針對(duì)二甲苯致鼠耳腫脹的抑制作用一、試驗(yàn)?zāi)康谋景l(fā)明粉針為北京福瑞康正醫(yī)藥技術(shù)研究所研制新藥，本試驗(yàn)旨在觀察本發(fā)明粉針對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的抑制作用，以評(píng)價(jià)該藥的抗炎療效。
二、試驗(yàn)材料1.動(dòng)物及飼養(yǎng)條件KM小鼠，100只，雄性，健康二級(jí)，購(gòu)進(jìn)后進(jìn)行3天預(yù)飼養(yǎng)，用于試驗(yàn)時(shí)體重18～22g，購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK-(軍)2002-001。飼養(yǎng)條件群養(yǎng)5只/籠，標(biāo)準(zhǔn)顆粒鼠飼料喂養(yǎng)，自由飲水，室溫18～22℃，濕度50％～70％。實(shí)驗(yàn)設(shè)施合格證醫(yī)動(dòng)字第01-2049號(hào)。
2.儀器JA5003電子天平HANGPING3.藥品及試劑本發(fā)明粉針，由北京福瑞康正醫(yī)藥技術(shù)研究所提供，臨床擬用劑量1-2次/日，0.4-0.8g/次；氯化鈉注射劑，500ml/瓶，由北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司提供，批號(hào)030415322；雙黃連粉針劑，600mg/安瓿，由哈藥集團(tuán)中藥二廠生產(chǎn)，批號(hào)0306225；二甲苯。
三、試驗(yàn)方法1.試驗(yàn)藥物本發(fā)明高劑量組本發(fā)明中劑量組本發(fā)明低劑量組雙黃連對(duì)照組900mg/20ml/kg；模型組20ml生理鹽水/kg；2.試驗(yàn)方法雄性KM小鼠100只，按體重隨機(jī)分為本發(fā)明粉針低劑量組、中劑量組與高劑量組、模型組和雙黃連對(duì)照組5組，每組20只。按上述給藥劑量上、下午各靜脈給藥一次，次日早上給藥一次，共給藥3次。末次給藥30min時(shí)于右耳滴50ul二甲苯，左耳不做任何處理，15min后脫臼處死，沿耳廓剪下雙耳后用7mm直徑打孔器分別在同一部位打下左右兩圓耳片后，電子天平稱耳片濕重，每鼠用右耳片的重量減去左耳片的重量即為腫脹度，并計(jì)算腫脹抑制率。
抑制率＝(模型組腫脹度-用藥組腫脹度)/模型組腫脹度×100％四、試驗(yàn)結(jié)果本研究發(fā)現(xiàn)與模型組比較，雙黃連與本發(fā)明粉針各組可明顯抑制二甲苯引起的小鼠耳腫脹；結(jié)果見(jiàn)表3。
表3 本發(fā)明粉針對(duì)鼠耳腫脹的抑制作用(n＝20)體重/g 腫脹度/g腫脹抑制率％模型組 16.3±6.92 0雙黃連組 7.7±6.5552.8本發(fā)明低劑量組 8.9±4.2845.4本發(fā)明中劑量組 10.7±3.15 34.4本發(fā)明高劑量組 12.75.28 22.1五、試驗(yàn)結(jié)論在本試驗(yàn)條件下，本發(fā)明粉針對(duì)二甲苯引起的鼠耳腫脹有抑制作用，且抑制程度與劑量呈反比。
本發(fā)明粉針抗呼吸系統(tǒng)病毒作用一、試驗(yàn)?zāi)康谋景l(fā)明粉針為北京福瑞康正醫(yī)藥技術(shù)研究所研制新藥，本試驗(yàn)旨在觀察本發(fā)明粉針對(duì)各病毒株的抑制作用，以評(píng)價(jià)該藥的抗病毒療效。
二、試驗(yàn)材料1.動(dòng)物及飼養(yǎng)條件動(dòng)物昆明種小鼠，雌雄各半，18～20g，4周齡購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK-(軍)2002-001。飼養(yǎng)條件群養(yǎng)5只/籠，標(biāo)準(zhǔn)顆粒鼠飼料喂養(yǎng)，自由飲水，室溫18～22℃，濕度50％～70％。實(shí)驗(yàn)設(shè)施合格證醫(yī)動(dòng)字第01-2049號(hào)。
2.試劑病毒呼吸道合胞病毒(RSV)Long株，源自美國(guó)ATCC菌種庫(kù)，批號(hào)990521；腺病毒Ad3V，中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒學(xué)研究所保存。甲1型流感病毒(A1V)，鼠肺病毒液由中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒學(xué)研究所保存。雙黃連粉針劑，600mg/安瓿，由哈藥集團(tuán)中藥二廠生產(chǎn)，批號(hào)0306225培養(yǎng)基IMDM(美國(guó)GIBC產(chǎn)品)；噻唑藍(lán)(MTT)購(gòu)自華美公司。Eagle′s維持液，由中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒學(xué)研究所提供。
3.受試藥物本發(fā)明粉針，由北京福瑞康正醫(yī)藥技術(shù)研究所。
4.儀器儀器酶標(biāo)測(cè)定儀、LBK紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)均由美國(guó)產(chǎn)，LC-9A輸液泵，低溫離心機(jī)，Olympus相差顯微鏡均為日本島津公司產(chǎn)品。
三、試驗(yàn)方法1.細(xì)胞的篩選與制備所用3種病毒分別接種于VERO、HEP2細(xì)胞以測(cè)定敏感性，細(xì)胞按常規(guī)方法傳代。同時(shí)制成2×10-5/mL細(xì)胞懸液，每孔0.1mL，24h后形成單層細(xì)胞備用。
2.初篩與分組實(shí)驗(yàn)形成單層細(xì)胞孔棄去培養(yǎng)液，加入對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性濃度的藥物作用24h，吸出藥液加入病毒液，按一般病毒吸附的時(shí)間，均采用37℃吸附1h吸出，加入含藥的維持液，置37℃、5％CO2恒溫箱培養(yǎng)48～96h，待病毒對(duì)照孔病變達(dá)+++～++++，細(xì)胞對(duì)照正常時(shí)測(cè)結(jié)果。將初篩有意義的病毒分4組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，探討藥物的具體作用環(huán)節(jié)。高劑量感染前24h給藥，吸出藥液，用Hank′s液洗3遍，加入病毒液。中劑量組感染后給藥，先加液置37℃吸附1h洗去病毒加含藥維持液。低劑量組藥液與病毒同時(shí)加入細(xì)胞層。IV組藥液與病毒混合置37℃、2h后加入細(xì)胞層。以上均設(shè)正常對(duì)照及病毒對(duì)照。
3.感染動(dòng)物模型的建立及給藥方案病毒性肺炎模型建立[1]。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為病毒感染模型組、正常對(duì)照組、抗病毒不同濃度給藥組，陽(yáng)性對(duì)照藥比較組，每組10只，均在相同條件下飼養(yǎng)，均為靜脈給藥，劑量如下本發(fā)明粉針及陽(yáng)性對(duì)照藥雙黃連粉針劑均為320，160，80，40mg/kg。
四、結(jié)果利用光鏡檢查細(xì)胞病變(CPE)，結(jié)果表明本發(fā)明粉針可以不同程度地抑制上述病毒對(duì)組織細(xì)胞的CPE，見(jiàn)表4。
