檢測(cè)呼吸道感染相關(guān)病原微生物的系統(tǒng)及其專用lamp引物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域中檢測(cè)呼吸道感染相關(guān)病原微生物的系統(tǒng)及其專用 LAMP引物。
【背景技術(shù)】
[0002] 肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、肺炎 克雷伯菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、嗜麥芽窄食單胞菌、流感嗜血桿菌、嗜肺軍團(tuán)菌、 結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群、肺炎支原體和肺炎衣原體這十三種病原菌是呼吸道感染的常見病原 菌。呼吸道感染是我國(guó)臨床上最常見的疾病之一，重癥肺炎若不能及時(shí)、正確用藥，容易危 及生命。然而，臨床常規(guī)的生化指標(biāo)分析無(wú)法對(duì)患者所感染的病原菌種做出準(zhǔn)確鑒定，大多 數(shù)臨床治療仍處于經(jīng)驗(yàn)用藥階段，在使用高級(jí)抗生素方面存在較大的盲目性。目前臨床上 流行使用的相對(duì)比較科學(xué)地鑒定病原菌的方法主要是依靠細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)法，但是細(xì)菌培養(yǎng) 檢測(cè)法存在較大的缺陷：檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)（一般兩天左右）、準(zhǔn)確率低（假陰性率和假陽(yáng)性率都 較高）、難以檢測(cè)出難培養(yǎng)的病原體等。
[0003]環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法（loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)是利用一 種具有鏈置換活性和瀑布式核酸擴(kuò)增功能的BstDNA聚合酶，在等溫條件下進(jìn)行核酸的變 性和自動(dòng)循環(huán)的鏈置換核酸擴(kuò)增反應(yīng)。LAMP針對(duì)靶序列的6個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)4條特異引物，利 用具備鏈置換功能的DNA聚合酶在恒定溫度下不斷復(fù)制擴(kuò)增DNA。為了提高反應(yīng)效率，可在 反應(yīng)體系中添加兩條環(huán)引物，使之分別與莖環(huán)結(jié)構(gòu)結(jié)合，啟動(dòng)鏈置換合成，循環(huán)復(fù)制。
[0004]LAMP具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏、特異的優(yōu)勢(shì)，尤其適合在基層開展LAMP試劑盒的應(yīng)用 推廣。LAMP技術(shù)中，引物是決定檢測(cè)結(jié)果靈敏度和特異性的關(guān)鍵因素。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是如何檢測(cè)呼吸道感染相關(guān)病原微生物的種類。
[0006] 本發(fā)明首先提供了檢測(cè)呼吸道感染相關(guān)病原微生物的系統(tǒng)及其專用LAMP引物。
[0007] 本發(fā)明所提供的檢測(cè)呼吸道感染相關(guān)病原微生物的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增的成套引物， 為下述十三個(gè)引物組中的十三組、任十二組、任十一組、任十組、任九組、任八組、任七組、任 六組、任五組、任四組、任三組、任兩組或任一組：用于檢測(cè)肺炎鏈球菌的引物組、用于檢測(cè) 金黃色葡萄球菌的引物組、用于檢測(cè)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的引物組、用于檢測(cè)大腸 埃希氏菌的引物組、用于檢測(cè)肺炎克雷伯菌的引物組、用于檢測(cè)銅綠假單胞菌的引物組、用 于檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌的引物組、用于檢測(cè)嗜麥芽窄食單胞菌的引物組、用于檢測(cè)流感嗜血 桿菌的引物組、用于檢測(cè)嗜肺軍團(tuán)菌的引物組、用于檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群的引物組、用 于檢測(cè)肺炎支原體的引物組和用于檢測(cè)肺炎衣原體的引物組；所述用于檢測(cè)肺炎鏈球菌的 弓丨物組為肺炎鏈球菌正義6引物組、肺炎鏈球菌反義6引物組、肺炎鏈球菌正義4引物組或 肺炎鏈球菌反義4引物組。
