專利名稱：取代的聚氨基羧酸大環(huán)化合物的金屬螯合物和其在診斷成象中的應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及由大環(huán)聚氨基羧酸和金屬陽離子形成的螯合物和其在診斷成象，特別是在磁性陽離子的磁共振成象(MRI)中的應用。
弛豫性r1和r2特別是第一個給出了該螯合物的磁效力的量度，可以確定其作為造影劑的用途。對于最近上市的產(chǎn)品，r1沒有超過6mM-1s-1(在20MHz和37℃條件下)，無論這些螯合物是直線型的(三胺五乙酸釓(gadopentetate或DTPA和gadoversetamide)還是大環(huán)化合物(四氮十二環(huán)酸鹽(gadoterate)或DOTA和加多利通(gadoteridol))。此外，當這些化合物通過靜脈給藥時，它們迅速從血管區(qū)域擴散進細胞外的間隙腔，至今市場上還沒有一種產(chǎn)品能充分局限在血管中以便精確評價組織灌注、毛細血管滲透性或血容量。
將標準螯合物接枝到生物相容的聚合物上得到的取代的大分子例如三胺五乙酸釓連接到聚乙二醇或聚賴氨酸上得到的，或者三胺五乙酸釓和四氮十二環(huán)酸鹽接枝到多糖上得到取代的大分子，這些取代的大分子已被描述了10多年進行了動物實驗，但還沒有在人體中進行研究。
人們已經(jīng)提出將這些標準的螯合物(DTPA或DOTA)接枝到獨特分子量的支鏈聚合物上，稱為階式聚合物或樹枝狀聚合物(dendrimers)，它們由不同的重復單元組成，例如在EP-A-430863或EP-A-607222中公開的。已知這些產(chǎn)物的弛豫性高且它們具有一定量的血管滯留，但這些結(jié)果受到限制，因為，不管其大小，例如在EP-A-430863中描述的含有24或48個三胺五乙酸釓分子的聚胺的弛豫性r1僅有約13mM-1s-1，對單獨的三胺五乙酸釓的弛豫性為4.8mM-1s-1。此外，在合成過程中似乎難以分離單一的化合物，即難以獲得該聚胺的所有末端基的取代物，假定可以獲得均勻分子量的單一化合物，就能夠避免給予劑量的藥物組分的物理化學和藥物動力學特性的分散性，該分散性是標準取代的聚合物的已知缺點，限制了它們的開發(fā)。
在針對獲得獨特的分子量的具有高弛豫性和僅含一個螯合基的分子的最新研究中，可能涉及EP-A-661279和WO97/01359，它們強調(diào)了在已知分子結(jié)構(gòu)的供體氮原子的側(cè)基上引入至少3個重量大于200的親水側(cè)臂的優(yōu)點，該供體氮原子側(cè)基含其他配位基團，無論它們是酸基還是取代的基團；特別提到下式的四氮十二環(huán)酸鹽的取代化合物的釓配合物在20MHz和37℃下的弛豫性r1＞20mM-1s-1，
其中
對于具有高弛豫性和具有一定量的血管滯留的化合物，亦應當提到在WO96/23526中描述的那些，它們在結(jié)構(gòu)方面基本上不同于上面的化合物，它們的代表例之一是MS325，下式化合物的釓配合物可逆地結(jié)合在血漿中的白蛋白上，這樣其在該介質(zhì)中的弛豫性r1實際上是從其衍生的gadopendtetate的10倍，根據(jù)Acad.Radiol.S356-S358(1996)，在兔子中半衰期乘以4，分布體積除以2.5。
與MS325和其同系物相比，本發(fā)明的的順磁金屬配合物即使在水中也具有高弛豫性，因為其中r1大于30mM-1s-1(20MHz,37℃)；此外，盡管它們幾乎不結(jié)合到血漿白蛋白上，但它們顯示出顯著的血管定位性，且主要通過腎排除，這樣它們可有利地在MRI中作為造影劑，來揭示循環(huán)系統(tǒng)。
根據(jù)第一個方面，本發(fā)明涉及式Ⅰ的聚氨基羧酸大環(huán)化合物的順磁或放射性金屬離子螯合物
其中m是1或2,R＇是H，選擇性羥基化的C1-C4烷基，CH2-COOH基，CH2-CONZ1Z2,Z1和Z2彼此獨立地是H或選擇性羥基化的C1-C4烷基或R′是基團
R是基團
其中a是1或2Z是鍵，CH2,CH2-CO-NH或(CH2)2-NHCOZ′是鍵，O,S,NQ,CH2,CO,CO-NQ,NQ-CO,NQ-CO-NQ,CO-NQ-CH2-CONQZ″是CO-NQ,NQ-CO,CO-NQ-CH2-CO-NQ或NQ-CO-CH2-NQ-CO其中Q是H或選擇性羥基化的C1-C4烷基，R1,R2,R3,R4和R5彼此獨立地是選自由H,Br,Cl,I,CO-NQ1Q2或N(Q1)-CO-Q2組成的組,Q1和Q2(可以相同或不同)選自C2-C6烷基,該烷基是選擇性羥基化的和由氧原子選擇性間斷的，這樣Q1和Q2總共含有4-10個OH基，但須R1,R2,R3,R4和R5基的至少一個，但不多于2個的基團是酰氨基基團。
本發(fā)明的在螯合物中配合的金屬陽離子是選自一般用于MRI中的順磁陽離子，特別是包括Fe3+,Cr3+,Eu3+,Gd3+,Tb3+的三價陽離子，優(yōu)選Gd3+，或用于閃爍照相時，選自放射性同位素例如99mTc或111In的陽離子。
可得到式Ⅰ化合物的金屬配合物的含有選擇性的游離酸基的藥物上可接受的鹽的無機堿優(yōu)選選自堿金屬(K+,Na+)或堿土金屬(Ca++,Mg++)氫氧化物和碳酸鹽，而有機堿是選自胺如氨基乙醇，thromethamine或N-甲基葡糖胺，或氨基酸如賴氨酸，甘氨酸或精氨酸。
優(yōu)選的化合物是那些這樣的化合物，其中m是2,a是1,R′不是H或烷基，Z是鍵，CH2或CH2CONH,Z＇是CONH,NHCO,CONHCH2CONH或NHCONH,Z″是CONH或CONHCH2CONH和R2=CONQ1Q2,R1,R2,R4和R5分別是H,Br,Cl或I，或者R2=R4=CONQ1Q2，在此情況下，R1,R2和R5分別是H,Br,Cl或I，或Z″是NHCO和R3=N(Q1)COQ2,R1,R2,R4和R5分別是H,Br,Cl或I，或者R2=R4=N(Q1)COQ2，在此情況下，R1,R3和R5分別是H,Br,Cl或I。
其中，優(yōu)選的化合物是這樣的化合物，其中Z′是CONH,CONHCH2CONH或NHCONH，更優(yōu)選的是那些這樣的化合物，其中Z′是CONH，較短的鍵，R1,R3和R5都是Br或I,R2=R4=CONQ1Q2，其中Q1和Q2是總共含有-10個OH基的C2-C6羥烷基，或者如果Q1和/或Q2由氧原子間斷，它們含有4-8個OH基。
根據(jù)第二個方面，本發(fā)明涉及一種制備式Ⅰ化合物的金屬螯合物的方法，其特征在于在適合于含水或有機反應介質(zhì)的偶合劑存在下，特別是那些用于肽合成的偶合劑存在下，金屬陽離子M3+和式Ⅱ化合物的螯合物Ⅱ
和式Ⅲ的胺
反應，其中字母的含義與式Ⅰ中的相同，其中式Ⅱ和Ⅲ的化合物至少部分是溶液態(tài)。在上述條件下，被保護的位于相對于化合物Ⅱ中的氮原子是α位的碳原子上的羧酸基團沒有反應。
根據(jù)另一方面，本發(fā)明涉及當螯合物作為放射性標記的時候，通過閃爍照相法，或當螯合物含有順磁離子時，通過磁共振，對人或動物成象的造影劑，該試劑選擇性地是無機或有機陽離子的鹽，在藥物可接受的載體中，與相容的賦形劑混合。
根據(jù)最后方面，本發(fā)明涉及人體或動物體的成象方法，其特征在于給予個體有效單位劑量的本發(fā)明的組合物，將研究的組織或表面置于合適的磁場中以便觀察質(zhì)子磁共振，或當螯合物含有放射性核素時經(jīng)受閃爍照相。
制備在中心大環(huán)化合物，1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷或環(huán)烯(cyclen)的氮原子上含4個相同取代基的式Ⅰ化合物的螯合物，制備步驟比R＇是H,CH2COOH,CH2CONZ1Z2或C1-C4烷基或羥烷基化基團，例如CH3,CH2CH2OH或CH-CHOH-CH2OH的情況少，因為環(huán)烯的4個氮原子之一必須暫時選擇性地用離去基保護或必須事先進行含基團R＇大環(huán)化合物的單取代。
本發(fā)明化合物中的基團R含有3或4個苯環(huán)，最遠離大環(huán)化合物的一個苯環(huán)被一個或多個親水基團取代，該親水基團對螯合物的水溶解性和生物相容性有影響。在這些親水基團當中，優(yōu)選的是叔酰胺基團，其中取代基是選擇性地被氧原子間斷的C2-C6羥烷基，特別是那些衍生自直鏈氨基醇HNQ1Q2的基團，其中Q1和Q2彼此分別是CH2(CHOH)n(CH2OCH2)r(CHOH)pCH2OH，和，·如果在Q1和Q2中，r=0，那么p=0,n可以是0-4,Q1和Q2總共含有5-10個OH基團，特別對于HNQ1Q2，相當于H-N[CH2(CHOH)4CH2OH]2和
如果在Q1和/或Q2中，r=1，那么n和p彼此分別是O或1,Q1和Q2總共含有4-8個OH基團，特別對于HNQ1Q2，相當于
這些氨基醇前體可以商購得到或通過以下方法制備-例如通過糖的反應并還原由合適的伯氨基醇制備，當n=4,p=r=0時，反應記載在EP-A-675105中，或n=3,p=r=O時記載在EP-A-558395中。
-或者通過糖和芐基胺的反應，接著通過適當?shù)柠u化物或磺酸鹽的反應，引入第二個羥基化的取代基，最后通過催化氫化除去芐基。
當Q1和/或Q2在鏈中含有一個氧原子時，當n=p=0時，從2-氨基乙氧基乙醇制備氨基醇，該2-氨基乙氧基乙醇可以和適當?shù)牧u基化的烷基鹵化物或環(huán)氧化物或羥基化的脂族醛如單糖反應以便形成亞胺，然后該亞胺被催化或化學還原。
當n=1時，通過環(huán)氧化物
和適當?shù)牟被嫉姆磻獊碇苽浒被?，所述的環(huán)氧化物通過用過酸或過氧亞氨基酸氧化相應的取代的乙烯獲得，如在J.Org.Chem.(有機化學期刊)26 659-663(1961)和48888-890(1983)中描述的。
在苯環(huán)上的酰胺基旁有鹵原子特別對于它們的穩(wěn)定性來說是有利的，優(yōu)選的基團R是那些R1=R3=R5=Br或I和R2=R4=CO-NQ1Q2的基團。