表4本發(fā)明粉針對(duì)病毒引起細(xì)胞病變抑制作用病毒細(xì)胞對(duì)照 病毒對(duì)照 試驗(yàn)RSV- ++++ -AD3V - ++++ -A1V - ++++ -分組結(jié)果在鏡下觀察CPE基礎(chǔ)上，用MTT染色細(xì)胞，測(cè)定吸光度，以便進(jìn)一步客觀地反映加藥與不加藥之差別。高劑量實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖怯^察藥物能否進(jìn)入細(xì)胞或吸附于細(xì)胞表面，以阻止病毒的吸附與穿入。結(jié)果表明，本發(fā)明粉針此法對(duì)RSV，Ad3V，A1V3種病毒有意義(P＜0.05)。中劑量組實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖怯^察藥物能否對(duì)已進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的病毒起作用，抑制其生物合成及成熟釋放。結(jié)果表明，本發(fā)明粉針此法對(duì)3種病毒有意義(P＜0.05)。III、IV組為藥物與病毒在不同條件下作用，觀察藥物對(duì)病毒直接滅活作用，結(jié)果表明，本發(fā)明粉針對(duì)3種病毒均有作用。說(shuō)明本發(fā)明粉針無(wú)論是藥物與病毒同時(shí)加入細(xì)胞層或是藥物與病毒先作用2h然后加入細(xì)胞層，均具有抗病毒效應(yīng)。對(duì)細(xì)胞的保護(hù)率最高可達(dá)96％，見(jiàn)表5。
表5本發(fā)明粉針?biāo)幬飳?duì)病毒直接滅活作用NO. RSV AD3V A1V PI91.6 84.3 94.1 ＜0.05II 90.1 84.7 94.6 ＜0.05III 88.9 79.2 80.5 ＜0.05IV 66.4 80.2 73.4 ＜0.05組織病理學(xué)檢查本發(fā)明粉針對(duì)FM1感染所致的病毒性炎有明顯的保護(hù)作用，治療組鼠肺組織結(jié)構(gòu)基正常，病毒對(duì)照組鼠肺部有大量病變，藥物對(duì)組織細(xì)胞保護(hù)率用下式計(jì)算。保護(hù)率(％)＝加藥孔A值-病毒對(duì)照孔A值/細(xì)胞對(duì)照孔A值×100％。見(jiàn)表6。
表6本發(fā)明粉針對(duì)FM1感染所致的病毒性肺炎的保護(hù)作用NO 比例Index 保護(hù)率(％)(x±s)病毒對(duì)照組 -1.785±0.312 -正常對(duì)照組 -0.910±0.103 -1.401±0.171 30.73API 1.232±0.069 41.421.199±0.062 48.68五、試驗(yàn)結(jié)論在本試驗(yàn)條件下，本發(fā)明粉針的抗病毒作用不僅在細(xì)胞水平上得以證實(shí)，即能顯著的抑制、延緩細(xì)胞病變出現(xiàn)，也表現(xiàn)在整體水平上，即可有效抑制流感病毒等呼吸道病毒性肺炎的發(fā)生與發(fā)展，有著較好的療效。關(guān)于本發(fā)明粉針抗病毒的作用機(jī)制，從分組實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，作用是多途徑的，不僅有直接滅活病毒的作用，而且對(duì)吸附于細(xì)胞表面和進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的病毒也有抑制作用。
本發(fā)明粉針熱原檢查一、試驗(yàn)?zāi)康谋景l(fā)明粉針由北京福瑞康正醫(yī)藥技術(shù)研究所提供，將一定劑量的藥液靜脈注入大耳白兔體內(nèi)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)，觀察兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。
二、試驗(yàn)材料(一).受試藥物本發(fā)明粉針，由北京福瑞康正醫(yī)藥技術(shù)研究所提供。臨床擬用劑量1-2次/日，0.4-0.8g/次，臨床最大用量為Xg生藥/Mml/60kg體重。
(二)儀器與試劑氯化鈉注射劑，500ml/瓶，由北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)030415322；DT-1TB電子體溫計(jì)，上海華辰醫(yī)用儀表有限公司生產(chǎn)。
(三)動(dòng)物及飼料大耳白兔，雄性，由北京科宇動(dòng)物養(yǎng)殖中心提供，合格證號(hào)SCXK京2002-005，購(gòu)進(jìn)后進(jìn)行一周預(yù)飼養(yǎng)，用于試驗(yàn)時(shí)體重2.3～2.4kg。飼養(yǎng)條件用金屬兔籠單籠飼養(yǎng)，自由飲水，給予顆粒兔飼料，濕度50％～70％，溫度18～22℃。實(shí)驗(yàn)設(shè)施合格證醫(yī)動(dòng)字第01-2049號(hào)。
三、試驗(yàn)方法(一)試驗(yàn)前的準(zhǔn)備1.熱原檢查前供試用兔處于同一溫度的環(huán)境預(yù)飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)室的溫度在17～25℃，在試驗(yàn)全部過(guò)程中，室溫變化不得大于3℃，避免噪音干擾；2.兔在試驗(yàn)前禁食不禁水，操作要輕柔；3.體溫計(jì)插入各兔肛門(mén)的深度和時(shí)間相同；4.每隔30分鐘測(cè)量體溫一次，測(cè)量二次，二次體溫之差不得超過(guò)0.2℃，以此二次體溫的平均值作為該兔的正常體溫；5.當(dāng)日使用的兔，正常體溫應(yīng)在38.0～39.6℃的范圍內(nèi)，且各兔間正常體溫之差不得超過(guò)1℃。
(二)動(dòng)物的挑選挑選的條件與檢查供試品時(shí)相同，僅不注射藥液，每隔30分鐘測(cè)量體溫一次，測(cè)量四次，四次體溫之差不得超過(guò)0.4℃。
(三)檢查法取適用的大耳白兔3只，測(cè)定其正常體溫后15分鐘以內(nèi)，以無(wú)菌操作法自耳緣靜脈緩緩注入溫?zé)嶂?8℃的本發(fā)明粉針，然后每隔30min按前法測(cè)量其體溫一次，共測(cè)六次，以六次體溫中最高的一次減去正常體溫，即為該兔體溫升高的度數(shù)(℃)，如果給藥后體溫低于正常體溫，則體溫升高度數(shù)以“0”計(jì)。
四、結(jié)果判斷(一)判斷復(fù)試
1.如3只兔中有1只體溫升高0.6℃或0.6℃以上；2.3只兔體溫升高均低于0.6℃，但升高的總數(shù)達(dá)1.4℃或1.4℃以上出現(xiàn)上述情況之一應(yīng)另取5只兔復(fù)試，檢查方法同上。
(二)熱原檢查合格1.初試的3只兔中，體溫升高均低于0.6℃，并且3只兔體溫升高總數(shù)低于1.4℃；2.復(fù)試的5只兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的兔數(shù)僅有1只，并且初試、復(fù)試合并8只兔的體溫升高總數(shù)為3.5℃或3.5℃以下。
符合上述情況之一均認(rèn)為供試品的熱原檢查符合規(guī)定。
