一種銅綠假單胞菌及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，特別涉及一種銅綠假單胞菌，還涉及該銅綠假單胞菌在 防治植物病害中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 真菌是引起植物病害的重要病原菌，其侵染寄主后，作物根、莖、葉、花、果實(shí)和種 子會(huì)產(chǎn)生變色、壞死、腐爛、萎蔫或畸形癥狀。目前玉米、豇豆和京蔥等農(nóng)作物病害主要還是 依靠化學(xué)殺菌劑進(jìn)行防治，這些藥劑一方面對(duì)環(huán)境和人的健康有著潛在的危害，一方面會(huì) 導(dǎo)致病原真菌的抗性增強(qiáng)，因此，單一的依靠化學(xué)殺菌劑來(lái)防治真菌病害并不是長(zhǎng)久環(huán)保 之計(jì)。
[0003] 拮抗細(xì)菌可以通過(guò)分泌產(chǎn)生一系列代謝產(chǎn)物抑制病原菌的生長(zhǎng)，如細(xì)菌素、蛋白 酶、有機(jī)酸、幾丁質(zhì)酶和過(guò)氧化氫酶等。假單胞菌作為一種生防菌，廣泛活躍于植物根際中， 是植物根際促生菌（PlantGrowth-PromotingRhizobacteria,PGPR)的重要組成部分。
[0004] 研究表明，其中銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa)、惡臭假單胞菌 (Pseudomonasputida)和焚光假單胞菌（PseudomonasfIuorescens)等可產(chǎn)生活性物質(zhì)或 代謝產(chǎn)物等抑制或阻礙病原真菌地生長(zhǎng)，主要有抗生素類、相關(guān)酶類、嗜鐵素、脂肽類等。而 銅綠假單胞菌作為假單胞菌的一種，其可產(chǎn)生吩嗪-1-羧酸，藤黃綠膿素菌素等多種活性 物質(zhì)，對(duì)水稻紋枯病、油菜菌核病、辣椒疫霉病等多種植物病原菌具有抑制作用。而作物輪 作障礙或重茬現(xiàn)象中，病原真菌是其一個(gè)重要原因，因此拮抗細(xì)菌在作物輪作障礙或重茬 中也有重要的開(kāi)發(fā)前景。
[0005] 隨著人們環(huán)保意識(shí)的不斷增強(qiáng)以及對(duì)無(wú)公害農(nóng)產(chǎn)品的需求增大，植物病害的生物 防治迫在眉睫，拮抗細(xì)菌有著分布廣泛、數(shù)量眾多，作用方式多樣、安全無(wú)污染而備受關(guān)注。 因此，本研究中具有對(duì)多種植物病原菌有著較廣抑制譜的T1-3菌株在玉米多種病害、班豆 銹病和京蔥銹病等病害中具有較廣應(yīng)用前景，此項(xiàng)工作具有重要的意義

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 發(fā)明目的：本發(fā)明的第一目的在于提供一種對(duì)玉米大斑病、玉米圓斑病、玉米莖基 腐病、玉米紋枯病、包菜銹病、豇豆銹病、辣椒葉腐、京蔥銹病和京蔥葉斑病菌具有拮抗作用 的銅綠假單胞菌。
[0007] 本發(fā)明的第二目的在于提供一種銅綠假單胞菌在防治玉米大斑病、玉米圓斑病、 玉米莖基腐病、玉米紋枯病、包菜葉腐病、豇豆銹病、辣椒葉腐、京蔥銹病和京蔥葉斑病菌植 物病害中的應(yīng)用。
[0008] 技術(shù)方案：為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：一種銅綠假單 胞菌，其分類命名為銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa)T1-3,保藏在中國(guó)微生物菌 種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院 微生物研究所，郵編為100101，保藏編號(hào)為：CGMCCNo. 10433,保藏日期為2015年01月23 曰。
[0009] 銅綠假單胞菌的16SrDNA序列如SEQIDNo. 1所示。將所測(cè)16SrDNA序列通過(guò) BLAST比對(duì)，鑒定其為銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa)。
[0010] 所述的銅綠假單胞菌是在防治玉米大斑病中的應(yīng)用。
[0011] 所述的銅綠假單胞菌是在防治玉米圓斑病中的應(yīng)用。
[0012] 所述的銅綠假單胞菌是在防治玉米莖基腐病中的應(yīng)用。
[0013] 所述的銅綠假單胞菌是在防治玉米紋枯病中的應(yīng)用。
[0014] 所述的銅綠假單胞菌是在防治包菜葉腐病中的應(yīng)用。
[0015] 所述的銅綠假單胞菌是在防治豇豆銹病中的應(yīng)用。
[0016] 所述的銅綠假單胞菌是在防治辣椒葉腐病中的應(yīng)用。
