本發(fā)明屬于化合物藥物領(lǐng)域，具體涉及一種查爾酮類(lèi)似物及其制備方法和在制備抗腫瘤藥物中的用途。

背景技術(shù)：

腫瘤是人體組織細(xì)胞在內(nèi)外各種有害的因素長(zhǎng)期作用下，發(fā)生基因突變，表達(dá)紊亂，調(diào)節(jié)失控，產(chǎn)生過(guò)度增生及異常分化形成的新生物或贅生物。這種新生物或贅生物并非機(jī)體所需要，不按正常規(guī)律生長(zhǎng)或不可遏止的生長(zhǎng)，喪失正常組織細(xì)胞功能，并可破壞原來(lái)器官組織結(jié)構(gòu)，進(jìn)而危及生命。腫瘤是一種常見(jiàn)病、多發(fā)病，其中惡性腫瘤是僅次于心血管疾病的第二大造成人類(lèi)高死亡率的疾病，我國(guó)每5個(gè)死亡者中就有一個(gè)死于癌癥。根據(jù)最新數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)2015年新發(fā)腫瘤病例429.2萬(wàn)例，腫瘤致死病例281.4萬(wàn)例。我國(guó)抗腫瘤藥物銷(xiāo)售規(guī)模近幾年一直穩(wěn)步增長(zhǎng)，2014年達(dá)到了837.65億元，并且年增速在20％左右，這是因?yàn)槟[瘤治療的特殊性，患者需要全程或終身接受正規(guī)治療以延緩腫瘤進(jìn)展或防止腫瘤復(fù)發(fā)，費(fèi)用昂貴，因此各國(guó)政府、研究機(jī)構(gòu)、制藥公司長(zhǎng)期以來(lái)對(duì)抗腫瘤藥物研究予以高度重視。

在惡性腫瘤的三大治療(手術(shù)、放療、化療)中，藥物治療占有重要地位。在合成的化學(xué)類(lèi)抗腫瘤藥物中絕大多數(shù)都是以天然抗腫瘤活性成分為先導(dǎo)化合物的。據(jù)統(tǒng)計(jì)，超過(guò)74.8％的藥物直接或間接來(lái)源于天然產(chǎn)物，因此基于天然產(chǎn)物的新藥研發(fā)受到各國(guó)的廣泛重視。近年來(lái)，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)黃酮、異黃酮類(lèi)化合物具有廣泛的抗腫瘤活性，且其抗腫瘤作用主要體現(xiàn)在性激素樣作用、抗氧化作用、抗細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡分化、抑制腫瘤新生血管生成以及提高機(jī)體免疫力等諸多方面。

射干苷元是鳶尾科植物的一種特征成分，主要存在于鳶尾科鳶尾屬和射干屬的植物根莖中，如射干、川射干、野鳶尾、蝴蝶花等植物?，F(xiàn)代藥理研究表明，射干苷元具有清除自由基、抗脂質(zhì)過(guò)氧化損傷和降低血糖，防止動(dòng)脈粥樣硬化以及防止血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷作用，亦有對(duì)心肌梗死小鼠心臟有保護(hù)作用，還有抗炎、抗菌、抗腫瘤、抗病毒、雌激素類(lèi)作用等。