橋鍵Z″可以在橋鍵Z＇之前或之后在2個苯環(huán)之間形成。
例如，當Z是一個鍵時，式Ⅳ的化合物
可從二苯基衍生物Ⅴ或其酯制備
其中Z′的含義和式Ⅰ中的一樣。
Z′是O的化合物Ⅴ在Makromoleculare Chemie(大分子化學)130 103-144(1969)中有描述；Z＇是HN的化合物在Indian J.Chem.(印度化學雜志)1335-37(1975)有描述，Z＇是CH2或CO的化合物在J.Pharm.Sci.(藥物科學雜志)55(3)295-302(1966)中有描述，Z＇是一個鍵的化合物在Synth.Comm.(合成通訊)24(22)3307-3313(1994)有描述和Z′是S的化合物在ⅡFarmaco,44(7-8)683-684(1989)中有描述。
可通過相似方法制備其它化合物Ⅴ例如，當Z′是HNCONH時，通過在無水介質(zhì)中O2NC6H4NCO和H2NC6H4COOH的反應，或當Z＇是NHCO或CONH時，通過芳香?；群腿芙庠诜琴|(zhì)子傳遞溶劑如CH2Cl2,C6C5CH3,CH3CON(CH3)2中的適當?shù)谋桨返姆磻?，或在磺酰氯、三乙胺和二甲基氨基吡啶存在下，芳香酸和苯胺反應來制備，如在Synth.Communications(合成通訊)25(18)2877-2881(1995)中描述的。
用已知方法，在催化劑存在下用氫氣將NO2基團還原為NH2，或進行化學反應。
當式Ⅳ中的Z是CH2-CONH時，其中NH2基團受到保護的活化甘氨酸和其中Z是一個鍵的化合物Ⅳ反應或和含有Z＇前體基團(選擇性保護)的苯胺反應。甘氨酸被保護，例如以氨基甲酸酯的形式，特別是叔丁基氨基甲酸酯的形式(Synthesis(合成),48,1986)和芐基氨基甲酸酯的形式(Chem.,Ber.(化學報告),65,1192(1932))，苯鄰二甲酰亞胺的形式(TetrahedronLetters(四面體通訊)25,20,2093-2096(1984))，用芐基保護(Bull.soc.Chim.Fr.(法國化學學會通報),1012-1015,(1954))，用N-烯丙基保護(Tetrahedron Letters 22,16,1483-1486(1981))。(亦參見在有機合成中的保護基團315-349,T.W.Greene(John Wiley&SonsInc.).)一般僅在化合物Ⅲ的階段從與Z連接的NH2除去保護基團。常規(guī)地，通過肼的作用除去苯二甲酰亞氨基，而通過催化氫化除去芐氧基羰基或芐基。
當化合物Ⅳ中的Z=CH2和Z＇=CONH或CONHCH2CONH時，4-氨基甲基苯甲酸可和適當取代的保護的苯甲酸反應，其中NH2基團以氨基甲酸酯或酰亞胺的形式被保護，如在J.Org.Chem.43,2320-2325(1978)或在Rec.Trav.Chim.(荷蘭化學論文集)Pays-Bas,79,688(1960)描述的。
當Z是(CH2)2NHCO時，可通過過量的1,2-乙二胺對適當?shù)谋郊姿狨サ淖饔脕碇苽浠衔铫螅浜腥〈?Z＇-苯基)a-Z″-苯基鏈或僅含有一個選擇性保護的前體基團Z＇。
而且，當a等于2時，其中氨基選擇性地被保護的化合物Ⅳ可和氨基苯甲酸反應，該氨基苯甲酸的酸官能團選擇性地被保護，以得到第二個Z′是CONH的式Ⅳ′的化合物Ⅳ′
然后化合物Ⅳ或Ⅳ′和式Ⅵ的適當取代的末端苯環(huán)在有機或水溶液中反應
其中R1,R2,R3,R4和R5是如式Ⅰ中的H，鹵原子，CO-NQ1Q2或選擇性地被保護，R″表示CO-CH2-NH2或H，化合物Ⅳ或Ⅳ′是酰基氯的形式或者存在偶合劑，例如那些用于肽合成的偶合劑，例如，脂族碳化二亞胺，磺酰氯或氯甲酸酯，選擇性地含有增溶季銨或氨基。
通過本領(lǐng)域公知的方法制備其中R″=H的式Ⅵ的酰胺，用適當?shù)?、選擇性鹵化的芳香氨基酸起始，其中每個存在的羧基以?；被蚧旌萧男问奖换罨?，或者用酰胺化的硝基芳香酸開始，之后還原NQ2基團。在WO97/01359中描述了化合物Ⅵ，其中R1=R3=R5=Br或I,R2和R4=CO-NQ1Q2，其中Q1＝CH2(CHOH)4CH2OH和Q2=CH2CH2OH或CH2(CHOH)1-3-CH2OH和R″=CO-CH2-NH2。其它鹵代的或非鹵代的衍生物，特別是那些其中Q1和Q2的鏈被氧原子間斷的衍生物可以用相似的方法，用適當?shù)陌被计鹗贾苽洹?br> 當Z是一個鍵時，優(yōu)選在進行還原反應之前，硝基化合物如Ⅴ和苯胺Ⅵ反應。
亦可以選擇性地將化合物Ⅳ或Ⅳ和Ⅵ前體化合物反應，以便僅接著制備單酰胺或二酰胺，該前體化合物含有COOH基團，選擇性地以酯的形式保護，代替基團CO-NQ1Q2，或者使化合物
其中NL1L2是被保護的氨基，與下列化合物反應
這樣，Z′1和Z′2反應得到Z′。
為了制備化合物Ⅲ，其中R3或R2和R4代表N(Q1)CO-Q2和Z″=NH-CO或NH-CO-CH2-NH-CO，式Ⅴ的苯甲酸，
其中基團N(Q1)CO-Q2中的羥基選擇性地被保護，可以和式Ⅶ的胺
反應，R″是H或COCH2-NH2，接著還原硝基得到其中Z是一個鍵的化合物Ⅲ。
在式Ⅴ的化合物當中，可以提及那些在Org.Synth.(有機合成)41,79-82(1961)中描述的由CH2(OCOCH3)CH(OCOCH3)4COCl制備的化合物和從適當?shù)陌被郊姿嶂苽涞幕衔?，或者其中R1=R3=R5=I的化合物和EP357467中描述的分子式如下的化合物。
在酰胺基Z′和Z″中，以常規(guī)方式，通過在堿存在下相應的鹵化物和其中Q=H的化合物反應而引入Q，優(yōu)選在中間階段。
進行式Ⅲ化合物和式Ⅱ螯合物的鹽的反應，反應優(yōu)選在含水介質(zhì)中進行，選擇性地在極性非質(zhì)子傳遞溶劑例如二噁烷或四氫呋喃存在下，在可溶性碳化二亞胺例如那些含有氨基的碳化二亞胺存在下(在J.Org.Chem.21,439441(1956)和26,2525-2528,(1961)或US3135748有描述)，或那些含有季銨基的碳化二亞胺(在Org.Synth.V,555-558有描述)存在下進行，這些化合物涉及取代的1-乙基-3(3-二甲基氨基)丙基-碳化二亞胺(EDCI)或其類似物，1-環(huán)己基-3-(2-嗎啉代乙基)碳化二亞胺，N-甲-對-甲苯基磺酸鹽。亦可以按照Bioconjugate Chem.(生物共軛化學)5,565-576(1994)中描述的在N-羥基磺基琥珀酰亞胺存在下或按照Tetrahedron Letters 30,1927-1930(1989)中描述的在2-琥珀酰亞胺基-1,1,3,3-四甲基尿鎓四氟硼酸鹽和類似物存在下進行。
另一個方法在于形成中間活化酯，例如通過在碳化二亞胺如EDCI存在下，N-羥基磺基琥珀酰亞胺(NHS)或羥基苯并三唑(HOBT)和螯合物Ⅱ反應形成，該螯合物Ⅱ可溶解為帶有無機陽離子的鹽，例如銨或鈉陽離子。
在2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1,2-二氫喹啉(EEDQ)存在下，可在水性醇介質(zhì)中進行此反應。
由環(huán)烯制備其中m是1的式Ⅱ′化合物，該環(huán)烯和乙炔基二羧酸二酯反應得到烯胺，該烯胺通過常規(guī)的催化或化學方法被還原，接著水解酯基。在芐基酯的情況下，優(yōu)選在第一步進行烯胺的化學還原，例如通過和氰基氫硼化物反應，接著在催化劑存在下，用氫脫芐基。
螯合物Ⅱ是已知的化合物，其中m=2，氮原子上的4個取代基是相同的，M3+是Gd3+，特別在EP-A-661279中有描述。
通過相同的方法制備其中m=1的螯合物Ⅱ。
用相似方法制備化合物Ⅱ，其中M3+代表另一種金屬陽離子，通過金屬鹽特別是鹵化物或金屬氧化物在配位體的鹽的水溶液中的反應制備，在US5554748和在其中引證的參考文獻，或在Helv.Chim.Acta(瑞士化學學報)69,2067-2074(1986)中有描述，或當螯合物的相對穩(wěn)定性允許時，通過陽離子交換制備，特別是用離子交換樹脂。
對于具有放射性核素的螯合物，通過在超純水中加熱螯合物和放射性金屬的無機鹽進行放射性同位素交換，通過配位樹脂除去非配合陽離子。亦可通過另一種過量的配位劑(優(yōu)選給出不溶性Gd螯合物的配位劑，例如草酸)釋放螯合物的金屬陽離子，以便在配位另一種金屬陽離子之前得到純的式Ⅱ化合物。
從用R＇或可除去的保護基團單取代的環(huán)烯制備化合物Ⅱ′，其中m=2和R是H、選擇性羥基化的烷基、CH2COOH和CH2CONZ1Z2，在此情況下，在用
三烷基化后引入R′。在單取代方法當中，可以分別提及在J.Org.Chem.583869-3876(1993)中描述的通過選擇溶劑促進單烷基化反應和在Tetrahedron Letters32(5)639-641(1991)和Angew Chem.(應用化學)Int.Ed.30(5)560-561(1991)描述的通過硼或磷的衍生物進行3個氮原子的配位反應，或者在US5410043中描述的正酰胺中間體形成的反應。當R′不是H時，優(yōu)選第一步引入R＇而不是直接用
的反應性衍生物進行環(huán)烯的三烷基化，因為通過簡單操作不能除去同時形成的二烷基和四烷基的衍生物。
純化各種合成中間體和終產(chǎn)物的方法是標準的，但不用說必須適合于產(chǎn)物的化學性質(zhì)，其分子量，其溶解性和其溶液的粘度?？墒褂没瘜W分離方法(選擇性溶解，結(jié)晶)或在膜上經(jīng)過濾或在懸浮液或柱中用吸附劑處理的物理方法。
特別地，對于溶于含水介質(zhì)中的化合物Ⅲ，通過使它們經(jīng)過陰離子和陽離子交換樹脂或通過超濾或通過滲析超濾(diafiltration)或通過在適當選擇的膜上的反滲透進行純化，以便除去進入洗脫液中的低重量分子，溶劑和鹽。
對于化合物Ⅱ，優(yōu)選不進行能改善異構(gòu)體相對比例的處理，溶解于不混溶有機溶劑中的中間體酯在攪拌下用酸性水相純化，然后在傾析和分離之后，使它們與吸附劑如硅膠接觸，之后，它們可在堿性或酸性介質(zhì)中水解得到要配合的酸Ⅱ′。
