本發(fā)明涉及一類具抗腫瘤活性的甘草查爾酮A硫脲嘧啶類衍生物及其合成方法，屬于醫(yī)藥化學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

腫瘤已嚴(yán)重威脅到人類的健康，尋找有效安全、毒副作用小的抗腫瘤藥物一直是腫瘤藥物研發(fā)工作者孜孜以求的目標(biāo)。隨著藥物化學(xué)的發(fā)展，以嘧啶環(huán)為結(jié)構(gòu)母核的化合物在腫瘤治療中的作用引起廣泛關(guān)注。

甘草查爾酮A被視為脹果甘草的種屬特異性成分，其結(jié)構(gòu)如下所示。

近年來，研究發(fā)現(xiàn)甘草查爾酮A具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗腫瘤、降脂、解痙和抗瘧抗寄生蟲等多種生物活性，在醫(yī)藥領(lǐng)域具有很大的開發(fā)價值，但甘草查爾酮A是平面性強(qiáng)的分子，水溶性差。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一類具抗腫瘤活性的甘草查爾酮A硫脲嘧啶類衍生物及其合成方法，以提高甘草查爾酮A的水溶性和抗腫瘤活性。

本發(fā)明的實現(xiàn)過程如下：

結(jié)構(gòu)通式（I）所示的化合物，

其中：R為C1-C4的烷基，C1-C4的烷氧基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的芐基、硝基；

所述的取代為單取代或多取代，取代基為：鹵素、C1-C4的烷氧基、氰基、三氟甲基、苯氧基。

結(jié)構(gòu)通式（I）所示的化合物的合成方法，以甘草查爾酮A、硫脲類化合物為原料，以有機(jī)堿為催化劑，在甲苯或DMF作為反應(yīng)溶劑的條件下進(jìn)行合成，

。

具體來說，包括如下步驟，

（1）向反應(yīng)器中按摩爾比為1:1~1:1.5加入甘草查爾酮A和硫脲類化合物，加入有機(jī)溶劑混合均勻，加入有機(jī)堿催化劑，80℃~120℃回流反應(yīng)3~8小時；

（2）將步驟（1）反應(yīng)體系的固液混合物減壓濃縮后，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物。

步驟（1）中所述的甘草查爾酮A與硫脲類化合物的摩爾比優(yōu)選為1:1 ~1:1.3，有機(jī)溶劑為甲苯或DMF，反應(yīng)溫度優(yōu)選為105℃~115℃，有機(jī)堿優(yōu)選為三乙胺。

本發(fā)明的優(yōu)點在于：原料環(huán)保，生產(chǎn)成本低，操作安全性高，反應(yīng)條件溫和，可實現(xiàn)反應(yīng)原料的充分利用，適用于工業(yè)化生產(chǎn)，解決了現(xiàn)有技術(shù)產(chǎn)率低的問題，同時將嘧啶環(huán)引入到甘草查爾酮A的化學(xué)結(jié)構(gòu)中，對探究該類化合物的生物活性與總結(jié)構(gòu)效關(guān)系具有重要的理論價值和應(yīng)用價值。

具體實施方式：

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述。這些實施例僅是出于解釋說明的目的，而不限制本發(fā)明的范圍和實質(zhì)。

一類甘草查爾酮A硫脲嘧啶類衍生物的合成方法包括如下步驟：

（1）向反應(yīng)器中按摩爾比為1:1~1:1.5，加入甘草查爾酮A、硫脲類化合物，加甲苯或DMF混合均勻，其中溶劑體積小于反應(yīng)器容積的2/3，加入有機(jī)堿催化劑三乙胺，置于磁力攪拌器上攪拌，加熱到80℃~120℃，回流反應(yīng)3~8小時；

（2）反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進(jìn)行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置；

（3）將步驟（2）反應(yīng)體系的固液混合物減壓濃縮后，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物。

本發(fā)明部分優(yōu)選實施方案中的化合物結(jié)構(gòu)式如下所示：

實施例1

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-甲基-5,6-二氫嘧啶-2（1H）- 硫酮(1)的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和68.44mg(1.3mmol) 1-甲基硫脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)3小時。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（113mg）， 總收率46.57%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6,300K):d 7.85(2H,d,J=7.52Hz), 6.95 (1H,s), 6.85(2H,d,J=7.52Hz), 6.41(1H,s), 6.30(1H,q), 5.35 (2H,s), 5.00-4.98(2H,m), 3.9(1H,t), 3.83(3H,s), 3.04(3H,s), 1.76-1.51(2H,m), 1.69(6H,s). ¹³C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm): 182.2, 164.6, 160.8, 156.1, 155.0, 148.8, 133.2, 129,2, 125.2, 116.2, 111.1, 103.8, 61.8, 56.1, 40.2, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for (M+H)⁺: calcd: 411.17, found:411.78。