(三)熱原檢查不合格1.在初試的3只兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的兔數(shù)超過(guò)1只；2.在復(fù)試的5只兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的兔數(shù)超過(guò)1只；3.在初試和復(fù)試合并8只大耳白兔的體溫升高總數(shù)超過(guò)3.5℃。
出現(xiàn)上述情況之一均認(rèn)為供試品的熱原檢查不符合規(guī)定。
五、試驗(yàn)結(jié)果靜脈給予所試本發(fā)明粉針，2只家兔體溫不升高，1只體溫升高0.1℃低于0.6℃，3只體溫升高總數(shù)(0.1℃)低于1.4℃，結(jié)果見(jiàn)表7。
表7本發(fā)明粉針熱原檢查結(jié)果體重 給藥量 正常體溫給藥后最高體溫升高號(hào)數(shù)(kg)(mg生藥/kg) (℃) 體溫(℃) (℃)1 2.4 X 38.5 38.6 0.13 2.3 X 38.9 38.8 05 2.4 X 38.9 38.8 0六、試驗(yàn)結(jié)論在本試驗(yàn)條件下，本發(fā)明粉針?biāo)瑹嵩南薅确弦?guī)定。
本發(fā)明粉針異常毒性檢查一、試驗(yàn)?zāi)康膶⒁欢▌┝康谋景l(fā)明藥液靜脈注入小鼠體內(nèi)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)，觀察小鼠的死亡情況，以判定供試品的異常毒性是否符合規(guī)定。
二、試驗(yàn)材料(一)受試藥物本發(fā)明粉針，由北京福瑞康正醫(yī)藥技術(shù)研究所提供。臨床擬用劑量1-2次/日，0.2-0.4g/次，臨床最大用量為Xg生藥/Mml/60kg體重。
(二)動(dòng)物及飼料5只KM小鼠，雄性，健康二級(jí)，購(gòu)進(jìn)后進(jìn)行3天預(yù)飼養(yǎng)，用于試驗(yàn)時(shí)體重17～20g，購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK-(軍)2002-001。飼養(yǎng)條件5只/籠群養(yǎng)，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由飲水，室溫18～25℃，濕度50％～70％，光照明暗各12小時(shí)，實(shí)驗(yàn)設(shè)施合格證醫(yī)動(dòng)字第01-2049號(hào)。全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒鼠飼料，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心研制。
三、試驗(yàn)方法小鼠5只，稱重后由靜脈注射給藥0.5ml/只，正常飼養(yǎng)，48小時(shí)內(nèi)不得死亡，稱重。
四、結(jié)果判斷(一)判斷復(fù)試5只小鼠中有死亡情況時(shí)，應(yīng)另取體重18～19g的小鼠10只復(fù)試，檢查方法同上。
(二)異常毒性檢查合格1.初試的5只小鼠在48小時(shí)內(nèi)無(wú)死亡；2.復(fù)試的10只小鼠在48小時(shí)內(nèi)無(wú)死亡。
符合上述情況之一均認(rèn)為供試品的異常毒性檢查符合規(guī)定。
(三)異常毒性檢查不合格初試的5只小鼠在48小時(shí)內(nèi)有死亡；復(fù)試的10只小鼠在48小時(shí)內(nèi)有死亡。
符合上述情況認(rèn)為供試品的異常毒性檢查不符合規(guī)定。
五、試驗(yàn)結(jié)果全部小鼠在給藥后48小時(shí)內(nèi)無(wú)死亡。
六、試驗(yàn)結(jié)論在本試驗(yàn)條件下，本發(fā)明粉針異常毒性符合規(guī)定。
本發(fā)明粉針小鼠急性毒性試驗(yàn)一.試驗(yàn)?zāi)康谋景l(fā)明粉針的毒性較低，測(cè)不出來(lái)半數(shù)致死量(LD50)，觀察單次靜脈和灌胃給予小鼠本發(fā)明粉針?biāo)a(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)和死亡情況，得出iv和ig給藥的最大耐受量，對(duì)其安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)，為臨床提供參考。
二.材料(一)受試物1.受試藥物本發(fā)明粉針，由北京福瑞康正醫(yī)藥技術(shù)研究所提供。臨床擬用劑量1-2次/日，0.4-0.8g/次，臨床最大用量為Dg生藥，即Fg生藥/60kg體重。
2.試劑蒸餾水，購(gòu)自中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院。
(二)動(dòng)物60只KM小鼠，雌雄各半，健康二級(jí)，購(gòu)進(jìn)后進(jìn)行3天預(yù)飼養(yǎng)，用于試驗(yàn)時(shí)體重18～22g，購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK-(軍)2002-001。飼養(yǎng)條件5只/籠群養(yǎng)，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由飲水，室溫18～25℃，濕度50％～70％，光照明暗各12小時(shí)，實(shí)驗(yàn)設(shè)施合格證醫(yī)動(dòng)字第01-2049號(hào)。全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒鼠飼料，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心研制。
三.試驗(yàn)方法(一)給藥量的確定所用本發(fā)明粉針的濃度Ag生藥/ml，根據(jù)小鼠單次靜脈(iv)給藥最大容量為aml/bg，確定小鼠iv的劑量為vg生藥/kg；小鼠單次灌胃(ig)給藥最大容量為dml/10g，確定小鼠ig的劑量為fg生藥/kg。
(二)給藥方法1.給藥途徑iv與臨床靜脈給藥的途徑是一致的。
2.給藥容量小鼠iv vml/10g；ig dml/10g。
3.供試藥藥物由本所制劑室提供。
(三)試驗(yàn)依據(jù)根據(jù)中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥政局《中藥新藥研究指南》和《新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則匯編》中的“急性毒性試驗(yàn)”的方法要求及本科室制定的“藥理試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程”(SOP)進(jìn)行。
(四)方法KM小鼠60只，按照體重隨機(jī)分為本發(fā)明iv組、本發(fā)明ig組與對(duì)照組三組，每組20只，雌雄各半，給藥前禁食不禁水12小時(shí)，本發(fā)明iv組小鼠按照0.25ml/10g的給藥容量靜脈給藥；本發(fā)明ig組小鼠按照0.4ml/10g的給藥容量灌胃給藥。給藥后即刻觀察動(dòng)物的反應(yīng)，包括動(dòng)物的形態(tài)、行為活動(dòng)、精神狀態(tài)、食欲、大小便及其顏色、皮毛、鼻、眼、口有無(wú)異常分泌物以及動(dòng)物死亡情況，死亡的動(dòng)物及時(shí)尸檢，若有肉眼可見(jiàn)的病變則進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。給藥第1天每1小時(shí)觀察一次，以后每天觀察一次，連續(xù)觀察7天，記錄動(dòng)物毒性反應(yīng)及死亡情況。稱量小鼠在試驗(yàn)前、試驗(yàn)后第三天及第七天的體重。從體重和動(dòng)物的反應(yīng)情況綜合評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果，得到本發(fā)明粉針對(duì)小鼠單次靜脈與灌胃給藥的最大耐受量。若出現(xiàn)死亡，則進(jìn)行急性半數(shù)致死量(LD50)的測(cè)定。
