本發(fā)明屬于生物技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域，具體地，涉及一種高穩(wěn)定性mcf-7乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法。

背景技術(shù)：

乳腺癌是女性最常見的癌癥，主要包括導(dǎo)管癌和小葉癌。2016年美國ca（acancerjournalforclinicians）公布的最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，美國2016年預(yù)計(jì)將有420840例女性患乳腺癌，占女性新發(fā)惡性腫瘤的38%，居女性惡性腫瘤發(fā)病率第一位，并且死亡人數(shù)將達(dá)52930例。更為嚴(yán)重的是全球的乳腺癌發(fā)病率正在逐年增長。

細(xì)胞培養(yǎng)是生物與健康相關(guān)研究領(lǐng)域的一項(xiàng)重要技術(shù)。隨著生命科學(xué)的迅速發(fā)展，目前細(xì)胞培養(yǎng)已成為細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)和免疫學(xué)等學(xué)科研究的重要基礎(chǔ)。為了深入探討細(xì)胞的生長活動(dòng)規(guī)律、有關(guān)疾病的病理和藥物的藥理（毒理）機(jī)制，開發(fā)具有不同針對(duì)性的細(xì)胞培養(yǎng)方法具有重要意義。

其中，mcf-7乳腺癌細(xì)胞作為人源性高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞，常用于乳腺癌的體內(nèi)外研究。細(xì)胞培養(yǎng)基是培養(yǎng)細(xì)胞的營養(yǎng)物質(zhì)，是生命及再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用的關(guān)鍵技術(shù)。尤其隨著細(xì)胞治療個(gè)性化技術(shù)的興起，體外擴(kuò)增特殊功效的細(xì)胞成了臨床前研究以及臨床治療的重點(diǎn)研發(fā)項(xiàng)目。

本發(fā)明的方便快速的mcf-7乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，應(yīng)用方便，穩(wěn)定性好，復(fù)蘇后的mcf-7細(xì)胞去除了凍存液的影響，生長速度快，細(xì)胞狀態(tài)好，邊界清晰，可以方便應(yīng)用于乳腺癌的原位生長、血管生成以及與其他乳腺癌高轉(zhuǎn)移性細(xì)胞進(jìn)行對(duì)比研究等的相關(guān)研究。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明目的：本發(fā)明提供了一種高穩(wěn)定性mcf-7乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法。

技術(shù)方案：本發(fā)明提供了一種高穩(wěn)定性mcf-7乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，包括以下步驟：將凍存的mcf-7乳腺癌細(xì)胞凍存管從液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min內(nèi)于37℃搖晃至含有mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用凍存液的mcf-7乳腺癌細(xì)胞液完全融化，將mcf-7乳腺癌細(xì)胞液加入到盛有2-3ml新鮮mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基的離心管中，用移液槍上下吹打20-30次，于1000-1500g/min的轉(zhuǎn)速下離心3-10min；移去上清液，加入1-2ml的新鮮mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基，用移液槍上下吹打40-50次，然后均勻的加入到盛有7-9ml的新鮮mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，于37℃，5%co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；所述mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用凍存液以重量組分計(jì)，包括以下組分：二甲基亞砜5-15份、羥甲基淀粉2-5份、山梨糖3-12份、維生素c1-4份、50%高滲葡萄糖0.8-3份、丙二醇1-1.5份、(s)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基）磺?；?2-甲基-1,4-二氮環(huán)庚烷0.3-3份和基礎(chǔ)培養(yǎng)基80-90份。本發(fā)明所述的高穩(wěn)定性mcf-7乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，應(yīng)用方便，穩(wěn)定性好，復(fù)蘇后的mcf-7細(xì)胞去除了凍存液的影響，細(xì)胞生長速度快，細(xì)胞狀態(tài)好，邊界清晰，可以方便應(yīng)用于乳腺癌的原位生長、血管生成以及與其他乳腺癌高轉(zhuǎn)移性細(xì)胞進(jìn)行對(duì)比研究等的相關(guān)研究。其中，50%高滲葡萄糖為滲透性保護(hù)液，而(s)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮環(huán)庚烷則抑制細(xì)胞活動(dòng)和基因表達(dá)，維生素c的抗氧化性好，在保證休眠細(xì)胞的營養(yǎng)的同時(shí)還可以顯著減少對(duì)細(xì)胞的損傷，提高凍存細(xì)胞的存活率，并且在增殖方面也保持很好的狀態(tài)。

進(jìn)一步的，上述的高穩(wěn)定性mcf-7乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，所述mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基包括70-90%的基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及10-30%的胎牛血清。mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基，組分合理，可以進(jìn)一步為復(fù)蘇的細(xì)胞的提供營養(yǎng)物質(zhì)。