射干苷元抗腫瘤作用，前人做過(guò)一些研究。黃文哲，異黃酮類(lèi)化合物抗腫瘤細(xì)胞增殖作用[j].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2003，等證實(shí)射干苷元對(duì)胃癌細(xì)胞和白血病增殖有一定程度的抑制作用，并呈劑量依耐性；汪新亮，葛花鳶尾異黃酮對(duì)smmc-7721肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用[j].中國(guó)新藥雜志，2010，19(2)：168～171，通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明射干苷元對(duì)smmc-7721人肝癌細(xì)胞株增殖具有明顯的抑制作用，其機(jī)制可能與促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡有關(guān)；tectorigeninandotherphytochemicalsextractedfromleopardlilybelamcandachinensisaffectnewandestablishedtargetsfortherapiesinprostatecancer[j].carcinogenesis，2005，26(8)：1360～1367.等用射干的提取物治療裸鼠前列腺癌，證實(shí)其中的射干苷元可調(diào)癌基因的異常表達(dá)；cytotoxiceffectsofcompoundsfromiristectorumonhumancancercelllines[j].jethnopharmacol，2008，118(2)：257～263.證實(shí)射干苷元具有細(xì)胞毒性，能抑制細(xì)胞分裂；theanti-angiogenesisandanti-tumoractivityofisoflavonesonbelamcandachinensis(l.)dc.[j].worldphytomed(國(guó)外醫(yī)藥:植物藥分冊(cè))，2004，19(6)：260.證實(shí)射干苷元可通過(guò)抑制cox-2的誘導(dǎo)作用而抑制tpa或辛酸刺激的腹膜巨噬細(xì)胞前列腺素e2(pge2)的產(chǎn)生，即可抑制新生血管生成，而對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后起著重要作用；潘靜，川射干化學(xué)成分及體外抗腫瘤活性的研究[d].武漢：湖北中醫(yī)學(xué)院，2009.用mtt比色法觀(guān)察從川射干提取的異黃酮類(lèi)成分對(duì)人胃癌細(xì)胞株sgc7901的作用，結(jié)果，射干苷元對(duì)人胃癌細(xì)胞有不同的抑制作用。但射干苷元屬異黃酮化合物，水溶性和脂溶性都很低，在藥用時(shí)，影響到藥物生物利用度，不利于臨床使用。以射干苷元作為抗腫瘤藥物的先導(dǎo)化合物，需要尋找更有效、臨床應(yīng)用更方便的藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供了一種新的查爾酮類(lèi)似物。本發(fā)明的另一目的是提供了查爾酮類(lèi)似物的制備方法和用途。

本發(fā)明提供了一種如式(ⅰ)所示的化合物，

其中，r1、r2、r3、r4分別獨(dú)立地選自氫或c1～c10烷基、環(huán)烷基、芳基。

進(jìn)一步地，r1、r2、r3、r4分別獨(dú)立地選自氫或c1～c10烷基。

進(jìn)一步地，r1、r2、r3、r4分別獨(dú)立地選自氫或c1～c4烷基。

進(jìn)一步地，r1、r2均為氫，且r3、r4分別獨(dú)立地選自氫、-ch3、-ch2ch3、-ch2ch2ch3、-ch(ch3)2、-ch2ch2ch2ch3、-ch2ch(ch3)ch3。

進(jìn)一步地，r1、r2均為氫，且r3、r4分別獨(dú)立地選自-ch3、-ch2ch3。

進(jìn)一步地，所述化合物為如下化合物之一：

本發(fā)明化合物的一種制備方法，包括以下步驟：射干苷元經(jīng)烷化反應(yīng)，制備烷基射干苷元；烷基射干苷元在堿性條件下發(fā)生脫甲基反應(yīng)，制備出查爾酮類(lèi)似物。

上述射干苷元可以通過(guò)以下步驟制備：川射干在醇溶液中提取分離，得到射干苷，然后加入酸，使射干苷在酸性條件下水解，制備出射干苷元。

進(jìn)一步地，射干苷元烷化反應(yīng)在堿性條件下進(jìn)行，加入烷化試劑，加熱，調(diào)ph值至酸性，加水?dāng)嚢瑁龀龀恋?，過(guò)濾水洗后重結(jié)晶。

進(jìn)一步地，射干苷元烷化反應(yīng)步驟為：以射干苷元為原料，加入溶劑、堿和烷化試劑，加熱至沸騰5～50分鐘，反應(yīng)完成后加酸調(diào)ph至酸性，加水?dāng)嚢?，析出沉淀，過(guò)濾，水洗沉淀至流出液ph近中性，得無(wú)色粉末，用氯仿或二甲基乙酰胺結(jié)晶。

進(jìn)一步地，所述堿為koh或naoh，所述酸為鹽酸。

進(jìn)一步地，所述的烷化試劑選自硫酸二酯、碳酸二酯、溴烷或碘烷。

進(jìn)一步地，所述的硫酸二酯結(jié)構(gòu)式為r選自-ch3、-ch2ch3、-ch2ch2ch3、-ch(ch3)2、-ch2ch2ch2ch3、-ch2ch(ch3)ch3；所述的碳酸二酯結(jié)構(gòu)式為r選自-ch3、-ch2ch3、-ch2ch2ch3、-ch(ch3)2、-ch2ch2ch2ch3、-ch2ch(ch3)ch3；所述的溴烷或碘烷結(jié)構(gòu)式為：x-r，x為br或i，r選自-ch3、-ch2ch3、-ch2ch2ch3、-ch(ch3)2、-ch2ch2ch2ch3、-ch2ch(ch3)ch3。