[0008] 本發(fā)明提供的成套引物中所述肺炎鏈球菌正義6引物組由肺炎鏈球菌引物F3-Z、 肺炎鏈球菌引物B3-Z、肺炎鏈球菌引物FIP-Z、肺炎鏈球菌引物BIP-Z、肺炎鏈球菌引物 LF-Z和肺炎鏈球菌引物L(fēng)B-Z這6條引物組成；所述肺炎鏈球菌反義6引物組由肺炎鏈球 菌引物F3-F、肺炎鏈球菌引物B3-F、肺炎鏈球菌引物FIP-F、肺炎鏈球菌引物BIP-F、肺炎鏈 球菌引物L(fēng)F-F和肺炎鏈球菌引物L(fēng)B-F這6條引物組成；所述肺炎鏈球菌正義4引物組由 所述肺炎鏈球菌引物F3-Z、所述肺炎鏈球菌引物B3-Z、所述肺炎鏈球菌引物FIP-Z和所述 肺炎鏈球菌引物BIP-Z這4條引物組成；所述肺炎鏈球菌反義4引物組由所述肺炎鏈球菌 引物F3-F、所述肺炎鏈球菌引物B3-F、所述肺炎鏈球菌引物FIP-F和所述肺炎鏈球菌引物 BIP-F這4條引物組成。
[0009] 本發(fā)明提供的成套引物中所述肺炎鏈球菌引物F3-Z是如下al)至a2)中的任一 種單鏈DNA:
[0010]al)SEQIDNo. 1的第6-25位核苷酸的單鏈DNA;
[0011]a2)與al)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0012] 本發(fā)明提供的成套引物中所述肺炎鏈球菌引物B3-Z是如下a4)至a5)中的任一 種單鏈DNA:
[0013]a4)SEQIDNo. 1的第213-229位核苷酸的反向互補(bǔ)單鏈DNA;
[0014]a5)與a4)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0015] 本發(fā)明提供的成套引物中所述肺炎鏈球菌引物FIP-Z是如下a7)至a8)中的任一 種單鏈DNA:
[0016]a7)結(jié)構(gòu)為A-linker-B的單鏈DNA，所述A是SEQIDNo. 1的第79-100位核苷酸 組成的單鏈DNA的反向互補(bǔ)單鏈DNA;所述linker是長(zhǎng)度為0-10個(gè)核苷酸的單鏈DNA，所 述B是SEQIDNo. 1的第39-55位核苷酸組成的單鏈DNA;
[0017]a8)與a7)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0018] 本發(fā)明提供的成套引物中所述肺炎鏈球菌引物BIP-Z是如下alO)至all)中的任 一種單鏈DNA:
[0019]alO)結(jié)構(gòu)為A-linker-B的單鏈DNA，所述A是SEQIDNo. 1的第101-124位核苷 酸組成的單鏈DNA;所述linker是長(zhǎng)度為0-10個(gè)核苷酸的單鏈DNA，所述B是SEQIDNo. 1 的第166-185位核苷酸組成的單鏈DNA的反向互補(bǔ)單鏈DNA;
[0020] all)與alO)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0021] 本發(fā)明提供的成套引物中所述肺炎鏈球菌引物L(fēng)F-Z是如下al3)至al4)中的任 一種單鏈DNA:
[0022] al3)SEQIDNo. 1的第56-77位核苷酸的反向互補(bǔ)單鏈DNA;
[0023]al4)與al3)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0024] 本發(fā)明提供的成套引物中所述肺炎鏈球菌引物L(fēng)B-Z是如下al6)至al7)中的任 一種單鏈DNA:
[0025]al6)SEQIDNo. 1的第126-146位核苷酸的單鏈DNA片段；
[0026]al7)與al6)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0027] 本發(fā)明提供的成套引物中所述肺炎鏈球菌引物F3-F是所述肺炎鏈球菌引物F3-Z 的反義DNA;所述肺炎鏈球菌引物B3-F是所述肺炎鏈球菌引物B3-Z的反義DNA;所述肺炎 鏈球菌引物FIP-F是所述肺炎鏈球菌引物FIP-Z的反義DNA;所述肺炎鏈球菌引物BIP-F是 所述肺炎鏈球菌引物BIP-Z的反義DNA;所述肺炎鏈球菌引物L(fēng)F-F是所述肺炎鏈球菌引物 LF-Z的反義DNA;所述肺炎鏈球菌引物L(fēng)B-F是所述肺炎鏈球菌引物L(fēng)B-Z的反義DNA。
[0028] 本發(fā)明提供的成套引物中所述用于檢測(cè)金黃色葡萄球菌的引物組為金黃色葡萄 球菌正義6引物組、金黃色葡萄球菌反義6引物組、金黃色葡萄球菌正義4引物組或金黃色 葡萄球菌反義4引物組；所述金黃色葡萄球菌正義6引物組由金黃色葡萄球菌引物F3-Z、 金黃色葡萄球菌引物B3-Z、金黃色葡萄球菌引物FIP-Z、金黃色葡萄球菌引物BIP-Z、金黃 色葡萄球菌引物L(fēng)F-Z和金黃色葡萄球菌引物L(fēng)B-Z這6條引物組成；所述金黃色葡萄球 菌反義6引物組由金黃色葡萄球菌引物F3-F、金黃色葡萄球菌引物B3-F、金黃色葡萄球菌 引物FIP-F、金黃色葡萄球菌引物BIP-F、金黃色葡萄球菌引物L(fēng)F-F和金黃色葡萄球菌引 物L(fēng)B-F這6條引物組成；所述金黃色葡萄球菌正義4引物組由所述金黃色葡萄球菌引物 F3-Z、所述金黃色葡萄球菌引物B3-Z、所述金黃色葡萄球菌引物FIP-Z和所述金黃色葡萄 球菌引物BIP-Z這4條引物組成；所述金黃色葡萄球菌反義4引物組由所述金黃色葡萄球 菌引物F3-F、所述金黃色葡萄球菌引物B3-F、所述金黃色葡萄球菌引物FIP-F和所述金黃 色葡萄球菌引物BIP-F這4條引物組成。
