一種酶解制備鎖陽多糖的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種酶解制備鎖陽多糖的方法。本發(fā)明公開的一種制備鎖陽多糖的方法，包括如下步驟：在脫脂的鎖陽粉末中加入占脫脂的鎖陽粉末質(zhì)量百分含量0.5％-3％的胃蛋白酶，得混合粉末；在混合粉末中加入鹽酸水溶液，酶解，得酶解液；將酶解液微沸回流，使酶解液中的胃蛋白酶失活，冷卻，離心得上清液；將上清液用Sevage法脫除蛋白，棄去下層有機(jī)相，得上層水溶液；將上層水溶液加入無水乙醇醇沉，即得所述的鎖陽多糖。本發(fā)明公開的方法工藝簡(jiǎn)單，提取成本低，適合于工業(yè)化大量生產(chǎn)，同時(shí)由于本制備方法得到的鎖陽多糖相較于傳統(tǒng)工藝脫色效果良好，顏色呈淺粉色，為開發(fā)觀感要求高的新產(chǎn)品奠定了基礎(chǔ)。
【專利說明】一種酶解制備鎖陽多糖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種鎖陽多糖的制備方法；特別涉及一種酶解制備鎖陽多糖的方法，屬于中藥制備領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]鎖陽是一種根寄生肉質(zhì)草本種子植物，俗稱不老藥，其干燥肉質(zhì)莖可作為傳統(tǒng)中醫(yī)、蒙醫(yī)、維吾爾醫(yī)藥材。中華人民共和國(guó)藥典2010年版一部記載，鎖陽用作補(bǔ)腎陽，益精血，潤(rùn)腸通便，主治腎陽不足，精血虧虛，腰膝痿軟，陽痿滑精，腸燥便秘。近代研究發(fā)現(xiàn)鎖陽水提液具有抗氧化、抗缺氧、抗癲癇、提高免疫、延緩衰老、增強(qiáng)耐力、延長(zhǎng)抗應(yīng)激存活時(shí)間等方面的重要醫(yī)療價(jià)值。
[0003]多糖是許多中草藥的重要成分，在傳統(tǒng)熱水煎服途徑，水煎液中必然含有大量的多糖類組分。近年研究表明鎖陽多糖具有多種生物活性，包括抗氧化、增強(qiáng)免疫、抗衰老、抗疲勞、抗急性胃潰瘍、促進(jìn)小腸推進(jìn)功能等，具備了鎖陽水提液大部分重要的生物活性。因此，提高鎖陽多糖的提取率，對(duì)充分利用鎖陽資源、開發(fā)鎖陽多糖產(chǎn)品很有價(jià)值。
[0004]鎖陽多糖的提取制備方法一般采用水提醇沉法，按照料液比、提取時(shí)間、提取次數(shù)三個(gè)因素的最佳工藝條件進(jìn)行提取制備，經(jīng)減壓烘干后所得鎖陽多糖樣品溶于蒸餾水中，經(jīng)苯酚-硫酸法測(cè)定其中所含多糖質(zhì)量，并計(jì)算出鎖陽(產(chǎn)地:甘肅張掖市)多糖得率為43.46mg/g;不同產(chǎn)地的鎖陽，其多糖得率也有差別，經(jīng)測(cè)量甘肅地區(qū)不同產(chǎn)地鎖陽多糖得率為37.05mg/g-68.50mg/g(羅光宏等，2011，甘肅河西沙區(qū)鎖陽多糖提取工藝優(yōu)化及含量測(cè)定，食品科學(xué)，32(10):79-83 J近年已公布的相關(guān)專利中鎖陽多糖提取率較高的方法為:采用酶輔助提取法，相對(duì)于傳統(tǒng)方法可使鎖陽多糖提取率提高10-65%，鎖陽多糖含量提高
5-40%。(甘肅凱源生物技術(shù)開發(fā)中心，2013，酶處理提取鎖陽多糖的方法及鎖陽多糖抗腫瘤制劑的制備，CN103145863A。)
[0005]鎖陽是全寄生植物，采收后干燥肉質(zhì)莖全部入藥，味微苦澀。市售鎖陽多糖多為棕色或棕紅色粉末，含有大量鞣質(zhì)花青素類成分，其顏色嚴(yán)重影響鎖陽多糖劑型的應(yīng)用，需要發(fā)明一種多糖提取率高、多糖得率也高，并具有脫色效果好、利于多種劑型應(yīng)用的鎖陽多糖制備方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種酶解制備鎖陽多糖的方法，本發(fā)明提供的制備方法有效提高了鎖陽多糖提取率和得率，分別比傳統(tǒng)方法提高了 114%-242%和95%-273% ;并通過胃蛋白酶酶解作用 ，分解了部分細(xì)胞間蛋白質(zhì)，大大改善了鎖陽多糖的溶出和提取，制備的鎖陽多糖純度高，顏色淺，水溶性好，可用于直接制備鎖陽多糖制劑，或用于高品質(zhì)鎖陽多糖藥品保健品的原料。
[0007]本發(fā)明提供一種制備鎖陽多糖的方法，包括如下步驟:在脫脂的鎖陽粉末中加入占脫脂的鎖陽粉末質(zhì)量百分含量0.5% -3%的胃蛋白酶，得混合粉末；在混合粉末中加入鹽酸水溶液，酶解，得酶解液；將酶解液微沸回流，使酶解液中的胃蛋白酶失活，冷卻，離心得上清液；將上清液用Sevage法脫除蛋白，棄去下層有機(jī)相，得上層水溶液；將上層水溶液加入無水乙醇醇沉，即得所述的鎖陽多糖。
