一種脂肪酶拆分dl-纈沙坦酯制備l-纈沙坦的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物化工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種脂肪酶拆分DL-纈沙坦酯制備 L-纈沙坦的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 纈沙坦(Valsartan)，化學(xué)名Ν-α-戊?；?-Ν-[4-[2-(1Η-四氮唑-5-基)苯基]芐 基]-L-纈氨酸，是第二個(gè)上市的血管緊張素II(AngII)受體拮抗劑，該藥避免了鈣拮抗劑 和ACE抑制劑的不良反應(yīng)，可用于治療各種類型高血壓，具有療效顯著、耐受性好的優(yōu)點(diǎn)，目 前已經(jīng)成為治療高血壓藥物的一線藥。
[0003] 目前，關(guān)于纈沙坦的合成方法的國(guó)內(nèi)外報(bào)道有很多，例如US5399578、US7199144、 TO2012001484等。然而，纈沙坦作為手性藥物，在合成過(guò)程中，特別是工藝最后階段要在堿 性條件下對(duì)纈沙坦酯進(jìn)行水解，其手性中心受到反應(yīng)條件的影響容易消旋化，生成D-型異 構(gòu)體，導(dǎo)致其光學(xué)純度降低。因此在生產(chǎn)過(guò)程中，纈沙坦粗品需經(jīng)過(guò)多次精制才能有效地控 制異構(gòu)體的含量，從而大大降低產(chǎn)物收率。
[0004] 根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)于纈沙坦D-型異構(gòu)體的去除，主要有三種方法：（1)采用粗品成 鹽再酸化析晶的方法。專利CN201110295707.6和CN201210045388.8報(bào)道，將纈沙坦粗品溶 于無(wú)機(jī)堿的水溶液成鹽，再用無(wú)機(jī)酸水溶液酸化，降溫析晶、離心干燥得到高純度的纈沙 坦;專利CN201110032265.6則是將纈沙坦粗品溶于堿或者強(qiáng)堿弱酸鹽中成鹽后，再用活性 炭、大孔吸附樹(shù)脂吸附，最后經(jīng)酸酸化得到精制產(chǎn)品。（2)采用混合溶劑重結(jié)晶的方法。專利 CN200910001859.3報(bào)道采用丁酮或丁酮與酯類、醚類混合溶劑精制，顯著降低異構(gòu)體的含 量;專利CN201310407962.4則是采用醇溶劑-酯溶劑體系；專利CN201310047701.6將粗品加 入酯溶劑溶解后，再加入烷烴溶劑，攪拌程序降溫析晶，得到純品。（3)采用晶種誘導(dǎo)析晶的 方法。專利CN201110303358.8報(bào)道將粗品溶于酯溶劑中，再加入晶種析晶得到精制品。
[0005] 以上方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，但根據(jù)報(bào)道，上述方法僅對(duì)異構(gòu)體含量在10%以下的粗品有 效，因此反復(fù)多次精制是必須的，由此使得產(chǎn)品綜合收率大大降低，在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中，會(huì) 有大量的物料損失，原子利用率低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種脂肪酶來(lái)拆分DL-纈沙坦酯制備L-纈沙坦的方法，該方 法工藝簡(jiǎn)潔，適用范圍廣泛，環(huán)境污染小，原子利用率高。
[0007] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案是： 所述的一種脂肪酶拆分DL-纈沙坦酯制備L-纈沙坦的方法，其特征在于包括以下工藝 步驟： (1) 以式⑴所示的DL-纈沙坦酯為原料，在pH為4.0~9.0的緩沖溶液中，加入有機(jī)溶劑 及脂肪酶，在10~60°C溫度下反應(yīng)0.5~72小時(shí)； (2) 反應(yīng)液降溫冷卻至5~10°C，加堿調(diào)節(jié)pH值至6~8,有大量固體析出，抽濾，干燥得 式(la)所示的D-纈沙坦酯粗品； (3) 濾液用酸調(diào)節(jié)pH至1~2,用乙酸乙酯萃取，減壓濃縮，降溫冷卻至析晶，抽濾，干燥 得式（Ila)所示的L-纈沙坦粗品； (4) 將式(Ila)所示的L-纈沙坦粗品溶于酯類溶劑，加熱升溫至溶清，再攪拌階梯降溫， 抽濾、干燥得精制品； (5 )將式（Ia)所示的D-繳沙坦酯粗品在pΗ值為10~14的氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液 中，控制反應(yīng)溫度在10~80°C水解反應(yīng)1~10小時(shí)，再用4mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至2~5,有大 量固體析出，抽濾、干燥得外消旋產(chǎn)物式(II)所示的DL-纈沙坦； (6)將式(II)所示的DL-纈沙坦溶于醇中，在0~5°C下滴加氯化亞砜，滴加完畢后，升溫 至50~60°C酯化反應(yīng)2~9小時(shí)，減壓濃縮得式（I)所示的DL-纈沙坦酯，作為底物再次用于 酶促反應(yīng)； 其反應(yīng)式如下：
其中，R為C1~C5的烷基、芐基或取代芐基。
[0008] 所述的一種脂肪酶拆分DL-纈沙坦酯制備L-纈沙坦的方法，其特征在于步驟（1)中 所述的緩沖溶液為磷酸氫鈉-磷酸二氫鈉緩沖溶液、磷酸氫鉀-磷酸二氫鉀緩沖溶液，其pH 值為6.0~8.0，其體積用量以原料式（I)所示的DL-纈沙坦酯的質(zhì)量計(jì)為3~50mL/g。
