Ifi27作為冠心病診斷標(biāo)志物的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分子診斷領(lǐng)域，涉及一種用于冠心病診斷的分子標(biāo)志物，具體涉及血 液中的分子標(biāo)志物-IFI27基因在制備診斷冠心病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著經(jīng)濟(jì)和社會(huì)的發(fā)展，心血管疾病尤其是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(冠心??； Coronary Artery Disease;CAD)的發(fā)病率正在逐年上升。對(duì)于發(fā)達(dá)國(guó)家，還有大多數(shù)的發(fā) 展中國(guó)家來(lái)講，CAD已經(jīng)成為成年人發(fā)病和死亡的主要原因。近年來(lái)，對(duì)于CAD的流行趨勢(shì)以 及越來(lái)越嚴(yán)峻的不良預(yù)后的現(xiàn)狀，各國(guó)衛(wèi)生組織均給予了高度的關(guān)注。在中國(guó)，由于改革開(kāi) 放，物質(zhì)生活條件的提高，人均壽命逐漸延長(zhǎng)，相應(yīng)的，心血管疾病尤其是冠心病的發(fā)病率 逐年升高，有人預(yù)計(jì)，到本世紀(jì)的20年代，冠心病有可能會(huì)成為威脅人類健康的首位疾病。 近年來(lái)對(duì)冠心病的診斷方法和治療措施有了重大的突破，尤其是近年來(lái)抗血小板藥物、抗 凝藥物、溶栓藥物的更新?lián)Q代，以及經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療(PCI)措施的日益普及，使大多 數(shù)的冠心病患者的臨床結(jié)局發(fā)生了巨大改善。
[0003] 自從上世紀(jì)60年代處Frmainghma的研究結(jié)果被首次公布以來(lái)，人們對(duì)冠心病的認(rèn) 識(shí)也有了很大的提高，已經(jīng)認(rèn)識(shí)到冠心病不是一種單一的疾病，而是一種多因素疾病，由多 種危險(xiǎn)因素共同決定其流行趨勢(shì)及發(fā)病特點(diǎn)。當(dāng)然，在冠心病的發(fā)病機(jī)制當(dāng)中，傳統(tǒng)的危險(xiǎn) 因素如吸煙、不良飲食習(xí)慣、血壓升高、血糖升高等等起著舉足輕重的作用，近年認(rèn)為，個(gè)體 遺傳背景的差異也是導(dǎo)致冠心病發(fā)生的一種重要機(jī)制。因此從基因?qū)用嫔蠈ふ遗c冠心病的 發(fā)生發(fā)展相關(guān)的分子標(biāo)志物，有助于冠心病的預(yù)防、診斷和藥物的個(gè)性化治療。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種早期診斷冠心病的分子標(biāo)志物。使用基因標(biāo)志物來(lái)診 斷冠心病具有及時(shí)性、特異性和靈敏性，從而使患者在疾病早期就能知曉疾病風(fēng)險(xiǎn)，針對(duì)風(fēng) 險(xiǎn)高低，采取相應(yīng)的預(yù)防和治療措施。
[0005] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0006] 本發(fā)明提供了檢測(cè)IFI27基因表達(dá)的產(chǎn)品在制備診斷冠心病的工具中的應(yīng)用。
[0007] 進(jìn)一步，上面所提到的檢測(cè)IFI27基因表達(dá)的產(chǎn)品包括：通過(guò)RT-PCR、實(shí)時(shí)定量 PCR、免疫檢測(cè)、原位雜交、芯片或高通量測(cè)序平臺(tái)檢測(cè)IFI27基因表達(dá)水平以診斷冠心病的 產(chǎn)品。
[0008] 進(jìn)一步，所述用RT-PCR診斷冠心病的產(chǎn)品至少包括一對(duì)特異擴(kuò)增IFI27基因的引 物;所述用實(shí)時(shí)定量PCR診斷冠心病的產(chǎn)品至少包括一對(duì)特異擴(kuò)增IFI27基因的引物;所述 用免疫檢測(cè)診斷冠心病的產(chǎn)品包括:與IFI27蛋白特異性結(jié)合的抗體;所述用原位雜交診斷 冠心病的產(chǎn)品包括:與IFI27基因的核酸序列雜交的探針;所述用芯片診斷冠心病的產(chǎn)品包 括:蛋白芯片和基因芯片;其中，蛋白芯片包括與IFI27蛋白特異性結(jié)合的抗體，基因芯片包 括與IFI27基因的核酸序列雜交的探針。
[0009] 在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述用實(shí)時(shí)定量PCR診斷冠心病的產(chǎn)品至少包括一 對(duì)特異擴(kuò)增IFI27基因的引物的序列如SEQIDN0.3和SEQIDN0.4所示。
[0010] 優(yōu)選地，所述診斷工具包括芯片、試劑盒、試紙或高通量測(cè)序平臺(tái)。其中，高通量測(cè) 序平臺(tái)是一種特殊的診斷工具，檢測(cè)IFI27基因表達(dá)的產(chǎn)品可以應(yīng)用于該平臺(tái)實(shí)現(xiàn)對(duì)IFI27 基因的表達(dá)情況的檢測(cè)。隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，對(duì)一個(gè)人的基因表達(dá)譜的構(gòu)建將成 為十分便捷的工作。通過(guò)對(duì)比疾病患者和正常人群的基因表達(dá)譜，容易分析出哪個(gè)基因的 異常與疾病相關(guān)。因此，在高通量測(cè)序中獲知IFI27基因的異常與冠心病相關(guān)也屬于IFI27 基因的用途，同樣在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0011] 本發(fā)明還提供了一種診斷冠心病的工具，所述診斷工具包括芯片、試劑盒、試紙、 或高通量測(cè)序平臺(tái)。
