本發(fā)明涉及醫(yī)藥化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一類具抗腫瘤活性的甘草查爾酮A二氫氨基嘧啶類化合物及其合成方法。

背景技術(shù)：

腫瘤已嚴(yán)重威脅到人類的健康，尋找有效安全、毒副作用小的抗腫瘤藥物一直是腫瘤藥物研發(fā)工作者孜孜以求的目標(biāo)。隨著藥物化學(xué)的發(fā)展，以嘧啶環(huán)為結(jié)構(gòu)母核的化合物在腫瘤治療中的作用引起廣泛關(guān)注。

甘草查爾酮A被視為脹果甘草的種屬特異性成分，其結(jié)構(gòu)如下所示。

近年來，研究發(fā)現(xiàn)甘草查爾酮A具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗腫瘤、降脂、解痙和抗瘧抗寄生蟲等多種生物活性，在醫(yī)藥領(lǐng)域具有很大的開發(fā)價(jià)值。但甘草查爾酮A是平面性強(qiáng)的分子，水溶性差，所以，通過合理、安全的結(jié)構(gòu)修飾來增強(qiáng)甘草查爾酮A的水溶性，開發(fā)天然產(chǎn)物甘草查爾酮A的更多生物活性成為亟待解決的問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一類具抗腫瘤活性的甘草查爾酮A二氫氨基嘧啶類化合物及其合成方法。

本發(fā)明的實(shí)現(xiàn)過程如下：

結(jié)構(gòu)通式(I)所示的化合物：

其中：R為C1-C4的烷基，C1-C4的烷氧基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的芐基、硝基；所述的取代基為：鹵素、C1-C4的烷氧基、氰基、三氟甲基、苯氧基。

結(jié)構(gòu)通式（I）所示的化合物的合成方法，以甘草查爾酮A、胍類化合物為原料，以有機(jī)堿作為催化劑，在乙醇作為反應(yīng)溶劑的條件下進(jìn)行合成；

。

具體包括如下步驟，

（1）向反應(yīng)器中按摩爾比為1:1~1:1.5加入甘草查爾酮A和胍類化合物，加入有機(jī)溶劑混合均勻，加入有機(jī)堿催化劑，加熱到60℃~85℃，回流反應(yīng)3~8小時(shí)；

（2）將步驟（1）反應(yīng)體系的固液混合物減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物。

步驟（1）中所述的甘草查爾酮A：胍類化合物的摩爾比范圍為1:1 ~1:1.3；有機(jī)溶劑為乙醇；反應(yīng)溫度為70℃~80℃；有機(jī)堿催化劑為三乙胺。

嘧啶環(huán)是很多天然化合物和合成藥物中的核心結(jié)構(gòu)單元，作為雜環(huán)化合物中的一個(gè)重要分支，嘧啶類化合物因其具有高效、低毒，以及其環(huán)上取代基可以多方位的變換而在藥物領(lǐng)域中得到廣泛應(yīng)用。將嘧啶環(huán)引入甘草查爾酮A的化學(xué)結(jié)構(gòu)中，有望增強(qiáng)其生物活性，提高選擇性，具有重要的理論價(jià)值和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：原料環(huán)保，生產(chǎn)成本低，操作安全性高，反應(yīng)條件溫和，可實(shí)現(xiàn)反應(yīng)原料的充分利用，適用于工業(yè)化生產(chǎn)，解決了現(xiàn)有技術(shù)產(chǎn)率低的問題，同時(shí)將嘧啶環(huán)引入到甘草查爾酮A的化學(xué)結(jié)構(gòu)中，對(duì)探究該類化合物的生物活性與總結(jié)構(gòu)效關(guān)系具有重要的理論價(jià)值和應(yīng)用價(jià)值。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述。這些實(shí)施例僅是出于解釋說明的目的，而不限制本發(fā)明的范圍和實(shí)質(zhì)。

一類具抗腫瘤活性的甘草查爾酮A二氫氨基嘧啶類化合物的合成方法，具體包含如下步驟：

（1）向反應(yīng)器中按摩爾比為1:1~1:1.5加入甘草查爾酮A、胍類化合物，加乙醇混合均勻，其中溶劑體積小于反應(yīng)器容積的2/3，加入有機(jī)堿催化劑三乙胺，置于磁力攪拌器上攪拌，加熱到60℃~85℃，回流反應(yīng)3~8小時(shí)；

