一種新型單糖熒光衍生方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種新的熒光衍生試劑及其使用方法，并涉及將其應(yīng)用于生物樣品的 單糖組分分析。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著科學(xué)研宄的發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識到由不同單糖組成的糖鏈?zhǔn)浅鞍踪|(zhì)和核酸 外體現(xiàn)生命現(xiàn)象的第三類生物大分子，糖鏈的研宄已被公認(rèn)為繼蛋白質(zhì)和核酸的研宄后探 索生命奧秘的第三個(gè)里程碑。
[0003]糖鏈在生物體內(nèi)發(fā)揮著重要作用，如細(xì)胞識別，細(xì)胞相互作用，炎癥和疾病惡化 等。另外，糖鏈?zhǔn)呛芏嗖《?、?xì)菌等的受體，并作為腫瘤的標(biāo)記物受到越來越多的關(guān)注。
[0004] 然而，由于糖鏈結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和多樣性，其研宄進(jìn)展遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于蛋白質(zhì)和核酸的 研宄，而單糖組分研宄是深入研宄糖鏈結(jié)構(gòu)和功能的第一步。由于糖分子本身不具有(或 只具有極弱的）發(fā)光性，人們通常先將糖進(jìn)行化學(xué)衍生標(biāo)記，使其具有較強(qiáng)的紫外或熒光吸 收，然后經(jīng)高效液相色譜或毛細(xì)管電泳等技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步解析。
[0005] 目前，人們已經(jīng)開發(fā)出多種單糖衍生標(biāo)記化合物如2-氨基吡啶（2-PA)、2-鄰氨基 苯甲酸（2-AA)和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP)等，但這些方法都存在著一定局限 性：如使用2-PA時(shí)需要過葡聚糖凝膠柱除去過量的2-PA，這使得樣品準(zhǔn)備需要大量的時(shí)間 以及造成樣品損失；使用2-AA標(biāo)記匍糖胺時(shí)，會(huì)有15%的匍糖胺異構(gòu)成甘露糖胺；而PMP標(biāo) 記時(shí)也需要經(jīng)過多次乙醚萃取除去過量PMP，并且PMP標(biāo)記的糖定量效果不可靠?；谝陨?原因有必要開發(fā)出一種能夠避免上述缺陷的新的糖熒光衍生方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上，提供一種新的熒光衍生試劑。本發(fā)明所使 用的化學(xué)衍生物本身不具有熒光特性，與還原糖發(fā)生化學(xué)反應(yīng)后能夠使糖具有熒光特性， 因此反應(yīng)后無須去除多余的衍生物從而可以快速地進(jìn)行HPLC分析，此外此方法可實(shí)現(xiàn)對 糖的定量分析。
[0007]本發(fā)明的另一目的是提供一種將上述熒光衍生試劑應(yīng)用于單糖組分分析的方法。
[0008]本發(fā)明的目的可以通過以下措施達(dá)到：
[0009] 式（I)所示的非熒光化合物在作為還原糖的熒光衍生試劑方面的應(yīng)用，
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 式（I)所示的非巧光化合物在作為還原糖的巧光衍生試劑方面的應(yīng)用，
其中，Ar為雜芳基。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于Ar為化晚基、喀晚基、嗟咐基、異嗟咐基或 化挫咐基。
3. -種單糖巧光衍生方法，其特征在于將一種或多種還原糖，或者含有一種或多種還 原糖的溶液，與堿和式（I)所示的非巧光化合物進(jìn)行縮合和環(huán)化脫水反應(yīng)，得到用于單糖結(jié) 構(gòu)定性或定量檢測的巧光標(biāo)記產(chǎn)物；所述還原糖選自己糖、己糖衍生物、戊糖或戊糖衍生物 中的一種或幾種，式（I)非巧光化合物的結(jié)構(gòu)如下：
其中，Ar為雜芳基。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述還原糖選自式（II)或式（III)化合物 中的一種或幾種，
其中，Ri、R2、Rs或R 4分別獨(dú)立地選自氨、哲基、氨基、己酷基、駿基、磯酸基、面素、硫酸 基或糖基。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于R 1、R2或R 4分別獨(dú)立地選自哲基，R 3選自 氨或哲基。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述還原糖選自半乳糖、甘露糖、古洛糖、 甘露糖、阿拉伯糖、芹菜糖、木糖、巖藻糖或鼠李糖中的一種或幾種。
7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述堿為碳酸氨鋼或碳酸氨鐘，堿的用量 為還原糖總質(zhì)量的0. 1?1倍；反應(yīng)溶液選自水和/或甲醇；反應(yīng)溫度為50?130°C。
8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于Ar為化晚基、喀晚基、嗟咐基、異嗟咐基或 化挫咐基。
9. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述巧光標(biāo)記產(chǎn)物的激發(fā)波長為 300-600皿，吸收波長為360-650皿。
10. -種單糖巧光衍生測定方法，其特征在于將一種或多種還原糖，或者含有一種或多 種還原糖的溶液，與堿和式（I)所示的非巧光化合物進(jìn)行縮合和環(huán)化脫水反應(yīng)，得到巧光標(biāo) 記產(chǎn)物，采用HPLC方法W激發(fā)波長300-600皿、吸收波長360-650皿進(jìn)行測定得到的標(biāo)記產(chǎn) 物；所述還原糖選自己糖、己糖衍生物、戊糖或戊糖衍生物中的一種或幾種，式（I)非巧光 化合物的結(jié)構(gòu)如下：

其中，Ar為雜芳基。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種新型單糖熒光衍生方法和應(yīng)用，本發(fā)明的式（I）所示的非熒光化合物可以應(yīng)用于還原糖的熒光衍生試劑方面，其中Ar為芳基或雜芳基。本發(fā)明所使用的熒光衍生試劑不具有熒光特性，與還原糖發(fā)生化學(xué)反應(yīng)后能夠使糖具有熒光特性，因此反應(yīng)后無須去除多余的衍生物從而可以快速地進(jìn)行HPLC分析，此外，此方法中衍生物能夠與糖進(jìn)行分子量1：1的反應(yīng)從而實(shí)現(xiàn)對糖的定量分析。
【IPC分類】G01N21-64, C07D405-04, C09K11-06
【公開號】CN104592207
【申請?zhí)枴緾N201410083915
【發(fā)明人】約瑟夫·弗戈邁爾, 劉麗, 蔡志鵬, 安德魯·黑根
【申請人】南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年5月6日
【申請日】2014年3月7日