專利名稱：高純度蛋黃磷脂的精制工藝的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及高純度磷脂的制備方法，更確切地說是高純蛋黃磷脂的制備方法。
磷脂是一類含磷酸根的脂類，是組織細胞的基本組成成分，具有重要的生物學功能。磷脂中含高度不飽和脂肪酸，是人體多烯酸的重要來源。它具有降低血中的膽固醇(Ch)和甘油三酯(TG)含量，改善脂類代謝和動脈硬化的功能。磷脂分子是典型的兼溶性分子，具有較好的乳化功能，是脂質體的基本組成成分，又是全靜脈營養(yǎng)乳劑的重要成分。它具有較高的醫(yī)用價值，有健腦、美容、抗衰、降血脂、保肝補血等作用，在化工、輕工、食品工業(yè)等各各領域有著廣泛的應用。
動物、植物中卵黃含磷脂最多達18％，大豆為1.82％，前者是后者的9.9倍，提取磷脂的主要原料為大豆(提取大豆磷脂)和蛋黃(蛋黃磷脂)。磷脂中最主要的成分是卵磷脂(PC)，蛋黃磷脂中含PC 72.6％，大豆磷脂中含PC 16～21％。
人體所需的磷脂主要來自蛋黃和大豆等天然食物，但是隨著科學技術的發(fā)展及生活水平的提高，食物精加工后使磷脂減少，而機體對磷脂的需求量卻增多，因而易導致磷脂營養(yǎng)相對不足，所以發(fā)達國家中磷脂是不受限制的食品添加劑。隨著我國人民生活水平的不斷提高，磷脂的需求量越來越大。
從天然食品中提取磷脂的方法有二種一種是化學萃取法，第二種是物理萃取法。
所說的化學萃取法就是利用乙醇、乙醚、氯仿、丙酮等有機溶劑反復萃取提取磷脂的方法?；瘜W萃取法雖可以獲取較高純度的磷脂，但是步驟繁多，過程冗長，使得磷脂在萃取過程中易被氧化水解，其穩(wěn)定性降低，從而導致磷脂的質量下降。另外，化學萃取法要加入較多的化學試劑，其中包括大量的有機溶劑。由于磷脂多用于醫(yī)藥、食品及化妝品中，因此必須將其除去，但仍存有微量有機溶劑影響磷脂的質量。再者，用化學萃取法制備的蛋黃磷脂，其中膽固醇的含量仍較高，即使用丙酮處理，蛋黃磷脂中的膽固醇的含量也難低于2.5％。而且，化學萃取法又不可避免地造成一定的環(huán)境污染，有損于實驗人員的健康。
所說的物理萃取法就是超臨界流體萃取法(SFE)。
超臨界流體(SCF)是指在臨界壓力和臨界溫度以上相區(qū)的氣體。由于處于超臨界狀態(tài)時，氣液兩相性質非常接近，以至于無法分辨，故稱超臨界流體(SCF)。
早在1897年J.B.Hannay等發(fā)現(xiàn)在超臨界狀態(tài)下氣體對固體物質具有溶解作用，也就是說超臨界流體和液體一樣，能夠溶解固體。而且這種超臨界流體作為“溶劑”時，對物質的溶解作用受壓力、溫度的影響，通過改變溫度和壓力而達到將不同物質分離的目的，這樣就形成了所說的物理萃取法(超臨界流體萃取法)，常用的超臨界萃取溶劑有氨、二氧化碳、丁烷、乙烷等。
由于二氧化碳(CO2)是一種不活潑的氣體。它的臨界溫度(Tc31.1℃)，近于常溫水平，臨界壓力(Pc 7.30MPa)也不很高，而且具有無毒、價廉、易得，易揮發(fā)，無致癌性等特點，又不與被萃取物發(fā)生化學反應。所以二氧化碳廣泛應用于超臨界流體萃取法中作為超臨界萃取溶劑，用于醫(yī)藥、食品、香料及化妝品等領域的物質分離中。以二氧化碳作為超臨界萃取溶劑有許多優(yōu)點，由于用二氧化碳作為超臨界萃取溶劑使產品中不含有害的有機溶劑，不污染環(huán)境。超臨界二氧化碳萃取是在二氧化碳環(huán)境中、常溫下進行，可以防止產品中高度不飽和脂肪酸氧化，提高了產品的質量，而且萃取與分離同時進行，從而大大提高了反應效率，操作簡單。二氧化碳又可以循環(huán)使用，降低了產品的成本。其缺點是固定投資較大。
近些年來關于磷脂的提取方面的報導日益增多，中國專利文獻CN1047083A(申請?zhí)?9103233.9)用大豆混合磷脂為原料，通過萃取分離將卵磷脂與腦磷脂分開，然后用鹽析、溶解吸附和脫脂等工藝，對卵磷脂進行進一步處理制取了口服級和注射級卵磷脂乳化劑。