（2）反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時(shí)監(jiān)測反應(yīng)的進(jìn)行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置；

（3）將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物。

本發(fā)明部分優(yōu)選實(shí)施方案中的化合物結(jié)構(gòu)式如下所示：

實(shí)施例1

4-（6-（4-羥基苯基）-2-亞氨基-3-甲基-2,3,4,5-四氫嘧啶-4-基）-5-甲氧基-2-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯酚（1）的制備。

向反應(yīng)器中加入甘草查爾酮A200mg(1mmol)和1-甲基胍56.16mg（1.3mmol），加50mL乙醇做溶劑，加0.5mL三乙胺作為催化劑，置于磁力攪拌器上攪拌，加熱到75℃，回流反應(yīng)3小時(shí)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時(shí)監(jiān)測反應(yīng)的進(jìn)行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物127.87mg，收率為54.98%。

棕黃色固體粉末。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.85 (2H, d), 6.95 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, t), 3.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 3.04 (3H, s), 1.76 (1H, m), 1.69 (6H, s) 1.51 (1H, m); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 156.1, 155.0, 153.6, 148.8, 133.2, 129.1, 125.2, 116.4, 116.0, 111.1, 103.8, 57.1, 56.1, 40.8, 39.8, 31.0, 28.6; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 395.3635, found: 395.3042。

實(shí)施例2

4-（3-芐基-6-（4-羥基苯基）-2-亞氨基-2,3,4,5-四氫嘧啶-4-基）-5-甲氧基-2-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯酚（2）的制備。

向反應(yīng)器中加入甘草查爾酮A200mg(1mmol)和1-芐基胍114.63mg（1.3mmol），加50mL乙醇做溶劑，加0.5mL三乙胺作為催化劑，置于磁力攪拌器上攪拌，加熱到75℃，回流反應(yīng)6小時(shí)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時(shí)監(jiān)測反應(yīng)的進(jìn)行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物164.53mg，收率為59.28%。

棕黃色固體粉末。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K): d 7.85 (2H, d), 7.26-7.23 (5H, m), 6.95 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 3.9 (1H, s), 3.83 (3H, s), 3.81 (2H, s), 1.76 (1H, m), 1.69 (6H, s), 1.51 (1H, m) ; ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 156.1, 155.0, 153.0, 153.6, 148.8, 136.4, 133.2, 129.1, 128.5, 127.9, 127.0, 125.2, 116.4,116.0,111.1, 103.8, 56.1, 54.5, 47.3, 41.1, 39.8,28.6 ; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 450.4595, found: 450.3804。

實(shí)施例3

4-（6-（4-羥基苯基）-2-亞氨基-3-苯基-2,3,4,5-四氫嘧啶-4-基）-5-甲氧基-2-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯酚（3）的制備。

向反應(yīng)器中加入甘草查爾酮A200mg(1mmol)和1-苯基胍103.85mg（1.3mmol），加50mL乙醇做溶劑，加0.5mL三乙胺作為催化劑，置于磁力攪拌器上攪拌，加熱到75℃，回流反應(yīng)5小時(shí)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時(shí)監(jiān)測反應(yīng)的進(jìn)行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物136.54mg，收率為50.71%。

棕黃色固體粉末。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.85 (2H, d), 7.23 (2H, t), 6.98 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.77 (1H, t), 6.60 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, t), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 3.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 1.88 (1H, m), 1.69 (6H, s), 1.63 (1H, m) ; ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 144.4, 133.2, 129.5, 129.1, 125.2, 121.6, 120.8, 119.4, 116.9, 116.0,111.1, 103.8, 65.2, 56.1, 40.1, 39.8, 28.6 ; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 457.3329, found: 457.2917。

實(shí)施例4

4-（3-（2-氟苯基）-6-（4-羥基苯基）-2-亞氨基-2,3,4,5-四氫嘧啶-4-基）-5-甲氧基-2-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯酚（4）的制備。