本發(fā)明化合物、或其溶劑合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗腫瘤藥物中的用途。

進(jìn)一步地，所述腫瘤為人結(jié)腸癌、人乳腺癌、人肺癌、人胃癌、人卵巢腺癌或肉瘤。

一種藥物組合物，它是以本發(fā)明化合物、或其溶劑合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助成分制備成藥學(xué)上常用的制劑。

上述藥物組合物中所述制劑是注射劑、凍干粉針、片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、滴丸劑、口服溶液。

本發(fā)明以射干苷元為代表的異黃酮類(lèi)化合物，在強(qiáng)堿作用下失去一個(gè)碳原子而成為查爾酮類(lèi)似物，或二苯乙酮類(lèi)化合物、芐基苯酮類(lèi)化合物。據(jù)此以射干苷元為母體合成了一系列此類(lèi)結(jié)構(gòu)的查爾酮類(lèi)似物，經(jīng)藥理抗腫瘤作用篩選，這類(lèi)化合物具有一定的抗腫瘤活性。

本發(fā)明化合物實(shí)為異黃酮化合物合成時(shí)的中間體，即苯基芐基酮路線(xiàn)(合成異黃酮路線(xiàn)之一)，即通過(guò)(取代)苯乙酸(或者苯乙腈)的?；磻?yīng)生成羥基苯基芐基酮，再環(huán)合得到異黃酮。本發(fā)明化合物的制備方法是將自然界存在的異黃酮(或者經(jīng)結(jié)構(gòu)修飾得到的異黃酮衍生物)在強(qiáng)堿性條件下開(kāi)環(huán)失去一個(gè)碳原子而成為查爾酮類(lèi)似物(實(shí)為苯基芐基酮)。該制備路線(xiàn)特別、收率高、可作為工業(yè)化大生產(chǎn)。

本發(fā)明化合物可用于制備抗腫瘤疾病的藥物，即本發(fā)明化合物加上藥學(xué)上可接受的載體而制成不同的藥物制劑，如注射劑、凍干粉針、片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、口服溶液等，其中片劑包括：普通壓制片、咀嚼片、泡騰片、多層片、緩釋片、控釋片、包衣片、分散片、口含片、舌下片等；丸劑包括滴丸、含化滴丸、微丸等；膠囊劑包括硬膠囊劑、軟膠囊劑、腸溶膠囊劑、緩釋膠囊劑、微囊等。

注射劑的制備為采用常規(guī)注射劑的制備工藝制成，輔料可為聚乙二醇400(20％)、抗氧劑(亞硫酸氫鈉，0.1％)等。每支2ml，含2，6-二羥基-3，4，4′-三甲氧基二苯乙酮或2，6-二羥基-3-甲氧基-4，4′-二乙氧基二苯乙酮50mg。本品為淡黃色的澄明液體。

散劑的制備為將本發(fā)明的化合物加入適量輔料硬脂酸鎂增加其流動(dòng)性，分裝，即得。

顆粒劑的制備為將本發(fā)明的化合物與輔料粉碎后進(jìn)行充分的混合，然后加入適當(dāng)?shù)恼澈蟿?、?rùn)濕劑等進(jìn)行制粒，干燥，整粒，分裝，即得。

膠囊劑分為軟膠囊和硬膠囊，硬膠囊是將藥物的粉末或者是顆粒進(jìn)行裝膠囊制得，軟膠囊是把藥液密封于球形或軟質(zhì)膠囊材料中。按干增塑劑(增塑劑為甘油、山梨醇或兩者的混合物)：干明膠：水＝0.4～0.6：1.0：1.0，混合均勻，調(diào)配好作為軟膠囊的囊壁，藥物溶于聚乙二醇400、聚乙二醇6000按適當(dāng)比例制成的溶媒中，然后采用滴制法或壓制法制備本發(fā)明抗腫瘤藥物軟膠囊。另外，可以制成腸溶膠囊。另外，按照常規(guī)緩釋膠囊的制備方法，選用不同的輔料如:乙基纖維素(ec)，醋酸纖維素(ca)，聚丙烯酸樹(shù)脂等，作為緩控釋成膜材料，制成緩、釋控釋的制劑骨架。將本發(fā)明化合物制成微囊，然后裝入普通空膠囊中，即制成緩釋/控釋膠囊。