一般通過上述方法之一，以堿性鹽的形式純化式Ⅰ螯合物，該堿性鹽溶于水介質(zhì)中；特別是通過用碳黑或用硅烷化過的二氧化硅處理其水溶液。
本發(fā)明這些螯合物的特征在于在中心螯合環(huán)側(cè)臂上存在由短橋連接在一起的含有3或4個連續(xù)的苯環(huán)，最后一個苯環(huán)含有至少一個親水基；盡管它們的高分子量和多個疏水苯環(huán)的存在，但這些化合物是水溶性的和生物相容性的，并且可以通過靜脈給人使用。
此外，這是一個很重要的特性，它們僅少量穿過血管壁，而不象可商購得到的那些化合物，這樣可以在磁共振成象過程中，在血管和周圍組織之間得到強烈的對比；該特性和它們的高弛豫性的結(jié)合使得在病人體內(nèi)注射低劑量的配位釓或檢測迄今為止不能清楚說明的病態(tài)成為可能。
為了胃腸外給藥或小腸內(nèi)給藥，本發(fā)明的順磁螯合物可以和在本領(lǐng)域中是標準的藥物載體和賦形劑結(jié)合而配制。
對于靜脈內(nèi)或動脈內(nèi)給藥，本發(fā)明的化合物是濃度為0.001-0.5mol/l的消毒水溶液，選擇性地與使pH穩(wěn)定在約7的試劑如Tris緩沖液或CO2混合，或與張力劑如甘露糖醇，甘油或葡萄糖，優(yōu)選能改善螯合物的溶解性和分散度的NaCl，或與另一種配位劑如EDTA混合。
為了除去污染最終產(chǎn)物的內(nèi)毒素，特別在通過液相色譜純化之后，優(yōu)選進行超濾，選擇性地在膜上以基本上恒定的體積切向超濾，該膜的性質(zhì)和截留極限取決于產(chǎn)物的分子量和溶液的粘度壓力。亦可針對較小尺寸的化合物，在某些中間階段特別是通過在離子膜上的微過濾，或通過超濾進行該純化。亦可設(shè)想用吸附劑如碳黑處理，該吸附劑對于內(nèi)毒素可以是特定的也可以不是。
對于陰道內(nèi)給藥，優(yōu)選水溶液含有粘度改良劑如天然膠，多糖或纖維素衍生物。對于直腸給藥，螯合物可以配制成栓劑或粘稠溶液。最后，對于口服，可以配制成明膠膠囊、片劑或糖漿，用通常的賦形劑制備。制劑的例子可參見Remingtond的Pharmaceutical science,18th Edition(1990),Mack.Pub.Cy。
單位劑量和其濃度取決于病人的大小和進行成象的類型，以及化合物的溶解度、在溶液中的粘度、磁效力、毛細血管壁的滲透性和藥物動力學。通過使用快速和慢速技術(shù)，它們用于磁共振成像以便從血管造影照片研究灌注，特別是心肌、大腦、腎臟或肝臟灌注，或為了觀察或說明異常滲透性，特別是腫瘤、炎性和局部缺血或軟骨異常。
在引入放射性原子后，這些產(chǎn)物亦可用于核子醫(yī)學，例如通過鹵素的同位素交換或配位陽離子的同位素交換；在給予本發(fā)明的螯合物后，進行要成像區(qū)域的閃爍照相。
在下文中，描述了本發(fā)明的化合物的實例以及制備式Ⅱ化合物的釓螫合物和苯基前體化合物Ⅵ的方法，其中R＇=HOOC-CH(CH2)mCOOH,R＇=H和R′=CH2COOH。
根據(jù)情況的不同，回收的產(chǎn)物的特征在于它們在薄層色譜中的停留距離或它們在高效液相色譜(HPLC)或在空間排阻色譜(SEC)中的停留時間(tr)。通過質(zhì)譜分析(電子噴射)確定它們的分子量。
A．[1,4,7,10-四氮環(huán)十二烷]-1,4,7,10-四(2-戊二酸)的釓螯合物(鈉鹽)1．將30g碳酸鈉和78g按照例如在Acta Chim.Acad.Sci.Hung 41(3)331-6(1964)描述的方法制備的2-溴戊二酸乙酯加入到25g 1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷和280ml乙腈的溶液中；該介質(zhì)在回流下保持1天，在此期間，還加入2×78g溴衍生物和30g碳酸鈉。冷卻后過濾沉淀物，用水洗滌有機相，然后用稀鹽酸水溶液萃取該有機相。將水相調(diào)節(jié)至pH約3-4，然后用甲苯萃取。
通過二氧化硅色譜純化所需的產(chǎn)物，用選擇性地與丙酮混合的二氯甲烷洗脫。
2．水解酯基團溶解于52m1乙醇中的46g八酯加入到350ml水中，在水中已加入50gNaOH顆粒。
在80℃下攪拌2天后，500ml弱酸性陽離子交換樹脂加入到冷卻的溶液中以便對其進行中和，分離出固相后，接著加入500ml強堿性陰離子交換樹脂。分離出樹脂并加入到500ml6N的醋酸水溶液中；通過在真空下蒸發(fā)掉溶劑回收進入溶液的最終產(chǎn)物，為粉狀產(chǎn)物。HPLC:NucleosilC18100-5硅膠柱25cm×4.6mm。洗脫劑No.1含水H2SQ4(0.1％)10分鐘，然后在10分鐘內(nèi)用0-10％(v/v)的CH3CN:f=1ml/min；T=25℃；tr=5.4；8.7；10.2；14分鐘(異構(gòu)體)(CH3COOH-tr=4.5分鐘)。
3．配位反應用氧化釓0.47g氧化釓加入到2g上述八酸的30ml溶液中，pH為5.5-6，該混合物在80℃下保持3小時，在此期間，按需要調(diào)節(jié)pH。冷卻后，在pH=6.5，加入2gNa+形式的Chelex100樹脂(由Segma出售)；接觸幾小時后，分離出樹脂，將溶液倒入10體積乙醇中以便沉淀螯合物。
用氯化釓通過加含水NaOH(1N),6.5g八酸和3.5gGdCl3·6H2O在130ml水中的混合物被調(diào)節(jié)至pH6.5，該混合物在60℃下保持2小時，在此期間，通過加總計21ml的含水NaOH(1N),pH保持在6.5。在室溫下幾小時后，混合物濃縮至25ml，用10體積C2H5OH沉淀最終產(chǎn)物。
B．1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷-1,4,7-三(2-戊二酸)的釓螯合物(式Ⅱ)
1．10-芐基-1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷30.5g芐基氯滴加進50g 1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷和500ml氯仿形成的溶液中。在室溫下攪拌24小時后，過濾反應介質(zhì)；濃縮過濾物至干燥。殘余物溶解在350ml水和75ml甲苯中，傾析和分離甲苯相后，用2×200ml二氯甲烷萃取水相。在硫酸鈉上干燥有機相，然后濃縮至干燥。得到21g油狀產(chǎn)物。
2．10-芐基-1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷-1,4,7-三(2-戊二酸甲酯)56.3g2-溴戊二酸甲酯和50ml乙腈形成的溶液滴加進18.7g上述產(chǎn)物和24.7g碳酸鈉在300ml乙腈中的懸浮液中。反應介質(zhì)在回流下保持36小時；在室溫下過濾后，通過蒸發(fā)除去溶劑，殘余物溶解在最少量乙酸乙酯中并通過二氧化硅柱色譜純化，用乙酸乙酯和石油醚的混合物(40/60-70/30v/v)洗脫。由此得到20.7g油狀產(chǎn)物。
3．10-芐基-[1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷]-1,4,7-三(2-戊二酸)溶解于40ml甲醇中的16.7g上面得到的油加入到125ml水中，該水中已溶解了25gNaOH；該混合物在70℃下保持攪拌48小時。然后在減壓下除去甲醇，然后加入400ml弱酸性陽離子交換樹脂(Amberlite～IRC50，由Rohm&Haas出售)，分離后，接著加入強堿性陰離子交換樹脂(Amberlite～IRA458)，所希望的產(chǎn)物粘合于陰離子樹脂上。通過用2升3N醋酸水溶液且接著用2升6N醋酸水溶液洗脫回收該產(chǎn)物。
除去溶劑后，得到13.5g白色晶體，為異構(gòu)體混合物。HPLC柱No.1:25cm×4mm Lichrospher100-RP18-5μm(Merck,德國)；洗脫劑No.1tr=28,30分鐘(2個異構(gòu)體多重譜線，75/25面積)4．1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷-1,4,7-三(2-戊二酸)13g溶解于210ml水和90ml甲醇中的上述化合物在含50％水的炭上于10％鉑存在下，在室溫和28×104Pa壓力下氫化3小時。通過蒸發(fā)除去催化劑和溶劑后，得到11g白色粉末。HPLC柱No.1；洗脫劑No.1。tr=8,9分鐘(2個異構(gòu)體多重譜線，75/25面積)5．配位反應通過加入3N含水NaOH,60℃1.6g上述化合物和1gGdCl3·6H2O在30ml水中的溶液在pH5保持4小時。該溶液濃縮至10ml體積，用100ml乙醇沉淀殘余物。通過過濾回收1.6g所希望的釓配合物。HPLC柱No.1；洗脫劑No.1；tr=24,26分鐘。
C．1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷-1,4,7-三(2-戊二酸)-10-乙酸釓螯合物1．1g在制備B的步驟4中獲得的酸溶解于8ml水和270mg溴乙酸中，該混合物在70℃下保持3小時，通過加入1N含水NaOH將pH空制在10。然后在室溫下加入100ml水和10ml Amberlite-IRC50樹脂；接觸1小時后，分離出樹脂并在介質(zhì)中加入50ml Amberlite-IRA458樹脂。12小時后，分離出樹脂并加入柱中。通過用500ml 1N乙酸水溶液洗脫，從其中萃取所需的產(chǎn)物。由此得到0.8g白色晶體。HPLC柱No.2:25cm×4mm Symmetry-RP18-5μm(Waters)。洗脫劑No.1；tr=4分鐘。
2．配位反應0.45gGdCl3·6H2O和0.75g上述化合物加入13ml水中；通過加NaOH水溶液(1N),pH調(diào)節(jié)至6；反應介質(zhì)在60℃下保持5小時，在此期間，通過加NaOH溶液，幾次調(diào)節(jié)pH。冷卻后，介質(zhì)加入130ml乙醇中，回收沉淀物得到0.75g螯合物。