進(jìn)一步的，上述的高穩(wěn)定性mcf-7乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，包括以下組分：葡萄糖82-88份、碳酸氫鈉12-25份、丙酮酸鈉10-16份、轉(zhuǎn)鐵蛋白3-8份、氯化鉀35-45份、無水硫酸鎂6-10份、氯化鈉70-78份、氯化鋰5-8份、無水磷酸二氫鈉10-14份、葉酸0.3-0.5份、肌醇0.8-1.2份、煙酰胺0.3-0.6份、無水氯化鈣25-35份、硝酸鐵0.2-0.4份、丁二酸6-8份、丁二酸鈉12-16份、d-泛酸鈣0.3-0.6份、酒石酸膽堿0.6-0.8份、核黃素0.1-0.3份、鹽酸硫胺0.2-0.4份、鹽酸吡哆辛0.3-0.5份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.3-0.6份、亞麻油1-1.5份、聚脂肪酸酯0.8-1.6份、酚紅鈉1-1.3份和去離子水100份。

進(jìn)一步的，上述的高穩(wěn)定性mcf-7乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，還包括3-8份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計(jì)，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸5-10份、l-鹽酸胱氨酸3-8份、l-絲氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、l-鹽酸組氨酸4-6份、l-異亮氨酸8-20份、l-亮氨酸7-18份、l-鹽酸賴氨酸10-20份、l-甲硫氨酸1-6份、l-苯丙氨酸2-8份、l-蘇氨酸5-15份、l-色氨酸1-3份、l-酪氨酸5-9份和l-纈氨酸8-12份。

進(jìn)一步的，上述的高穩(wěn)定性mcf-7乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，還包括2-5份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計(jì)，由以下組分組成：胰島素生長因子3-8份、白介素62-5份、白介素101-4份、白介素123-6份、tnf-β2-10份、gm-csf1-5份?；A(chǔ)培養(yǎng)基組分合理，營養(yǎng)豐富，可以提高mcf-7乳腺癌細(xì)胞復(fù)蘇后生長的營養(yǎng)物質(zhì)，mcf-7細(xì)胞生長速度快，細(xì)胞狀態(tài)好，邊界清晰，鏡下觀察透亮、分裂相更多、形態(tài)及分散度佳，可以有利于乳腺癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)研究。

進(jìn)一步的，上述的高穩(wěn)定性mcf-7乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素?？梢杂行Х乐箯?fù)蘇的細(xì)胞被污染。

進(jìn)一步的，上述的高穩(wěn)定性mcf-7乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，所述青霉素選自10000u/ml，所述鏈霉素選自10000μg/ml。青霉素和鏈霉素活性好，效果佳。

有益效果：本發(fā)明所述的高穩(wěn)定性mcf-7乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，應(yīng)用方便，穩(wěn)定性好，復(fù)蘇后的mcf-7細(xì)胞去除了凍存液的影響，細(xì)胞生長速度快，細(xì)胞狀態(tài)好，邊界清晰，可以方便應(yīng)用于乳腺癌的原位生長、血管生成以及與其他乳腺癌高轉(zhuǎn)移性細(xì)胞進(jìn)行對(duì)比研究等的相關(guān)研究。

具體實(shí)施方式

下面將通過幾個(gè)具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明，這些實(shí)施例只是為了說明問題，并不是一種限制。

實(shí)施例1

一種高穩(wěn)定性mcf-7乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，包括以下步驟：將凍存的mcf-7乳腺癌細(xì)胞凍存管從液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min內(nèi)于37℃搖晃至含有mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用凍存液的mcf-7乳腺癌細(xì)胞液完全融化，將mcf-7乳腺癌細(xì)胞液加入到盛有2ml新鮮mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基的離心管中，用移液槍上下吹打20次，于1000g/min的轉(zhuǎn)速下離心10min；移去上清液，加入1ml的新鮮mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基，用移液槍上下吹打40次，然后均勻的加入到盛有7ml的新鮮mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，于37℃，5%co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

其中，所述mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基包括70%的基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及30%的胎牛血清。此外，所述mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用凍存液以重量組分計(jì)，包括以下組分：二甲基亞砜5份、羥甲基淀粉2份、山梨糖3份、維生素c1份、50%高滲葡萄糖0.8份、丙二醇1份、(s)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基）磺?；?2-甲基-1,4-二氮環(huán)庚烷0.3份和基礎(chǔ)培養(yǎng)基80份。