實施例2

1-芐基-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 硫酮(2)的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和127.73mg(1.3mmol) 1-芐基硫脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)5小時。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（124.72mg），總收率43.36%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6,300K):d 7.85(2H,d,J=7.52Hz), 7.33 (2H,m),7.23(2H,m), 7.26(1H,m), 6.95(1H,s), 6.85(2H,d,J=7.52Hz), 6.41(1H,s), 6.30(1H,q), 5.35(2H,s), 5.00-4.98(2H,m), 3.9(1H,t), 3.83(3H,s), 3.81(2H,s), 1.76-1.51(2H,m), 1.69 (6H,s).¹³C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm): 182.2, 164.6, 160.8, 156.1, 155.0, 148.8, 136.4, 133.2, 129.2, 128.5, 127.4, 125.2, 116.2, 111.1, 103.8, 59.2, 56.4, 40.5, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd: 487.20, found:487.63。

實施例3

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-苯基-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 硫酮(3)的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和116.95mg(1.3mmol) 1-苯基硫脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)8小時。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（115.31mg）, 總收率41.28%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6,300K):d 7.85(2H,d,J=7.52Hz), 7.23(2H,t),6.95(1H,s), 6.85(2H,d,J=7.52Hz), 6.77(1H,m), 6.60(2H,m), 6.41(1H,s), 6.30(1H,q), 5.35(2H,s), 5.00-4.98(2H,m), 3.9 (1H,t), 3.83(3H,s), 1.88-1.63(2H,m), 1.69(6H,s). ¹³C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):177.7, 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 140.3,133.3,129.1, 128.4, 125.2, 121.6, 116.0, 111.1, 103.8, 69.9, 56.1,40.1, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd: 473.18, found:473.63。

實施例4

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-（鄰甲苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 硫酮(4)的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和127.73mg(1.3mmol) 1-（鄰甲苯基）硫脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（121.79mg）, 總收率42.35%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6,300K):d 7.85(2H,d,J=7.52Hz), 7.18(1H, d),7.04(1H,t), 6.95(1H,s), 6.85(2H,d,J=7.52Hz), 6.65(1H,t), 6.41(1H,s), 6.30(1H,q), 6.19(1H,d), 5.35(2H,s), 5.00-4.98(2H, m),3.9(1H,t), 3.83(3H,s), 2.12(3H,s), 1.88-1.63(2H,m), 1.69 (6H,s). ¹³C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):177.7, 164.6, 160.8, 155.1,154.7, 148.8, 139.2, 137.2, 133.2, 130.8,129.4, 128.3, 126.0,125.2, 121.7, 116.0, 111.1, 103.8, 70.2, 56.1, 40.1, 39.8, 28.6, 18.2. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd:487.20, found:487.63。

實施例5

1-（2-氯苯基）-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 硫酮(5)的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和143.41mg(1.3mmol) 1-（2-氯苯基）硫脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)4小時。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（148.23mg）, 總收率49.46%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6,300K):d 7.85(2H,d,J=7.52Hz), 7.43(1H, d), 7.11(1H,t), 6.95(1H,s), 6.85(2H,d,J=7.52Hz), 6.71(1H,t), 6.54(1H,d), 6.41(1H,s), 6.30(1H,q), 5.35(2H,s), 5.00-4.98 (2H,m), 3.9(1H,t), 3.83(3H,s), 1.88-1.63(2H,m), 1.69(6H,s). ¹³C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm): 177.7, 164.6, 160.8, 155.1, 154.7,148.8, 146.0, 138.8, 133.2, 131.4, 130.2, 129.1, 128.3, 127.5, 125.2, 121.6, 116.0, 111.1, 103.8, 69.4, 56.1, 40.1, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd: 507.14, found: 507.52。