四.試驗(yàn)結(jié)果(一)iv的MTDKM小鼠單次靜脈給予所試本發(fā)明粉針17.075g生藥/kg，相當(dāng)于人臨床最大日用量的187.5倍，給藥后即刻動(dòng)物的翻正反射消失，心跳加快，3min內(nèi)翻正反射恢復(fù)，心跳恢復(fù)正常，動(dòng)物無(wú)異常表現(xiàn)，整個(gè)試驗(yàn)期間未出現(xiàn)任何異常，體重隨試驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，與同期對(duì)照組無(wú)差異(p＞0.05)，試驗(yàn)期間未見(jiàn)動(dòng)物死亡。觀察期結(jié)束時(shí)處死小鼠，尸檢無(wú)肉眼可見(jiàn)的變化。
(二)ig的MTDKM小鼠單次灌胃給予所試本發(fā)明粉針27.320g生藥/kg，相當(dāng)于人臨床最大日用量的300倍，給藥后即刻及整個(gè)試驗(yàn)期間未出現(xiàn)任何異常，體重隨試驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，與同期對(duì)照組無(wú)差異(p＞0.05)，試驗(yàn)期間未見(jiàn)動(dòng)物死亡。觀察期結(jié)束時(shí)處死小鼠，尸檢無(wú)肉眼可見(jiàn)的變化。
五.試驗(yàn)結(jié)論在本試驗(yàn)條件下，本發(fā)明粉針給小鼠單次靜脈給藥的最大耐受量＞Ag生藥/kg，相當(dāng)于人臨床最大日用量的187.5倍；單次灌胃的最大耐受量＞Sg生藥/kg，相當(dāng)于人臨床最大日用量的300倍，本試驗(yàn)提示該藥的臨床用量是一個(gè)相當(dāng)安全的劑量。
本發(fā)明粉針血管刺激性試驗(yàn)一、試驗(yàn)?zāi)康谋驹囼?yàn)旨在觀察本品每日連續(xù)耳緣靜脈給藥，對(duì)兔耳緣靜脈有無(wú)血管刺激作用，為臨床用藥安全提供參考。
二、試驗(yàn)材料1.受試藥物本發(fā)明粉針，由北京福瑞康正醫(yī)藥技術(shù)研究所提供。臨床擬用劑量1-2次/日，0.4-0.8g/次。
2.試劑氯化鈉注射劑，500ml/瓶，由北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)030415322。
3.動(dòng)物及飼料大耳白兔，雄性，由北京科宇動(dòng)物養(yǎng)殖中心提供，合格證號(hào)SCXK京2002-005，購(gòu)進(jìn)后進(jìn)行1周預(yù)飼養(yǎng)，用于試驗(yàn)時(shí)體重2.2～2.6kg。飼養(yǎng)條件金屬兔籠單籠飼養(yǎng)，自由飲水，給予標(biāo)準(zhǔn)顆粒兔飼料，室溫18～22℃，濕度50％～70％。實(shí)驗(yàn)設(shè)施合格證醫(yī)動(dòng)字第01-2049號(hào)。
三、試驗(yàn)方法
1.取健康、耳緣無(wú)傷大耳白兔6只，隨機(jī)分為本發(fā)明粉針組和氯化鈉注射劑對(duì)照組兩組，每組3只。給藥組以無(wú)菌操作法耳緣靜脈注射給藥91.07mg生藥/0.67ml/kg，對(duì)照組給予同體積氯化鈉注射劑，控制給藥速度3ml/min，分別于每日9:00am各組兔左側(cè)耳緣靜脈注射給藥一次，連續(xù)給藥3d。
2.取健康、耳緣無(wú)傷大耳白兔6只，隨機(jī)分為本發(fā)明粉針組和氯化鈉注射劑對(duì)照組兩組，每組3只。給藥組以無(wú)菌操作法耳緣靜脈注射給藥mg/0.67ml/kg，對(duì)照組給予同體積氯化鈉注射劑，控制給藥速度3ml/min，分別于每日9:00am各組兔左側(cè)耳緣靜脈注射給藥一次，連續(xù)給藥7d。
四、觀察指標(biāo)1.每日給藥后，肉眼觀察給藥局部的靜脈血管及周圍組織的紅腫情況。
2.末次給藥后24h將動(dòng)物敲擊頭部處死，分別于注射部位近心端1.5cm至3cm處剪取耳緣靜脈，用10％福爾馬林溶液固定，常規(guī)病理切片HE染色，觀察有無(wú)組織變性或壞死、血栓形成及內(nèi)皮損傷等刺激反應(yīng)。
五、試驗(yàn)結(jié)果本發(fā)明粉針耳緣靜脈注射給藥91.07mg生藥/0.67ml/kg，連續(xù)3d和7d，對(duì)兔耳局部血管具有擴(kuò)張、出血作用，及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，未見(jiàn)血管壁變性、壞死損傷和血栓形成，給藥7天比給藥3天血管變化略重?？傮w上本藥物血管刺激病變屬于可逆性、輕度血管病變。
六、試驗(yàn)結(jié)論該試驗(yàn)條件下，本發(fā)明粉針不產(chǎn)生血管壁的變性、壞死及血栓形成。
本發(fā)明粉針體外溶血試驗(yàn)一、試驗(yàn)?zāi)康谋驹囼?yàn)旨在觀察本發(fā)明粉針對(duì)兔紅細(xì)胞有無(wú)溶血和致凝集作用。
二、試驗(yàn)材料1.受試藥物同前2.試劑氯化鈉注射劑，500ml/瓶，由北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)0304153223.儀器800B型臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)；SY21-Ni電熱恒溫水浴鍋，北京市長(zhǎng)風(fēng)儀器儀表公司生產(chǎn)。
三、試驗(yàn)方法
1.2％紅細(xì)胞混懸液的制備兔心臟取血20ml，放入盛有玻璃珠的三角瓶中輕輕振搖10分鐘除去纖維蛋白，使成脫纖血液，加10倍量的生理鹽水搖勻，離心3min(轉(zhuǎn)速2000rpm/min)，除去上清液，沉淀的紅細(xì)胞再用生理鹽水洗滌至上清液無(wú)色透明為止。將所得紅細(xì)胞用生理鹽水配成2％的混懸液備用。
2.試驗(yàn)方法取試管7只，按表8依次加入2％紅細(xì)胞混懸液和生理鹽水，混勻后于37℃溫浴半小時(shí)，然后按表8加入不同量的藥液(第6管不加受試品，作為空白對(duì)照組；第7管不加受試品，用蒸餾水代替生理鹽水，作為陽(yáng)性對(duì)照組)，將各管輕輕搖勻后置37℃水浴保溫4h。開(kāi)始每隔15分鐘觀察一次，1小時(shí)后，每隔1小時(shí)觀察一次，如表9所示觀察溶血與凝集現(xiàn)象。
表8本發(fā)明粉針體外溶血試驗(yàn)加樣表管號(hào) 1 2 3 4 5 6 72％紅細(xì)胞懸液(ml) 2.5 2.52.52.52.52.52.5生理鹽水(ml)2.0 2.12.22.32.42.5-蒸餾水(ml) - - - - - - 2.5受試品(ml) 0.5 0.40.30.20.1- -表9紅細(xì)胞溶血、凝集判斷標(biāo)準(zhǔn)全溶血溶液澄明紅色，管底無(wú)細(xì)胞殘留；部分溶血 溶液澄明紅色或棕色，管底有少量紅細(xì)胞殘留；無(wú)溶血紅細(xì)胞全部下沉，上層液體無(wú)色澄明；凝集 紅細(xì)胞聚集成塊，振搖后不能分散；四、結(jié)果判斷1.以0.3ml粉針(第3管)，在2小時(shí)內(nèi)不產(chǎn)生溶血作用者認(rèn)為可供注射用。