滴丸或微丸的制備為取藥物基質(zhì)，如：聚乙二醇類(lèi)、硬脂酸等加熱后，將藥液與基質(zhì)混合均勻，置于滴丸機(jī)中保溫，然后滴制到適當(dāng)?shù)睦淠齽┲惺⑼耄闯淠齽└稍镎?，質(zhì)檢、包裝，即得。

片劑的制備，包括普通壓制片、咀嚼片、泡騰片、多層片、緩釋片、控釋片，包衣片(糖衣片、薄膜衣片、腸溶衣片)、分散片、口含片、舌下片等。將本發(fā)明的藥物與輔料粉碎后進(jìn)行充分的混合，然后加入適當(dāng)?shù)恼澈蟿?、?rùn)濕劑等進(jìn)行制粒，壓片，即得普通壓制片。將本發(fā)明的藥物與分散片用輔料混勻后制粒，壓片，即得分散片。將制得的素片包衣，根據(jù)需要可包糖衣、薄膜衣、腸溶衣等，制得包衣片。用常規(guī)方法還可制得咀嚼片、泡騰片、多層片、口含片、舌下片等。

本發(fā)明化合物在化學(xué)結(jié)構(gòu)上打破了射干苷元的平面結(jié)構(gòu)(開(kāi)環(huán))，使其溶解性問(wèn)題得到改善，本發(fā)明化合物既有一定的脂溶性又有一定的水溶性，在藥學(xué)可接受的載體基礎(chǔ)上可制備出不同的制劑，包括注射劑，使其應(yīng)用范圍擴(kuò)大，療效提高。藥效試驗(yàn)證明了本發(fā)明化合物2，6-二羥基-3，4，4′-三甲氧基二苯乙酮、2，6-二羥基-3-甲氧基-4，4′-二乙氧基二苯乙酮具有明顯的抗腫瘤活性。

顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

附圖說(shuō)明

圖1.化合物ⅱ的紅外光譜圖。

圖2.化合物ⅱ的質(zhì)譜圖。

圖3.化合物ⅱ的¹hnmr譜圖。

圖4.化合物ⅱ的¹hnmr譜圖局部放大圖。

圖5.化合物ⅲ的紅外光譜圖。

圖6.化合物ⅲ的質(zhì)譜圖。

圖7.化合物ⅲ的¹hnmr譜圖。

圖8.化合物ⅲ的¹hnmr譜圖局部放大圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明實(shí)施例所用原料和試劑均來(lái)自于市售的商品，所有試劑均由四川省中醫(yī)藥科學(xué)院后勤處統(tǒng)一購(gòu)買(mǎi)。

川射干藥材：四川新荷花中藥材有限公司；氫氧化鈉：成都長(zhǎng)聯(lián)化工試劑有限公司；鹽酸：成都市科龍化工試劑廠(chǎng)；硫酸二甲酯：成都市科龍化工試劑廠(chǎng)；硫酸二乙酯：成都市科龍化工試劑廠(chǎng)；碘甲烷：成都市科龍化工試劑廠(chǎng)；碘乙烷：成都市科龍化工試劑廠(chǎng)；氯仿：成都長(zhǎng)聯(lián)化工試劑有限公司；無(wú)水乙醇：成都長(zhǎng)聯(lián)化工試劑有限公司；95％乙醇：成都長(zhǎng)聯(lián)化工試劑有限公司。

本發(fā)明所用的射干苷元可以通過(guò)以下步驟或其他文獻(xiàn)報(bào)道的方法制備。

川射干原生藥60℃干燥，粉碎成粗粉過(guò)20目篩，置于提取容器內(nèi)，用95％乙醇加熱回流提取3次，每次時(shí)間1小時(shí)，每次溶媒用量為藥材量的4倍(v/w)。趁熱過(guò)濾，合并濾液，60℃減壓回收溶劑，得比重1.2g/ml(60℃測(cè)定)的糖漿狀物質(zhì)(棕黃色浸膏)，其得率為藥材量的49～51％(w/w)。將上述浸膏加95％乙醇(用量為藥材量的1/5,v/w)攪拌均勻，抽濾，得射干苷粗品。取射干苷粗品，加95％乙醇加熱回流1小時(shí)(溶媒用量為射干苷粗品的2倍，v/w)，靜置過(guò)夜，析出淡黃色沉淀，過(guò)濾，沉淀再用95％乙醇如上操作重結(jié)晶1次，得射干苷精品(無(wú)色結(jié)晶性粉末，得率為藥材量得4.5％，含量>98％)。