其中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，包括以下組分：葡萄糖82份、碳酸氫鈉12份、丙酮酸鈉10份、轉(zhuǎn)鐵蛋白3份、氯化鉀35份、無水硫酸鎂6份、氯化鈉70份、氯化鋰5份、無水磷酸二氫鈉10份、葉酸0.3份、肌醇0.8份、煙酰胺0.3份、無水氯化鈣25份、硝酸鐵0.2份、丁二酸6份、丁二酸鈉12份、d-泛酸鈣0.3份、酒石酸膽堿0.6份、核黃素0.1份、鹽酸硫胺0.2份、鹽酸吡哆辛0.3份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.3份、亞麻油1份、聚脂肪酸酯0.8份、酚紅鈉1份和去離子水100份。

另，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括3份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計(jì)，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸5份、l-鹽酸胱氨酸3份、l-絲氨酸3份、甘氨酸1份、l-鹽酸組氨酸4份、l-異亮氨酸8份、l-亮氨酸7份、l-鹽酸賴氨酸10份、l-甲硫氨酸1份、l-苯丙氨酸2份、l-蘇氨酸5份、l-色氨酸1份、l-酪氨酸5份和l-纈氨酸8份。

再，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括2份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計(jì)，由以下組分組成：胰島素生長因子3份、白介素62份、白介素101份、白介素123份、tnf-β2份、gm-csf1份。

此外，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素。并且，所述青霉素選自10000u/ml，所述鏈霉素選自10000μg/ml。

實(shí)施例2

一種高穩(wěn)定性mcf-7乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，包括以下步驟：將凍存的mcf-7乳腺癌細(xì)胞凍存管從液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min內(nèi)于37℃搖晃至含有mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用凍存液的mcf-7乳腺癌細(xì)胞液完全融化，將mcf-7乳腺癌細(xì)胞液加入到盛有3ml新鮮mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基的離心管中，用移液槍上下吹打30次，于1500g/min的轉(zhuǎn)速下離心3min；移去上清液，加入2ml的新鮮mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基，用移液槍上下吹打50次，然后均勻的加入到盛有9ml的新鮮mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，于37℃，5%co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

其中，所述mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基包括90%的基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及10%的胎牛血清。此外，所述mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用凍存液以重量組分計(jì)，包括以下組分：二甲基亞砜15份、羥甲基淀粉5份、山梨糖12份、維生素c4份、50%高滲葡萄糖3份、丙二醇1.5份、(s)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基）磺?；?2-甲基-1,4-二氮環(huán)庚烷3份和基礎(chǔ)培養(yǎng)基90份。

其中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，包括以下組分：葡萄糖88份、碳酸氫鈉25份、丙酮酸鈉16份、轉(zhuǎn)鐵蛋白8份、氯化鉀45份、無水硫酸鎂10份、氯化鈉78份、氯化鋰8份、無水磷酸二氫鈉14份、葉酸0.5份、肌醇1.2份、煙酰胺0.6份、無水氯化鈣35份、硝酸鐵0.4份、丁二酸8份、丁二酸鈉16份、d-泛酸鈣0.6份、酒石酸膽堿0.8份、核黃素0.3份、鹽酸硫胺0.4份、鹽酸吡哆辛0.5份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.6份、亞麻油1.5份、聚脂肪酸酯1.6份、酚紅鈉1.3份和去離子水100份。

另，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括8份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計(jì)，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸10份、l-鹽酸胱氨酸8份、l-絲氨酸6份、甘氨酸5份、l-鹽酸組氨酸6份、l-異亮氨酸20份、l-亮氨酸18份、l-鹽酸賴氨酸20份、l-甲硫氨酸6份、l-苯丙氨酸8份、l-蘇氨酸15份、l-色氨酸3份、l-酪氨酸9份和l-纈氨酸12份。

再，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括5份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計(jì)，由以下組分組成：胰島素生長因子8份、白介素65份、白介素104份、白介素126份、tnf-β10份、gm-csf5份。

此外，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素。并且，所述青霉素選自10000u/ml，所述鏈霉素選自10000μg/ml。

實(shí)施例3

一種高穩(wěn)定性mcf-7乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，包括以下步驟：將凍存的mcf-7乳腺癌細(xì)胞凍存管從液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min內(nèi)于37℃搖晃至含有mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用凍存液的mcf-7乳腺癌細(xì)胞液完全融化，將mcf-7乳腺癌細(xì)胞液加入到盛有3ml新鮮mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基的離心管中，用移液槍上下吹打25次，于1200g/min的轉(zhuǎn)速下離心8min；移去上清液，加入1ml的新鮮mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基，用移液槍上下吹打45次，然后均勻的加入到盛有8ml的新鮮mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，于37℃，5%co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