D．N,N＇-(2,3,4,5-四羥基戊基)-N,N＇-[2-(羥基乙氧基)乙基]-2,4,6-三碘代-5-(甘氨酰氨基)間苯二酰胺1．5-[2-(羥基乙氧基)乙基氨基]戊烷-1,2,3,4-四醇84g2-氨基乙氧基乙醇和150gD-木糖溶解于2.51甲醇中；該混合物在50g10％鉑/炭存在下，在室溫和6×105Pa壓力下氫化。通過過濾除去催化劑并蒸餾掉溶劑。在100mlAmberlite-IRN77樹脂(H+)上對溶解于最少量水中的殘余物進行色譜分析，用NH4OH溶液洗脫，然后在1KgGeduranSI60硅膠上進行，得到170g褐色油狀的氨基醇。TLC:CH3OH/NH4OH在25％-(7/3-v/v)-Rf=0.3。13C NMR:(DMSO-d6-50.3MHz)；δ(ppm):51.4,48.9(2×CH2NH)；62.9；60.5(2×CH2OH)；71.9；71.2；70.6(3×CHOH)；72.3；69.7(CH2OCH2)。用相同方式制備阿拉伯糖或核糖衍生物。
2．N,N＇-(2,3,4,5-四羥基戊基)-N,N＇-[2-(羥基乙氧基)乙基]-2,4,6-三碘代-5-(鄰苯二甲酰氨基乙酰氨基)間苯二酰胺；在45℃下，上述制備的30g氨基醇溶解于100ml二甲基乙酰胺中，然后加入22g取代的間苯二酸二氯和12g三乙基胺，在該溫度攪拌下放置該介質(zhì)24小時。在室溫下回收形成的沉淀物，通過真空蒸餾除去溶劑。
通過100ml Amberlite-IMAC HP1110樹脂(H+)洗脫溶解于50ml水中的殘余物；濃縮溶液至10ml后，殘余物倒進1500ml異丙醇中，24小時后回收形成的沉淀物。
3．釋放胺在80℃下，42g溶解于60ml水中的上述制備的產(chǎn)物加入到40ml水和2.7ml水合肼的溶液中。在此溫度下攪拌5小時后，過濾介質(zhì)，然后通過加濃鹽酸酸化至pH1。分離出形成的沉淀物并濃縮濾液。在30ml Amberlite-IMACHP111E樹脂(H+)，然后在55mlAmberlite-IRA 67樹脂(OH-)上對溶解于30ml水中的殘余物進行色譜分析。濃縮的洗脫液粘合于350mlAmberlite252Na樹脂(H+)上，用NH4OH水溶液(2N)從其上洗脫。w=20g。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2:H2O/CF3COOH(pH3.4)在50分鐘內(nèi)用乙腈梯度洗脫95/5-50/50v/v；tr=10-20分鐘(異構(gòu)體混合物)。
E．N,N＇-[雙(2,3,4,5,6-五羥基己基)]-2,4,6-三溴代-5-(甘氨酰氨基)間苯二甲酰亞胺1．5-氨基-2,4,6-三溴間苯二酸156g溴緩慢加入50g5-氨基間苯二酸的300ml水溶液和55ml37％鹽酸中。攪拌過夜后，通過加亞硫酸氫鈉水溶液中和過量的溴，然后回收沉淀物。產(chǎn)率90％。
2．5-(苯二甲酰亞氨基乙酰氨基)-2,4,6-三溴代-間苯二酸在10℃下，27ml亞硫酰氯緩慢加入69gN-鄰苯二甲酰甘氨酸在200ml二甲基乙酰胺的溶液中，攪拌2小時后，在約15-20℃下，加入100g上述得到的酸。在室溫下靜置過夜后，將該混合物倒入800ml的熱水中。由此回收140g最終產(chǎn)物。
3．上述二酸的氯化物在18℃下，70ml亞硫酰氯緩慢加入100g二酸在300ml二噁烷和50ml二甲基甲酰胺內(nèi)的溶液中。在室溫下攪拌3天后，過濾掉形成的黃色沉淀物，用甲基叔-丁基醚洗滌。由此得到70g米色固體。
4．N,N＇-[雙(2,3,4,5,6-五羥基己基)]-2,4,6-三溴代-5-(苯二甲酰亞氨基乙酰氨基)間苯二甲酰胺在80℃下，150g二山梨糖胺(disorbitylamine)溶解于600mlN-甲基吡咯烷酮，在60℃下，16g干碳酸鈉加入介質(zhì)中，接著加入96g上述?；取Ｔ诖藴囟认聰嚢?小時和在室溫下攪拌16小時后，除去沉淀物，溶液倒入1.61異丙醇中?；厥盏某恋砦镏?00g。
5．肼解在70℃下，200g上述產(chǎn)物和17ml水合肼加入400ml水中。攪拌3小時后，通過在室溫下加6N鹽酸，該混合物酸化至pH4。然后除去形成的沉淀物，通過加1NNaOH水溶液，濾液被中和。通過反滲透，除去過量的肼。用10ml強陽離子樹脂然后用65ml弱陰離子樹脂處理殘余溶液。
通過將其粘合于H+形式的強陽離子樹脂，從溶液中萃取最終產(chǎn)物，用稀NaCl水溶液(0.1M)從其中洗脫。w=80g。
HPLC柱NO.1；洗脫劑No.2；tr=約7分鐘。
F．N,N′-[雙(2,3,4,5,6-五羥基己基)]-2,4,6-三碘代-5-(甘氨酰氨基)間苯二甲酰亞胺1．5-(苯二甲酰亞氨基乙酰氨基)-2,4,6-三碘間苯二酰氯在10℃下，149ml SOCl2加入335gN-鄰苯二甲酰甘氨酸和11 N-甲基吡咯烷酮的溶液中，3小時后，加入700g2,4,6-三碘代-5-氨基間苯二酰二氯。在室溫下攪拌3天后，介質(zhì)倒入4.5L2/1v/v含水乙醇中。通過加三乙基胺，pH調(diào)至5，之后，回收形成的沉淀物，并通過用異丙醇洗滌純化。w=850g。
2．用二山梨糖胺H-N[CH2(CHOH)4CH2OH]2酰胺化(amidification)對于三溴化合物類似物，得到的產(chǎn)物的產(chǎn)率是85％。
3．肼解420g溶解于11水和300ml水合肼中的上述三碘苯鄰二甲酰亞胺在80℃下保持幾小時。將介質(zhì)酸化至pH3.6后，通過陽離子交換樹脂(H+)如Rohm&Haas出售的IMACHP111E色譜除去過量的肼，用陰離子交換樹脂(OH-)除去過量的氯化物。
通過陽離子交換樹脂(強H+)色譜純化最終產(chǎn)物并從其乙醇水溶液中沉淀出來。產(chǎn)率50％。HPLC柱No.1；洗脫劑No.4:CH3CN/P.I.C.B8(0.05M)(Waters)15/85；流速1ml/min。tr=3分鐘。
G．1-脫氧-1-[(2,3-二羥基丙基)氨基]-D-半乳糖醇
在140ml甲醇中的27g3-氨基丙烷-1,2-二醇和50gD-半乳糖在40℃下保持攪拌16小時。然后加60ml水，在7g鉑/炭(10％)存在下，在60℃和20×105Pa氫氣壓力下，氫化亞胺7小時。
通過Celite過濾而分離出催化劑。在減壓下除去溶劑后，溶解于最少量水(50ml)中的殘余物緩慢加入600ml異丙醇中?；厥招纬傻某恋砦?。m.p.=132℃，產(chǎn)率90％。
在從異丙醇沉淀之前，亦可在500ml磺酸形式的離子交換樹脂上對溶解于200ml水中的粗產(chǎn)物進行色譜分析，用稀NH4OH水溶液洗脫。
在這些條件下，氨基醇是兩種非對映異構(gòu)體的異構(gòu)體混合物(約50/50)。
該混合物通過重結(jié)晶、分段沉淀或放置在懸浮體中而富集在異構(gòu)體的一種或另一種中。
因此，通過用回流甲醇處理(500ml溶劑中有25g氨基醇)，獲得含過量的異構(gòu)體之一的混合物65％的異構(gòu)體具有較長的停留時間，基于根據(jù)下列條件獲得的在色譜上測量的面積氣相色譜(通過在60℃下三氟乙酸酐的反應，衍生物完全三氟乙?；?。設(shè)備Varian Star 3400；柱由J&W得到的DB 1701(0.25μm-30m×0.25mm)；載氣氦-T注射器(1/40分裂)=290℃；T柱=150℃至280℃(5℃/min)-體積1μl；tr:14.5和14.9分鐘(起始的氨基丙二醇是5.6min)。13C NMR(200MHz-DMSO d6-RefDMSO-T=30℃)δ(ppm):71.7；71.6；70.5；70.1；69.5；68.5；68.2-(CHOH)64.6；63.2；(CH2OH)-53.4；53；52.9(NCH2)。
亦可通過D-半乳糖和純氨基丙二醇的對映體偶合或通過縮水甘油的對映體和N-(2,3,4,5,6-五羥基己基)芐基酰胺的反應獲得每個非對映異構(gòu)體，方法如下a)N-芐基-N-(2,3,4,5,6-五羥基基)胺29gD-半乳糖和17ml芐胺溶解于230ml甲醇中，加5g5％鉑/炭后，該混合物在氫氣壓力8×105Pa和50℃下保持7小時。
氫化后，鹽酸水溶液加入到40℃的反應介質(zhì)中直至pH是酸性。
在室溫下通過Celite過濾混合物以便除去催化劑，部分濃縮后，加5NNaOH水溶液直至pH是堿性?；厥招纬傻某恋砦锊⒂靡掖贾亟Y(jié)晶。13C NMR(200MHz-DMSO d6-RefDMSO-T=30℃)δ(ppm):140.8(CCH2N)-128.8；128.4；126.9(苯基)-72；70.6；69.9；68.8；(CHOH)-63.2(CH2OH)-53.1；52.4(CH2NH)。
b)N-芐基-N-(2，3-二羥基丙基)(2,3,4,5,6-五羥基己基)胺6.5g上步得到的仲胺在60℃下溶解于200ml甲醇中，然后在此溫度下往溶液中加2.5g縮水甘油(外消旋混合物或純對映體)，攪拌該混合物24小時。然后通過減壓蒸餾除去溶劑，殘余物溶解于200ml水中后，在H+形式的AmberliteIMAC 110樹脂柱上對該溶液進行色譜分析，用稀NH4OH水溶液(0.1％)洗脫，由此得到5.5g胺。
C)N-(2,3-二羥基丙基)-N-(2,3,4,5,6-五羥基己基)胺在上步得到的溶解于30ml水中的2g叔胺在0.6g的10％鉑/炭存在下，在45℃和氫氣壓力100×105Pa下氫化5小時。然后通過Celite過濾該溶液以除去催化劑并在減壓下濃縮。殘余物用乙醇重結(jié)晶。
當和(S)-縮水甘油偶合時，得到在上述氣相色譜條件下的具有較長停留時間的氨基醇非對映異構(gòu)體。
用D-葡萄糖和D-甘露糖開始，通過使用這些方法，將獲得這些氨基醇的非對映異構(gòu)體，而其它氨基醇通過用不同的氨基醇或用不同的糖開始而獲得。
