一種球磨制備燕麥多肽的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種球磨制備燕麥多肽的方法，屬于燕麥深加工技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 燕麥屬于禾本科植物，具有降血脂、降低膽固醇、降血壓、降血糖和抗氧化性等多 種生物活性功能。其中，已有的研究表明，燕麥之所以能降血壓，是因?yàn)檠帑溇哂薪笛獕夯?性多肽，因此燕麥多肽在開發(fā)降血壓功能食品方面具有良好的發(fā)展前景。
[0003] 高血壓是一種以動(dòng)脈血壓升高為主要癥狀，并可引發(fā)心、腦、腎、視網(wǎng)膜等靶器官 損傷及代謝改變的臨床綜合癥。高血壓之所以對人類健康構(gòu)成極大的危害，是由于其容易 引起心血管疾病。目前，高血壓病主要治療藥物：即利尿劑、p受體阻滯劑、鈣拮抗劑、血管 緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（Angiotensinconvertingenzymeinhibitor，ACEI)、血管緊張素 11 受體拮抗劑及a受體阻滯劑。其中，血管緊張素轉(zhuǎn)化酶是一種含鋅二肽羧酶，廣泛分布于哺 乳動(dòng)物組織中并對其血壓調(diào)節(jié)起著關(guān)鍵性的作用。
[0004] 近年來，由于燕麥具有特有降血壓活性肽特點(diǎn)，已成為人們研究降壓的熱點(diǎn)。中國 專利CN101709321B公開了《一種燕麥多肽及其制備方法與應(yīng)用》，該燕麥多肽的制備方 法，包括如下步驟：1)預(yù)處理；2)酶處理；3)燕麥降壓肽的純化；專利CN101849606B公 開了《一種超聲輔助酶解制備燕麥降血壓肽的方法》，該燕麥降血壓肽的制備方法，包括如 下步驟：1)將原料粉碎；2)按照堿提酸沉法提取蛋白；3)將上述制得的蛋白，進(jìn)行超聲促 進(jìn)酶解處理；專利CN101805774B公開了《一種提取燕麥多肽、燕麥葡聚糖的綜合提取方 法》，該燕麥多肽的制備方法，包括如下步驟：1)將原料粉碎；2)超聲提?。?)酶解處理；4) 復(fù)溶、酶解、過濾。
[0005] 上述技術(shù)方案都采用了酶解法提取得到多肽，而酶解法容易存在反應(yīng)效率不高， 蛋白酶的利用率低等不足，從而導(dǎo)致反應(yīng)時(shí)間長、酶的消耗量大、產(chǎn)物活性低等問題。近年 來，機(jī)械化學(xué)在提取中的應(yīng)用越來越廣，這歸功于機(jī)械化學(xué)打破植物細(xì)胞壁，提高有效成分 的提取率，但是有關(guān)利用機(jī)械化學(xué)技術(shù)制備燕麥多肽的文章還未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提出了一種球磨制備燕 麥多肽的方法。
[0007] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：一種球磨制備燕麥多肽的方法， 包括如下步驟：
[0008] (1)預(yù)處理：先將燕麥清理篩選，然后粉碎，且過80目篩，得到燕麥粉；
[0009] (2)脫脂處理：將經(jīng)步驟⑴處理得到的燕麥粉用60~70%乙醇在60~70°C條 件下浸泡1~2h，冷卻，傾去上液，得到沉淀燕麥粉；
[0010] (3)微波干燥：將經(jīng)步驟（2)處理得到的沉淀燕麥粉進(jìn)行微波干燥：微波功率 40~50kW、微波時(shí)間10~15min;
[0011] (4)堿水提?。合葘⒔?jīng)步驟（3)處理得到的燕麥粉用30~40°C溫水浸泡，浸泡4~ 8min，其中料液比為1 :10~15,其次再用轉(zhuǎn)速為200~300轉(zhuǎn)/min的球磨機(jī)球磨，球磨 10~20min，然后用碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)球磨后混合物pH值至8. 0~11. 0,最后繼續(xù)用轉(zhuǎn)速為 200~300轉(zhuǎn)/min的球磨機(jī)球磨球磨，球磨20~30min，過濾，并收集濾液；
[0012] (5)離心分離濾液：將經(jīng)步驟⑷處理得到的濾液置于4000~5000轉(zhuǎn)的離心機(jī) 上離心15~20分鐘，并收集上清液1;
[0013] (6)超聲處理：將經(jīng)步驟（5)處理得到的上清液1置于超聲頻率為30~40KHz，超 聲溫度40~50°C下提取，提取20~30min;
[0014] (7)淀粉酶處理：先將經(jīng)步驟（6)處理得到的提取液調(diào)節(jié)酶解pH值至6.0~ 7. 0、酶解溫度為30~40°C，然后加入低溫α-淀粉酶進(jìn)行酶解，淀粉酶添加量為0. 08~ 0. 18%，最后再用轉(zhuǎn)速為200~300轉(zhuǎn)/min的球磨機(jī)球磨，球磨20~30min;