2.如有紅細(xì)胞凝聚的現(xiàn)象，可按下法進(jìn)一步判定是真凝聚還是假凝聚。若凝聚物在試管振蕩后又能均勻分散，或?qū)⒕奂锓旁谳d玻片上，在蓋玻片邊緣滴加2滴生理鹽水，顯微鏡下觀察，凝聚紅細(xì)胞能被沖散者為假凝聚，供試品可供臨床應(yīng)用。若凝聚物不被搖散或在玻片上不被沖散者為真凝聚，供試品不宜供臨床使用。
五、試驗(yàn)結(jié)果1-6管4h內(nèi)沒(méi)有出現(xiàn)溶血現(xiàn)象；1-4管在不同的時(shí)間點(diǎn)出現(xiàn)凝聚現(xiàn)象，振搖后紅細(xì)胞均勻分散，屬于假凝聚；7管完全溶血。(結(jié)果見(jiàn)表10)表10本發(fā)明粉針體外溶血試驗(yàn)結(jié)果時(shí)間 1 2 3 4 5 6 7
15min- - - - - - +30min- - - - - - +45min- - - - - - +1h * * - - - - +2h ** ** ** ******- +3h ***************- +4h ***************- +備注“-”表示無(wú)溶血；“+”表示完全溶血；“±”表示部分溶血；“*”表示假凝聚六、試驗(yàn)結(jié)論該試驗(yàn)條件下，所試本發(fā)明粉針對(duì)兔紅細(xì)胞無(wú)溶血作用，有不同程度的假凝聚現(xiàn)象發(fā)生。
本發(fā)明粉針全身過(guò)敏試驗(yàn)一、試驗(yàn)?zāi)康谋景l(fā)明粉針為北京福瑞康正醫(yī)藥技術(shù)研究所研制的中藥新藥，本試驗(yàn)旨在考察本發(fā)明粉針有無(wú)全身致敏作用，為臨床安全用藥提供參考。
二、試驗(yàn)材料1.受試藥物同前2.試劑氯化鈉注射劑，500ml/瓶，由北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)030415322；新鮮卵白蛋白，以生理鹽水配制成10％濃度供試驗(yàn)用。
3.動(dòng)物白色豚鼠，雌雄各半，由北京科宇動(dòng)物養(yǎng)殖中心提供，合格證號(hào)SCXK京2002-005，購(gòu)進(jìn)后進(jìn)行一周預(yù)飼養(yǎng)，用于試驗(yàn)時(shí)體重270～350g。飼養(yǎng)條件群養(yǎng)9只/籠，顆粒豚鼠飼料喂養(yǎng)，自由攝水，室溫20～22℃，濕度50％～70％。實(shí)驗(yàn)設(shè)施合格證醫(yī)動(dòng)字第01-2049號(hào)。
四、試驗(yàn)方法1.分組健康豚鼠18只，按體重隨機(jī)分為本發(fā)明粉針組、卵白蛋白陽(yáng)性對(duì)照組及氯化鈉注射劑陰性對(duì)照組三組，每組6只，雌雄各半。
2.受試動(dòng)物致敏各組動(dòng)物按無(wú)菌操作隔日分別腹腔注射給予本發(fā)明粉針、10％卵白蛋白和氯化鈉注射劑0.5ml/只，共致敏三次。
3.攻擊將各組動(dòng)物分為2批，每批3只，一批于首次致敏后14d分別靜脈注射相應(yīng)藥液1ml/只攻擊；另一批于首次致敏后21d靜脈注射相應(yīng)藥液1ml/只攻擊。
五、觀察指標(biāo)于攻擊給藥后15min內(nèi)，觀察動(dòng)物有無(wú)咳嗽、抓鼻、豎毛、呼吸困難、痙攣、休克及死亡等情況，并按表11所列標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分，評(píng)分≥2時(shí)，判定為過(guò)敏試驗(yàn)陽(yáng)性。(結(jié)果見(jiàn)表11)表11 全身過(guò)敏性反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分 體征0 無(wú)明顯反應(yīng)1 輕微抓鼻、顫抖或豎毛2 出現(xiàn)咳嗽，多次抓鼻、顫抖或豎毛3 多次或連續(xù)咳嗽，伴有呼吸困難或痙攣、抽搐4 痙攣、抽搐、大小便失禁、休克死亡六、試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性組6只豚鼠15min內(nèi)出現(xiàn)痙攣、抽搐、大小便失禁、最后死亡，評(píng)分4分，為過(guò)敏反應(yīng)陽(yáng)性；陰性組和本發(fā)明粉針組6只豚鼠無(wú)明顯反應(yīng)，評(píng)分0分，為過(guò)敏反應(yīng)陰性。(結(jié)果見(jiàn)表12)表12本發(fā)明粉針全身過(guò)敏試驗(yàn)結(jié)果粉針組 陽(yáng)性組 陰性組動(dòng)物號(hào) 性別評(píng)分動(dòng)物號(hào) 性別評(píng)分動(dòng)物號(hào) 性別 評(píng)分4 ♀ 0 7 ♀ 41 ♀ 05 ♀ 0 8 ♀ 42 ♀ 06 ♀ 0 9 ♀ 43 ♀ 04 ♂ 0 7 ♂ 41 ♂ 05 ♂ 0 8 ♂ 42 ♂ 06 ♂ 0 9 ♂ 43 ♂ 0七、試驗(yàn)結(jié)論該試驗(yàn)條件下，本發(fā)明粉針全身過(guò)敏反應(yīng)陰性，無(wú)全身致敏作用。這些實(shí)施例僅為本發(fā)明的優(yōu)選方式，并不限制本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1綠原酸 0.1g黃芩苷 40g氯化鈉 55g稱氯化鈉，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?。將投料量綠原酸、黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的氯化鈉，攪拌溶解，加注射用水至約550ml。使用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)。加入0.2％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至5.0。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例2綠原酸 25g黃芩苷 1.6g氯化鈉 67g取氯化鈉，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?。將投料量綠原酸、黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的氯化鈉，攪拌溶解，加注射用水至約500ml。使用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)。加入1％藥液量的活性炭，升溫至80℃，攪拌40分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至8.0。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例3綠原酸 25g黃芩苷 40g氯化鈉 35g取氫氧化鈉，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?。