H．(1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷)-1,4,7,10-四(2-琥珀酸)的釓螯合物1．乙炔二羧酸芐基酯和環(huán)烯的4個氮原子的偶合溶解于25ml乙腈中的按照J.C.S.Perkin I,p.2024-2029,(1973)的描述制備的23g乙炔二羧酸芐基酯在20℃下滴加進2.7g環(huán)烯在50ml乙腈中的溶液中。在50℃下攪拌3小時后，在減壓下除去該溶劑，通過二氧化硅色譜純化殘余物，用二氯甲烷/甲醇混合物(98/2-v/v)洗脫以回收19g黃色固體。
2．烯胺的還原在攪拌下，將7g氰基氫硼化鈉分批加入19g上述固體在500ml乙腈和50ml乙酸中的溶液中，在室溫下攪拌該混合物過夜。減壓除去溶劑后，油狀殘余物溶解于二氯甲烷/甲醇混合物(99/1)中并通過二氧化硅過濾。蒸發(fā)掉溶劑后，回收19g黃色油。
3．脫芐基在水/甲醇混合物(175ml/75ml)中的得到的8g八酯，在4g10％鉑/炭存在下，氫化(壓力3.5×105Pa)6小時。通過過濾分離出催化劑和通過蒸餾除去溶劑后，得到3g白色粉末狀的八酸。HPLC柱No.1；洗脫劑No.1；tr=18-19分鐘。
4．配位反應得到的1g八酸懸浮于20ml水中，通過加1NNaOH水溶液，pH調(diào)至5.5，然后加0.285gGd2O3。反應介質(zhì)在70℃下已攪拌4小時后，(該介質(zhì)的pH通過加1NHCl水溶液保持在5.5-6.5之間)，對其進行過濾，濃縮濾液至干燥，得到螯合物的鈉鹽。實施例1式1的釓螯合物，其中m=2
(鈉鹽)1．4-[N-(4-硝基苯基)脲基]苯甲酸在10℃攪拌下，24.6g異氰酸4-硝基苯酯加入到80ml四氫呋喃中，接著慢慢加入20.5g溶解于70ml四氫呋喃中的4-氨基苯甲酸。讓該混合物溫熱至室溫并連續(xù)攪拌1小時，之后，回收形成的沉淀物。w=45g。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2；H2O/CF3COOH；pH=3.4，用乙腈梯度洗脫(95/5至50/50-v/v，在50min內(nèi))；流速1ml/min；tr=44分鐘。
2．4-[N′-(4-氨基苯基)脲基]苯甲酸22g上述產(chǎn)物和37ml1NNaOH水溶液加入到280ml水和3g鉑/炭(5％)中。該介質(zhì)在65℃和氫氣壓力0.6MPa下保持6小時。冷卻至室溫后，pH調(diào)至10并在Celite上過濾催化劑，之后，通過加6NHCl水溶液，濾液酸化至pH5.3；用丙酮洗滌得到的沉淀物。w=13.2g。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2；tr=33分鐘。
3．4-[N′-[4-(苯二甲酰亞氨基乙酰氨基)苯基]-脲基]苯甲酸在10℃下，5.8g苯二甲酰亞氨基乙酸溶解于26ml二甲基乙酰胺中，加2ml亞硫酰氯同時保持溫度不變，攪拌2小時后，加7g在上步得到的化合物。
在室溫下12小時后，反應介質(zhì)倒入250ml水中，在25℃下用水洗滌形成的沉淀物，然后在95℃下洗滌直至中性。w=10.4g。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2；tr=40分鐘。
4．N,N′-(2,3,4,5-四羥基戊基)-N,N＇-[2-(羥基乙氧基)乙基]-2,4,6-三碘代-5-[4-[N′-(4-苯二甲酰亞氨基乙酰氨基苯基)脲基]苯甲酰基甘氨酰氨基]間苯二酰胺4g上面得到的化合物和1.7gHOBT·H2O和9.3gN,N′-雙(2,3,4,5-四羥基戊基)-N,N′-雙(羥基乙氧基乙基)-2,4,6-三碘代-5-(甘氨酰氨基)間苯二酰胺溶解于40ml二甲基乙酰胺，接著在0℃下加2.4gEDCI·HCl。在室溫下攪拌過夜后，介質(zhì)倒入300ml二氯甲烷中。用二乙基醚洗滌回收的沉淀物。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2；tr=30-33分鐘(異構(gòu)體混合物)。
5．除去苯二甲酰亞氨基式Ⅲ的產(chǎn)物，其中Z=CH2CONH；Z＇=NHCONH；Z″=CONHCH2CONH；
在80℃下，11.5g上述化合物加入到45ml水中，接著加1.12ml水合肼(0.023mol)。在80℃2小時45分鐘后，該混合物冷卻至0℃并通過加12N含水HCl酸化至pH1。然后在室溫下該混合物通過Celite過濾，然后通過16mlIMACHP111E陽離子樹脂(H+)和80mlIMACHP661弱陰離子樹脂(OH-)(Rohm&Haas出售)過濾。通過在硅烷化過的二氧化硅上過濾進行最終的純化后，得到4.6g最終產(chǎn)物。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2；tr=24-27分鐘(異構(gòu)體混合物)。
6．產(chǎn)物A和Ⅲ的偶合在40℃下，0.057gNHS(鈉鹽)和0.76gEDCI·HCl加入到4.5g上述胺和0.63g根據(jù)(A)制備的螯合物A的20ml(pH6)水溶液中。15分鐘后，該混合物倒入水中并回收沉淀物。除去原料后，得到式Ⅰ的化合物?？臻g排阻色譜(SEC)。條件No.1在含有聚羥基甲基丙烯酸酯膠的一系列4個柱(30cm×8mm)上進行，該柱在OH Pak SB-HQ標準下由Shodex(JP)出售，用茁霉多糖確定的排阻阻限順序是106千道爾頓(SB-804)；105千道爾頓(SB-803)；104千道爾頓(SB-802-5)；104千道爾頓(SB-802-5)。洗脫劑含水NaCl(0.16M)/乙腈(70/30-v/v)；流速0.8ml/min。T=30℃；tr；38分鐘(起始胺50-53分鐘)。HPLC柱No.3,25cm×4.6mmPlatinumEPSC18 100；5μM(Alltech)；洗脫劑No.37/CH3CN,從98/2至60/40-v/v,50分鐘內(nèi)；流速1ml/min；T=25℃；tr=26分鐘。實施例2式Ⅰ釓螯合物，其中m=2
(鈉鹽)1．4-[4-(苯二甲酰亞氨基甲基)苯甲酰氨基1苯甲酸37gN-乙酯基鄰苯二甲酰亞胺加入到用25g4-氨基甲基苯甲酸，18gNa2CO3和165ml水制備的溶液中。回收形成的沉淀物，然后懸浮在60ml二甲基乙酰胺中，在10℃下向其中緩慢加4.7ml亞硫酰氯。在此溫度下3小時后，加9g4-氨基苯甲酸，介質(zhì)在室溫下保持12小時，然后倒入600ml水中?；厥招纬傻某恋砦铩PLC柱No.1；洗脫劑No.2；tr=48分鐘。
2．N,N＇-雙(2,3,4,5,6-五羥基己基)-2,4,6-三碘代-5-[4-(4-氨基甲基苯甲酰氨基)苯甲?；拾滨０被鵠間苯二甲酰胺a)攪拌160ml二甲基乙酰胺和39g5-甘氨酰氨基-N,N′-雙(2,3,4,5,6-五羥基己基)-2,4,6-三碘代間苯二甲酰胺，4.6ml三乙基胺，5.7gHOBT·H2O和12g上面獲得的產(chǎn)物直至溶解，之后，該溶液冷卻至0℃，加8gEDCI·HCl。反應結(jié)束時，將介質(zhì)倒入1000ml二氯甲烷中。通過在甲醇中沉淀，從其水溶液純化回收的沉淀物。w=43gb)肼解在80℃下，25g上面得到的鄰苯二甲酰亞胺溶解于50ml水中，之后，加2.2ml水合肼。攪拌3小時后，介質(zhì)冷卻并通過加12NHCl酸化至pH1。然后通過Celite過濾介質(zhì)，通過弱陽離子樹脂(H+)，然后通過弱陰離子樹脂(OH-)色譜純化。
由此回收15g所需的產(chǎn)物。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2；tr=19分鐘。c)和釓螯合物A偶合由此得到的15g胺和1.9g螯合物A(鈉鹽)溶解于40ml水中。通過加1N含水HCl酸化至pH6后，在40℃下加2.3gEDCI·HCl。攪拌2小時后，介質(zhì)加入到400ml乙醇中；形成的溶解于水中的沉淀物通過Norit碳黑過濾。由此得到8.5g純產(chǎn)物。SEC條件No.1；tr=36分鐘。HPLC柱和洗脫劑No.3；tr=23分鐘。實施例3式Ⅰ的釓螯合物，其中m=2
a)4-[4-硝基苯甲酰氨基]苯甲酸100g4-硝基苯甲酰氯滴加進74g4-氨基苯甲酸和360ml二甲基乙酰胺中，同時保持溫度小于25℃。攪拌24小時后，在10℃下加500ml二氯甲烷，以便沉淀所需的產(chǎn)物。用水洗滌和干燥后，回收145g產(chǎn)物。
b)4-(4-氨基苯甲酰氨基)苯甲酸136g上述酸在1.8L水中的懸浮液保持在氫氣壓力0.6MPa下4小時，在懸浮液中已加入240ml1NNaOH水溶液和14g鈀/炭(10％)。
然后最終的懸浮液的pH調(diào)至約10，之后，通過Celite過濾混合物以除去催化劑?；厥赵谒峄癁V液至pH5.3過程中形成的沉淀物并干燥。w=106g；F＞260℃。
c)4-[4-(苯二甲酰亞氨基乙酰氨基)苯甲酰氨基]苯甲酸在10℃下，32ml亞硫酰氯滴加進90g苯二甲酰亞氨基乙酸和400ml二甲基乙酰胺的溶液中，攪拌3小時后，在低于20℃下，加105g上面得到的氨基酸。
攪拌12小時后，介質(zhì)倒入41水中，回收沉淀物和用熱水洗滌。干燥后的重量176g。m.p.＞260℃。
d)上述酸的氯化物2.5ml亞硫酰氯加入到10g酸的50ml二噁烷和和1ml二甲基甲酰胺的懸浮液中，該混合物在50℃下保持攪拌5小時。
加1體積的二異丙基醚后，回收10g沉淀物。
酸亦可懸浮于甲苯和作為催化劑的三辛?；谆然@中。
e)N,N＇-雙(2,3,4,5,6-五羥基己基)-2,4,6-三溴代-5-(4-[4-(苯二甲酰亞氨基乙酰氨基)苯甲酰氨基乙酰氨基]苯甲?；拾滨０被?間苯二酰胺2.25g酰基氯和5g N,N＇-雙(2,3,4,5,6-五羥基己基)-2,4,6-三溴代-5-(甘氨酰氨基)間苯二酰胺和0.7ml三乙基胺的25ml二甲基乙酰胺或N-甲基吡咯烷酮的溶液保持攪拌12小時，然后倒入60ml乙醇中。由此回收6.2g沉淀物。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2；tr=27-35min分鐘(異構(gòu)體的混合物)。