[0017] 所述的銅綠假單胞菌是在防治京蔥銹病中的應(yīng)用。
[0018] 所述的銅綠假單胞菌是在防治京蔥葉斑病中的應(yīng)用。
[0019] 有益效果：本發(fā)明提供的銅綠假單胞菌對(duì)玉米、班豆、辣椒、包菜和京蔥等多種植 物病害有很好的防治效果，抑菌譜廣；該菌繁殖速度快，可人工培育，培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單，抗逆性 強(qiáng)，利于生產(chǎn)應(yīng)用；該菌對(duì)人畜無(wú)致病性，安全有效，具有良好的開(kāi)發(fā)前景。
[0020] 具體而言，本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，具有以下突出的優(yōu)勢(shì)：
[0021] (1)本發(fā)明提供的銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa)T1-3菌劑抑制譜較 廣，對(duì)玉米紋枯病、大斑病、圓斑病、葉枯等病害、辣椒炭疽病、包菜葉腐病、豇豆銹病、京蔥 銹病和葉斑病病原菌有較廣抑制譜；彌補(bǔ)了化學(xué)藥劑防效欠佳的不足，為此類真菌病害的 綜合防治增加了一種手段；
[0022] (2)本發(fā)明銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa)T1-3菌劑為生物制劑，且菌 株本身分離自玉米的根際土，因此它的使用不會(huì)帶來(lái)一系列的環(huán)境問(wèn)題，有利于玉米等作 物的無(wú)公害生產(chǎn)；
[0023] (3)作物輪作障礙或重茬現(xiàn)象中，病原真菌種類變多、數(shù)量變大是其一個(gè)重要原 因，因此拮抗細(xì)菌在作物輪作障礙或重茬中也有重要開(kāi)發(fā)前景。
【附圖說(shuō)明】
[0024] 圖1為銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa)T1-3分別對(duì)玉米大斑菌?。ˋ)、 辣椒葉腐菌?。˙)、玉米莖基腐菌?。–)、豇豆銹?。―)的拮抗實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0025] 圖2為銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa)T1-3生理生化分析結(jié)果。
[0026] 圖3為對(duì)照組和處理組在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)結(jié)果。
[0027] 圖4為對(duì)照組和處理組在馬丁氏平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)中培養(yǎng)結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 實(shí)施例1銅綠假單胞菌菌株的分離篩選
[0029]1.培養(yǎng)基：
[0030]馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA培養(yǎng)基）：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15-20g， 自然PH，定容至1L。
[0031] 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（LB培養(yǎng)基）：胰蛋白胨10g、酵母浸粉5g、氯化鈉10g，pH偏 中性，定容至1L。
[0032] 2?銅綠假單胞菌菌株的分離篩選
[0033] A)稱取玉米大斑病發(fā)病較嚴(yán)重區(qū)域附近未有該病害發(fā)生的健康玉米植株的根際 土壤l〇g，加入90ml無(wú)菌水中，得10 1稀釋液，于30°C搖床中130r/min，培養(yǎng)2_3h，繼續(xù)加 入無(wú)菌水稀釋，分別得到10 5, 10 6, 10 7,10 8的稀釋液，分別取200ml上述稀釋液于LB平板 上涂布，30°C培養(yǎng)48h，挑取單菌落接種于LB固體培養(yǎng)基斜面上保存；
[0034]B)將活化于PDA平板的真菌病害用直徑5mm的打孔器打取同樣大小的菌碟接種 于PDA平板中央，降至24h后，將LB斜面活化的步驟A)得到的菌株接種于90mm平板的 一側(cè)，28°C培養(yǎng)3-5d，觀察抑菌能力，并記錄抑菌帶的寬度；以無(wú)菌的接種真菌的PDA平板 作為對(duì)照，初步篩選出具有拮抗真菌的菌株；再用相同方法進(jìn)行復(fù)篩，得到銅綠假單胞菌 (Pseudomonasa