[0015] (8)糖化酶、β-葡聚糖酶處理：先將經(jīng)步驟（7)處理得到的酶解液調(diào)整溫度至 50~60°C，并調(diào)節(jié)pH值至4. 0~6. 0,然后依次加入糖化酶和β-葡聚糖酶進(jìn)行酶解，糖化 酶、β-葡聚糖酶的添加量分別為0.05~0. 12%、0. 06~0. 16%，最后再用轉(zhuǎn)速為200~ 300轉(zhuǎn)/min的球磨機(jī)球磨，球磨20~30min;
[0016] (9)離心分離酶解液：將經(jīng)步驟（8)處理得到的酶解液置于4000~5000轉(zhuǎn)的離 心機(jī)上離心20~30分鐘，并收集上清液2;
[0017] (10)等電點(diǎn)沉淀：將經(jīng)步驟（9)處理得到的上清液2調(diào)節(jié)pH值至3.0~4.0,靜 置 40 ~60min;
[0018] (11)離心分離蛋白：將經(jīng)步驟（10)處理得到的沉淀溶液置于7000~8000轉(zhuǎn)的 離心機(jī)上離心10~15分鐘，并收集燕麥蛋白固體；
[0019] (12)堿蛋白酶處理：先將經(jīng)步驟（11)處理得到的燕麥蛋白固體用15~20倍質(zhì)量 的去離子水復(fù)溶，并調(diào)整pH值為9~10、溫度至45~55°C，然后加入堿蛋白酶進(jìn)行酶解， 堿蛋白酶的添加量為〇. 04~0. 08%，最后再用轉(zhuǎn)速為200~300轉(zhuǎn)/min的球磨機(jī)球磨，球 磨 30 ~40min;
[0020] (13)滅酶后離心分離：將經(jīng)步驟（12)處理得到的酶解液加熱到80~90°C，保溫 10~15min后，置于4000~5000轉(zhuǎn)的離心機(jī)上離心15~20分鐘，并收集上清液3;
[0021] (14)冷凍干燥：將經(jīng)步驟（13)處理得到的上清液3進(jìn)行冷凍干燥，得到燕麥多 肽。
[0022] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0023] 本發(fā)明采用了機(jī)械化學(xué)（球磨）結(jié)合酶解技術(shù)制備燕麥多肽，彌補(bǔ)了機(jī)械化學(xué)在 制備燕麥多肽提取工藝的空白，球磨的加入，不僅可以縮短了酶解時(shí)間，改善了酶解效果， 還可以使燕麥多肽得率高，從而使燕麥多肽的價(jià)值得以更好的發(fā)揮。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 實(shí)施例1
[0025] -種球磨制備燕麥多肽的方法，包括如下步驟：
[0026] (1)預(yù)處理：先將燕麥清理篩選，然后粉碎，且過80目篩，得到燕麥粉；
[0027] (2)脫脂處理：將經(jīng)步驟（1)處理得到的燕麥粉用65%乙醇在65°C條件下浸泡 1. 5h，冷卻，傾去上液，得到沉淀燕麥粉；
[0028] (3)微波干燥：將經(jīng)步驟（2)處理得到的沉淀燕麥粉進(jìn)行微波干燥：微波功率 45kW、微波時(shí)間12min;
[0029] (4)堿水提?。合葘⒔?jīng)步驟（3)處理得到的燕麥粉用35°C溫水浸泡，浸泡6min，其 中料液比為1 :12,其次再用轉(zhuǎn)速為250轉(zhuǎn)/min的球磨機(jī)球磨，球磨15min，然后用碳酸鈉溶 液調(diào)節(jié)球磨后混合物pH值至9. 5,最后繼續(xù)用轉(zhuǎn)速為250轉(zhuǎn)/min的球磨機(jī)球磨球磨，球磨 25min，過濾，并收集濾液；
[0030] (5)離心分離濾液：將經(jīng)步驟（4)處理得到的濾液置于4500轉(zhuǎn)的離心機(jī)上離心18 分鐘，并收集上清液1 ;
[0031] (6)超聲處理：將經(jīng)步驟（5)處理得到的上清液1置于超聲頻率為35KHz，超聲溫 度45°C下提取，提取25min;
[0032] (7)淀粉酶處理：先將經(jīng)步驟（6)處理得到的提取液調(diào)節(jié)酶解pH值至6.5、酶解 溫度為35°C，然后加入低溫α-淀粉酶進(jìn)行酶解，淀粉酶添加量為0. 13%，最后再用轉(zhuǎn)速為 250轉(zhuǎn)/min的球磨機(jī)球磨，球磨25min;
[0033] (8)糖化酶、β-葡聚糖酶處理：先將經(jīng)步驟（7)處理得到的酶解液調(diào)整溫度至 55°C，并調(diào)節(jié)pH值至5.0,然后依次加入糖化酶和β-葡聚糖酶進(jìn)行酶解，糖化酶、β-葡 聚糖酶的添加量分別為〇. 09 %、0. 12%，最后再用轉(zhuǎn)速為250轉(zhuǎn)/min的球磨機(jī)球磨，球磨 25min；
