一種由肝素鈉粗品生產(chǎn)那屈肝素鈣的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生化原料藥生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種由肝素鈉粗品生產(chǎn)那屈肝素 鈣的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 那屈肝素鈣是一種低分子肝素鈣鹽，通過(guò)對(duì)豬腸粘膜來(lái)源的肝素進(jìn)行亞硝酸解聚 后分級(jí)，選擇性的去除大部分分子量小于2000的糖鏈而獲得。由一系列未被完全定性的復(fù) 雜寡糖組成，非還原端主要由2-0-硫-a -L-艾杜糖醛酸組成，還原端主要由6-0-硫-2， 5-脫水-D-甘露醇組成。其重均分子量應(yīng)為3600?5000。按干燥品計(jì)算，抗Xa因子活性 為95IU/mg?130IU/mg，抗Xa因子效價(jià)與抗IIa因子效價(jià)比為2. 5?4. 0。那曲肝素鈣臨 床上可以用于預(yù)防靜脈血栓栓塞性疾病，治療已形成的深靜脈血栓，在血液透析中預(yù)防體 外循環(huán)中的血凝塊形成。
[0003] 目前，那屈肝素鈣的通常生產(chǎn)方法是以精品肝素鈉為原料，通過(guò)亞硝酸鹽降解，再 經(jīng)還原、轉(zhuǎn)鈣、過(guò)濾等制成，難以從原料源頭控制最終成品質(zhì)量。在生產(chǎn)過(guò)程中，肝素鈉的質(zhì) 量對(duì)那屈肝素鈣終產(chǎn)品有很大影響。這是因?yàn)楦嗡剽c分子結(jié)構(gòu)異常復(fù)雜，分子量難以固定， 不同工藝來(lái)源的肝素鈉直接影響那屈肝素鈣的產(chǎn)品質(zhì)量。那屈肝素鈣的結(jié)構(gòu)與組成比較 復(fù)雜，在結(jié)構(gòu)確認(rèn)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制上存在一定的不確定性，因而起始原料和生產(chǎn)過(guò)程的研 宄與控制就必須嚴(yán)格，且原料對(duì)后期那屈肝素鈣成品的分子量分布有直接影響。因此開發(fā) 從肝素鈉粗品直接生產(chǎn)那屈肝素鈣的新工藝可以從源頭和工藝控制原料質(zhì)量，更有效保證 產(chǎn)品質(zhì)量，在此前提下，盡可能降低能耗、減少環(huán)保壓力仍是本領(lǐng)域技術(shù)人員需要解決的問(wèn) 題。
[0004] CN104163878A提供了一種從肝素鈉粗品生產(chǎn)那曲肝素鈣的方法，通過(guò)離心、氯化 鈣鹽析轉(zhuǎn)鈣、醋酸鈣鹽析轉(zhuǎn)鈣，所得肝素鈉用于生產(chǎn)那曲肝素鈣：經(jīng)降解還原醇沉后，再經(jīng) 氯化鋇除硫酸根、陰離子樹脂吸附洗脫、氧化、醇沉，烘干得那曲肝素鈣原料。該方法中的肝 素鈉除雜步驟不容易保證用于制備那曲肝素鈣的肝素鈉質(zhì)量，且由肝素鈉制備那曲肝素鈣 時(shí)還使用氯化鋇，毒性大，若有殘留，終產(chǎn)品安全性難以保證，而且增加環(huán)保壓力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于克服上述不足之處，提供一種從肝素鈉粗品直接生產(chǎn)那屈肝素 鈣的制備工藝，生產(chǎn)周期短、生產(chǎn)耗能低、產(chǎn)品質(zhì)量高的制備方法。本發(fā)明以肝素鈉粗品為 原料，采用鹽解工藝進(jìn)行預(yù)處理，然后經(jīng)氧化、離子交換樹脂吸附、洗滌、洗脫，最后經(jīng)超濾、 凍干得肝素鈉精品，肝素鈉精品再經(jīng)解聚、還原、分級(jí)醇沉、轉(zhuǎn)鈣、凍干處理得到那屈肝素 鈣。工藝簡(jiǎn)單易行，適于工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)。
[0006] 下面對(duì)本發(fā)明方法進(jìn)行以下具體描述：
[0007] 一種由肝素鈉粗品生產(chǎn)那屈肝素鈣的方法，該方法包括以下步驟：
[0008] 1、一種由肝素鈉粗品生產(chǎn)那屈肝素鈣的方法，其特征在于該方法包括以下步驟：
[0009] 1)肝素鈉精品的制備：肝素鈉粗品用純化水溶解后加入氯化鈉，同時(shí)調(diào)節(jié)pH值為 8. 5?9. 0,進(jìn)行鹽解，鹽解液離心，得肝素鈉預(yù)處理液；所得肝素鈉預(yù)處理液溫度降至28? 32°C，加入雙氧水，然后加至強(qiáng)堿型陰離子交換樹脂柱中吸附、洗滌、洗脫，收集肝素鈉洗脫 液；洗脫液調(diào)節(jié)PH值至5. 5?6. 0后經(jīng)超濾、凍干得到肝素鈉精品；