取上述射干苷精品1000g置于10000m1圓底燒瓶中，加50％乙醇5000m1，攪拌均勻，再加濃鹽酸500m1，搖勻。加熱回流3～5小時(shí)，待薄層檢查無(wú)射干苷斑點(diǎn)時(shí)停止水解反應(yīng)。取出，趁熱過(guò)濾，靜置過(guò)夜，析出淡黃色細(xì)長(zhǎng)針晶。過(guò)濾，用水洗滌結(jié)晶至流出液ph近中性，結(jié)晶用2000m195％乙醇加熱溶解，過(guò)濾，濾液趁熱傾入4500m1沸水，靜置過(guò)夜，析晶。過(guò)濾，60℃減壓干燥，得射干苷元精品(淡黃色細(xì)長(zhǎng)針晶，得率為藥材量得2.5％，含量>98％)。

實(shí)施例12，6-二羥基-3，4，4′-三甲氧基二苯乙酮的制備

(1)烷基射干苷元——5-羥基-6，7，4′-三甲氧基異黃酮的制備

取射干苷元500g，加naoh100g，混勻，加95％乙醇1500m1于10升圓底燒瓶中，于水浴中加熱沸騰5分鐘后，再加1000m1硫酸二甲酯，反應(yīng)15min，取出，立即用鹽酸調(diào)ph至酸性，加水?dāng)嚢璺爬?，析出灰白色沉淀，過(guò)濾，水洗沉淀至流出液ph近中性，得灰白色粉末，用氯仿重結(jié)晶，過(guò)濾，60℃減壓干燥，得5-羥基-6，7，4′-三甲氧基異黃酮500g(白色結(jié)晶性粉末，收率為藥材量的2％，含量>98％)。

經(jīng)測(cè)定，該化合物mp：189～191℃(氯仿)；uvλmaxnm：267，211，202nm(etoh)；¹h-nmr(cdcl3，400mhz)δ：12.81(1h，s，5-oh)，7.89(1h，s，h-2)，7.45(2h，d，j＝8.5hz，h-2′,6′)，6.98(2h，d，j＝8.5hz，h-3′,5′)，6.46(1h，s，h-8)，3.95(3h，s，6-och3)，3.92(3h，s，7-och3)，3.84(3h，s，4′-och3)。上述光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，故鑒定此化合物為5-羥基-6，7，4′-三甲氧基異黃酮?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

(2)查爾酮類(lèi)似物——2，6-二羥基-3，4，4′-三甲氧基二苯乙酮的制備

取5-羥基-6，7，4′-三甲氧基異黃酮100g于圓底燒瓶中，加5％naoh水溶液200ml，于水浴加熱2小時(shí)，取出，用鹽酸調(diào)ph至酸性，加水?dāng)嚢璺爬?，析出沉淀，過(guò)濾，水洗至中性，得淡黃色粉末，用無(wú)水乙醇重結(jié)晶，過(guò)濾，60℃減壓干燥，得2，6-二羥基-3，4，4′-三甲氧基二苯乙酮80g(淡黃色結(jié)晶性粉末，含量>98％)。

經(jīng)測(cè)定，該化合物mp：119～121℃(無(wú)水乙醇)；uvλmaxnm：285nm；ir、ms、¹h-nmr見(jiàn)圖1～4。經(jīng)鑒定為2，6-二羥基-3，4，4′-三甲氧基二苯乙酮，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

實(shí)施例22，6-二羥基-3-甲氧基-4，4′-二乙氧基二苯乙酮的制備

(1)烷基射干苷元——5-羥基-6-甲氧基-7，4′-二乙氧基異黃酮的制備

取射干苷元500g，加naoh100g，混勻，加95％乙醇1500m1于10升圓底燒瓶中，于水浴中加熱沸騰5分鐘后，再加1000m1硫酸二乙酯，反應(yīng)30min，取出，立即用鹽酸調(diào)ph至酸性，加水?dāng)嚢璺爬?，析出沉淀，過(guò)濾，水洗沉淀至流出液ph近中性，得淡黃色粉末，用氯仿重結(jié)晶，過(guò)濾，60℃減壓干燥，得5-羥基-6-甲氧基-7，4′-二乙氧基異黃酮600g(淡黃色結(jié)晶性粉末，收率為藥材量的3％，含量>98％)。