向反應(yīng)器中加入甘草查爾酮A200mg(1mmol)和1-（2-氟苯基）胍117.68mg（1.3mmol），加50mL乙醇做溶劑，加0.5mL三乙胺作為催化劑，置于磁力攪拌器上攪拌，加熱到75℃，回流反應(yīng)6小時(shí)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時(shí)監(jiān)測反應(yīng)的進(jìn)行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物131.69mg，收率為47.05%。

棕色固體粉末。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.85 (2H, d), 7.02 (1H, d), 7.00 (1H, t), 6.98 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.83 (1H, d), 6.59 (1H, t), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 3.9 (1H, m), 3.83 (3H, s), 1.88 (1H, m), 1.69 (6H, s), 1.63 (1H, m) ; ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 133.2, 130.5, 129.1, 128.3, 125.2, 121.8, 121.6, 116.9, 116.3, 116.0, 115.3, 111.1, 103.8, 65.2, 56.1, 40.7, 39.8, 28.6, 17.2; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 474.4599, found：474.4302。

實(shí)施例5

4-（3-（3-溴苯基）-6-（4-羥基苯基）-2-亞氨基-2,3,4,5-四氫嘧啶-4-基）-5-甲氧基-2-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯酚（5）的制備。

向反應(yīng)器中加入甘草查爾酮A200mg(1mmol)和1-（3-溴苯基）胍164.47mg（1.3mmol），加50mL乙醇做溶劑，加0.5mL三乙胺作為催化劑，置于磁力攪拌器上攪拌，加熱到75℃，回流反應(yīng)8小時(shí)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時(shí)監(jiān)測反應(yīng)的進(jìn)行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物137.33mg，收率為43.48%。

棕色固體粉末。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K): d 7.85 (2H, d), 6.92 (1H, m), 6.85 (2H, d), 6.79 (1H, s), 6.66 (1H, s), 6.59 (1H, m), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, t), 3.9 (1H, m), 3.83 (3H, s), 1.88 (1H, m), 1.69 (6H, s), 1.63 (1H, m); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 146.6, 133.2, 130.6, 129.1, 128.4, 125.2, 123.9, 121.6, 120.0, 118.4, 116.9, 116.0, 112.7, 111.1, 103.8, 65.2, 56.1, 40.7, 39.8, 28.6 ; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 475.3234, found：475.2763。

實(shí)施例6

4-（3-（3-氯苯基）-6-（4-羥基苯基）-2-亞氨基-2,3,4,5-四氫嘧啶-4-基）-5-甲氧基-2-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯酚（6）的制備。

向反應(yīng)器中加入甘草查爾酮A200mg(1mmol)和1-（3-氯苯基）胍130.32mg（1.3mmol），加50mL乙醇做溶劑，加0.5mL三乙胺作為催化劑，置于磁力攪拌器上攪拌，加熱到70℃，回流反應(yīng)6小時(shí)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時(shí)監(jiān)測反應(yīng)的進(jìn)行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物138.93mg，收率為47.97%。

棕色固體粉末。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K): d 7.85 (2H, d), 7.17 (1H, t), 6.98 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.81 (1H, d), 6.78 (1H, m), 6.48 (1H, m), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, t), 3.9 (1H, m), 3.89 (3H, s), 1.88 (1H, m), 1.69 (6H, s), 1.63 (1H, m) ; ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm):164.4, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 145.8, 135.1, 133.2, 130.9, 129.1, 128.5, 127.7, 125.2, 121.6, 120.7, 118.3 116.9, 116.0, 111.1, 103.8, 65.2, 56.1, 40.7, 39.8, 28.6, HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd:490.7919, found:490.6086。

實(shí)施例7

4-（6-（4-羥基苯基）-2-亞氨基-3-（3-甲氧基苯基）-2,3,4,5-四氫嘧啶-4-基）-5-甲氧基-2-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯酚（7）的制備。