[0034] (9)離心分離酶解液：將經(jīng)步驟（8)處理得到的酶解液置于4500轉(zhuǎn)的離心機(jī)上離 心25分鐘，并收集上清液2 ;
[0035] (10)等電點(diǎn)沉淀：將經(jīng)步驟（9)處理得到的上清液2調(diào)節(jié)pH值至3. 5,靜置 50min；
[0036] (11)離心分離蛋白：將經(jīng)步驟（10)處理得到的沉淀溶液置于7500轉(zhuǎn)的離心機(jī)上 離心12分鐘，并收集燕麥蛋白固體；
[0037] (12)堿蛋白酶處理：先將經(jīng)步驟（11)處理得到的燕麥蛋白固體用18倍質(zhì)量的去 離子水復(fù)溶，并調(diào)整pH值為9. 5、溫度至50°C，然后加入堿蛋白酶進(jìn)行酶解，堿蛋白酶的添 加量為〇. 06%，最后再用轉(zhuǎn)速為250轉(zhuǎn)/min的球磨機(jī)球磨，球磨35min;
[0038] (13)滅酶后離心分離：將經(jīng)步驟（12)處理得到的酶解液加熱到85°C，保溫12min 后，置于4500轉(zhuǎn)的離心機(jī)上離心18分鐘，并收集上清液3 ;
[0039] (14)冷凍干燥：將經(jīng)步驟（13)處理得到的上清液3進(jìn)行冷凍干燥，得到燕麥多 肽。
[0040] 實(shí)施例2
[0041] -種球磨制備燕麥多肽的方法，包括如下步驟：
[0042] (1)預(yù)處理：先將燕麥清理篩選，然后粉碎，且過80目篩，得到燕麥粉；
[0043] (2)脫脂處理：將經(jīng)步驟（1)處理得到的燕麥粉用60%乙醇在60°C條件下浸泡 lh，冷卻，傾去上液，得到沉淀燕麥粉；
[0044] (3)微波干燥：將經(jīng)步驟（2)處理得到的沉淀燕麥粉進(jìn)行微波干燥：微波功率 40kW、微波時(shí)間lOmin;
[0045] (4)堿水提?。合葘⒔?jīng)步驟（3)處理得到的燕麥粉用30°C溫水浸泡，浸泡4min，其 中料液比為1 :10,其次再用轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/min的球磨機(jī)球磨，球磨lOmin，然后用碳酸鈉溶 液調(diào)節(jié)球磨后混合物pH值至8. 0,最后繼續(xù)用轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/min的球磨機(jī)球磨球磨，球磨 20min，過濾，并收集濾液；
[0046] (5)離心分離濾液：將經(jīng)步驟（4)處理得到的濾液置于4000轉(zhuǎn)的離心機(jī)上離心15 分鐘，并收集上清液1 ;
[0047] (6)超聲處理：將經(jīng)步驟（5)處理得到的上清液1置于超聲頻率為30KHz，超聲溫 度40°C下提取，提取20min;
[0048] (7)淀粉酶處理：先將經(jīng)步驟（6)處理得到的提取液調(diào)節(jié)酶解pH值至6.0、酶解 溫度為30°C，然后加入低溫α-淀粉酶進(jìn)行酶解，淀粉酶添加量為0. 08%，最后再用轉(zhuǎn)速為 200轉(zhuǎn)/min的球磨機(jī)球磨，球磨20min;
[0049] (8)糖化酶、β-葡聚糖酶處理：先將經(jīng)步驟（7)處理得到的酶解液調(diào)整溫度至 50°C，并調(diào)節(jié)pH值至4.0,然后依次加入糖化酶和β-葡聚糖酶進(jìn)行酶解，糖化酶、β-葡 聚糖酶的添加量分別為〇. 05 %、0. 06%，最后再用轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/min的球磨機(jī)球磨，球磨 20min；
[0050] (9)離心分離酶解液：將經(jīng)步驟（8)處理得到的酶解液置于4000轉(zhuǎn)的離心機(jī)上離 心20分鐘，并收集上清液2;
[0051] (10)等電點(diǎn)沉淀：將經(jīng)步驟（9)處理得到的上清液2調(diào)節(jié)pH值至3.0,靜置 40min；
[0052] (11)離心分離蛋白：將經(jīng)步驟（10)處理得到的沉淀溶液置于7000轉(zhuǎn)的離心機(jī)上 離心10分鐘，并收集燕麥蛋白固體；
[0053] (12)堿蛋白酶處理：先將經(jīng)步驟（11)處理得到的燕麥蛋白固體用15倍質(zhì)量的去 離子水復(fù)溶，并調(diào)整pH值為9、溫度至45°C，然后加入堿蛋白酶進(jìn)行酶解，堿蛋白酶的添加 量為0. 04%，最后再用轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/min的球磨機(jī)球磨，球磨30min;
[0054] (13)滅酶后離心分離：將經(jīng)步驟（12)處理得到的酶解液加熱到