專(zhuān)利名稱(chēng)：木聚糖酶活力的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于木聚糖酶活力測(cè)定領(lǐng)域，特別涉及一種測(cè)定木聚糖酶活力的方法。
背景技術(shù)：
木聚糖酶是可將木聚糖降解成低聚木糖和木糖的水解酶。近年來(lái)，因其在造紙工業(yè)、食品工業(yè)、飼料工業(yè)、能源工業(yè)和環(huán)境科學(xué)等方面都具有較大的應(yīng)用價(jià)值，因而引起科研工作者的廣泛關(guān)注，并對(duì)其進(jìn)行了相關(guān)研究。酶活力是衡量酶生物活力的重要指標(biāo)。木聚糖酶屬多糖水解酶，目前常用DNS測(cè)定其酶活力，具體方法是分別取具有一定濃度梯度的木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液各2. OOmL于試管中，加入5mL DNS試劑，混勻，沸水浴加熱5 15min，然后立即用冷水冷卻至室溫，加水定容至25mL。以標(biāo)準(zhǔn)空白樣對(duì)照調(diào)零，在MOnm處測(cè)定吸光度OD值。雖然此法簡(jiǎn)便、快捷，但由于DNS對(duì)還原性的單糖、寡糖都具有氧化能力，導(dǎo)致該方法中建立的單糖標(biāo)準(zhǔn)曲線與實(shí)際樣品間存在誤差，不利于產(chǎn)品質(zhì)量的控制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)已有技術(shù)的不足，提供一種采用砷鉬酸鹽法來(lái)測(cè)定木聚糖酶活力的方法，該方法在檢測(cè)酶活時(shí)產(chǎn)生的變異較小，干擾較少，準(zhǔn)確性明顯提高。本發(fā)明所述木聚糖酶活力的測(cè)定方法，其步驟如下(1)制作木糖吸光度-木糖濃度的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)應(yīng)曲線；(2)用待測(cè)木聚糖酶水解木聚糖，然后檢測(cè)水解得到的木糖的吸光度值；(3)將步驟( 所測(cè)水解得到的木糖的吸光度值用步驟(1)所述木糖吸光度-木糖濃度的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)應(yīng)曲線獲得所述水解產(chǎn)物木糖的含量；(4)根據(jù)以下公式計(jì)算木聚糖酶的活力
權(quán)利要求
1.一種木聚糖酶活力的測(cè)定方法，其特征在于步驟如下(1)制作木糖吸光度-木糖濃度的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)應(yīng)曲線；(2)用待測(cè)木聚糖酶水解木聚糖，然后檢測(cè)水解得到的木糖的吸光度值；(3)將步驟( 所測(cè)水解得到的木糖的吸光度值用步驟(1)所述木糖吸光度-木糖濃度的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)應(yīng)曲線獲得所述水解產(chǎn)物木糖的含量；(4)根據(jù)以下公式計(jì)算木聚糖酶的活力
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的木聚糖酶活力的測(cè)定方法，其特征在于制作木糖吸光度-木糖濃度的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)應(yīng)曲線時(shí)，在0 16. 7ug/ml濃度范圍配制5組不同濃度的木糖標(biāo)準(zhǔn)液，分別在各組標(biāo)準(zhǔn)液中加入硫酸銅混合液，沸水浴lOmin，冷卻至室溫，再加入砷鉬酸混合液，離心后在MOnm下測(cè)上清液的吸光值。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的木聚糖酶活力的測(cè)定方法，其特征在于用待測(cè)木聚糖酶水解木聚糖是將木聚糖溶液平衡到30°C再加入待測(cè)木聚糖酶溶液，混合均勻后，30°C靜置 IOmin,再加入硫酸銅混合液，沸水浴lOmin，然后冷卻到室溫時(shí)再加入砷鉬酸混合液，搖動(dòng)或渦漩直到試管停止起泡，所有的沉淀溶解后離心。
全文摘要
一種木聚糖酶活力的測(cè)定方法，其特征在于步驟如下(1)制作木糖吸光度-木糖濃度的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)應(yīng)曲線；(2)用待測(cè)木聚糖酶水解木聚糖，然后檢測(cè)水解得到的木糖的吸光度值；(3)將步驟(2)所測(cè)水解得到的木糖的吸光度值用步驟(1)所述木糖吸光度-木糖濃度的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)應(yīng)曲線獲得所述水解產(chǎn)物木糖的含量；(4)根據(jù)以下公式計(jì)算木聚糖酶的活力上式中，df＝稀釋系數(shù)，10＝反應(yīng)時(shí)間，0.1＝使用酶的體積。
文檔編號(hào)G01N21/31GK102401786SQ20101028488
公開(kāi)日2012年4月4日 申請(qǐng)日期2010年9月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月17日
發(fā)明者李丹, 王傳勝, 蔣彥 申請(qǐng)人:四川大學(xué)