向反應(yīng)器中加入甘草查爾酮A200mg(1mmol)和1-（3-甲基苯基）胍126.92mg（1.3mmol），加50mL乙醇做溶劑，加0.5mL三乙胺作為催化劑，置于磁力攪拌器上攪拌，加熱到80℃，回流反應(yīng)6小時(shí)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時(shí)監(jiān)測反應(yīng)的進(jìn)行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物139.42mg，收率為48.58%。

棕色固體粉末。¹H NMR(400MHz, DMSO-d6, 300K):d 7.85(2H, d, J=7.52Hz), 7.12(1H, t), 6.95(1H, s), 6.85 (2H, d, J=7.52Hz), 6.41(1H, s), 6.31(1H, m), 6.30(1H, q), 6.16(1H, m), 6.15(1H, m), 5.35(2H, s), 5.00-4.98(2H, m), 3.9(1H, t), 3.83(6H, s), 1.88-1.63(2H, m), 1.69(6H, s). ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 164.6, 161.4, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 145.4, 133.2, 129.1, 128.3, 125.2, 124.6, 121.6, 117.3, 116.4, 111.4, 109.2, 103.8, 65.2, 56.1, 55.8, 40.7, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd: 486.23, found:486.57。

實(shí)施例8

4-（6-（4-羥基苯基）-2-亞氨基-3-（3-苯氧基苯基）-2,3,4,5-四氫嘧啶-4-基）-5-甲氧基-2-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯酚（8）的制備。

向反應(yīng)器中加入甘草查爾酮A200mg(1mmol)和1-（3-苯氧基苯基）胍174.61mg（1.3mmol），加50mL乙醇做溶劑，加0.5mL三乙胺作為催化劑，置于磁力攪拌器上攪拌，加熱到75℃，回流反應(yīng)6小時(shí)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時(shí)監(jiān)測反應(yīng)的進(jìn)行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物139.44mg，收率為43.08%。

棕色固體粉末。¹H NMR(400MHz, DMSO-d6, 300K):d 7.85(2H, d, J=7.52Hz), 7.41(2H, t), 7.19(1H, m), 7.17(1H, m), 7.14(2H, m), 6.95(1H, s), 6.85(2H, d, J=7.52Hz), 6.41(1H, s), 6.32(1H, m), 6.30(2H, m), 6.19(1H, m), 5.35(2H, s), 5.00-4.98(2H, m), 3.9(1H, t), 3.83(3H, s), 1.88-1.63(2H, m), 1.69(6H, s). ¹³CNMR(75MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 164.6, 160.8, 157.8, 157.0, 155.1, 154.7, 148.8, 144.1, 133.2, 129.1, 128.3, 125.2, 121.7, 118.9, 116.4, 112.5, 111.1, 107.3, 103.8, 99.8, 65.2, 56.1, 40.7, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd: 548.25, found:548.64。

實(shí)施例9

4-（6-（4-羥基苯基）-2-亞氨基-3-（4-甲氧基苯基）-2,3,4,5-四氫嘧啶-4-基）-5-甲氧基-2-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯酚（9）的制備。

向反應(yīng)器中加入甘草查爾酮A200mg(1mmol)和1-（4-甲基苯基）胍126.92mg（1.3mmol），加50mL乙醇做溶劑，加0.5mL三乙胺作為催化劑，置于磁力攪拌器上攪拌，加熱到60℃，回流反應(yīng)6小時(shí)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時(shí)監(jiān)測反應(yīng)的進(jìn)行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物132.43mg，收率為46.15%。

棕色固體粉末。¹H NMR(400MHz, DMSO-d6, 300K):d 7.85(2H, d, J=7.52Hz), 6.95(1H, s), 6.85(2H, d, J=7.52Hz), 6.77(2H, d, J=7.43Hz), 6.71(2H, d, J=7.34Hz), 6.41(1H, s), 6.30(1H, q), 5.35(2H, s), 5.00-4.98(2H, m), 3.9(1H, t), 3.83(6H, s), 1.88-1.63(2H, m), 1.69(6H, s). ¹³CNMR(75MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 151.7, 148.8, 136.7, 133.2, 129.1, 128.3, 125.2, 121.6, 116.4, 115.1, 114.5, 111.1, 103.8, 65.2, 56.1, 55.8, 40.7, 39.8, 28.6. HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 486.23, found:486.57。