[0029] 本發(fā)明提供的成套引物中所述金黃色葡萄球菌引物F3-Z是如下bl)至b2)中的 任一種單鏈DNA:
[0030]bl)SEQIDNo. 2的第11-30位核苷酸的單鏈DNA;
[0031]b2)與bl)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0032] 本發(fā)明提供的成套引物中所述金黃色葡萄球菌引物B3-Z是如下b4)至b5)中的 任一種單鏈DNA:
[0033]b4)SEQIDNo. 2的第222-243位核苷酸的反向互補(bǔ)單鏈DNA;
[0034]b5)與b4)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0035] 本發(fā)明提供的成套引物中所述金黃色葡萄球菌引物FIP-Z是如下b7)至b8)中的 任一種單鏈DNA:
[0036]b7)結(jié)構(gòu)為A-linker-B的單鏈DNA，所述A是SEQIDNo. 2的第72-95位核苷酸 組成的單鏈DNA的反向互補(bǔ)單鏈DNA;所述linker是長(zhǎng)度為0-10個(gè)核苷酸的單鏈DNA，所 述B是SEQIDNo. 2的第31-50位核苷酸組成的單鏈DNA;
[0037]b8)與b7)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0038] 本發(fā)明提供的成套引物中所述金黃色葡萄球菌引物BIP-Z是如下blO)至bll)中 的任一種單鏈DNA:
[0039]blO)結(jié)構(gòu)為A-linker-B的單鏈DNA，所述A是SEQIDNo. 2的第127-149位核苷 酸組成的單鏈DNA;所述linker是長(zhǎng)度為0-10個(gè)核苷酸的單鏈DNA，所述B是SEQIDNo. 2 的第196-212位核苷酸組成的單鏈DNA的反向互補(bǔ)單鏈DNA;
[0040] bll)與bio)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0041] 本發(fā)明提供的成套引物中所述金黃色葡萄球菌引物L(fēng)F-Z是如下bl3)至bl4)中 的任一種單鏈DNA:
[0042]bl3)SEQIDNo. 2的第54-71位核苷酸的反向互補(bǔ)單鏈DNA;
[0043]bl4)與bl3)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0044] 本發(fā)明提供的成套引物中所述金黃色葡萄球菌引物L(fēng)B-Z是如下bl6)至bl7)中 的任一種單鏈DNA:
[0045]bl6)SEQIDNo. 2的第157-178位核苷酸的單鏈DNA片段；
[0046]bl7)與bl6)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0047] 本發(fā)明提供的成套引物中所述金黃色葡萄球菌引物F3-F是所述金黃色葡萄球菌 引物F3-Z的反義DNA;所述金黃色葡萄球菌引物B3-F是所述金黃色葡萄球菌引物B3-Z的 反義DNA;所述金黃色葡萄球菌引物FIP-F是所述金黃色葡萄球菌引物FIP-Z的反義DNA; 所述金黃色葡萄球菌引物BIP-F是所述金黃色葡萄球菌引物BIP-Z的反義DNA;所述金黃 色葡萄球菌引物L(fēng)F-F是所述金黃色葡萄球菌引物L(fēng)F-Z的反義DNA;所述金黃色葡萄球菌 引物L(fēng)B-F是所述金黃色葡萄球菌引物L(fēng)B-Z的反義DNA。
[0048] 本發(fā)明提供的成套引物中所述用于檢測(cè)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的引物組為 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌正義6引物組、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌反義6引物組、耐甲 氧西林金黃色葡萄球菌正義4引物組或耐甲氧西林金黃色葡萄球菌反義4引物組；所述耐 甲氧西林金黃色葡萄球菌正義6引物組由耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物F3-Z、耐甲氧西 林金黃色葡萄球菌引物B3-Z、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物FIP-Z、耐甲氧西林金黃色 