[0010] 2)解聚：肝素鈉精品用9?10倍水溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值為2?3,加入亞硝酸 鈉反應(yīng)，得肝素解聚液；
[0011] 3)還原：用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)肝素解聚液的pH值為9?10,加入硼氫化鈉反應(yīng)。 反應(yīng)完成后，用鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH值為3?4,繼續(xù)反應(yīng)30分鐘，得肝素還原液；
[0012] 4)分級(jí)醇沉：用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)肝素還原液的pH值為6. 5?7. 0,然后加入乙 醇，靜置，分離沉淀，得分級(jí)醇沉品；
[0013] 5)轉(zhuǎn)鈣：將分級(jí)醇沉品用水溶解，加入氯化鈣，攪拌30分鐘，然后用0. 45um濾膜 過(guò)濾，在濾液中加入乙醇，靜置，分離沉淀，得到一次轉(zhuǎn)鈣沉淀；重復(fù)一次，得到二次轉(zhuǎn)鈣沉 淀；
[0014] 6)凍干：將二次轉(zhuǎn)鈣沉淀用水溶解，使其濃度達(dá)到10?20%，過(guò)0. 22um濾
[0015] 膜，所得濾液經(jīng)凍干得那屈肝素鈣。
[0016] 其中步驟1)中所述純化水，純化水加入體積和肝素鈉粗品重量的比為8?IOml/ g ;所述氯化鈉加入量和純化水用量體積的比為1/100?2/100g/ml ;鹽解溫度為50°C? 60°C，鹽解時(shí)間為2?3小時(shí)。
[0017] 其中步驟1)中所述雙氧水，加入量為肝素鈉預(yù)處理液體積的1 %?2%，為體積與 體積比。
[0018] 其中步驟1)中所述強(qiáng)堿型陰離子交換樹脂為0C1074或FPA-98。
[0019] 其中步驟1)中所述吸附，吸附速度為每小時(shí)0. 05?0. 06倍樹脂柱體積（0. 05? 0. 06BV/h);所述洗滌，洗滌所用溶液為5. 5 %?6. 0 %的氯化鈉溶液，洗滌速度為每小時(shí) 0.5倍樹脂柱體積（0.5BV/h);所述洗脫，洗脫所用溶液為12%的氯化鈉溶液，洗脫速度為 每小時(shí)0. 05?0. 06倍樹脂柱體積（0. 05?0. 06BV/h)。
[0020] 其中步驟1)中所述超濾使用的超濾膜為截留分子量1000的膜。
[0021] 其中步驟2)中所述亞硝酸鈉加入量為肝素鈉精品重量的2%?3%，為重量與重 量比；所述反應(yīng)溫度為20?25°C，反應(yīng)時(shí)間為1?2小時(shí)。
[0022] 其中步驟3)中所述硼氫化鈉的加入量為肝素鈉精品重量的1%，為重量與重量 比；反應(yīng)時(shí)間為15?18小時(shí)。
[0023] 其中步驟4)中所述乙醇，其加入量為使乙醇濃度達(dá)到50%?55%，靜置時(shí)間為 48?56小時(shí)。
[0024] 其中步驟5)中所述分級(jí)醇沉品用水溶解，水用量和分級(jí)醇沉品重量的比為9? l〇ml/g，為體積重量比，氯化鈣加入量和分級(jí)醇沉品重量相等，乙醇加入量為使乙醇濃度達(dá) 到70%?80%，靜置時(shí)間為24小時(shí)。
[0025] 本發(fā)明以肝素鈉粗品為原料，首先通過(guò)步驟1)得到肝素鈉精品。肝素鈉粗品通過(guò) 鹽解使蛋白和肝素分離，離心去除雜質(zhì)。獲得的肝素鈉預(yù)處理液中加入1% -2%的雙氧水， 在樹脂吸附時(shí)同時(shí)氧化，在樹脂純化時(shí)同時(shí)脫色。在離子交換時(shí)采用梯度洗脫工藝，可以除 去蛋白質(zhì)、核酸、類肝素等雜質(zhì)，且一步完成除雜脫色。與現(xiàn)有肝素鈉精制工藝比較，可免除 多次氧化、多次醇沉步驟，耗能低，不使用有機(jī)溶劑，經(jīng)濟(jì)環(huán)保。制備得到的肝素鈉精品進(jìn)一 步用于那屈肝素鈣的生產(chǎn)，可以有效保證那屈肝素鈣的產(chǎn)品質(zhì)量。
[0026] 在從肝素鈉精品制備那屈肝素鈣的工藝部分，降解、還原、醇沉得到分級(jí)醇沉品 后，只需兩次轉(zhuǎn)鈣步驟，即可過(guò)濾凍干得到那屈肝素鈣，產(chǎn)品質(zhì)量符合歐洲藥典標(biāo)準(zhǔn)。
[0027] 本發(fā)明具有的有益效果：
