一種低聚古羅糖醛酸磷酸酯及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于海洋藥物和免疫增強(qiáng)劑領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種低聚古羅糖醛酸磷 酸酯及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 多糖是一類天然的生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑（Biological response modifier, BRM)，它對(duì) 機(jī)體的特異性和非特異性免疫功能均具有增強(qiáng)作用，例如，香菇多糖和黃芪多糖因顯著的 免疫增強(qiáng)作用而作為免疫增強(qiáng)劑應(yīng)用于藥品或功能制品中。然而，這些多糖的分離、純化工 藝大都較為繁瑣，產(chǎn)業(yè)化成本較高。
[0003] 近年來(lái)，多糖磷酸酯作為一類具有特殊結(jié)構(gòu)的多糖衍生物，被報(bào)道具有免疫調(diào)節(jié)、 抗腫瘤、抗氧化等生物活性。1998年，日本東北大學(xué)的Kitazawa小組從德氏乳桿菌保加利 亞亞種（Lactobacillus delbrueckii ssp. Bulgaricus)中分離得到一種胞外磷酸化多糖 (APS)，研宄表明APS可以明顯促進(jìn)C57BL/6小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的增殖，同時(shí)還可以激活巨 噬細(xì)胞而抑制S180和P388腫瘤細(xì)胞的增殖；然而將APS水解掉磷酸基之后，其活性明顯下 降甚至消失，證明磷酸基在該多糖的免疫增強(qiáng)作用中發(fā)揮重要的作用（Kitazawa H，Harata T，Uemura J，et al.Int J Food Microbiol, 1998, 40 (3): 169 ~175)。基于以上發(fā)現(xiàn)， 2004年日本東北大學(xué)的Sato等發(fā)現(xiàn)通過(guò)化學(xué)的手段將右旋糖酐上共價(jià)接入磷酸基之后， 可以顯著促進(jìn)小鼠脾臟B淋巴細(xì)胞的增殖，促進(jìn)B淋巴細(xì)胞表面CD分子的表達(dá)，以及促進(jìn) IL_10、IFN-y 等細(xì)胞因子 mRNA 的表達(dá)（Sato T，Nishimura_Uemura J，Shimosato T，et al.J Food Protect, 2004, 67 (8): 1719~1724)。這些發(fā)現(xiàn)初步揭示了多糖磷酸酯具備開 發(fā)成為多糖類免疫增強(qiáng)劑的潛力。
[0004] 低聚古羅糖醛酸是一種由海洋褐藻中提取、分離、純化的均聚酸性多糖，是由 L-古羅糖醛酸通過(guò)a_(l，4)-糖苷鍵連接形成的線性聚合物。目前，文獻(xiàn)報(bào)道了低聚古羅 糖醛酸及其衍生物具有抗凝血、抗病毒、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性，然而關(guān)于低聚古 羅糖醛酸磷酸酯及其在免疫增強(qiáng)劑中的應(yīng)用未見文獻(xiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對(duì)目前多糖類免疫調(diào)節(jié)劑的產(chǎn)業(yè)化成本高，以及多糖磷酸酯和低聚古羅糖醛酸 免疫調(diào)節(jié)作用的研宄現(xiàn)狀，本發(fā)明提供了一種低聚古羅糖醛酸磷酸酯及其制備方法和應(yīng) 用。本發(fā)明方法制備得到的低聚古羅糖醛酸磷酸酯能夠用于多糖類免疫調(diào)節(jié)劑藥品、食品 或功能制品中，具有原料易得、工藝簡(jiǎn)單、成本低等特點(diǎn)。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：
[0007] -種低聚古羅糖醛酸磷酸酯，它的結(jié)構(gòu)式如下：
[0008]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種低聚古羅糖醛酸磷酸酯，其特征在于它的結(jié)構(gòu)式如下：
其分子骨架為L(zhǎng)-古羅糖醛酸通過(guò)α -(1，4)-糖苷鍵連接形成的線性聚合物，式中R1=H 或Li、Na、K、Ca、Mg藥用鹽，R2=H或Ρ032-，1? 2取代基為-PO 32-時(shí)的成鹽形式與1^取代基為 藥用鹽時(shí)一致，η彡20。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的低聚古羅糖醛酸磷酸酯，其特征在于：所述低聚古羅糖醛酸 磷酸酯的有機(jī)磷質(zhì)量百分比>2%。