實施例6

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-（2-甲氧基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 硫酮(6)的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和140.02mg(1.3mmol) 1-（2-甲氧基苯基）硫脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到80℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（135.94mg），總收率45.76%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6,300K):d 7.85(2H,d,J=7.52Hz), 6.95(1H, s), 6.88(1H,m), 6.85(2H,d,J=7.52Hz), 6.79(1H,m), 6.66(1H,m), 6.41(1H,s), 6.30(1H,q), 5.35(2H,s), 5.00-4.98(2H,m), 3.9(1H, t), 3.83(3H,s), 1.88-1.63(2H,m), 1.69(6H,s). ¹³C NMR(75MHz, DMSO-d6)δ(ppm): 177.7, 166.9, 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 133.2, 129.1, 128.4, 127.2, 125.2, 122.0, 121.4, 116.0, 112.9, 111.1, 103.8, 70.2, 56.1, 55.8, 40.1, 39.8, 28.6. HRMS (ESI)for(M+H)+: calcd: 503.19, found: 503.62。

實施例7

1-（3-氟苯基）-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 硫酮(7)的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和130.77mg(1.3mmol)1-（3-氟苯基）硫脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到90℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（126.76mg），總收率43.72%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6,300K):d 7.85(2H,d,J=7.52Hz), 7.21(1H, m),6.95(1H,s), 6.85(2H,d,J=7.52Hz), 6.56(1H,m), 6.54(1H,m), 6.41(1H,s), 6.37(1H,m), 6.30(1H,q), 5.35(2H,s), 5.00-4.98(2H, m), 3.9(1H,t), 3.83(3H,s), 1.88-1.63(2H,m), 1.69(6H,s).¹³C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm): 177.7, 164.6, 163,2, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 141.9, 133.2, 130.6, 129.1, 128.2, 125.2,121.6, 116.2, 115.0, 111.1, 103.8, 69.9, 56.1, 40.1, 39.8,28.6. HRMS (ESI)for(M+H)+: calcd: 491.17, found: 491.59。

實施例8

3-（6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-2-硫代-5,6-二氫嘧啶1（2H） - 基）芐腈(8)的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和136.16mg(1.3mmol) 1-（3-氰基苯基）硫脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到105℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（117.83mg）， 總收率40.06%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6,300K):d 7.85(2H,d,J=7.52Hz), 7.30(1H, m),7.24(1H,m), 6.95(1H,s), 6.88(1H,m), 6.85(2H,d,J=7.52Hz), 6.69(1H,m), 6.41(1H,s), 6.30(1H,q), 5.35(2H,s), 5.00-4.98(2H, m), 3.9(1H,t), 3.83(3H,s), 1.88-1.63(2H,m), 1.69(6H,s). ¹³C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm): 177.7, 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 141.0, 136.7, 133.5, 131.2, 129.4, 128.3, 125.2, 121.6, 118.6, 116.0, 112.9, 111.1, 103.8, 69.9, 56.1, 40.1, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd: 498.18, found: 498.61。

實施例9

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-（3-（三氟甲基）苯基）-5，6-二氫嘧啶-2（1H） - 硫酮(9)的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和169.19mg(1.3mmol) 1-（3-（三氟甲基）苯基）硫脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（131.32mg）， 總收率41.10%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6,300K):d 7.85(2H,d,J=7.52Hz), 7.16(1H, t), 6.95(1H,s), 6.94(1H,m), 6.91(1H,m), 6.85(2H,d,J=7.52), 6.60(1H,m), 6.41(1H,s), 6.30(1H,q), 5.35(2H,s), 5.00-4.98(2H, m), 3.9(1H,t), 3.83(3H,s), 1.88-1.63(2H,m), 1.69(6H,s).¹³C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm): 177.7, 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 140.6, 135.7, 133.2, 131.3, 129.2, 128.3, 125.2. 124.1, 122.3, 121.3, 116.0, 111.1, 103.8, 69.9, 56.1, 40.1, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd: 541.17, found: 541.60。

實施例10

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-（對甲苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 硫酮(10)的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和127.73mg(1.3mmol) 1-（對 - 甲苯基）硫脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到115℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（139.51mg）, 總收率48.51%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6,300K):d 7.85(2H,d,J=7.52Hz), 7.01(2H,d, J=7.34Hz), 6.95(1H,s), 6.85(2H,d,J=7.52Hz), 6.41(1H,s), 6.30 (1H,q), 6.13(2H,d,J=7.34Hz), 5.35(2H,s), 5.00-4.98(2H,m), 3.9 (1H,t), 3.83(3H,s), 2.34(3H,s), 1.88-1.63(2H,m), 1.69(6H,s). ¹³C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm): 177.7, 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 138.3, 137.3, 133.2, 129.2, 128.3, 125.2, 121.6, 116.0, 111.1, 103.8, 69.9, 56.1, 40.1, 39.8, 28.6, 21.3. HRMS (ESI)for(M+H)+: calcd: 487.20,found: 487.63。