其中，所述mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基包括80%的基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及20%的胎牛血清。此外，所述mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用凍存液以重量組分計(jì)，包括以下組分：二甲基亞砜12份、羥甲基淀粉3份、山梨糖8份、維生素c2份、50%高滲葡萄糖2份、丙二醇1.2份、(s)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基）磺?；?2-甲基-1,4-二氮環(huán)庚烷0.3-3份和基礎(chǔ)培養(yǎng)基85份。

其中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，包括以下組分：葡萄糖86份、碳酸氫鈉18份、丙酮酸鈉12份、轉(zhuǎn)鐵蛋白6份、氯化鉀40份、無水硫酸鎂8份、氯化鈉75份、氯化鋰6份、無水磷酸二氫鈉12份、葉酸0.4份、肌醇1份、煙酰胺0.5份、無水氯化鈣30份、硝酸鐵0.3份、丁二酸7份、丁二酸鈉14份、d-泛酸鈣0.5份、酒石酸膽堿0.7份、核黃素0.2份、鹽酸硫胺0.3份、鹽酸吡哆辛0.4份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.5份、亞麻油1.2份、聚脂肪酸酯1.2份、酚紅鈉1.2份和去離子水100份。

另，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括5份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計(jì)，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸8份、l-鹽酸胱氨酸6份、l-絲氨酸5份、甘氨酸4份、l-鹽酸組氨酸5份、l-異亮氨酸12份、l-亮氨酸10份、l-鹽酸賴氨酸16份、l-甲硫氨酸3份、l-苯丙氨酸6份、l-蘇氨酸9份、l-色氨酸2份、l-酪氨酸6份和l-纈氨酸10份。

再，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括3份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計(jì)，由以下組分組成：胰島素生長因子4份、白介素64份、白介素103份、白介素125份、tnf-β8份、gm-csf3份。

此外，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素。并且，所述青霉素選自10000u/ml，所述鏈霉素選自10000μg/ml。

實(shí)施例4

一種高穩(wěn)定性mcf-7乳腺癌細(xì)胞的復(fù)蘇方法，包括以下步驟：將凍存的mcf-7乳腺癌細(xì)胞凍存管從液氮或者-80℃冰箱中取出，在取出后1min內(nèi)于37℃搖晃至含有mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用凍存液的mcf-7乳腺癌細(xì)胞液完全融化，將mcf-7乳腺癌細(xì)胞液加入到盛有3ml新鮮mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基的離心管中，用移液槍上下吹打20次，于1000-1500g/min的轉(zhuǎn)速下離心5min；移去上清液，加入2ml的新鮮mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基，用移液槍上下吹打45次，然后均勻的加入到盛有8ml的新鮮mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，于37℃，5%co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

其中，所述mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基包括70-90%的基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及25%的胎牛血清。此外，所述mcf-7乳腺癌細(xì)胞專用凍存液以重量組分計(jì)，包括以下組分：二甲基亞砜5份、羥甲基淀粉2份、山梨糖12份、維生素c4份、50%高滲葡萄糖2份、丙二醇1.2份、(s)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基）磺?；?2-甲基-1,4-二氮環(huán)庚烷1.5份和基礎(chǔ)培養(yǎng)基90份。

其中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，包括以下組分：葡萄糖82份、碳酸氫鈉25份、丙酮酸鈉16份、轉(zhuǎn)鐵蛋白5份、氯化鉀40份、無水硫酸鎂6份、氯化鈉78份、氯化鋰6份、無水磷酸二氫鈉12份、葉酸0.4份、肌醇1.2份、煙酰胺0.3份、無水氯化鈣28份、硝酸鐵0.2份、丁二酸8份、丁二酸鈉12份、d-泛酸鈣0.6份、酒石酸膽堿0.8份、核黃素0.1份、鹽酸硫胺0.4份、鹽酸吡哆辛0.3份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.6份、亞麻油1.2份、聚脂肪酸酯0.8份、酚紅鈉1.3份和去離子水100份。

另，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括5份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計(jì)，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸5份、l-鹽酸胱氨酸8份、l-絲氨酸3份、甘氨酸4份、l-鹽酸組氨酸5份、l-異亮氨酸12份、l-亮氨酸7份、l-鹽酸賴氨酸10份、l-甲硫氨酸6份、l-苯丙氨酸8份、l-蘇氨酸9份、l-色氨酸2份、l-酪氨酸8份和l-纈氨酸8份。

再，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括2份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計(jì)，由以下組分組成：胰島素生長因子3份、白介素65份、白介素103份、白介素125份、tnf-β8份、gm-csf5份。

此外，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素。并且，所述青霉素選自10000u/ml，所述鏈霉素選自10000μg/ml。

以上所述僅是發(fā)明的幾個(gè)實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)，這些改進(jìn)也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。