f)肼解在80℃下，0.6ml水合肼的10ml水溶液加入到10g上述鄰苯二甲酰亞胺的40ml二甲基乙酰胺溶液中。在此溫度下攪拌3小時后，冷卻的混合物倒入125ml乙醇中?；厥?g沉淀物并用強陰離子樹脂(OH-)然后用弱陽離子樹脂(H+)處理它們的水溶液而進行純化。w=8g。
亦可酸化反應介質(zhì)以便在含水乙醇中的最終沉淀之前分離出沉淀的鄰苯二甲酰肼和通過超濾除去溶劑和低分子量的分子。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2但90/10v/v，而沒有梯度洗脫；tr=28-35min分鐘。
g)和螯合物A偶合以得到式Ⅰ化合物5g步驟(f)中得到的化合物和0.65g螫合物A(鈉鹽)溶解于135ml水中；通過加1N含水HCl，介質(zhì)的pH降至6，之后，在40℃下0.8gEDCI·HCl加入到介質(zhì)中。攪拌2小時和冷卻至室溫后，介質(zhì)倒入135ml乙醇中。
1.6g螯合物A(鈉鹽)亦可加入到10g在f中得到的胺的25ml水溶液中，接著在pH6.5，順次加18ml二噁烷、1.4gEDCI和0.08gHOBT。在室溫下2小時后，反應介質(zhì)倒入100ml乙醇中并回收沉淀物。重新溶解于100ml水中后，用2×1g碳黑處理并重新沉淀于3體積的乙醇中。
在pH7下，通過用5mlChelex 100離子交換樹脂(Na+)(Sigma出售)處理，然后通過在截留極限為5KD的膜上dia-超濾，純化形成的沉淀物。w=4g。SEC條件No.1；tr=34min。HPLC柱和洗脫劑No.3；tr=23min。實施例4式Ⅰ的釓螯合物，其中m=2,R1=H和R=
在40℃下保持攪拌在5ml水中的0.3g根據(jù)(B)制備的1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷-1,4,7-三戊二酸的釓配合物、2g在實施例3(f)中制備的胺和0.3gEDCI·HCl5小時，同時通過加1NHCl水溶液保持pH為7。介質(zhì)倒入50ml乙醇中并回收形成的沉淀。沉淀物在以120ml水溶液的形式，通過在截留極限為3KD的膜上超濾進行純化以除去未反應的起始原料。在碳黑上攪拌和過濾后，溶液被干燥，得到1g白色固體。SEC條件No.1；tr=36.8min。HPLC柱和洗脫劑No.3；tr=31min。實施例5式Ⅰ的釓螯合物，其中m=2,R1=CH2COOH和R=
(鈉鹽)通過采用和實施例4相同的方法，從0.3g起始螯合物C和2g在實施例3f中制備的胺得到0.8g最終產(chǎn)物。SEC條件No.1；tr=35.7min。HPLC柱和洗脫劑No.3；tr=22min。實施例6式Ⅰ的釓螯合物，其中m=2
1．5-[4-(4-氨基苯甲酰氨基)苯甲酰氨基]-2,4,6-三溴間苯二甲酸(a)4-(4-硝基苯甲酰氨基)苯甲酰氯70g酸在250ml亞硫酰氯和0.1ml二甲基甲酰胺中回流8小時。在減壓下蒸餾掉過量的亞硫酰氯，在攪拌下，殘余物倒入1.51乙酸乙酯和500g破碎的冰中。
最終產(chǎn)物萃取成為有機相，用水、用碳酸氫鈉水溶液洗滌該有機相，然后干燥和濃縮。w=64g。
(b)5-[4-(4-硝基苯甲酰氨基)苯甲酰氨基]-2,4,6-三溴間苯二甲酸64g?；群?7g5-氨基-2,4,6-三溴間苯二甲酸的170ml二噁烷溶液回流18小時。蒸發(fā)掉溶劑，用300ml熱乙酸乙酯洗滌后，殘余物溶解于600ml水和足量的5NNaOH中以得到pH7；用乙酸乙酯洗滌和酸化后，回收沉淀的所需的產(chǎn)物。w=73g。
(c)還原19g上述產(chǎn)物的水溶液(pH6)在氫氣壓力0.5MPa下和2g鉑/炭型156(Johnson Matthey)存在下，在PH6下保持7小時。過濾后，蒸發(fā)溶液。w=15g。
2．N,N′-(2,3-二羥基丙基)-N,N′-(2,3,4,5,6-五羥基己基)-2,4,6-三溴代-5-[4-(4-甘氨酰氨基苯甲酰氨基)苯甲酰氨基]間苯二甲酰亞胺(a)在10℃下，13g上述衍生物加入到10ml用4.7g鄰苯二甲酰甘氨酸和1.7mlSOCl2制備的鄰苯二甲酰亞氨基乙酰氯溶液中。在20℃下攪拌2小時后，在80℃下，該溶液倒入150ml水中，回收沉淀物。w=10.6g。
(b)?；?6ml亞硫?；燃尤氲?2.4g上述衍生物的60ml二噁烷和10ml二甲基甲酰胺的溶液中，同時保持溫度低于10℃。攪拌30分鐘后，該溶液倒入200ml水中，用100ml乙酸乙酯洗滌回收的沉淀物。w=12g。
(c)和氨基醇偶合在60℃下，11.6g?；燃尤氲?20ml根據(jù)G制備的含13.5g 1-脫氧-1-(2,3-二羥基丙基氨基)-D-半乳糖醇的N-甲基吡咯烷酮中。攪拌4小時后，該混合物加入到1200ml二氯甲烷中并回收沉淀物。w=35g。
(d)除去苯二甲酰亞氨基保護基團在80℃下，14g上述衍生物加入到30ml含1.2g水合肼水中。在此溫度下3小時后，通過加5NHCl水溶液，該溶液酸化至pH1。幾小時后分離出形成的沉淀物，依次用樹脂IMACHP1110Na和HP661(Rohm&Haas)處理濾液。HPC柱No.1；洗脫劑No.2；tr=25-28min分鐘(起始原料32-36分鐘)。
3．和螯合物A反應0.6g釓螯合物A(Na鹽)、0.7EDCI·HCl和4g上述胺加入到15ml水中；通過加1NHCl水溶液，pH調(diào)至6，該混合物在40℃下保持2小時，然后加入到200ml乙醇中?；厥招纬傻某恋砦?，其在100ml水中的溶液在截留極限為5KDa的聚醚砜膜上超濾。HPLC柱和洗脫劑No.3；tr=26min。SEC條件No.1；tr=36min。實施例7式Ⅰ的釓螯合物，其中m=2
1．4-(4-氨基苯基氨基甲?；?苯甲酸(a)4-(4-硝基苯基氨基甲?；?苯甲酸甲酯在約10℃下，10ml亞硫酰氯滴加進25g對苯二酸一甲基酯的125ml二甲基乙酰胺溶液中；在15℃下攪拌1小時30分鐘后，該混合物緩慢加入到19g4-硝基苯胺的125ml相同溶劑的溶液中。在50℃下2小時后，回收形成的沉淀物。產(chǎn)率97％。
(b)還原10g上述硝基衍生物在2.5g 10％鈀/炭(50％水)存在下懸浮于100ml二甲基乙酰胺中，并在氫氣壓力0.5Mpa下保持7小時。通過ClarcelR過濾介質(zhì)去除催化劑，濾液加入500ml水中?；厥招纬傻某恋砦铩?br> (c)酯基的水解9g上述化合物、50ml含水NaOH(2N)和25ml甲醇在60℃下保持2小時。在20℃下，通過加濃鹽酸溶液(37％)，該溶液酸化至pH4.5，回收形成的沉淀物7g。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2；tr=29min分鐘。
2．N,N＇-雙(2,3,4,5,6-五羥基己基)-5-[4-(4-氨基苯基氨基甲?；?苯甲酰基甘氨酰氨基]-2,4,6-三碘間苯二酰胺在室溫下攪拌25g在F中制備的碘代氨基乙酰氨基間苯二酰胺和3ml三乙基胺、5.8g上述產(chǎn)物、4.3gHOBT和6gEDCI·HCl2小時，然后該混合物倒在700ml二氯甲烷上?；厥招纬傻某恋砦?，通過RP-2硅烷化過的二氧化硅柱色譜(Merck)純化，用水洗脫?；厥?6g所需的產(chǎn)物。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2；tr=14min分鐘。
3．用釓螯合物A偶合在40℃下，攪拌0.125g螯合物(鈉鹽)、1.8g上述化合物、0.15gEDCI·HCl和100mg磺酸NHS幾天，同時通過加1NHCl水溶液保持pH在約7?；厥胀ㄟ^加50ml乙醇形成的沉淀物和通過在5KDa膜上的超濾純化，得到1g所需的產(chǎn)物。SEC條件No.1；tr=30min。HPLC柱No.3；洗脫劑No.3；tr=20min分鐘。
實施例8式Ⅰ的釓螯合物，其中m=2
(鈉鹽)1．3-[3-(苯二甲酰亞氨基乙基氨基甲?；?苯甲酰氨基]苯甲酸(a)3-(氨基乙基氨基甲?；?苯甲酸攪拌9g間苯二酸一乙基酯和1.5mll,2-乙二胺的90ml甲醇溶液18小時，然后濃縮至干燥。用冰冷卻的甲醇洗滌殘余物。產(chǎn)率91％。
(b)保護作為鄰苯二甲酰亞胺的NH2:
9g胺和14gN-乙酯基鄰苯二甲酰亞胺加入到6.9g碳酸鈉的180ml水溶液中。攪拌1小時30分鐘后，回收固體，濾液酸化至pH2。鄰苯二甲酰亞胺沉淀物是白色晶體。產(chǎn)率80％。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2；tr=32分鐘。
(c)在10℃下，2.6ml亞硫酰氯滴加到12g上述鄰苯二甲酰亞胺的45ml二甲基乙酰胺溶液中。在15℃下攪拌2小時后，橙色溶液緩慢地加至5g3-氨基苯甲酸的45ml二甲基乙酰胺溶液中。反應介質(zhì)在55℃下保持3小時，然后倒入900ml水中?；厥招纬傻某恋砦?。產(chǎn)率96％。
2．N,N′-雙(2,3,4,5,6-五羥基己基)-5-[3-[3-(氨基乙基氨基甲酰基)苯甲酰氨基]苯甲酰氨基乙酰氨基]-2,4,6-三碘間苯二酰胺(a)攪拌在100ml二甲基乙酰胺中的20根據(jù)F制備的碘代氨基乙酰氨基間苯二酰胺、2.5ml三乙基胺、8.3g上述化合物、3.4gHOBT和4.9gEDCI·HCl1小時30分鐘。然后反應介質(zhì)倒入700ml二氯甲烷中，回收形成的沉淀物26g。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2；tr=26分鐘。