實(shí)施例10

4-（6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-2-亞氨基-5,6-二氫吡啶1（2H） - 基）芐腈(10)的制備。

向反應(yīng)器中加入甘草查爾酮A200mg(1mmol)和1-（4-氰基苯基）胍123.07mg（1.3mmol），加50mL乙醇做溶劑，加0.5mL三乙胺作為催化劑，置于磁力攪拌器上攪拌，加熱到75℃，回流反應(yīng)6小時(shí)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時(shí)監(jiān)測反應(yīng)的進(jìn)行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物140.42mg，收率為49.44%。

棕色固體粉末。¹H NMR(400MHz, DMSO-d6, 300K):d 7.85(2H, d, J=7.52Hz), 7.42(2H, d, J=7.43Hz), 6.95 (1H, s), 6.85(2H, d, J=7.52Hz), 6.78(2H, d, J=7.43Hz), 6.41(1H, s), 6.30(1H, q), 5.35(2H, s), 5.0-4.98(2H, m), 3.9(1H, t), 3.83(3H, s), 1.88-1.63(2H, m), 1.69(6H, s). ¹³CNMR(75MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 133.1, 129.1, 128.3, 125.2, 121.6, 118.6, 116.4, 114.2, 111.1, 103.8, 101.0, 65.2, 56.1, 40.7, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd: 481.22, found:482.56。

實(shí)施例11

4-（3-（4-氟苯基）-6-（4-羥基苯基）-2-亞氨基-2,3,4,5-四氫嘧啶-4-基）-5-甲氧基-2-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯酚（11）的制備。

向反應(yīng)器中加入甘草查爾酮A200mg(1mmol)和1-（4-氟苯基）胍117.68mg（1.3mmol），加50mL乙醇做溶劑，加0.5mL三乙胺作為催化劑，置于磁力攪拌器上攪拌，加熱到85℃，回流反應(yīng)6小時(shí)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時(shí)監(jiān)測反應(yīng)的進(jìn)行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物142.63mg，收率為50.96%。

棕色固體粉末。¹H NMR(400MHz, DMSO-d6, 300K):d 7.85(2H, d, J=7.52Hz), 7.02(2H, t), 6.95(1H, s), 6.85(2H, d, J=7.52Hz), 6.58(2H, m), 6.41(1H, s), 6.30(1H, q), 5.35(2H, s), 5.00-4.98(2H, m), 3.9(1H, t), 3.83(3H, s), 1.88-1.63(2H, m), 1.69(6H, s). ¹³CNMR(75MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 164.6, 160.8, 155.4, 154.7, 148.8, 140.0, 133.2, 129.1, 128.3, 125.2, 121.6, 116.4, 115.1, 111.1, 103.8, 65.2, 56.1, 40.7, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd: 474.21, found:474.54。

實(shí)施例12

4-（6-（4-羥基苯基）-2-亞氨基-3-（4-苯氧基苯基）-2,3,4,5-四氫嘧啶-4-基）-5-甲氧基-2-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯酚（12）的制備。

向反應(yīng)器中加入甘草查爾酮A200mg(1mmol)和1-（4-苯氧基苯基）胍174.61mg（1.3mmol），加50mL乙醇做溶劑，加0.5mL三乙胺作為催化劑，置于磁力攪拌器上攪拌，加熱到75℃，回流反應(yīng)6小時(shí)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時(shí)監(jiān)測反應(yīng)的進(jìn)行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物167.35mg，收率為51.70%。

棕色固體粉末。¹H NMR(400MHz, DMSO-d6, 300K):d 7.85(2H, d, J=7.52Hz), 7.41(2H, t), 7.17(1H, m), 7.14(2H, m), 6.95(1H, s), 6.85(2H, d, J=7.52Hz), 6.79(2H, m), 6.78(2H, m), 6.41(1H, s), 6.30(1H, q), 5.35(2H, s), 5.0-4.98(2H, m), 3.9(1H, t), 3.83(3H, s), 1.88-1.63(2H, m), 1.69(6H, s). ¹³CNMR(75MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 164.6, 160.8, 157.0, 154.7, 155.1, 148.8, 142.6, 137.5, 133.2, 129.1, 128.4, 125.2, 121.7, 118.9, 116.3, 113.2, 111.1, 103.8, 65.2, 56.1, 40.7, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd: 548.25, found:548.64。

