專利名稱：誘導杜仲愈傷組織并從中提取杜仲膠的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及愈傷組織的誘導及從愈傷組織中提取目的物的方法，特別是涉及杜仲愈傷組織的誘導及從愈傷組織中提取杜仲膠的方法。
目前，國內外生產杜仲膠通常要經過播種、育苗、移栽，育成成齡樹后再從樹葉中提取杜仲膠，需要8-10年時間，土地、人力和物力等的投資較大，提膠方法主要有發(fā)酵法、甲苯法、堿浸法和凍膠法等，技術復雜，費時、費力。
本發(fā)明的目的是提供一種方法，使杜仲愈傷組織在室內大量快速繁殖，并從中提取杜仲膠，實現(xiàn)杜仲膠的快速工廠化生產，降低生產成本，提高生產效率。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取以下技術方案。這種誘導杜仲愈傷組織并從中提取杜仲膠的方法包括(1)培養(yǎng)愈傷組織將杜仲幼苗的葉片和莖段接種于加入了2-6μM2，4-D和5-10μM 6-BA，瓊脂7g/l的B5或MS培養(yǎng)基上，誘導愈傷組織，并進行繼代培養(yǎng)和收獲愈傷組織。
(2)將收獲的愈傷組織在70-80℃下烘干至恒重，然后粉碎、過篩；(3)將粉末浸入苯或三氯甲烷中浸提24-48小時，然后過濾，向濾液中加入1-1.5倍量的甲醇，在25-26℃下沉淀1-2小時，棄去沉淀液，自然干燥沉淀物。
用上述方法生產杜仲膠，簡單、實用、高效。只需播種少量種子，即可獲得大量可用于培養(yǎng)的莖和葉，而且不受季節(jié)限制。愈傷組織采取固體培養(yǎng)，方便簡單，提膠方法也簡單易行，不需要特殊設備，因而成本較低，不需太多的投資，就可進行杜仲膠的工廠化生產。
下面結合實施例對本發(fā)明作進一步說明。
實施例1播種杜仲種子，采取幼苗的葉片和莖段，常規(guī)消毒后，接種于添加了4.5μM2，4-D(2，4一二氯苯氧乙酸)和8.9μM 6-BA(6-芐基腺嘌呤)的B5瓊脂培養(yǎng)基上，瓊脂為7g/l。在26-28℃下進行暗培養(yǎng)，誘導愈傷組織形成，其愈傷組織的誘導率為97.7％。每30-35天對愈傷組織進行一次繼代培養(yǎng)，邊繼代培養(yǎng)邊收獲愈傷組織，將收獲的愈傷組織在75℃下烘干至恒重，粉碎后用60目篩過篩，將所得粉末浸入苯提取液中，苯用量為樣品6倍(重量比)苯液完全浸沒了樣品。浸提32小時，然后過濾，向濾液中加入1.5倍量的甲醇，在25℃下沉淀1小時，棄去沉淀液，自然干燥沉淀物，得到杜仲膠。杜仲膠的得率為2.92％。
實施例2基本方法和步驟與實施例1相同，所不同的是，向B5瓊脂培養(yǎng)基中添加的是2μM2，4-D和5μM6-BA，愈傷組織的誘導率為50.4％。愈傷組織烘干粉末在苯提取液中浸提24小時，杜仲膠的得率為1.80％。
實施例3基本方法和步驟與實施例1相同，所不同的是，向B5瓊脂培養(yǎng)基中添加6μM2，4-D和10μM 6-BA，愈傷組織的誘導率為84.4％，愈傷組織烘干粉末在苯提取液中浸提48小時，濾液在1倍量的甲醇中沉淀2小時，杜仲膠的得率為1.89％。
實施例4基本方法同實施例1，只是采用培養(yǎng)基為MS，其誘導率為90.0％，杜仲膠得率為1.68％。
實施例5基本方法同實施例1，只是溶劑為三氯甲烷，其誘導率仍為90.0％，而得率為1.67％。
實施例6將實施例1得到的自然干燥沉淀物以4-5倍量(重量比)的乙醚溶解，回收乙醚得到精制杜仲膠，其純度為98.2％。
用上述方法得到的杜仲膠，經紅外光譜和紫外光譜檢測、比較，證明與從植株中直接得到的杜仲膠相同。
權利要求
1.一種誘導杜仲愈傷組織并從中提取杜仲膠的方法，其特征在于它包括(1)培養(yǎng)愈傷組織將杜仲幼苗的葉片和莖段接種于加入了2-6μM2，4-D和5-10μM6-BA，瓊脂7g/l的B5或MS培養(yǎng)基上，誘導愈傷組織，并進行繼代培養(yǎng)和收獲愈傷組織。(2)將收獲的愈傷組織在70-80℃下烘干至恒重，然后粉碎、過篩；(3)將粉末浸入苯或三氯甲烷中浸提24-48小時，然后過濾，向濾液中加入1-1.5倍量的甲醇，在25-26℃下沉淀1-2小時，棄去沉淀液，自然干燥沉淀物。
2.根據(jù)權利要求1所述的誘導杜仲愈傷組織并從中提取杜仲膠的方法，其特征在于在所述的2，4-D濃度為4.5μM，6-BA的濃度為8.9μM。
3.根據(jù)權利要求1所述的誘導杜仲愈傷組織并從中提取杜仲膠的方法，其特征在于杜仲幼苗的葉片和莖段在培養(yǎng)基上的培養(yǎng)為26-28℃的溫度下暗培養(yǎng)。
4.根據(jù)權利要求1所述的誘導杜仲愈傷組織并從中提取杜仲膠的方法，其特征在于所述的粉碎后60-80目下過篩。
5.根據(jù)權利要求1所述的誘導杜仲愈傷組織并從中提取杜仲膠的方法，其特征在于所述的用苯或三氯甲烷浸提的時間為32小時。
6.根據(jù)權利要求1所述的誘導杜仲愈傷組織并從中提取杜仲膠的方法，其特征在于所述的自然干燥沉淀物以乙醚溶解，揮掉或回收乙醚得到精制杜仲膠。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種誘導杜仲愈傷組織并從中提取杜仲膠的方法,目的是降低杜仲膠的生產成本,提高生產率。將杜仲幼苗的葉片和莖段接種于添加了2,4－D和6－BA的固體MS或B
文檔編號C08C1/02GK1252215SQ9812069
公開日2000年5月10日 申請日期1998年10月27日 優(yōu)先權日1998年10月27日
發(fā)明者楊振堂, 臧埔, 趙景輝 申請人:楊振堂