(b)肼解在80℃下，3.5ml水合肼加入到25g上述產(chǎn)物的55ml水溶液中。在此溫度下8小時后，該介質(zhì)酸化至pHl并回收形成的沉淀物。通過陽離子樹脂(H+)色譜，然后通過陰離子樹脂(OH-)色譜純化該沉淀物。產(chǎn)率為70％。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2；tr=23分鐘。
3．和釓螯合物A偶合在40℃和攪拌下，2g螯合物A(鈉鹽)、2.3gEDCI·HCl和16g上述化合物在50ml水中(pH7)保持1小時，之后，加200mg磺酸NHS并在40℃下繼續(xù)攪拌3小時。然后介質(zhì)倒入500ml乙醇中，通過超濾純化回收的沉淀物，得到10g所需產(chǎn)物的鈉鹽。SEC條件No.1；tr=36min。HPLC柱No.3；洗脫劑No.3；tr=21分鐘。
實施例9式Ⅰ的釓螯合物，其中m=2
(鈉鹽)1．4-[4-(4-[苯二甲酰亞氨基甲基]苯甲酰氨基)苯甲酰氨基]苯甲酸在15℃下，3.5ml亞硫酰氯加入到19.3g4-[4-[苯二甲酰亞氨基甲基]苯甲酰氨基]苯甲酸的溶液中，攪拌2小時45分鐘后，加8g4-氨基苯甲酸。在20℃下12小時后，該介質(zhì)倒入500ml水中。用二噁烷洗滌形成的沉淀物。w=11.5g。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2；tr=53分鐘。
2．N,N′-(2,3,4,5,6-五羥基己基)-N,N′-(2-羥基乙基)-4-[4-[4-(氨基乙基)苯甲酰氨基]苯甲酰氨基]苯甲酰胺(a)在20℃下，攪拌4.8gl-脫氧-1-(2-羥基乙基氨基)-D-葡萄糖醇(glucitol)、4gHOBT·H2O、11g上述酸和6.7gEDCI·HCl過夜。然后反應介質(zhì)倒入500ml二氯甲烷中，用300ml二乙基醚洗滌形成的沉淀物。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2；tr=39分鐘。
(b)肼解上述沉淀物加入到60ml二甲基乙酰胺中，在80℃下，3.2ml水合肼溶解于25ml水中。3小時后，濃縮介質(zhì)，殘余物溶解于水中。通過加濃HCl溶液，水相調(diào)至pH7.5，在強陽離子樹脂(H+)，然后在弱陰離子樹脂(OH-)上進行色譜分析。在乙醇中，得到3.5g沉淀物。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2；tr=27分鐘。
3．和釓螯合物A偶合使在15ml水和5ml二甲基乙酰胺中的0.5g螯合物A和1.5g上述化合物的溫度調(diào)為40℃，加0.75gEDCI·HCl和0.05g磺酸NHS(鈉鹽)。在此溫度下攪拌2小時后，反應介質(zhì)倒入2體積乙醇中，回收1.3g沉淀物。HPLC柱No.3；洗脫劑No.3；tr=31分鐘。
實施例10式Ⅰ的釓螯合物，其中m=2
1．4-[4-[4-硝基苯甲酰氨基]苯甲酰氨基]苯甲酸在5℃下，25.4g4-硝基苯甲酰氯加入到35g4-(4-氨基苯甲酰氨基)苯甲酸的140ml二甲基乙酰胺溶液中。在20℃下攪拌1天后，反應介質(zhì)倒入500ml二氯甲烷中。w=50g。
2．還原硝基在3g5％Pd/C(50％水)存在下，在壓力0.15MPa下氫化13g上述酸的400ml二甲基乙酰胺的懸浮液4小時。過濾和蒸發(fā)溶劑后，回收12g產(chǎn)物。
3．4-[4-[4-(苯二甲酰亞氨基乙酰氨基)苯甲酰氨基]苯甲酰氨基]苯甲酸16.4g苯二甲酰亞氨基乙酸的40ml亞硫酰氯的溶液回流4小時。濃縮后，反應介質(zhì)加入到100ml二異丙基醚中。回收10g?；瘸恋砦?。8.5g該產(chǎn)物加入到12g在步驟2得到的苯胺溶液中，在10℃下溶解于50ml二甲基乙酰胺中。使該介質(zhì)升至20℃，通過蒸餾除去溶劑并用二乙基醚洗滌殘余物。w=16g。
4．在E中制備的胺的偶合和肼解在35℃下，18g胺E、10g上述酸和3.5gHOBT溶解于80ml二甲基乙酰胺中；然后4.9gEDCI·HCl加入到反應介質(zhì)中，冷卻至20℃；1天后，該混合物倒入600ml二氯甲烷中并用400ml乙醇洗滌形成的沉淀物。該沉淀物在80℃下溶解于90ml二甲基乙酰胺和22ml水中；然后加1.85ml水合肼并攪拌該介質(zhì)3小時，之后，蒸發(fā)掉溶劑。殘余物溶解于800ml水中，通過加HCl水溶液(12N)，pH調(diào)至1。通過Celite和陰離子樹脂色譜和陽離子樹脂色譜過濾后，接著通過碳黑過濾洗脫液，回收13g所需的化合物。
5．式Ⅱ和式Ⅲ產(chǎn)物的反應1g螯合物A和8g上述胺溶解于40ml水中。通過加稀HCl水溶液酸化至pH6后，使反應介質(zhì)至40℃，向其中加0.09g磺酸NHS和1.2gEDCI·HCl。在此溫度下攪拌2小時后，該介質(zhì)倒入400ml乙醇中，回收沉淀物。
經(jīng)過通常的純化處理后，回收6g最終產(chǎn)物。SEC上述條件tr=38min。
實施例11式Ⅰ的釓螯合物，其中m=2
1．5-(4-硝基苯甲酰氨基)-2,4,6-三溴間苯二酸50g對硝基苯甲酰氯和75g5-氨基-2,4,6-三溴間苯二酸在400ml二噁烷中回流18小時。冷卻后，過濾掉沉淀物，用50ml二噁烷洗滌并干燥。w=115g。
2.5-(4-氨基苯甲酰氨基)-2,4,6-三溴間苯二酸通過加5NNaOH水溶液使180g上述硝基衍生物的600ml水溶液至pH6，并在Pt型156(Johnson Matthey)存在下，在壓力5×105下氫化7小時。通過過濾分離出催化劑，在減壓下蒸發(fā)水。w=80g。HPLC柱No.1；洗脫劑No.6；水/三氟乙酸(pH2.8)和甲醇(99/1-v/v)；流速1ml/min.；tr=27分鐘(硝基化合物是18.8分鐘)。
3．5-(4-[4-(苯二甲酰亞氨基甲基)苯甲酰氨基]苯甲酰氨基)-2,4,6-三溴間苯二酸10g4-氨基甲基苯甲酸、14.5gN-乙酯基鄰苯二甲酰亞胺和9.2ml三乙基胺在140ml四氫呋喃中的混合物回流72小時。用二乙基醚和1N鹽酸水溶液洗滌在室溫下通過過濾從反應介質(zhì)回收的沉淀物。得到14.5g固體，其中的12.2g在10℃下溶解于90mlN,N-二甲基乙酰胺和3.5ml亞硫酰氯中；攪拌3小時后，在步驟2得到的23.4g苯胺加入到介質(zhì)中，該混合物攪拌過夜，之后將其倒入900ml水中?；厥蘸陀盟礈斓某恋砦镉?00ml二噁烷重結(jié)晶。w=30g。HPLC柱No.1；洗脫劑No.5；水/CH3COONH4(0.01M)/CH3CN)；流速1ml/min.；在20分鐘內(nèi)梯度從85/15-50/50。
4．酰基二氯在上述步驟得到的30.3g間苯二酸衍生物溶解于150ml含26ml二甲基甲酰胺的二噁烷中，在5℃下，滴加42ml亞硫酰氯。在0℃下30分鐘后，該混合物倒入550ml水中，過濾掉形成的沉淀物，用水和用二異丙基醚洗滌。干燥后w=26g。
5．N,N′-(2,3,4,5,6-五羥基己基)-N,N′-(2,3-二羥基丙基)-2,4,6-三溴-5-[4-(4-氨基甲基苯甲酰氨基)苯甲酰氨基]間苯二酰胺(a)在60℃下，10g酰基二氯加入到15g1-脫氧-1-(2,3-二羥基丙基氨基)-D-半乳糖醇的100mlN-甲基吡咯烷酮溶液中。在此溫度下攪拌4小時后，冷卻至室溫的該介質(zhì)倒入11異丙醇中?；厥招纬傻某恋砦锊⒏稍?。HPLC柱No.1；洗脫劑No.5；tr=16min。
(b)除去苯二甲酰亞氨基在80℃和攪拌下，20.4g上述固體加入到80mlN,N-二甲基乙酰胺中，接著1.6ml水合肼溶解于20ml水中。在此溫度下3小時后，在室溫下該反應介質(zhì)倒入11乙醇中。回收形成的沉淀物，干燥，然后溶解于40ml水中。在0℃下，加約2ml6NHCl水溶液以降低pH至2；通過Celite過濾該介質(zhì)，然后通過離子交換樹脂(Amberlite陰離子和IMAC陽離子)純化。由此得到6g所需的產(chǎn)物。HPLC柱No.1；洗脫劑No.5；tr=24-29min。
6．和螯合物A反應
5.8g上述胺和1.1g螯合物(鈉鹽)溶解于12.5ml水中，通過加1NHCl水溶液，pH降低至6。加12.5ml二噁烷、0.06gHOBT然后加1.8gEDCI，該介質(zhì)在pH6下保持4小時，之后，將其倒入150ml乙醇中?；厥招纬傻某恋砦?，然后通過在50cm2截留極限為30KD的再生纖維素膜(從Millipore得到的Labscale模件)上切向超濾，純化該沉淀物。由此回收5.6g所需的產(chǎn)物。HPLC柱No.1；洗脫劑No.3；tr=16min。
實施例12式Ⅰ的釓螯合物，其中m=2
(鈉鹽)1．N,N＇-雙(2,3,4,5,6-五羥基己基)-2,4,6-三溴代-5-[4-(4-氨基甲基苯甲酰氨基)苯甲酰氨基]間苯二酰胺(a)在60℃下，攪拌10g按照實施例11的步驟4制備的?；群?0.6g二山梨醇酰胺(disorbitylamine)的200mlN-甲基吡咯烷酮溶液4小時。然后反應介質(zhì)倒入1.5L異丙醇中，從其中回收17.5g沉淀物。HPLC柱No.1；洗脫劑No.5；tr=15min。
(b)除去苯二甲酰亞氨基進行與上述實施例相同的方法，從步驟(a)的16g產(chǎn)物開始，得到6.2g所需的胺。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2；tr=15-20mm。
2．進行與上述實施例11相同的方法，用0.78g螯合物A和4.8g胺開始，得到2.5g所需的產(chǎn)物。HPLC柱No.1；洗脫劑No.3；tr=13min。
實施例13式Ⅰ的釓螯合物，其中m=2
1．4-(苯二甲酰亞氨基甲基羰基氨基)苯甲酸在10℃下，3.9ml亞硫酰氯加入到10g鄰苯二甲酰甘氨酸的30mlN,N-二甲基乙酰胺溶液中，在此溫度下攪拌3小時后，加4g4-氨基苯甲酸。在室溫下放置過夜，在80℃下，該介質(zhì)倒入500ml水中?；厥招纬傻某恋砦?。