[0028] 1、肝素鈉精品制備工藝簡(jiǎn)潔。離子交換步驟中，肝素鈉預(yù)處理液中加入雙氧水，在 樹脂吸附時(shí)同時(shí)氧化，在樹脂純化時(shí)同時(shí)脫色；在離子交換時(shí)采用梯度洗脫工藝，可以除去 蛋白質(zhì)、核酸、類肝素等雜質(zhì)，且一步完成除雜脫色。與現(xiàn)有工藝比較，減少了多次氧化、多 次醇沉步驟，耗能低，不使用有機(jī)溶劑，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
[0029] 2、制備得到的肝素鈉精品進(jìn)一步用于那屈肝素鈣的生產(chǎn)，可以有效保證那屈肝素 媽的產(chǎn)品質(zhì)量。
[0030] 3、由該肝素鈉精品制備那屈肝素鈣的工藝也相應(yīng)簡(jiǎn)潔。得到分級(jí)醇沉品后，只需 兩次轉(zhuǎn)鈣，過(guò)濾凍干即可得那曲肝素鈣。
[0031] 4、制備得到的那屈肝素鈣產(chǎn)品質(zhì)量符合歐洲藥典標(biāo)準(zhǔn)。
[0032] 5、本發(fā)明以肝素鈉粗品為原料，得到肝素鈉精品，再用于生產(chǎn)那屈肝素鈣，整個(gè)制 備工藝簡(jiǎn)潔，節(jié)能降耗，生產(chǎn)周期縮短，且能從源頭和工藝有效保證那屈肝素鈣的產(chǎn)品質(zhì) 量。 具體實(shí)施例
[0033] 下述實(shí)施例僅用于闡述實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的方法，不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制，所有基 于本發(fā)明的思路作出的修改和變化都應(yīng)歸于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0034] 本發(fā)明所使用的肝素鈉粗品（效價(jià)為78U/mg)為華北制藥華坤河北生物技術(shù)有 限公司所制；氯化鈉、雙氧水、亞硝酸鈉、氫氧化鈉、硼氫化鈉、鹽酸、乙醇、氯化鈣等為市售； 離子交換樹脂0C1074為德國(guó)朗盛公司產(chǎn)品、FPA-98為美國(guó)羅門哈斯產(chǎn)品。
[0035]實(shí)施例1
[0036]取肝素鈉粗品1公斤，用8L純化水溶解，加入80g氯化鈉，升高溫度至50°C，同 時(shí)用lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為8. 5,在此條件下鹽解2小時(shí)，鹽解液離心得肝素 鈉預(yù)處理液。將肝素鈉預(yù)處理液溫度降至28°C，加入雙氧水，其體積為肝素鈉預(yù)處理液 體積的1%，攪拌均勻后加至裝有15L 0C1074樹脂的樹脂柱中進(jìn)行吸附，控制吸附速度 為0.058￥/11，吸附完畢后的樹脂先用5.5%氯化鈉溶液洗滌，流速0.58￥/11，洗滌至吸光度 A 26cimiS 0. 20、A28tlm^ 0. 20時(shí)，用12%氯化鈉溶液洗脫，洗脫速度0. 05BV/h，檢測(cè)下柱液折 光，當(dāng)折光大于5. 5時(shí)開始收集洗脫液，約收集1BV。收集的洗脫液用4mol/L鹽酸溶液調(diào) 節(jié)pH為5. 5,再經(jīng)1000分子量的超濾膜超濾、凍干得肝素鈉精品335g。稱取肝素鈉精品 150g，用10倍水溶解，用4mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值為2?3,加入3g亞硝酸鈉，在20°C下 反應(yīng)2小時(shí)得肝素解聚液；肝素解聚液用lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為9,加入肝素鈉 重量1 %的硼氫化鈉反應(yīng)15小時(shí)。反應(yīng)完成后，用4mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值為3?4,繼 續(xù)反應(yīng)30分鐘，得肝素還原液；用lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)肝素還原液的pH值為6. 5? 7. 0,然后加入乙醇，使乙醇在溶液中濃度為50%，靜置48小時(shí)，分離沉淀，得分級(jí)醇沉品； 將分級(jí)醇沉品用9倍水溶解，加入與分級(jí)醇沉品相同重量的氯化鈣，攪拌30分鐘，然后用 0. 45um濾膜過(guò)濾，在濾液中加入乙醇，使乙醇在溶液中濃度為70%，靜置24小時(shí)，分離沉 淀，得到一次轉(zhuǎn)鈣沉淀；重復(fù)一次，得