高鹽抽提法從粗品中提取絨促性素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說涉及從粗品中進(jìn)一步提純絨促性素方法。
【背景技術(shù)】
[0002]絨促性素(Chor1nic Gonadotrophin)系自健康孕婦尿中提取、精制而成的一種天然促性腺激素，具有類似黃體生成素的功能。對(duì)女性可促進(jìn)卵泡的成熟及排卵，并維持黃體的功能。對(duì)男性，能刺激睪丸間質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育，增加雄激素分泌，促使睪丸下降和男性第二性征發(fā)育。與尿促性素合用，可模擬生理性的促黃體生成素高峰，而觸發(fā)排卵。臨床上絨促性素至今仍是治療月經(jīng)失調(diào)、無排卵性不孕癥、先兆流產(chǎn)和習(xí)慣性流產(chǎn)、隱睪癥、男性性功能低下等的首選藥物。
[0003]國(guó)際上從20年代就開始研究，1927年Zondek和Ascbheim首先發(fā)現(xiàn)妊娠婦女尿中存在著促性腺激素，1936年Brown和Venning找到在妊娠第60-80天,尿中絨促性素分泌達(dá)到最聞峰。
[0004]1928年Zondek和Ascbheim首先用乙醇沉淀法，從孕婦尿中取得了活性物質(zhì)，其它研究者則進(jìn)行應(yīng)用吸附劑從尿中直接吸附絨促性素的研究，這包括1932年Katzman和Doisy用苯甲酸吸附法，1943年Katzman等人用人造沸石層析吸附法，1954年Loraine和Brown用高嶺土吸附法，1959年難波修一等人用離子交換樹脂吸附法等，用這些方法所取得的絨促性素再用各種純化方法進(jìn)行純化。目前國(guó)際上工業(yè)生產(chǎn)的絨促性素的純度在2500-5000iu/mg，科研的水平則達(dá)到10000iu/mg以上。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供了一種高鹽抽提法即從粗品中進(jìn)一步提取絨促性素的方法，利用絨促性素是一種糖蛋白，一定濃度的鹽溶液能夠促進(jìn)蛋白質(zhì)溶解的性質(zhì)，高鹽抽提過程中，調(diào)節(jié)抽提液中鹽的成分及其濃度，PH值，使絨促性素溶解于抽提液中，然后在抽提液中加入一定濃度的乙醇，使絨促性素沉淀析出。
[0006]在發(fā)明的技術(shù)方案中，還具有以下技術(shù)特征:所述高鹽抽提法包括如下步驟:
1.聞鹽抽提
1.1高鹽抽提液的配制:
0.lmol/L醋酸鈉，0.015mol/L無水氯化鈣，0.5mol/L氯化鈉，加純化水?dāng)嚢枞芙?，滴加冰醋酸，調(diào)pH至5.1 ;然后加95%乙醇，使乙醇終濃度為50%，攪拌混合均勻，置8-12°C保存。
[0007]1.2高鹽抽提:
1.2.1將粗制品按1:20比例慢慢加到高鹽抽提液，在溶液溫度8-12°C條件下攪拌5小時(shí)，靜置過夜。
[0008]1.2.2次日虹吸上清液，離心渣按干粉1:3.3比例加高鹽抽提液，在溶液溫度8-12°C條件下攪拌I小時(shí)，離心取上清液。
[0009]1.2.3合并二次上清液，按1:2.6比例加_20°C以下95%乙醇，邊攪邊加，并繼續(xù)攪拌30分鐘，置低溫8-12°C靜置過夜。
[0010]1.2.4次日虹吸除去上清液，下層沉淀離心收集，沉淀物再用適量工業(yè)丙酮脫水，置六罐離心機(jī)中離心，棄去上清液，沉淀物置用五氧化二磷作吸水劑的真空干燥箱中真空干操，干燥后的即為高鹽抽提干粉。
[0011]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是:
利用絨促性素是一種糖蛋白，一定濃度的鹽溶液能夠促進(jìn)蛋白質(zhì)溶解的性質(zhì)，高鹽抽提過程中，調(diào)節(jié)抽提液中鹽的成分及其濃度，PH值，使絨促性素溶解于抽提液中，然后在抽提液中加入一定濃度的乙醇，使絨促性素沉淀析出。從而使絨促性素高鹽效價(jià)穩(wěn)定在400iu/mg以上。
[0012]此發(fā)明為醫(yī)藥行業(yè)中絨促性素的發(fā)展做出了貢獻(xiàn)，促進(jìn)了國(guó)家的生豬生產(chǎn)；本產(chǎn)品每年出口在10個(gè)億以上，為國(guó)家出口創(chuàng)匯作出貢獻(xiàn)。又是一個(gè)支持三農(nóng)、變廢為寶，環(huán)境保護(hù)的好項(xiàng)目。