2．5-(4-[4-(苯二甲酰亞氨基甲基羰基氨基)苯甲酰氨基]苯甲酰氨基)-2,4,6-三溴間苯二酸在10℃下，4.8rml亞硫酰氯加入到19.5g上述酸的120mlN,N-二甲基乙酰胺溶液中，2小時30分鐘后，加38g5-(4-氨基)苯甲酰氨基-2,4,6-三溴間苯二酸。在室溫下放置過夜，該介質(zhì)倒入11水中，回收形成的沉淀物并用400ml熱二噁烷洗滌。w=7.4g。
3．N,N＇-雙(2,3,4,5,6-五羥基己基)-2,4,6-三溴代-5-(4-(4-[苯二甲酰亞氨基甲基羰基氨基]苯甲酰氨基)苯甲酰氨基)間苯二酰胺在5℃下，21ml亞硫酰氯加入到16.5g上述二酸的90ml二噁烷和13.6ml二甲基甲酰胺的溶液中。攪拌2小時30分鐘后，該介質(zhì)倒入400ml水中并干燥形成的沉淀物，然后在70℃下，加入到29.3g二山梨醇酰胺(disorbitylamine)的150mlN-甲基吡咯烷酮溶液中。在此溫度下攪拌4小時后，該介質(zhì)冷卻至室溫，回收鹽，濾液倒入11異丙醇中。用1.2L乙醇洗滌形成的沉淀物。w=23g。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2；tr=28-33min。
4．除去苯二甲酰亞氨基在80℃下，22g上述鄰苯二甲酰亞胺和1.4ml水合肼加入到80mlN,N-二甲基乙酰胺和20ml水的混合物中。在此溫度下3小時后，該介質(zhì)冷卻至約20℃，然后倒入300ml乙醇中。干燥形成的沉淀物并溶解于40ml水中，該溶液冷卻至0℃并加3ml6N鹽酸至pH1.5。通過Celite過濾后，通過45mlAmberliteIRA67陰離子樹脂(Rohm&Haas),50mlIMACHPmE陽離子樹脂，然后用16mlAmberliteIRA458陰離子樹脂洗脫該濾液。中和并通過0.22μm膜過濾后，該溶液被干燥。w=11.7g。HPLC柱No.1；洗脫劑No.2；tr=16-20min。
5．和螯合物A偶合11.2上述胺和1.9g螯合物A(鈉鹽)溶解于24ml水中。通過加2NHCl水溶液，使溶液的pH至6.1。然后加24ml二噁烷，接著加2.7g1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸化物和0.094g羥基苯并三唑。在室溫下攪拌3小時后，該混合物倒入300ml乙醇中并回收形成的沉淀物。用Labscale模件超濾后，該模件的膜的截留極限為10KD，該溶液被冷凍干燥。w=10.2g。HPLC柱No.1；洗脫劑No.7；CH3CN/P.I.C.A*(Waters)梯度從25/75-30/70，時間25分鐘；P.I.C.A=H2O/H3PO4/(C4H9)4N+HSO4-；tr=14分鐘。
實施例14式Ⅰ的釓螯合物，其中m=1
1.8g(1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷)-1,4,7,10-四(2-琥珀酸)的釓螯合物和13.5g按照實施例3的步驟f制備的N,N′-雙(2,3,4,5,6-五羥基己基)-2,4,6-三溴代-5-(4-[4-氨基乙酰氨基苯甲酰氨基]苯甲?；拾滨０被?間苯二酰胺溶解于70ml的水中，加11NHCl水溶液至pH6。加2gEDCI后，該混合物在40℃下保持2小時。然后在截留極限為5KD的含聚醚砜膜的MinisetteFiltron模件上進行切向超濾，直至得到2L濾液；然后截留液與15gDarcoG60 black(以Aldrich出售)接觸2小時。通過過濾分離碳黑和濃縮至干燥后，回收5g白色固體。SEC條件No.1；tr=35分鐘。
權(quán)利要求
1．順磁金屬陽離子和式Ⅰ化合物的螯合物
其中m是1或2，R′是H,C1-C4烷基或羥烷基，CH2-COOH基或CH2-CONZ1Z2基，Z1和Z2彼此分別是H或選擇性羥基化的C1-C4烷基，或R′是基團
R是基團
其中a是1或2,Z是一個鍵，CH2,CH2CONH或(CH2)2-NHCO,Z′是一個鍵，O,S,NQ,CH2,CO,CO-NQ,NQ-CO,NQ-CO-NQ或CO-NQ-CH2-CONQ,Z″是CO-NQ,NQ-CO,CO-NQ-CH2-CO-NQ或NQ-CO-CH2-NQ-CO，其中Q是H或選擇性羥基化的C1-C4烷基，R1,R2,R3,R4和R5彼此分別是選自由H,Br,Cl,I,CO-NQ1Q2或N(Q1)-CO-Q2組成的組，Q1和Q2可以相同或不同，選自C2-C6烷基，該烷基是選擇性羥基化的和由氧原子選擇性間斷的，這樣Q1和Q2總共含有4-10個OH基，但須R1,R2,R3,R4和R5基的至少一個，但不多于2個的基團是酰氨基基團，及其與可藥用的有機堿或無機堿形成的鹽。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的順磁金屬陽離子和式Ⅰ化合物的螯合物及其鹽，其中m是2R＇是
CH2COOH，或CH2CONZ1Z2,a是1,Z是一個鍵，CH2或CH2CONH,Z′是CONH,NHCO,CONH-CH2-CONH或NHCON,Z″是CONH或CONH-CH2-CONH和R2=R4=CONQ1Q2,或R3=CONQ1Q2和R1,R2,R4和R5是H,Br,Cl或I，或Z″是NHCO和R2=R4=N(Q1)COQ2，或R3=N(Q1)COQ2和R1,R2,R4和R5是H,Br,Cl或I。
3．根據(jù)權(quán)利要求1的順磁金屬陽離子和式Ⅰ化合物的螯合物及其鹽，其中m是2R′是
或CH2COOH，a是1,Z是一個鍵，CH2或CH2CONH,Z″是CONH,NHCONH或CONH-CH2-CONH,Z是CONH或CONH-CH2-CONH,R1,R3和R5都是Br或I,R2和R4是CONQ1Q2,Q1和Q2選自共含有6-10個OH基的C2-C6羥烷基，或者如果Q1和/或Q2是被氧原子間斷的，Q1和Q2選自含有4-8個OH基的C2-C6羥烷基。
4．根據(jù)權(quán)利要求1的順磁金屬陽離子和式Ⅰ化合物的螫合物及其鹽，其中m是2,R′是
a是1,Z是CH2或CH2CONH,Z′是CONH或NHCONH,Z″是CONH或CONH-CH2-CONH,R1,R3和R5都是Br或I,R2和R4是CONQ1Q2，其中Q1和Q2選自共含有6-10個OH基的C2-C6羥烷基，或者如果Q1和/或Q2是被氧原子間斷的，Q1和Q2選自含有4-8個OH基的C2-C6羥烷基。
5．根據(jù)權(quán)利要求1的順磁金屬陽離子和式Ⅰ化合物的螯合物及其鹽，其由m是2，R′是CH2CO2H,或
a是1，Z是CH2或CH2CONH，Z′和Z″是CONH,R1,R3和R5都是Br或I,R2和R4是CONQ1Q2，其中Q1和Q2選自共含有6-10個OH基的C2-C6羥烷基，或者如果Q1和/或Q2是被氧原子間斷的，Q1和Q2選自含有4-8個OH基的C2-C6羥烷基。
6．根據(jù)權(quán)利要求1的順磁金屬陽離子和式Ⅰ化合物的螯合物及其鹽，其由m是2,R＇是CH2CO2H，或
a是2,Z是CH2或CH2CONH,Z′是CONH或NHCO,Z″是CONH或CONH-CH2CONH，和R1,R3和R5都是Br或IR2和R4都是CONQ1Q2，或R3是CONQ1Q2和R1,R2,R4和R5是H,Br或I。
7．根據(jù)權(quán)利要求1的順磁金屬陽離子和式Ⅰ化合物的螯合物及其鹽，其中m是1,R′是
a是1,Z是CH2或CH2CONH,Z′是CONH,Z″是CONH或CONH-CH2CONH,R1,R3和R5是Br,R2和R4是CONQ1Q2，其中Q1和Q2是共含有6-10個OH基的C2-C6羥烷基。
8．權(quán)利要求1-7之一的螯合物，其中金屬陽離子是Gd3+。
9．根據(jù)權(quán)利要求1的式Ⅰ化合物的釓螯合物及其鹽，其中m是2
和R是
10．根據(jù)權(quán)利要求1的式Ⅰ化合物的釓螯合物及其鹽，其中m是2,R’是
其中Z″是CONH-CH2CONH,Q1和Q2是CH2(CHOH)4CH2OH，在此情況下，Z是CH2和R1,R3和R5是I，或者Z是CH2CONH和R1,R3和R5是Br，或者其中Z″是CONH,Z是CH2或CH2CONH和R1,R3和R5是Br和Q1是CH2(CHOH)4CH2OH和Q2是CH2CHOH-CH2OH或CH2(CHOH)4CH2OH。
11．用于診斷的磁共振成象的造影試劑，含有在可藥用載體中的有效量的權(quán)利要求1-10中之一的螯合物。
12．含有放射性標記的金屬陽離子和式Ⅱ化合物的螯合物的閃爍試劑
其中m是1或2,R′是H,C1-C4烷基或羥烷基，CH2-COOH基或CH2-CONZ1Z2基，Z1和Z2彼此分別是H或選擇性羥基化的C1-C4烷基，或R′是基團
R是基團
其中a是1或2Z是一個鍵，CH2,CH2CONH或(CH2)2NHCOZ′是一個鍵，O,S,NQ,CH2,CO,CO-NQ,NQ-CO,NQ-CO-NQ或CO-NQ-CH2-CONQZ″是CO-NQ,CQ-CO,CO-NQ-CH2-CO-NQ或NQ-CO-CH2-NQ-CO其中Q是H或選擇性羥基化的C1-C4烷基，R1,R2,R3,R4和R5彼此分別是選自由H,Br,Cl,I,CO-NQ1Q2或N(Q1)-CO-Q2組成的組，Q1和Q2可以相同或不同，選自C2-C6烷基，該烷基是選擇性羥基化的和由氧原子選擇性間斷的，這樣Q1和Q2總共含有4-10個OH基，但須R1,R2,R3,R4和R5基的至少一個，但不多于2個的基團是酰氨基基團，及其與可藥用的有機堿或無機堿形成的鹽。
全文摘要
式I化合物與金屬離子的螯合物其中R是含3或4個連續(xù)苯環(huán)的親水基團;m 是1或2,其用于診斷成象。
文檔編號C07F5/00GK1225922SQ9812692
公開日1999年8月18日 申請日期1998年12月10日 優(yōu)先權(quán)日1997年12月10日
發(fā)明者D·梅耶, M·潑特, O·洛瑟克斯, C·斯莫諾特 申請人:古爾比特公司