3. 權(quán)利要求1所述的低聚古羅糖醛酸磷酸酯的制備方法，其特征在于它包括以下步 驟：將低聚古羅糖醛酸加入到反應(yīng)器中，然后加入尿素，低聚古羅糖醛酸與尿素的質(zhì)量比為 1 :5~25 ;接著加入N，N-二甲基甲酰胺，低聚古羅糖醛酸與N，N-二甲基甲酰胺的質(zhì)量體積 比為1 :50~100 ;再加入質(zhì)量體積比為85%的磷酸，低聚古羅糖醛酸與磷酸的質(zhì)量體積比為 1 :1~10 ;上述組分混合形成的混合物在110°C~150°C攪拌反應(yīng)0. 5~6小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，收 集反應(yīng)沉淀，用95%乙醇反復(fù)洗滌后，溶于水中，調(diào)節(jié)溶液的pH至8~9 ;除去反應(yīng)過(guò)程中殘 留的尿素以及磷酸鹽后，噴霧干燥，得到低聚古羅糖醛酸磷酸酯。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的低聚古羅糖醛酸磷酸酯的制備方法，其特征在于：所述低聚 古羅糖醛酸的重均分子量〈20 kDa，純度> 80%。
5. 權(quán)利要求1所述的低聚古羅糖醛酸磷酸酯在制備具有免疫增強(qiáng)作用的藥品、食品或 功能制品中的應(yīng)用。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的低聚古羅糖醛酸磷酸酯在制備具有免疫增強(qiáng)作用的藥品、食 品或功能制品中的應(yīng)用，其特征在于：所述低聚古羅糖醛酸磷酸酯能顯著提高免疫功能低 下小鼠的脾臟/體重比值和胸腺/體重比值，能夠抑制環(huán)磷酰胺引起的小鼠免疫器官的萎 縮。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的低聚古羅糖醛酸磷酸酯在制備具有免疫增強(qiáng)作用的藥品、食 品或功能制品中的應(yīng)用，其特征在于：所述低聚古羅糖醛酸磷酸酯能顯著增加免疫功能低 下小鼠血清溶血素的釋放，能夠改善因環(huán)磷酰胺而引起的小鼠體液免疫功能的下降。
8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的低聚古羅糖醛酸磷酸酯在制備具有免疫增強(qiáng)作用的藥品、食 品或功能制品中的應(yīng)用，其特征在于：所述低聚古羅糖醛酸磷酸酯能顯著增強(qiáng)免疫功能低 下小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，具有恢復(fù)因環(huán)磷酰胺所致的小鼠細(xì)胞免疫低下的作用。
9. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的低聚古羅糖醛酸磷酸酯在制備具有免疫增強(qiáng)作用的藥品、食 品或功能制品中的應(yīng)用，其特征在于：所述低聚古羅糖醛酸磷酸酯能顯著增加免疫功能低 下小鼠的廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)，具有增強(qiáng)小鼠單核-巨噬細(xì)胞功能，恢復(fù)因環(huán)磷酰胺導(dǎo)致 的單核-巨噬細(xì)胞功能低下的作用。
10. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的低聚古羅糖醛酸磷酸酯在制備具有免疫增強(qiáng)作用的藥品、 食品或功能制品中的應(yīng)用，其特征在于：所述低聚古羅糖醛酸磷酸酯能顯著增加免疫功能 低下小鼠外周血象中白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和紅細(xì)胞的數(shù)量，對(duì)環(huán)磷酰胺所致的外周血中白細(xì) 胞、淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞數(shù)量下降具有恢復(fù)作用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種低聚古羅糖醛酸磷酸酯及其制備方法和應(yīng)用，低聚古羅糖醛酸磷酸酯的分子骨架為L(zhǎng)-古羅糖醛酸通過(guò)α-（1,4）-糖苷鍵連接形成的線性聚合物，式中R1=H或Li、Na、K、Ca、Mg藥用鹽，R2=H或PO32-，-PO32-的成鹽形式與R1取代基為藥用鹽時(shí)一致，n≤20。本發(fā)明提供的低聚古羅糖醛酸磷酸酯能改善小鼠因環(huán)磷酰胺所致的免疫功能低下，主要表現(xiàn)在升高免疫臟器/體重比值，增強(qiáng)體液免疫和細(xì)胞免疫能力，增強(qiáng)單核-巨噬細(xì)胞的吞噬能力，對(duì)外周血象中白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的數(shù)量也有明顯的升高作用。藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，本發(fā)明提供的低聚古羅糖醛酸磷酸酯可以用于制備具有免疫增強(qiáng)作用的藥品、食品或功能制品。
【IPC分類】C08B37-00, A23L1-09, C07H1-00, C07H11-04, A61P37-04
【公開號(hào)】CN104650253
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510102665
【發(fā)明人】李春霞, 管華詩(shī), 李全才, 辛萌, 李海花, 于廣利
【申請(qǐng)人】中國(guó)海洋大學(xué)
【公開日】2015年5月27日
【申請(qǐng)日】2015年3月9日