【具體實(shí)施方式】
[0013]實(shí)施例1
1.聞鹽抽提
1.1高鹽抽提液的配制:
0.lmol/L醋酸鈉，0.015mol/L無水氯化鈣，0.5mol/L氯化鈉，加純化水?dāng)嚢枞芙?，滴加冰醋酸，調(diào)pH至5.1 ;然后加95%乙醇，使乙醇終濃度為50%，攪拌混合均勻，置8-12°C保存。
[0014]1.2高鹽抽提:
1.2.1將粗制品按1:20比例慢慢加到高鹽抽提液，在溶液溫度8-12°C條件下攪拌5小時(shí)，靜置過夜。
[0015]1.2.2次日虹吸上清液，離心渣按干粉1:3.3比例加高鹽抽提液，在溶液溫度8-12°C條件下攪拌I小時(shí)，離心取上清液。
[0016]1.2.3合并二次上清液，按1:2.6比例加_20°C以下95%乙醇，邊攪邊加，并繼續(xù)攪拌30分鐘，置低溫8-12°C靜置過夜。
[0017]1.2.4次日虹吸除去上清液，下層沉淀離心收集，沉淀物再用適量工業(yè)丙酮脫水，置六罐離心機(jī)中離心，棄去上清液，沉淀物置用五氧化二磷作吸水劑的真空干燥箱中真空干操，干燥后的即為高鹽抽提干粉。
[0018]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對(duì)本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實(shí)施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種高鹽抽提法即從粗品中進(jìn)一步提純絨促性素的方法，其特征在于:在絨促性素粗品中加入高鹽抽提液，控制好抽提液中鹽的成分以及濃度、PH值，使絨促性素溶解在抽提液中，然后在抽提液中加入一定比例的乙醇使絨促性素沉淀析出； 從而使絨促性素高鹽效價(jià)穩(wěn)定在400 iu/mg以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高鹽抽提法從粗品提取絨促性素方法，其特征在于所述高鹽抽提法包括如下步驟: .1.聞鹽抽提 . 1.1高鹽抽提液的配制: .0.lmol/L醋酸鈉，0.015mol/L無水氯化鈣，0.5mol/L氯化鈉，加純化水?dāng)嚢枞芙?，滴加冰醋酸，調(diào)pH至5.1 ;然后加95%乙醇，使乙醇終濃度為50%，攪拌混合均勻，置8-12°C保存； .1.2聞鹽抽提: .1.2.1將粗制品按1:20比例慢慢加到高鹽抽提液，在溶液溫度8-12°C條件下攪拌5小時(shí)，靜置過夜； .1.2.2次日虹吸上清液，離心渣按干粉1:3.3比例加高鹽抽提液，在溶液溫度8-12°C條件下攪拌I小時(shí)，離心取上清液； .1.2.3合并二次上清液，按1:2.6比例加-20°C以下95%乙醇，邊攪邊加，并繼續(xù)攪拌30分鐘，置低溫8-12°C靜置過夜； .1.2.4次日虹吸除去上清液，下層沉淀離心收集，沉淀物再用適量工業(yè)丙酮脫水，置六罐離心機(jī)中離心，棄去上清液，沉淀物置用五氧化二磷作吸水劑的真空干燥箱中真空干操，干燥后的即為高鹽抽提干粉。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用高濃度的鹽溶液抽提法即從絨促性素粗品中進(jìn)一步提純絨促性素的方法。利用一定濃度的高鹽溶液能夠促進(jìn)蛋白質(zhì)溶解的特性，在對(duì)絨促性素進(jìn)行純化抽提過程中，通過調(diào)節(jié)抽提液中鹽的成分，及其濃度，使絨促性素溶解于抽提液中，然后在抽提液中加入一定比例的乙醇使絨促性素沉淀析出。技術(shù)方案是通過在絨促性素粗品高鹽抽提液，對(duì)其分別進(jìn)行抽提、沉淀、脫水、干燥等步驟來實(shí)現(xiàn)從粗品中進(jìn)一步提純絨促性素。從而使絨促性素高鹽效價(jià)穩(wěn)定在400 iu/mg以上。
【IPC分類】C07K1-30, C07K14-59
【公開號(hào)】CN104530216
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410807823
【發(fā)明人】劉冠男, 劉君, 孫延年
【申請(qǐng)人】青島康原藥業(yè)有限公司
【公開日】2015年4月22日
【申請(qǐng)日】2014年12月23日