實施例11

1-（4-氟苯基）-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 硫酮(11)的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和130.77mg(1.3mmol) 1-（4-氟苯基）硫脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到120℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（136.21mg），總收率46.98%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6,300K):d 7.85(2H,d,J=7.52Hz), 7.02(2H, t), 6.95(1H,s), 6.85(2H,d,J=7.52Hz), 6.58(2H,m), 6.41(1H,s), 6.30(1H,q), 5.35(2H,s), 5.00-4.98(2H,m), 3.9(1H,t), 3.83(3H, s), 1.88-1.63(2H,m), 1.69(6H,s). ¹³C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm): 177.7, 164.6, 163.3, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 135.9, 133.2, 129.1, 128.2, 125.2, 121.6, 116.0, 115.8, 111.1, 103.8, 69.9, 56.1, 40.1, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd: 491.17, found: 491.59。

實施例12

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-（4-苯氧基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 硫酮(12)的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和187.71mg(1.3mmol)1-（4-苯氧基苯基）硫脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（147.08mg）, 總收率44.07%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6,300K):d 7.85(2H,d,J=7.52Hz), 7.41(2H, t),7.17(1H,m), 7.14(2H,m), 6.95(1H,s), 6.85(2H,d,J=7.52Hz), 6.79(2H,m), 6.78(2H,m), 6.41(1H,s), 6.30(1H,q), 5.35(2H,s), 5.00-4.98(2H,m), 3.9(1H,t), 3.83(3H,s), 1.88-1.63(2H,m), 1.69 (6H,s). ¹³C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm): 177.7, 164.6, 160.8, 157.0, 155.1, 154.7, 150.2, 148.8, 133.3, 129.1, 128.3, 126.2, 125.2, 121.7,118.9, 116.0, 115.7, 111.1, 103.8, 69.9, 56.1, 40.1, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd: 565.21, found: 565.69。

實施例13

1-（3,5-二氯苯基）-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 硫酮(13)的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和169.87mg(1.3mmol)1-（3,5-二氯苯基）硫脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（134.25mg），總收率41.95%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6,300K):d 7.85(2H,d,J=7.52Hz), 7.01(1H, m), 6.95(1H,s), 6.85(2H,d,J=7.52Hz), 6.66(2H,s), 6.41(1H,s), 6.30(1H,q), 5.35(2H,s), 5.00-4.98(2H,m), 3.9(1H,t), 3.83(3H, s), 1.88-1.63(2H,m), 1.69(6H,s). ¹³C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm): 177.7, 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 143.1, 138.8, 133.2, 129.2, 128.3, 125.2, 121.6, 116.0, 111.1, 103.8, 69.9, 56.1, 40.1, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd: 541.10, found: 541.49。

實施例14

1-（3,5-雙（三氟甲基）苯基）-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 硫酮(14)的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和221.44mg(1.3mmol) 1-（3,5-雙（三氟甲基）苯基）硫脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（153.09mg），總收率42.56%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6,300K):d 7.85(2H,d,J=7.52Hz), 7.33(1H, m), 6.95(1H,s), 6.91(2H,s), 6.85(2H,d,J=7.52Hz), 6.41(1H,s), 6.30(1H,q), 5.35(2H,s), 5.00-4.98(2H,m), 3.9(1H,t), 3.83(3H, s), 1.88-1.63(2H,m), 1.69(6H,s). ¹³C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm): 177.7, 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 140.9, 133.2, 131.6, 129.1, 128.3, 125.4, 121.6, 119.1, 116.0, 111.1, 103.8, 69.9, 56.1, 40.1, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd: 609.16, found: 609.59。