[0012] 其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白質(zhì)芯片;所述基因芯片包括固相載體以及固定 在固相載體的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針包括用于檢測(cè)IFI27基因轉(zhuǎn)錄水平的針對(duì) IFI27基因的寡核苷酸探針;所述蛋白質(zhì)芯片包括固相載體以及固定在固相載體的IFI27蛋 白的特異性抗體;所述基因芯片可用于檢測(cè)包括IFI27基因在內(nèi)的多個(gè)基因（例如，與冠心 病相關(guān)的多個(gè)基因）的表達(dá)水平。所述蛋白質(zhì)芯片可用于檢測(cè)包括IFI27蛋白在內(nèi)的多個(gè)蛋 白質(zhì)(例如與冠心病相關(guān)的多個(gè)蛋白質(zhì)）的表達(dá)水平。通過(guò)將多個(gè)與冠心病的標(biāo)志物同時(shí)檢 測(cè)，可大大提高冠心病診斷的準(zhǔn)確率。
[0013] 其中，所述試劑盒包括基因檢測(cè)試劑盒和蛋白免疫檢測(cè)試劑盒;所述基因檢測(cè)試 劑盒包括用于檢測(cè)IFI27基因轉(zhuǎn)錄水平的試劑;所述蛋白免疫檢測(cè)試劑盒包括IFI27蛋白的 特異性抗體。進(jìn)一步，所述試劑包括使用RT-PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、免疫檢測(cè)、原位雜交或芯片 方法檢測(cè)IFI27基因表達(dá)水平過(guò)程中所需的試劑。優(yōu)選度，所述試劑包括針對(duì)IFI27基因的 引物和/或探針。根據(jù)IFI27基因的核苷酸序列信息容易設(shè)計(jì)出可以用于檢測(cè)IFI27基因表 達(dá)水平的引物和探針。
[0014] 與IFI27基因的核酸序列雜交的探針可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或其它 衍生物。所述探針的長(zhǎng)度沒(méi)有限制，只要完成特異性雜交、與目的核苷酸序列特異性結(jié)合， 任何長(zhǎng)度都可以。所述探針的長(zhǎng)度可短至25、20、15、13或10個(gè)堿基長(zhǎng)度。同樣，所述探針的 長(zhǎng)度可長(zhǎng)至60、80、100、150、300個(gè)堿基對(duì)或更長(zhǎng)，甚至整個(gè)基因。由于不同的探針長(zhǎng)度對(duì)雜 交效率、信號(hào)特異性有不同的影響，所述探針的長(zhǎng)度通常至少是14個(gè)堿基對(duì)，最長(zhǎng)一般不超 過(guò)30個(gè)堿基對(duì)，與目的核苷酸序列互補(bǔ)的長(zhǎng)度以15-25個(gè)堿基對(duì)最佳。所述探針自身互補(bǔ)序 列最好少于4個(gè)堿基對(duì)，以免影響雜交效率。
[0015] 所述高通量測(cè)序平臺(tái)包括檢測(cè)IFI27基因表達(dá)水平的試劑。
[0016]所述試紙包括試紙載體和固定在試紙載體上的寡核苷酸，所述寡核苷酸能夠檢測(cè) IFI27基因的轉(zhuǎn)錄水平。
[0017]進(jìn)一步，所述IFI27蛋白的特異性抗體包括單克隆抗體、多克隆抗體。所述IFI27蛋 白的特異性抗體包括完整的抗體分子、抗體的任何片段或修飾（例如，，嵌合抗體、scFv、 Fab、F(ab'）2、Fv等。只要所述片段能夠保留與IFI27蛋白的結(jié)合能力即可。用于蛋白質(zhì)水平 的抗體的制備時(shí)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且本發(fā)明可以使用任何方法來(lái)制備所述抗體。
[0018]在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述針對(duì)IFI27基因的引物序列如下:正向引物序列 如SEQ ID N0.3所示，反向引物如SEQ ID N0.4所示。
[0019] 用于診斷冠心病的IFI27基因及其表達(dá)產(chǎn)物的來(lái)源包括但不限于血液、組織液、尿 液、唾液、脊髓液等可以獲得基因組DNA的體液。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，用于診斷冠心 病的IFI27基因及其表達(dá)產(chǎn)物的來(lái)源是血液。
[0020] 在本發(fā)明的上下文中，"IFI27基因"包括IFI27基因以及IFI27基因的任何功能等 同物的多核苷酸。IFI27基因包括與目前國(guó)際公共核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)GeneBank中IFI27基因 (NC_000014.9)DNA序列具有70%以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA序列；
[0021 ] 優(yōu)選地，IFI27基因的編碼序列包括以下任--種DNA分子：
[0022] (1)序列表中SEQ ID N0.1所示的DNA序列；