葡萄球菌引物BIP-Z、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物L(fēng)F-Z和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌 引物L(fēng)B-Z這6條引物組成；所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌反義6引物組由耐甲氧西林 金黃色葡萄球菌引物F3-F、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物B3-F、耐甲氧西林金黃色葡萄 球菌引物FIP-F、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物BIP-F、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物 LF-F和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物L(fēng)B-F這6條引物組成；所述耐甲氧西林金黃色葡 萄球菌正義4引物組由所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物F3-Z、所述耐甲氧西林金黃色 葡萄球菌引物B3-Z、所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物FIP-Z和所述耐甲氧西林金黃色 葡萄球菌引物BIP-Z這4條引物組成；所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌反義4引物組由所 述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物F3-F、所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物B3-F、所述 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物FIP-F和所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物BIP-F這4 條引物組成。
[0049] 本發(fā)明提供的成套引物中所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物F3-Z是如下cl) 至c2)中的任一種單鏈DNA:
[0050]cl)SEQIDNo. 3的第12-30位核苷酸的單鏈DNA;
[0051]c2)與cl)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0052] 本發(fā)明提供的成套引物中所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物B3-Z是如下c4) 至c5)中的任一種單鏈DNA:
[0053]c4)SEQIDNo. 3的第211-234位核苷酸的反向互補(bǔ)單鏈DNA;
[0054]c5)與c4)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0055] 本發(fā)明提供的成套引物中所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物FIP-Z是如下c7) 至c8)中的任一種單鏈DNA:
[0056]c7)結(jié)構(gòu)為A-linker-B的單鏈DNA，所述A是SEQIDNo. 3的第97-121位核苷酸 組成的單鏈DNA的反向互補(bǔ)單鏈DNA;所述linker是長(zhǎng)度為0-10個(gè)核苷酸的單鏈DNA，所 述B是SEQIDNo. 3的第47-71位核苷酸組成的單鏈DNA;
[0057]c8)與c7)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0058] 本發(fā)明提供的成套引物中所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物BIP-Z是如下 clO)至ell)中的任一種單鏈DNA:
[0059] clO)結(jié)構(gòu)為A-linker-B的單鏈DNA，所述A是SEQIDNo. 3的第133-156位核苷 酸組成的單鏈DNA;所述linker是長(zhǎng)度為0-10個(gè)核苷酸的單鏈DNA，所述B是SEQIDNo. 3 的第182-206位核苷酸組成的單鏈DNA的反向互補(bǔ)單鏈DNA;
[0060]cl1)與ClO)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0061] 本發(fā)明提供的成套引物中所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物L(fēng)F-Z是如下cl3) 至c14)中的任一種單鏈DNA:
[0062]cl3)SEQIDNo. 3的第72-95位核苷酸的反向互補(bǔ)單鏈DNA片段，該單鏈DNA片段 名稱為耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物L(fēng)F-Z1 ;
[0063]cl4)與cl3)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0064] 本發(fā)明提供的成套引物中所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物L(fēng)B-Z是如下cl6) 至cl7)中的任一種單鏈DNA:
[0065]cl6)SEQIDNo. 3 的第 157-181 位核苷酸的單鏈DNA;
[0066]cl7)與cl6)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0067] 本發(fā)明提供的成套引物中所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物F3-F是所述耐甲 氧西林金黃色葡萄球菌引物F3-Z的反義DNA;所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物B3-F 是所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物B3-Z的反義DNA;所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌 引物FIP-F是所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物FIP-Z的反義DNA;所述耐甲氧西林金 黃色葡萄球菌引物BIP-F是所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物BIP-Z的反義DNA;所述 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物L(fēng)F-F是所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物L(fēng)F-Z的反 義DNA;所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物L(fēng)B-F是所述耐甲氧西林金黃色葡萄球菌引物 LB-Z的反義DNA。
[0068] 本發(fā)明提供的成套引物中所述用于檢測(cè)大腸埃希氏菌的引物組為大腸埃希氏菌 正義6引物組、大腸埃希氏菌反義6引物組、大腸埃希氏菌正義4引物組或大腸埃希氏菌反 義4引物組；所述大腸埃希氏菌正義6引物組由大腸埃希氏菌引物F3-Z、大腸埃希氏菌引 物B3-Z、大腸埃希氏菌引物FIP-Z、大腸埃希氏菌引物BIP-Z、大腸埃希氏菌引物L(fēng)F-Z和大 腸埃希氏菌引物L(fēng)B-Z這6條引物組成；所述大腸埃希氏菌反義6引物組由大腸埃希氏菌 引物F3-F、大腸埃希氏菌引物B3-F、大腸埃希氏菌引物FIP-F、大腸埃希氏菌引物BIP-F、大 腸埃希氏菌引物L(fēng)F-F和大腸埃希氏菌引物L(fēng)B-F這6條引物組成；所述大腸埃希氏菌正義 4引物組由所述大腸埃希氏菌引物F3-Z、所述大腸埃希氏菌引物B3-Z、所述大腸埃希氏菌 引物FIP-Z和所述大腸埃希氏菌引物BIP-Z這4條引物組成；所述大腸埃希氏菌反義4引 物組由所述大腸埃希氏菌引物F3-F、所述大腸埃希氏菌引物B3-F、所述大腸埃希氏菌引物 FIP-F和所述大腸埃希氏菌引物BIP-F這4條引物組成。
[0069] 本發(fā)明提供的成套引物中所述大腸埃希氏菌引物F3-Z是如下dl)至d2)中的任 一種單鏈DNA:
[0070]dl)SEQIDNo. 4的第11-30位核苷酸的單鏈DNA;
[0071]d2)與dl)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0072] 本發(fā)明提供的成套引物中所述大腸埃希氏菌引物B3-Z是如下d4)至d5)中的任 一種單鏈DNA:
[0073]d4)SEQIDNo. 4的第200-219位核苷酸的反向互補(bǔ)單鏈DNA;
[0074]d5)與d4)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0075] 本發(fā)明提供的成套引物中所述大腸埃希氏菌引物FIP-Z是如下d7)至d8)中的任 一種單鏈DNA:
[0076]d7)結(jié)構(gòu)為A-linker-B的單鏈DNA，所述A是SEQIDNo. 4的第77-96位核苷酸 組成的單鏈DNA的反向互補(bǔ)單鏈DNA;所述linker是長(zhǎng)度為0-10個(gè)核苷酸的單鏈DNA，所 述B是SEQIDNo. 4的第38-55位核苷酸組成的單鏈DNA;
[0077]d8)與d7)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0078] 本發(fā)明提供的成套引物中所述大腸埃希氏菌引物BIP-Z是如下dlO)至dll)中的 任一種單鏈DNA:
[0079]dlO)結(jié)構(gòu)為A-linker-B的單鏈DNA，所述A是SEQIDNo. 4的第101-122位核苷 酸組成的單鏈DNA;所述linker是長(zhǎng)度為0-10個(gè)核苷酸的單鏈DNA，所述B是SEQIDNo. 4 的第163-183位核苷酸組成的單鏈DNA的反向互補(bǔ)單鏈DNA;
[0080] dll)與dlO)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0081] 本發(fā)明提供的成套引物中所述大腸埃希氏菌引物L(fēng)F-Z是如下dl3)至dl4)中的 任一種單鏈DNA:
[0082]dl3)SEQIDNo. 4的第56-76位核苷酸的反向互補(bǔ)單鏈DNA片段；
[0083]dl4)與dl3)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0084] 本發(fā)明提供的成套引物中所述大腸埃希氏菌引物L(fēng)B-Z是如下dl6)至dl7)中的 任一種單鏈DNA:
[0085]dl6)SEQIDNo. 4 的第 137-154 位核苷酸的單鏈DNA ;
[0086]dl7)與dl6)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0087] 本發(fā)明提供的成套引物中所述大腸埃希氏菌引物F3-F是所述大腸埃希氏菌引物 F3-Z的反義DNA;所述大腸埃希氏菌引物B3-F是所述大腸埃希氏菌引物B3-Z的反義DNA; 所述大腸埃希氏菌引物FIP-F是所述大腸埃希氏菌引物FIP-Z的反義DNA;所述大腸埃希 氏菌引物BIP-F是所述大腸埃希氏菌引物BIP-Z的反義DNA;所述大腸埃希氏菌引物L(fēng)F-F 是所述大腸埃希氏菌引物L(fēng)F-Z的反義DNA;所述大腸埃希氏菌引物L(fēng)B-F是所述大腸埃希 氏菌引物L(fēng)B-Z的反義DNA。
[0088] 本發(fā)明提供的成套引物中所述用于檢測(cè)肺炎克雷伯菌的引物組為肺炎克雷伯菌 正義6引物組、肺炎克雷伯菌反義6引物組、肺炎克雷伯菌正義4引物組或肺炎克雷伯菌反 義4引物組；所述肺炎克雷伯菌正義6引物組由肺炎克雷伯菌引物F3-Z、肺炎克雷伯菌引 物B3-Z、肺炎克雷伯菌引物FIP-Z、肺炎克雷伯菌引物BIP-Z、肺炎克雷伯菌引物L(fēng)F-Z和肺 炎克雷伯菌引物L(fēng)B-Z這6條引物組成；所述肺炎克雷伯菌反義6引物組由肺炎克雷伯菌 引物F3-F、肺炎克雷伯菌引物B3-F、肺炎克雷伯菌引物FIP-F、肺炎克雷伯菌引物BIP-F、肺 炎克雷伯菌引物L(fēng)F-F和肺炎克雷伯菌引物L(fēng)B-F這6條引物組成；所述肺炎克雷伯菌正義 4引物組由所述肺炎克雷伯菌引物F3-Z、所述肺炎克雷伯菌引物B3-Z、所述肺炎克雷伯菌 引物FIP-Z和所述肺炎克雷伯菌引物BIP-Z這4條引物組成；所述肺炎克雷伯菌反義4引 物組由所述肺炎克雷伯菌引物F3-F、所述肺炎克雷伯菌引物B3-F、所述肺炎克雷伯菌引物FIP-F和所述肺炎克雷伯菌引物BIP-F這4條引物組成。
[0089] 本發(fā)明提供的成套引物中所述肺炎克雷伯菌引物F3-Z是如下el)至e2)中的任 一種單鏈DNA:
[0090]el)SEQIDNo. 5的第14-30位核苷酸的單鏈DNA;
[0091]e2)與el)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0092] 本發(fā)明提供的成套引物中所述肺炎克雷伯菌引物B3-Z是如下e4)至e5)中的任 一種單鏈DNA:
[0093]e4)SEQIDNo. 5的第186-203位核苷酸的反向互補(bǔ)單鏈DNA;
[0094]e5)與e4)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0095] 本發(fā)明提供的成套引物中所述肺炎克雷伯菌引物FIP-Z是如下e7)至e8)中的任 一種單鏈DNA:
[0096]e7)結(jié)構(gòu)為A-linker-B的單鏈DNA，所述A是SEQIDNo. 5的第90-108位核苷酸 組成的單鏈DNA的反向互補(bǔ)單鏈DNA;所述linker是長(zhǎng)度為0-10個(gè)核苷酸的單鏈DNA，所 述B是SEQIDNo. 5的第38-54位核苷酸組成的單鏈DNA;
[0097]e8)與e7)限定的單鏈DNA片段具有85%以上的同一性的單鏈DNA片段。
[0098] 本發(fā)明提供的成套引物中所述肺炎克雷伯菌引物BIP-Z是如下elO)至ell)中的 任一種單鏈DNA:
[0099]e10)結(jié)構(gòu)為A-linker-B的單鏈DNA，所述A是SEQIDNo. 5的第118-140位核苷 酸組成的單鏈DNA;所述linker是長(zhǎng)度為0-10個(gè)核苷酸的單鏈DNA，所述B是SEQIDNo. 5 的第168-185位核苷酸組成的單鏈DNA的反向互補(bǔ)單鏈DNA;
[0100]ell)與elO