實施例15

1-（2,4-二甲氧基苯基）-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 硫酮(15)的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和163.09mg(1.3mmol) 1-（2,4-二甲基苯基）硫脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（135.70mg），總收率43.11%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6,300K):d 7.85(2H,d,J=7.52Hz), 6.95(1H, s), 6.85(2H,d,J=7.52Hz), 6.41(1H,s), 6.38(1H,m), 6.36(1H,m), 6.33(1H,m), 6.30(1H,q), 5.35(2H,s), 5.00-4.98(2H,m), 3.9(1H, t), 3.83(3H,s), 1.88-1.63(2H,m), 1.69(6H,s). ¹³C NMR(75MHz, DMSO-d6 ) δ(ppm): 177.7, 170.0, 164.6, 160.8, 158.6, 155.1, 154.7, 148.8, 133.2, 129.1, 128.4, 125.2, 121.6, 119.5, 116.0, 111.1, 106.9, 103.8, 100.7, 70.2, 56.1, 55.8, 40.1, 39.8, 28.6. HRMS(ESI)for(M+H)+: calcd: 533.20, found: 533.65。

實施例16

本發(fā)明化合物的抗腫瘤活性測試

對本發(fā)明的化合物進(jìn)行了腫瘤細(xì)胞增殖抑制試驗，試驗方法采用常規(guī)的MTT法。

細(xì)胞株選用：人肝癌細(xì)胞(HepG2)，人肺癌細(xì)胞(A-549)，人胃癌細(xì)胞(SGC-7901)。培養(yǎng)液為DMEM+15%NBS+雙抗。

樣品液的配制：用DMSO(Merck)溶解后，加入PBS(-)配成的100 μmol/L的溶液或者均勻的混懸液，然后用DMSO的PBS(-)稀釋，最終濃度分別為0.1，1，10，20，40，60，80，100 μmol/L。

將上市的抗腫瘤藥物阿糖胞苷(Ara-C)以同樣的條件配成對照品溶液。

細(xì)胞培養(yǎng)：貼壁生長腫瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)于含10% 滅活新生牛血清和青霉素、鏈霉素（各100萬U/L）的1640培養(yǎng)液中，置于37℃，5% CO₂，飽和濕度的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞貼壁生長，每2～3 天傳代1 次，傳代時首先倒出培養(yǎng)液，PBS洗2次，胰酶消化后，加入新鮮的培養(yǎng)液吹打均勻，調(diào)整細(xì)胞至適當(dāng)濃度移入新的培養(yǎng)瓶中，添加培養(yǎng)液至適量。取對數(shù)生長期細(xì)胞用于實驗。

MTT法檢測細(xì)胞活性及IC₅₀的測定：

實驗原理：活細(xì)胞線粒體中脫氫酶能將黃色的MTT還原成不溶于水的藍(lán)紫色產(chǎn)物甲臜 (MTT formazan)，并沉積在細(xì)胞中，生成的量與活細(xì)胞數(shù)目成正比，而死細(xì)胞沒有這種功能。DMSO能溶解藍(lán)紫色結(jié)晶物，顏色深淺與所含的量成正比，因此用酶標(biāo)儀測定的光吸收值可反映細(xì)胞存活率。

表1 化合物對不同腫瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC₅₀（單位：μmol/L）

實驗方法：取對數(shù)生長期細(xì)胞，消化、計數(shù)，以 2×104/mL 的密度接種于 96 孔培養(yǎng)板中，每孔100 μl。培養(yǎng) 24小時后，將待測化合物以0.1，1，10，20，40，60，80，100 μmol/L濃度處理細(xì)胞。實驗組每個濃度設(shè)5個復(fù)孔，以含0.4% DMSO的培養(yǎng)液作對照。藥物作用 48小時后，去上清，每孔加入100 μl MTT（2-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-3，5-二苯基-2H-四唑氫溴酸鹽）(1mg/mL)，繼續(xù)培養(yǎng) 4小時，棄上清，每孔加入100μl DMSO，振蕩混勻，用酶標(biāo)儀在570 nm處測定吸光度值，采用 IC₅₀ 計算軟件求出半數(shù)抑制濃度(IC₅₀)。

試驗結(jié)果詳見表1，其中，樣品是指相應(yīng)實施例中制備的甘草查爾酮A硫脲嘧啶類衍生物，樣品編號對應(yīng)制備實施例中所得到的化合物的具體編號。

化合物7和化合物2在所測試的3種細(xì)胞株中均表現(xiàn)出了良好的抗腫瘤活性，化合物1和11次之，在不同的細(xì)胞株中也表現(xiàn)出了良好的抗腫瘤活性。以上實驗結(jié)果表明，本發(fā)明的化合物具有良好的抗腫瘤活性，特別是部分甘草查爾酮A硫脲嘧啶類衍生物的活性在特定細(xì)胞株中抗腫瘤活性優(yōu)于或等同于阿糖胞苷，可用于抗腫瘤藥物的研究。