經(jīng)測(cè)定，該化合物mp：163～166℃(氯仿)；uvλmaxnm：268nm；3465，1654，1608，1577，1490，1465，1290，1180，1074。esi-msm/z357[m+h]⁺；¹h-nmr(cdcl3，400mhz)δ：12.80(1h，s，5-oh)，7.86(1h，s，h-2)，7.44(1h，d，h-6′)，7.42(1h，d，h-2′)，6.96(1h，d，h-5′)，6.94(1h，d，h-3′)，6.43(1h，s，h-8)，4.15(2h，q，4′-ch2)4.06(2h，q，7-ch2)，3.90(3h，s，6-och3)，1.51(3h，t，4′-ch3)，1.43(3h，t，7-ch3)。¹³c-nmr(cdcl3，400mhz)δ:152.55(c-2)，122.53(c-3)，180.78(c-4)，153.24(c-5)，132.42(c-6)，158.11(c-7)，90.81(c-8)，153.27(c-9)，106.34(c-10)，122.93(c-1′)，129.82(c-2′，6′)，114.33(c-3′，5′)，158.89(c-4′)，60.52(6-och3)，14.35，63.29(7-och2ch3)，14.62，64.61(4′-och2ch3)。鑒定此化合物為5-羥基-6-甲氧基-7，4′-二乙氧基異黃酮?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

(2)查爾酮類(lèi)似物——2，6-二羥基-3-甲氧基-4，4′-二乙氧基二苯乙酮的制備

取5-羥基-6-甲氧基-7，4′-二乙氧基異黃酮100g于圓底燒瓶中，加5％naoh水溶液200ml，于水浴加熱4小時(shí)，取出，用鹽酸調(diào)ph至酸性，加水?dāng)嚢璺爬?，析出沉淀，過(guò)濾，水洗沉淀至流出液ph近中性，得淡黃色粉末，用無(wú)水乙醇重結(jié)晶，過(guò)濾，60℃減壓干燥，得2，6-二羥基-3-甲氧基-4，4′-二乙氧基二苯乙酮85g(淡黃色結(jié)晶性粉末，含量>98％)。

經(jīng)測(cè)定，該化合物mp：137～139℃(無(wú)水乙醇)；uvλmaxnm：288nm；ir、ms、¹h-nmr見(jiàn)圖5～8。經(jīng)鑒定為2，6-二羥基-3-甲氧基-4，4′-二乙氧基二苯乙酮，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

實(shí)施例3

取射干苷元500g，加naoh100g，混勻，加碘甲烷1000m1于10升圓底燒瓶中，于水浴中加熱沸騰30分鐘后，取出，立即用鹽酸調(diào)ph至酸性，加水?dāng)嚢璺爬?，析出灰白色沉淀，過(guò)濾，水洗沉淀至流出液ph近中性，得灰白色粉末，用氯仿重結(jié)晶，過(guò)濾，60℃減壓干燥，得5-羥基-6，7，4′-三甲氧基異黃酮500g(白色結(jié)晶性粉末，收率為藥材量的2％，含量>98％)。

取5-羥基-6，7，4′-三甲氧基異黃酮100g于圓底燒瓶中，加5％naoh水溶液200ml，于水浴加熱2小時(shí)，取出，用鹽酸調(diào)ph至酸性，加水?dāng)嚢璺爬?，析出沉淀，過(guò)濾，水洗至中性，得淡黃色粉末，用無(wú)水乙醇重結(jié)晶，過(guò)濾，60℃減壓干燥，得2，6-二羥基-3，4，4′-三甲氧基二苯乙酮80g(淡黃色結(jié)晶性粉末，含量>98％)。

實(shí)施例4

取射干苷元500g，加naoh100g，混勻，加碘乙烷1000m1于10升圓底燒瓶中，于水浴中加熱沸騰40分鐘后，取出，立即用鹽酸調(diào)ph至酸性，加水?dāng)嚢璺爬?，析出灰白色沉淀，過(guò)濾，水洗沉淀至流出液ph近中性，得灰白色粉末，用氯仿重結(jié)晶，過(guò)濾，60℃減壓干燥，得5-羥基-6-甲氧基-7，4′-二乙氧基異黃酮500g(白色結(jié)晶性粉末，收率為藥材量的2％，含量>98％)。。