[0009] 所述的一種脂肪酶拆分DL-纈沙坦酯制備L-纈沙坦的方法，其特征在于步驟（1)中 所述的有機(jī)溶劑為C1~C8的脂肪酸酯、C1~C5的鹵代烷烴、醇類、酮類、N，N-二甲基甲酰胺、 DMS0或乙腈，其體積用量是緩沖溶液體積用量的5%~20%，優(yōu)選為乙酸乙酯、二氯甲烷、乙 醇、異丙醇、丙酮、N，N-二甲基甲酰胺、DMS0或乙腈。
[0010] 所述的一種脂肪酶拆分DL-纈沙坦酯制備L-纈沙坦的方法，其特征在于步驟⑴中 所述的脂肪酶包括:酸性脂肪酶、中性脂肪酶或堿性脂肪酶，所述的脂肪酶加入量以式（I) 所述的DL-繳沙坦質(zhì)量計(jì)為0.01~0.2g/g。
[0011]所述的一種脂肪酶拆分DL-纈沙坦酯制備L-纈沙坦的方法，其特征在于步驟（1)中 所述的反應(yīng)溫度為20~40°C，反應(yīng)時(shí)間為12~48小時(shí)。
[0012]所述的一種脂肪酶拆分DL-纈沙坦酯制備L-纈沙坦的方法，其特征在于步驟(2)中 所述的堿為氫氧化鋰、氫氧化鈉或氫氧化鉀。
[0013]所述的一種脂肪酶拆分DL-纈沙坦酯制備L-纈沙坦的方法，其特征在于步驟(3)中 濾液用4mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至1~2,用乙酸乙酯萃取，減壓濃縮至原體積的1/4~1/2,降溫 冷卻至0~5°C析晶，抽濾，干燥得式(Ila)所示的L-纈沙坦粗品。
[0014]所述的一種脂肪酶拆分DL-纈沙坦酯制備L-纈沙坦的方法，其特征在于步驟(4)中 所述的酯類溶劑為甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸異丁酯，其體積用量以式（la)所示 的L-繳沙坦粗品質(zhì)量計(jì)為5~8mL/g。
[0015]所述的一種脂肪酶拆分DL-纈沙坦酯制備L-纈沙坦的方法，其特征在于步驟(4)中 加入升溫至35~40°C溶清，在攪拌階梯降溫，第一階段溫度20~25°C，保溫析晶10小時(shí)，再 降溫至0~5°C，保溫析晶4小時(shí)。
[0016] 所述的一種脂肪酶拆分DL-纈沙坦酯制備L-纈沙坦的方法，其特征在于步驟(6)中 所述的醇為C1~C5的脂肪醇、苯甲醇或取代苯甲醇，其體積用量以式(II)所示的DL-纈沙坦 質(zhì)量計(jì)為5~lOmL/g，優(yōu)選為甲醇、乙醇、異丙醇、叔丁醇或芐醇。
[0017] 本發(fā)明中脂肪酶為：丹麥諾維信公司LipozymeTLIM、LipozymeRMIM、Novozym 435和日本天野酶制劑公司LipasePSIM、LipaseAK和LipaseAS。
[0018] 相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明合成方法的有益效果在于： 本發(fā)明不僅適用于消旋的DL-纈沙坦甲酯的拆分，亦適用于L-纈沙坦甲酯中D-型異構(gòu) 體的去除。本發(fā)明同時(shí)適用于目前L-纈沙坦生產(chǎn)過(guò)程中，對(duì)母液料的回收重利用。本發(fā)明制 備工藝簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低、環(huán)境污染小，是一條綠色化合成工藝。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 以下以具體實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此： 實(shí)施例1L-繳沙坦粗品及D-繳沙坦酯粗品的制備 在225mL的磷酸氫鈉-磷酸二氫鈉緩沖溶液(pH=4.0)中加入原料DL-纈沙坦甲酯(4.5g，O.Olmol)，再加入有機(jī)溶劑乙酸乙酯12mL，機(jī)械攪拌，控制反應(yīng)液溫度在20°C，加入脂肪酶 丹麥諾維信公司LipozymeTLIM(0.9g，0.2g/g)進(jìn)行水解反應(yīng)1小時(shí)； 反應(yīng)液降溫冷卻至5~10°C，加氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至7,有大量固體析出，抽濾，干燥得D-纈沙坦甲酯粗品1.7g，收率75.5%; 濾液用4mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至1~2,用乙酸乙酯萃取，減壓濃縮至原體積的1/4,降溫 冷卻至0~5°C析晶，抽濾，干燥L(fēng)-纈沙坦粗品1.lg，收率50.5%，ee值63.2%。
[0020] 實(shí)施例2 在180mL的磷酸氫鈉-磷酸二氫鈉緩沖溶液(pH=5.0)中加入原料DL-纈沙坦甲酯(4.5g，O.Olmol)，再加入有機(jī)溶劑二氯甲烷36mL，機(jī)械攪拌，控制反應(yīng)液溫度在25°C，加入脂肪酶 丹麥諾維信公司Novozym435(0.9g，0.2g/g)進(jìn)行水解反應(yīng)5小時(shí)； 加氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至8,其他操作同實(shí)施例1，得D-纈沙坦甲酯粗品1.8g，收率80.0%; 減壓濃縮至原體積的1/4，其他操作同實(shí)施例1，得L-纈沙坦粗品1.3g，收率59.7%，ee值 80.3%〇
[0021] 實(shí)施例3 在150mL的磷酸氫鈉-磷酸二氫鈉緩沖溶液(ρΗ=6.0)中加入原料DL-纈沙坦甲酯(4.5g，O.Olmol)，再加入有機(jī)溶劑乙醇22.5mL，機(jī)械攪拌，控制反應(yīng)液溫度在30°C，加入脂肪酶丹 麥諾維信公司LipozymeTLIM(0.45g，0.1g/g)進(jìn)行水解反應(yīng)10小時(shí)； 加氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至6,其他操