將投料量綠原酸、黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的氯化鈉，攪拌溶解，加注射用水至900ml。使用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)。加入1％藥液量的活性炭，升溫至75℃，攪拌20分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至7.0。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例4綠原酸 5.0g黃芩苷 30g氯化鈉 63g取氫氧化鈉，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?。將投料量綠原酸、黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的氯化鈉，攪拌溶解，加注射用水至250ml。使用1mol/L鹽酸及1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值，使藥液的pH值在6.0～6.8的范圍內(nèi)。加入1％藥液量的活性炭，升溫至75℃，攪拌20分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至7.0。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例5綠原酸 17.5g黃芩苷 6g葡萄糖 78g取氫氧化鈉適量，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙狻⑼读狭烤G原酸、黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的葡萄糖，攪拌溶解，加注射用水至約780ml。加入1％藥液量的活性炭，升溫至60℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至5.5。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例6綠原酸10.0g黃芩苷23.0g葡萄糖67g取氫氧化鈉適量，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?。將投料量綠原酸、黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的葡萄糖，攪拌溶解，加注射用水至約1340ml。加入1％藥液量的活性炭，升溫至80℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.5。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例7綠原酸 14g黃芩苷 17g葡萄糖 69g取氫氧化鈉適量，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?。將投料量綠原酸、黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的葡萄糖，攪拌溶解，加注射用水至約280ml。加入1％藥液量的活性炭，升溫至85℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至7.5。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例8
綠原酸 5.0g黃芩苷 30.0g異綠原酸 8.0g漢黃芩苷 4.0g葡萄糖 50.5g取氫氧化鈉適量，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?。將投料量綠原酸、黃芩苷、異綠原酸、漢黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的葡萄糖，攪拌溶解，加注射用水至約1265ml。加入1％藥液量的活性炭，升溫至80℃，攪拌40分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至8.5。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例9綠原酸 17.5g黃芩苷 6g異綠原酸8g漢黃芩苷4g山梨醇 60.5g稱取氫氧化鈉適量，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?。將投料量綠原酸、黃芩苷、異綠原酸、漢黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的山梨醇，攪拌溶解，加注射用水至約605ml。加入1％藥液量的活性炭，升溫至80℃，攪拌50分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至9.0。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例10綠原酸 17.5g黃芩苷 30g異綠原酸0.3g漢黃芩苷4.0g山梨醇 58.2g稱取氫氧化鈉適量，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?。將投料量綠原酸、黃芩苷、異綠原酸、漢黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的山梨醇，攪拌溶解，加注射用水至約340ml。加入1％藥液量的活性炭，升溫至80℃，攪拌50分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.4。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例11綠原酸17.5g黃芩苷30.0g異綠原酸 8.0g漢黃芩苷 0.2g山梨醇44.3g稱取氫氧化鈉適量，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?。將投料量綠原酸、黃芩苷、異綠原酸、漢黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的山梨醇，攪拌溶解，加注射用水至約1100ml。加入1％藥液量的活性炭，升溫至80℃，攪拌40分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至7.8。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例12綠原酸 10g黃芩苷 23g異綠原酸 8g漢黃芩苷 4g山梨醇 45g稱取氫氧化鈉適量，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?。將投料量綠原酸、黃芩苷、異綠原酸、漢黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的山梨醇，攪拌溶解，加注射用水至約180ml。加入1％藥液量的活性炭，升溫至50℃，攪拌60分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.8。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例13綠原酸 14g黃芩苷 17g異綠原酸8g