取5-羥基-6-甲氧基-7，4′-二乙氧基異黃酮100g于圓底燒瓶中，加5％naoh水溶液200ml，于水浴加熱4小時(shí)，取出，用鹽酸調(diào)ph至酸性，加水?dāng)嚢璺爬?，析出沉淀，過(guò)濾，水洗沉淀至流出液ph近中性，得淡黃色粉末，用無(wú)水乙醇重結(jié)晶，過(guò)濾，60℃減壓干燥，得2，6-二羥基-3-甲氧基-4，4′-二乙氧基二苯乙酮85g(淡黃色結(jié)晶性粉末，含量>98％)。

以下通過(guò)試驗(yàn)說(shuō)明本發(fā)明的有益效果。

試驗(yàn)例1本發(fā)明化合物對(duì)hct116、mcf-7、a549、sgc7901、sk-ov-3細(xì)胞株體外增殖的影響

分別取對(duì)數(shù)期的人結(jié)腸癌細(xì)胞株hct116、人乳腺癌細(xì)胞株mcf-7、人肺癌細(xì)胞株a549、人胃癌細(xì)胞株sgc7901、人卵巢腺癌細(xì)胞株sk-ov-3，用胰酶消化，吹散，制備細(xì)胞混懸液，顯微計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度，按6×10³個(gè)/孔接種到96孔板，在37℃培養(yǎng)過(guò)夜。藥物處理組中加入梯度稀釋的各化合物，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組和射干苷元陽(yáng)性藥對(duì)照組，每個(gè)濃度做3個(gè)重復(fù)，放入37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，試驗(yàn)結(jié)束前4h，將96孔板里的培養(yǎng)液吸出，加入100μlpbs緩沖液和10μl5mg/mlmtt溶液，37℃孵育4h。加100μl10％sds溶液。37℃孵育過(guò)夜。測(cè)定od570，計(jì)算ic50。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1本發(fā)明化合物對(duì)多種人癌細(xì)胞的體外抗腫瘤活性

結(jié)果表明，本發(fā)明化合物對(duì)hct116、mcf-7、a549、sgc7901、sk-ov-3細(xì)胞株顯示出較強(qiáng)的活性，化合物(ⅱ)作用略大于化合物(ⅲ)。

試驗(yàn)2.本發(fā)明化合物對(duì)s180肉瘤小鼠的抑制作用研究

分別取對(duì)數(shù)期的s180肉瘤細(xì)胞，用胰酶消化，配成1×10⁷個(gè)/ml單細(xì)胞混懸液，在無(wú)菌條件下接種于小鼠體內(nèi)腹腔0.2ml/只。接種7天后，待腫瘤長(zhǎng)至直徑3～5mm時(shí)，按體積大小，隨機(jī)分為對(duì)照組、射干苷元陽(yáng)性藥對(duì)照組及化合物(ⅱ)、(ⅲ)的低、中、高劑量組，每組10只小鼠。分組后當(dāng)天開(kāi)始給藥，腹腔注射，每天給藥一次，連續(xù)2周，停藥次日稱(chēng)重。處理小鼠，剔除瘤塊后稱(chēng)量瘤塊重量，算出平均瘤重，按下式計(jì)算抑制率：抑制率％＝(1-給藥組腫瘤平均重量/對(duì)照組腫瘤平均重量)×100％。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2本發(fā)明化合物對(duì)s180肉瘤小鼠的抑制作用

結(jié)果表明，本發(fā)明化合物(ⅱ)、(ⅲ)對(duì)小鼠s180肉瘤模型有較好的抑制作用，抑制率與劑量呈正相關(guān)，且化合物(ⅱ)療效略高于化合物(ⅲ)，且均高于射干苷元。

通過(guò)以上藥理實(shí)驗(yàn)證明了本發(fā)明化合物2，6-二羥基-3，4，4′-三甲氧基二苯乙酮、2，6-二羥基-3-甲氧基-4，4′-二乙氧基二苯乙酮的藥理活性，即具有明顯的抗腫瘤作用。故本發(fā)明化合物可用于制備抗腫瘤疾病的藥物，即本發(fā)明化合物加上藥學(xué)上可接受的載體而制成不同的藥物制劑。