實(shí)施例13

本發(fā)明化合物的抗腫瘤活性測試

對(duì)本發(fā)明的化合物進(jìn)行了腫瘤細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)，試驗(yàn)方法采用常規(guī)的MTT法。

細(xì)胞株選用：人肝癌細(xì)胞(HepG2)，人肺癌細(xì)胞(A-549)，人胃癌細(xì)胞(SGC-7901)。培養(yǎng)液為DMEM+15%NBS+雙抗。

樣品液的配制：用DMSO(Merck)溶解后，加入PBS(-)配成的100 μmol/L的溶液或者均勻的混懸液，然后用DMSO的PBS(-)稀釋，最終濃度分別為0.1，1，10，20，40，60，80，100 μmol/L。

將上市的抗腫瘤藥物阿糖胞苷(Ara-C)以同樣的條件配成對(duì)照品溶液。

細(xì)胞培養(yǎng)：貼壁生長腫瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)于含10% 滅活新生牛血清和青霉素、鏈霉素（各100萬U/L）的1640培養(yǎng)液中，置于37℃，5% CO₂，飽和濕度的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞貼壁生長，每2～3 天傳代1 次，傳代時(shí)首先倒出培養(yǎng)液，PBS洗2次，胰酶消化后，加入新鮮的培養(yǎng)液吹打均勻，調(diào)整細(xì)胞至適當(dāng)濃度移入新的培養(yǎng)瓶中，添加培養(yǎng)液至適量。取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

MTT法檢測細(xì)胞活性及IC₅₀的測定：

實(shí)驗(yàn)原理：活細(xì)胞線粒體中脫氫酶能將黃色的MTT還原成不溶于水的藍(lán)紫色產(chǎn)物甲臜 (MTT formazan)，并沉積在細(xì)胞中，生成的量與活細(xì)胞數(shù)目成正比，而死細(xì)胞沒有這種功能。DMSO能溶解藍(lán)紫色結(jié)晶物，顏色深淺與所含的量成正比，因此用酶標(biāo)儀測定的光吸收值可反映細(xì)胞存活率。

實(shí)驗(yàn)方法：取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，消化、計(jì)數(shù)，以 2×104/mL 的密度接種于 96 孔培養(yǎng)板中，每孔100 μl。培養(yǎng) 24小時(shí)后，將待測化合物以0.1，1，10，20，40，60，80，100 μmol/L濃度處理細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組每個(gè)濃度設(shè)5個(gè)復(fù)孔，以含0.4% DMSO的培養(yǎng)液作對(duì)照。藥物作用 48小時(shí)后，去上清，每孔加入100 μl MTT（2-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-3，5-二苯基-2H-四唑氫溴酸鹽）(1mg/mL)，繼續(xù)培養(yǎng) 4小時(shí)，棄上清，每孔加入100μl DMSO，振蕩混勻，用酶標(biāo)儀在570 nm處測定吸光度值，采用 IC₅₀ 計(jì)算軟件求出半數(shù)抑制濃度(IC₅₀)。

試驗(yàn)結(jié)果詳見表1，其中，樣品是指相應(yīng)實(shí)施例中制備的甘草查爾酮A二氫氨基嘧啶類衍生物，樣品編號(hào)對(duì)應(yīng)制備實(shí)施例中所得到的化合物的具體編號(hào)。

化合物5和化合物2在所測試的3種細(xì)胞株中均表現(xiàn)出了良好的抗腫瘤活性，化合物1和11次之，在不同的細(xì)胞株中也表現(xiàn)出了良好的抗腫瘤活性。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的化合物具有良好的抗腫瘤活性，特別是部分甘草查爾酮A二氫氨基嘧啶類衍生物的活性在特定細(xì)胞株中抗腫瘤活性優(yōu)于或等同于阿糖胞苷，可用于抗腫瘤藥物的研究。

表1 化合物對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC₅₀（單位：μmol/L）