漢黃芩苷4g甘露醇 43g稱取氫氧化鈉適量，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙狻⑼读狭烤G原酸、黃芩苷、異綠原酸、漢黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的甘露醇，攪拌溶解，加注射用水至約430ml。加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至7.2。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例14綠原酸14g黃芩苷23g異綠原酸 0.3g漢黃芩苷 2g甘露醇61g稱取氫氧化鈉適量，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙狻⑼读狭烤G原酸、黃芩苷、異綠原酸、漢黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的甘露醇，攪拌溶解，加注射用水至約410ml。加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至7.8。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例15綠原酸 14g黃芩苷 23g異綠原酸 5g漢黃芩苷 0.2g甘露醇 58g稱取氫氧化鈉適量，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?。將投料量綠原酸、黃芩苷、異綠原酸、漢黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的甘露醇，攪拌溶解，加注射用水至約1450ml。加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的PH值至7.8。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例16綠原酸5.0g黃芩苷30g異綠原酸 5g漢黃芩苷 2g甘露醇55g稱取氫氧化鈉適量，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?。將投料量綠原酸、黃芩苷、異綠原酸、漢黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的甘露醇，攪拌溶解，加注射用水至約1300ml。加入1％藥液量的活性炭，升溫至80℃，攪拌50分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.6。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例17綠原酸 17.5g黃芩苷 10g異綠原酸 5g漢黃芩苷 2g甘露醇 65g取氫氧化鈉適量，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?。將投料量綠原酸、黃芩苷、異綠原酸、漢黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的甘露醇，攪拌溶解，加注射用水至約1300ml。加入1％藥液量的活性炭，升溫至80℃，攪拌45分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.8。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例18綠原酸 17.5g黃芩苷 30g異綠原酸0.8g漢黃芩苷2g氯化鈉 使成品至100g取氫氧化鈉適量，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙狻⑼读狭烤G原酸、黃芩苷、異綠原酸、漢黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的氯化鈉，攪拌溶解，加注射用水至約3000ml。加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.4。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例19綠原酸 17.5g黃芩苷 30g異綠原酸 5g漢黃芩苷 0.4g山梨醇 使成品至100g取氫氧化鈉適量，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙狻⑼读狭烤G原酸、黃芩苷、異綠原酸、漢黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的山梨醇，攪拌溶解，加注射用水至約3000ml。加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.5。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例20綠原酸10g黃芩苷23g異綠原酸 5g漢黃芩苷 2g葡萄糖使成品至100g取氫氧化鈉適量，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙狻⑼读狭烤G原酸、黃芩苷、異綠原酸、漢黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。再加入投料量的山梨醇，攪拌溶解，加注射用水至約3000ml。加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.2。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例21綠原酸 14g黃芩苷 17g異綠原酸5g漢黃芩苷2g氫氧化鈉適量，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙狻⑼读狭烤G原酸、黃芩苷、異綠原酸、漢黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。加注射用水約至4000ml，加添加劑適量。加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.6。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例22綠原酸 14g黃芩苷 23g異綠原酸0.8g漢黃芩苷2g氫氧化鈉適量，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙狻⑼读狭烤G原酸、黃芩苷、異綠原酸、漢黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。加注射用水約至2000ml，加入1％藥液量的活性炭，升溫至70℃，攪拌30分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.6。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
實(shí)施例23綠原酸 14g黃芩苷 23g異綠原酸5g漢黃芩苷0.4g氫氧化鈉適量，加入適量注射用水?dāng)嚢枋谷芙?。將投料量綠原酸、黃芩苷、異綠原酸、漢黃芩苷投入注射用水中，攪拌下加入適量50％氫氧化鈉溶液使綠原酸與黃芩苷溶解，控制藥液的pH值使低于7.5。加注射用水約至2000ml。加入1％藥液量的活性炭，升溫至65℃，攪拌45分鐘。使用沙濾棒與真空泵將藥液過(guò)濾。使用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)藥液的pH值至6.2。使用過(guò)濾機(jī)將藥液過(guò)濾，依半成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定半成品的含量、pH值，灌裝，冷凍干燥，得凍干粉約100g，包裝、貯存。