[0023] (2)在嚴(yán)格條件下與1)限定的DNA序列雜交且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA序列；
[0024] (3)與（1)或(2)限定的DNA序列具有70%、優(yōu)選地，90%以上同源性，且編碼相同功 能蛋白質(zhì)的DNA分子。
[0025]在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述IFI27基因的編碼序列是SEQ ID NO. 1所示的 DNA序列。
[0026] 在本發(fā)明的上下文中，IFI27基因表達(dá)產(chǎn)物包括IFI27蛋白以及IFI27蛋白的部分 肽。所述IFI27蛋白的部分肽含有與冠心病相關(guān)的功能域。
[0027] "IFI27蛋白"包括IFI27蛋白以及IFI27蛋白的任何功能等同物。所述功能等同物 包括IFI27蛋白保守性變異蛋白質(zhì)、或其活性片段，或其活性衍生物，等位變異體、天然突變 體、誘導(dǎo)突變體、在高或低的嚴(yán)緊條件下能與IFI27的DNA雜交的DNA所編碼的蛋白質(zhì)。
[0028] 優(yōu)選地，IFI27蛋白是具有下列氨基酸序列的蛋白質(zhì)：
[0029] (1)由序列表中SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0030] (2)將SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺 失和/或添加且與SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列具有相同功能的由SEQ ID N0.2所示的氨 基酸序列衍生的蛋白質(zhì)。取代、缺失或者添加的氨基酸的個(gè)數(shù)通常為1-50個(gè)，較佳地1-30 個(gè)，更佳地1-20個(gè)，最佳地1-10個(gè)。
[0031] (3)與SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列具有至少80%同源性(又稱為序列同一性）， 更優(yōu)選地，與SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列至少約90%至95%的同源性，常為96%、97%、 98 %、99 %同源性的氨基酸序列構(gòu)成的多肽。
[0032]在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述IFI27蛋白是具有SEQ ID N0.2所示的氨基酸序 列的蛋白質(zhì)。
[0033]通常，已知的是，一個(gè)蛋白質(zhì)中一個(gè)或多個(gè)氨基酸的修飾不會(huì)影響蛋白質(zhì)的功能。 本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)認(rèn)可改變單個(gè)氨基酸或小百分比的氨基酸或?qū)Π被嵝蛄械膫€(gè)別添加、 缺失、插入、替換是保守修飾，其中蛋白質(zhì)的改變產(chǎn)生具有相似功能的蛋白質(zhì)。提供功能相 似的氨基酸的保守替換表是本領(lǐng)域公知的。
[0034]通過(guò)添加一個(gè)氨基酸或多個(gè)氨基酸殘基修飾的蛋白質(zhì)的例子是IFI27蛋白的融合 蛋白。對(duì)于與IFI27蛋白融合的肽或者蛋白質(zhì)沒(méi)有限制，只要所得的融合蛋白保留IFI27蛋 白的生物學(xué)活性即可。
[0035]本發(fā)明的IFI27蛋白也包括對(duì)SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列的非保守修飾，只要 經(jīng)過(guò)修飾的蛋白質(zhì)仍然能夠保留IFI27蛋白的生物學(xué)活性即可。在此類修飾蛋白質(zhì)中突變 的氨基酸數(shù)目通常是10個(gè)或者更少，例如6個(gè)或者更少，例如3個(gè)或者更少。
[0036]在本發(fā)明的上下文中，"診斷冠心病"既包括判斷受試者是否已經(jīng)患有冠心病、也 包括判斷受試者是否存在患有冠心病的風(fēng)險(xiǎn)。
[0037]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果：
[0038] 本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)了 IFI27基因表達(dá)與冠心病相關(guān)，通過(guò)檢測(cè)受試者中IFI27的表 達(dá)，可以判斷受試者是否患有冠心病、或者判斷受試者是否存在患有冠心病的風(fēng)險(xiǎn)，從而指 導(dǎo)臨床醫(yī)師給受試者提供預(yù)防方案或者治療方案。
[0039] 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了一種新的分子標(biāo)記物-IFI27基因，基因診斷更及時(shí)、更特異、更靈 敏，能夠?qū)崿F(xiàn)冠心病的早期診斷，從而降低冠心病的死亡率。
【附圖說(shuō)明】
[0040] 圖1顯示利用基因芯片檢測(cè)IFI27基因在冠心病患者和正常人中的表達(dá)差異；
[0041 ]圖2顯示利用QPCR檢測(cè)IFI27基因在冠心病患者和正常人中的表達(dá)差異。
[0042]具體的實(shí)施方式
[0043] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。以下實(shí)施例僅用于說(shuō)明本 發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具