專利名稱：脫氧野尻霉素的一種純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物與新醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及從植物中提取活性化合物，即從桑葉中提取分離高純度的1-脫氧野尻霉素及高附加值副產(chǎn)物桑葉多糖。
背景技術(shù)：
1-脫氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin，以下簡(jiǎn)稱“1-DNJ”)是一種多羥基哌啶生物堿，因其結(jié)構(gòu)類似單糖也稱為亞胺基糖，其化學(xué)名稱是3，4，5-三羥基-2-羥甲基四氫吡啶，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如

圖1所示，分子式為C6H13NO4，分子量為163。I-DNJ具有多種生物活性，可用于治療糖尿病、肥胖癥、病毒感染等疾病，同時(shí)可抑制腫瘤，對(duì)α-葡萄糖淀粉酶有抑制作用，并可用作載體用于高純度麥芽糖的酶合成。
權(quán)利要求
1.脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于(1)桑葉藥材除雜，干燥后粉碎，過篩，得提取用桑葉粉末；(2)原料粉末在乙醇溶液內(nèi)浸泡后，超聲波提取，分離固液相后獲得提取液，提取液濃縮并回收乙醇，離心，去沉淀；(3)將步驟( 得到的的離心濃縮液過陽離子樹脂層析柱上樣后用蒸餾水沖洗至流出液無色為止，用氨水洗脫，收集PH 9-12段洗脫液，濃縮至小體積；(4)將步驟(3)得到的濃縮液調(diào)節(jié)pH值至7.0左右，以氯仿萃取，留水相；(5)將步驟的水相用正丁醇萃取，保留正丁醇相，濃縮后收集析出固體；(6)將步驟(5)析出的固體用無水乙醇進(jìn)行重結(jié)晶；(7)將步驟(6)獲得的晶體溶于水后，過凝膠過濾層析柱，流出液濃縮、干燥獲得1-脫氧野尻霉素精制品，純度不低于98. 5%。
2.如權(quán)利要求1中所述的脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于，步驟(1)所述的桑葉干燥粉碎后過30 50目篩。
3.如權(quán)利要求1中所述的脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于，步驟( 所述乙醇的浸泡濃度為60% 65%，浸泡時(shí)間為30 40min。
4.如權(quán)利要求1中所述的脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于，步驟( 所述超聲波的提取功率為125W，溫度70°C，提取次數(shù)為2 3次，每次30min。
5.如權(quán)利要求1中所述的脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于，步驟C3)中所述的陽離子樹脂為AB-8、732H、D152，氨水的洗脫濃度為0. 25 0. 30mol/L，洗脫速度為1 2mL/min。
6.如權(quán)利要求1中所述的脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于，步驟(4)所述 PH值調(diào)節(jié)液為鹽酸、醋酸，氯仿與濃縮液的體積比為1 2-1 4，萃取次數(shù)為2 4次。
7.如權(quán)利要求1所述的脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于，步驟(5)所述正丁醇與水相的體積比為1 2-1 4，萃取次數(shù)為4 6次。
8.如權(quán)利要求1所述的脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于，步驟(6)所述無水乙醇重結(jié)晶的次數(shù)為2 3次。
9.如權(quán)利要求1所述的脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于，步驟(7)所述凝膠過濾層析柱Superose 4B, Sephdex 20等，純水洗脫。
10.脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于制備獲得1-脫氧野尻霉素的同時(shí)可制備獲得桑葉多糖(1)將權(quán)利要求1步驟( 超聲波提取后分離獲得的固相加入2-3倍體積的蒸餾水，攪拌均勻后固液分離獲得提取液；(2)將權(quán)利要求10步驟(1)獲得提取液濃縮后加入乙醇、丙酮或異丙醇萃取，除去脂溶性部分，保留水相；(3)將權(quán)利要求10步驟⑵獲得水相內(nèi)加入乙酸乙酯或石油醚萃取，去除葉綠色，保留水相；(4)將權(quán)利要求10步驟C3)獲得水相內(nèi)加入無水乙醇，使其終濃度達(dá)到80%，攪拌均勻后4°C下靜置48h，抽濾，獲得沉淀物；(5)將權(quán)利要求10步驟(4)獲得沉淀物加水溶解后4°C下加入三氯乙酸，終濃度達(dá)到20%，攪拌20min后離心，保留液相，除蛋白；(6)將權(quán)利要求10步驟( 獲得液相過AB-8大孔徑吸附樹脂，蒸餾水洗脫，洗脫液濃縮后加活性炭脫色，脫色液加無水乙醇終濃度達(dá)到80%以上，攪拌均勻后4°C下靜置48h， 抽濾，沉淀分別用無水乙醇、丙酮各洗3-5次，得白色沉淀；(7)將權(quán)利要求10步驟(6)獲得沉淀溶解透析(分子量11000以上)，干燥，獲得白色粉末，多糖含量高于90%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從植物內(nèi)提取化合物的純化技術(shù)，從天然產(chǎn)物桑葉中提取分離高純度1-脫氧野尻霉素，同時(shí)精制獲得桑葉多糖的方法，主要包括以下步驟原料預(yù)處理后溶于乙醇溶液，超聲波提取，提取液濃縮后過陽離子樹脂，洗脫液濃縮后經(jīng)有機(jī)溶劑萃取、重結(jié)晶、凝膠過濾層析后制備獲得1-脫氧野尻霉素精制品，純度不低于98.5％。本工藝操作簡(jiǎn)單，成本低，環(huán)境污染低，設(shè)備典型，材料易于獲得，適合大規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C08B37/00GK102491938SQ20111042278
公開日2012年6月13日 申請(qǐng)日期2011年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月16日
發(fā)明者殷紅 申請(qǐng)人:北京貫虹科技集團(tuán)有限公司