權(quán)利要求
1.一種靜脈注射用粉針，其特征在于它是由下述原料制成的金銀花1-10重量份，黃芩1-10重量份。
2.一種靜脈注射用粉針，其特征在于它主要有效成分由以下成分組成綠原酸10-250mg/g、黃芩苷16-400mg/g，不含連翹苷、梔子苷。
3.如權(quán)利要求2所述的粉針，其特征在于所述活性成分及含量為綠原酸50-175mg/g、黃芩苷60-300mg/g。
4.如權(quán)利要求3所述的粉針，其特征在于所述活性成分及含量為綠原酸100-140mg/g、黃芩苷170-230mg/g。
5.如權(quán)利要求3或4所述的粉針，其特征在于還包含以下重量百分比的活性成分異綠原酸3-80mg/g、漢黃芩苷2-40mg/g。
6.如權(quán)利要求3或4所述的粉針，其特征在于還包含以下重量百分比的活性成分異綠原酸8-50mg/g、漢黃芩苷4-20mg/g。
7.如權(quán)利要求1-6所述的粉針，其特征在于藥物制劑中加了添加劑氯化鈉、葡萄糖、山梨醇或甘露醇。
8如權(quán)利要求7所述的粉針，其特征在于添加劑的濃度在4％-25％之間。
9.如權(quán)利要求8所述的粉針，其特征在于所述添加劑濃度葡糖糖的濃度優(yōu)選為5％-10％，其它優(yōu)選為10％-15％。
10.如權(quán)利要求1-8所述的粉針，其特征在于所藥物制劑PH值在4.0～9.0之間。
11.如權(quán)利要求1-10所述的粉針在制備治療肺炎藥物中的應(yīng)用。
12.如權(quán)利要求1-10所述的粉針在制備治療上呼吸道感染藥物中的應(yīng)用。
13.如權(quán)利要求1-12所述的粉針，其特征在于其中綠原酸的測(cè)定方法為色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為10∶90的乙腈-0.4％磷酸溶液為流動(dòng)相檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm對(duì)照品溶液的制備精密稱取綠原酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取本品，研細(xì)，取約0.1g精密稱定，置具塞錐形瓶中，加50％的甲醇100ml，稱定重量，超聲30min，放冷，再稱定重量，用50％的甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過(guò)，取濾液適量加入棕色量瓶即得供試樣品溶液；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
14.如權(quán)利要求1-12所述的粉針，其特征在于黃芩苷的測(cè)定方法色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基鍵合硅膠為填充材料以比例47∶53∶0.2的甲醇-水-磷酸為流動(dòng)相檢測(cè)波長(zhǎng)280nm對(duì)照品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的黃芩苷適量，置50ml量瓶中，加甲醇溶解，搖勻，制成每1ml含60μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品，研細(xì)，取約0.1g精密稱定，置50ml量瓶中，加50％甲醇50ml振搖，溶解，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液1ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)，濾過(guò)，即得；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液10μl；
15.根據(jù)權(quán)利要求1-14所述藥物制劑，其特征在于它的制備工藝為(1)綠原酸、異綠原酸的制備工藝取金銀花，4-20倍量40％-95％乙醇，回流提取1-5次，每次0.5-3小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至浸膏狀，放入真空干燥箱中干燥，干燥的金銀花提取物，溶于相當(dāng)于其重量1-20倍量體積的水中，水溶液用等量氯仿萃取1-5次，氯仿層棄去(回收氯仿)，水相再用0.5-3倍量異戊醇萃取1-5次，合并異戊醇層，減壓濃縮，真空干燥，取適量溶于40-90％乙醇溶液適量，拌入200克硅膠，水浴揮干(60℃)，作為柱層析分離樣品，稱取200-300目硅膠2000克，以氯仿-甲醇(40∶1-2∶1)為溶劑，濕法裝柱，干法上樣，用氯仿-甲醇(40∶1-2∶1)洗脫，等體積收集，每份500ml，梯度洗脫，每500ml加甲醇10ml，TLC追蹤檢查，合并相同部分，再經(jīng)小柱反復(fù)層析及結(jié)合重結(jié)晶技術(shù)，得到化合物氯原酸，化合物異氯原酸；(2)黃芩苷、漢黃芩苷的制備工藝黃芩粗粉，加2-10倍量水，回流提取1-5次，每次0.5--3小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮，加入0.5-4mol/LHCl溶液適量調(diào)PH＝0.5～4.0，保溫0.5-3小時(shí)，放置8-24小時(shí)，濾過(guò)，沉淀加4-20倍量水，調(diào)PH＝5.0～10.0，再加入0.5-2倍乙醇，攪拌使溶解，濾過(guò)，濾液用HCl溶液調(diào)PH＝1.0～5.5，保溫0.5-3小時(shí)，放置8-24小時(shí)，濾過(guò)，沉淀用乙醇洗至PH＝5.0～10.0，真空干燥，取上述干燥物，拌以硅膠(200-300目)，硅膠濕法裝柱進(jìn)行層析分離，氯仿-甲醇(90∶1～1∶1)為洗脫劑，薄層檢查洗脫液，等量收集，每份500ml，合并相同部分后分為2大部分一(10∶1～90∶1)，B(10∶1～1∶1)，從一部分在氯仿-甲醇(10∶1)段的洗脫液中析出針狀結(jié)晶，進(jìn)一步重結(jié)晶得到化合物2；B部分經(jīng)過(guò)硅膠柱層析(200-300目)，葡聚糖凝膠(LH-20)柱層析分離得到化合物1；化合物1，黃芩苷；化合物2，漢黃芩苷，即得；(3)該制劑的制備工藝為將投料量的綠原酸、黃芩苷等溶于適量的注射用水中，使?jié)舛葹榫G原酸0.1％-25mg/ml、黃芩苷1-40mg/ml，加等滲調(diào)節(jié)劑，控制藥液的PH值。用注射用水補(bǔ)至適量，調(diào)節(jié)藥液的PH值，使成品的PH值在4.0～9.0的范圍內(nèi)，質(zhì)檢，灌裝、冷凍干燥，包裝，即得。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種靜脈注射用粉針及其制備方法。該藥物主要是綠原酸、黃芩苷為原料為原料制備而成。本藥物對(duì)上呼吸道感染、肺炎和呼吸道病毒感染具有顯著的療效。
文檔編號(hào)G01N33/15GK1616051SQ20041008002
公開(kāi)日2005年5月18日 申請(qǐng)日期2004年9月24日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月24日
發(fā)明者趙志全 申請(qǐng)人:魯南制藥股份有限公司