[0008]上述方法中，所述脫脂的鎖陽粉末按照如下方法制備:將鎖陽的肉質(zhì)莖自然干燥，粉碎，過篩，得粉末；將粉末脫脂干燥，得脫脂的鎖陽粉末。
[0009]上述方法中，所述篩為30目-80目篩，具體為30目篩。
[0010]上述 任一所述的方法中，所述脫脂干燥的步驟如下:采用脫脂有機(jī)溶劑按(5ml-20ml):lg的比例加入所述粉末，浸泡，抽濾，得濾餅，并將濾餅重復(fù)上述操作，將濾餅烘干；
[0011]所述脫脂有機(jī)溶劑具體按IOml:lg的比例加入所述粉末；
[0012]所述脫脂有機(jī)溶劑按照如下方法制備:將二氯甲烷和甲醇按照體積比(1-3):1混勻；
[0013]所述二氯甲烷和甲醇的體積比具體為2:1 ;
[0014]所述浸泡的時(shí)間為4-24小時(shí),具體為12小時(shí)；
[0015]所述重復(fù)的次數(shù)為2-4次,具體為3次。
[0016]上述任一所述的方法中，所述胃蛋白酶占所述脫脂的鎖陽粉末質(zhì)量百分含量為1% -3%。
[0017]上述任一所述的方法中，所述混合粉末與所述鹽酸水溶液的比例為Ig:(40ml-140ml)；
[0018]所述鹽酸水溶液的pH為1.3-2.0，具體為1.3-1.5 ；
[0019]所述酶解的溫度為30°C -45°C ；
[0020]所述酶解的時(shí)間為3h_7h，具體為4h_7h ；
[0021]所述回流的時(shí)間為0.5h_2h，具體為lh_2h。
[0022]上述任一所述的方法中，所述胃蛋白酶占所述脫脂的鎖陽粉末質(zhì)量百分含量為2 % ；
[0023]所述混合粉末與所述鹽酸水溶液的比例為Ig:80ml ；
[0024]所述鹽酸水溶液的pH為1.5 ;
[0025]所述酶解的溫度為40°C ；
[0026]所述酶解的時(shí)間為5h ；
[0027]所述回流的時(shí)間為lh。
[0028]上述任一所述的方法中，所述離心的條件為3000-10000r/min，10_30min，2_25°C，具體為 5000r/min，20min, 4°C。
[0029]上述任一所述的方法中，所述用Sevage法脫除蛋白的次數(shù)為2_4次，具體為3次；
[0030]所述Sevage法中氯仿:正丁醇體積比為4:1 ;
[0031]所述上層水溶液加入無水乙醇醇沉之前還包括如下步驟:將上層水溶液減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得濃縮液；
[0032]所述無水乙醇醇沉?xí)r濃縮液與無水乙醇的體積比為1:4;
[0033]所述醇沉的條件為4°C靜置過夜，離心，得沉淀；
[0034]所述醇沉之后還包括如下步驟:用無水乙醇洗滌沉淀，離心得沉淀，將其冷凍干燥，即得所述的鎖陽多糖；
[0035]所述離心的條件為3000-10000r/min，10_30min，2-25 °C，具體為 5000r/min，20min，4。。。
[0036]上述任一所述的方法在制備鎖陽多糖中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0037]本發(fā)明提供的方法工藝簡(jiǎn)單，提取成本低，適合于工業(yè)化大量生產(chǎn)，同時(shí)由于本制備方法得到的鎖陽多糖相較于傳統(tǒng)工藝脫色效果良好，顏色呈淺粉色，為開發(fā)觀感要求高的新產(chǎn)品奠定了基礎(chǔ)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0038]圖1為實(shí)施例15制備的鎖陽多糖紅外吸收光譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0039]下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0040]下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0041]下述實(shí)施例中選用的材料鎖陽(Cynomorium songaricum Rupr.),為自然干燥肉質(zhì)莖(購自當(dāng)?shù)馗Ｈ鸫笏幏?，產(chǎn)地內(nèi)蒙古鄂爾多斯市杭錦旗)，將其粉碎，過30目篩，備用。
[0042]下述實(shí)施例中鎖陽多糖得率參照文獻(xiàn)“羅光宏等，2011，甘肅河西沙區(qū)鎖陽多糖提取工藝優(yōu)化及含量測(cè)定，食品科學(xué)，32(10):79-83”、鎖陽多糖提取率參照文獻(xiàn)“J.Prakash Maran,et al.2013, Box - Behnken design based statistical modelingfor ultrasound-assisted extraction of corn silk polysaccharide, CarbohydratePolymers, 2013(92): 604-611.”進(jìn)行計(jì)算，計(jì)算公式如下:
[0043]
【權(quán)利要求】
1.一種制備鎖陽多糖的方法，包括如下步驟:在脫脂的鎖陽粉末中加入占脫脂的鎖陽粉末質(zhì)量百分含量0.5% -3%的胃蛋白酶，得混合粉末；在混合粉末中加入鹽酸水溶液，酶解，得酶解液；將酶解液微沸回流，使酶解液中的胃蛋白酶失活，冷卻，離心得上清液；將上清液用Sevage法脫除蛋白，棄去下層有機(jī)相，得上層水溶液；將上層水溶液加入無水乙醇醇沉，即得所述的鎖陽多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述脫脂的鎖陽粉末按照如下方法制備:將鎖陽的肉質(zhì)莖自然干燥，粉碎，過篩，得粉末；將粉末脫脂干燥，得脫脂的鎖陽粉末。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于:所述篩為30目-80目篩，具體為30目篩。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于:所述脫脂干燥的步驟如下:采用脫脂有機(jī)溶劑按(5ml-20ml):1g的比例加入所述粉末，浸泡，抽濾，得濾餅，并將濾餅重復(fù)上述操作，將濾餅烘干； 所述脫脂有機(jī)溶劑具體按IOml:lg的比例加入所述粉末； 所述脫脂有機(jī)溶劑按照如下方法制備:將二氯甲烷和甲醇按照體積比(1-3):1混勻； 所述二氯甲烷和甲醇的體積比具體為2:1 ; 所述浸泡的時(shí)間為4-24小時(shí),具體為12小時(shí)； 所述重復(fù)的次數(shù)為2-4次,具體為3次。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的方法，其特征在于:所述胃蛋白酶占所述脫脂的鎖陽粉末質(zhì)量百分含量為
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的方法，其特征在于:所述混合粉末與所述鹽酸水溶液的比例為 Ig: (40ml-140ml)； 所述鹽酸水溶液的PH為1.3-2.0,具體為1.3-1.5 ； 所述酶解的溫度為30°C -45°C ； 所述酶解的時(shí)間為3h-7h，具體為4h-7h ； 所述回流的時(shí)間為0.5h-2h，具體為lh-2h。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一所述的方法，其特征在于:所述胃蛋白酶占所述脫脂的鎖陽粉末質(zhì)量百分含量為2% ； 所述混合粉末與所述鹽酸水溶液的比例為Ig:80ml ； 所述鹽酸水溶液的pH為1.5; 所述酶解的溫度為40°C ； 所述酶解的時(shí)間為5h ； 所述回流的時(shí)間為lh。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一所述的方法，其特征在于:所述離心的條件為3000-100001./min, 10-30min, 2-25°C，具體為 5000r/min, 20min, 4°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一所述的方法，其特征在于:所述用Sevage法脫除蛋白的次數(shù)為2-4次，具體為3次； 所述Sevage法中氯仿:正丁醇體積比為4:1; 所述上層水溶液加入無水乙醇醇沉之前還包括如下步驟:將上層水溶液減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得濃縮液； 所述無水乙醇醇沉?xí)r濃縮液與無水乙醇的體積比為1:4 ；所述醇沉的條件為4°C靜置過夜，離心，得沉淀； 所述醇沉之后還包括如下步驟:用無水乙醇洗滌沉淀，離心得沉淀，將其冷凍干燥，即得所述的鎖陽多糖； 所述離心的條件為 3000-10000r/min，10-30min，2-25°C，具體為 5000r/min，20min，4。。。
10.權(quán)利要 求1-9任一所述的方法在制備鎖陽多糖中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C08B37/00GK104004108SQ201410244149
【公開日】2014年8月27日 申請(qǐng)日期:2014年6月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月4日
【發(fā)明者】陳貴林, 樊海燕, 于春洋 申請(qǐng)人:內(nèi)蒙古大學(xué)