德國專利文獻DE2,833,371報導了用化學萃取法，以蛋黃為原料制取高純度卵磷脂的方法，將2千克蛋黃與5.5千克甲醚混合，在28℃，5.7公斤/平方厘米的條件下攪拌30分鐘，過濾除去蛋白質，將濾液于40℃的條件下蒸發(fā)，除去甲醚后得787克殘留物，按此法反復處理7次，后在50℃，10公斤/平方厘米的條件下蒸發(fā)，再通過5000轉/分離心10分鐘，取得較高純度的卵磷脂。
日本專利文獻特開平3-133991報導了以粗制的卵磷脂為原料來制取純度為90～99.0％的卵磷脂的方法。該法是將一定量的原料粗制卵磷脂裝入注入器中，溫度保持在32～70℃，從注入器的噴嘴，呈絲狀，以0.5-10克/小時的速度注入到提取槽中，與此同時將溫度為32-70℃，壓力為80-600公斤/平方厘米的超臨界狀態(tài)的二氧化碳或上述溫度、壓力的超臨界狀態(tài)的二氧化碳中含有CO2總量0.1-4％(重量百分數(shù))的乙醇、丙酮其中的一種的混合物，以3-3000升/小時的速度進入到提取槽中，使超臨界狀態(tài)的二氧化碳與粗制卵磷脂接觸，原料粗制卵磷脂和超臨界狀態(tài)的二氧化碳注入完畢后，再向提取槽注入超臨界狀態(tài)的二氧化碳10-60分鐘。該法的優(yōu)點是有的制取卵磷脂的工藝流程制出的卵磷脂的純度高，其不足之處是回收率低，進料設備復雜，不易操作，進料速度慢，單位時間內的產量低。
本發(fā)明的目的就在于研究出從天然的原料中提取磷脂的方法，使得制出的磷脂純度高，回收率也高，設備有所簡化，又易操作，單位時間的產量有較大的提高。
本發(fā)明的高純度蛋黃磷脂的精制工藝，以蛋黃粉為原料，將蛋黃粉裝入萃取器中，向盛有原料蛋黃粉的萃取器中通入超臨界二氧化碳，在萃取器中于萃取壓力30-45MPa，溫度35-55℃的超臨界條件下連續(xù)萃取，在分離器中收集甘油三酯(TG)和膽固醇(Ch)，連續(xù)萃取至不再分離出甘油三酯和膽固醇為止；向盛有除去了甘油三酯和膽固醇的蛋黃粉的萃取器中通入含有乙醇的超臨界二氧化碳，在萃取器中于萃取壓力30～45MPa，溫度35-55℃的超臨界條件下連續(xù)萃取，在分離器中收集蛋黃磷脂的乙醇溶液，連續(xù)萃取至蛋黃磷脂的乙醇溶液在分離器中收集完全為止，在含有乙醇的超臨界二氧化碳中乙醇與二氧化碳的摩爾比為1∶5～15，萃取器中的殘余物為蛋白粉。
作為原料的蛋黃粉中一般含有的水份為10％(重量百分數(shù)，下同)以下，以含有水份1-10％為好，又以含有1-5％為更佳。將蛋黃粉裝入萃取器中后，向盛有原料蛋黃粉的萃取器中通入超臨界二氧化碳，在萃取器中于萃取壓力30～45MPa，溫度35-55℃的超臨界條件下連續(xù)萃取，又以在萃取器中于萃取壓力35-42MPa，溫度36-48℃的超臨界條件下連續(xù)萃取為好。超臨界的二氧化碳的平均流量保持在0.5～50升/分為佳，又以保持在2.5-20升/分為更佳。在分離器中收集甘油三酯(TG)和膽固醇(Ch)至不再分離出甘油三酯和膽固醇為止。通入臨界二氧化碳將甘油三酯和膽固醇在分離器中收集完全的時間一般在0.5～10小時之間。將甘油三酯和膽固醇分離收集完全后，得到甘油三酯和膽固醇產品。向盛有除去了甘油三酯和膽固醇的蛋黃粉的萃取器中通入含有乙醇的超臨界二氧化碳，在萃取器中于萃取壓力30-45MPa，溫度35-55℃的超臨界條件下連續(xù)萃取，又以在萃取器中于萃取壓力35～42MPa，溫度36-48℃的超臨界條件下連續(xù)萃取為好。含有乙醇的超臨界二氧化碳的平均流量保持在0.5-50升/分為好，又以保持在2-20升/分為更好。在分離器中收集蛋黃磷脂的乙醇溶液，在分離器中收集蛋黃磷脂的乙醇溶液收集完全所需時間為0.1～2小時，又以0.5-2小時為好。在萃取器中殘余物為蛋白粉。在含有乙醇的超臨界二氧化碳中乙醇與超二氧化碳的摩爾比為1∶5～15，其摩爾比又以1∶6～13為佳。所用的超臨界二氧化碳的純度為92-100％(純度92-100％即二氧化碳中含有二氧化碳為92-100％，體積百分數(shù)，下同)，以95～98％為佳，又以99-99.5為最佳。國產的二氧化碳的純度一般為95～99.5％，經再提純后可達到99～100％的純度。所用乙醇中乙醇的含量為90～100％(重量百分數(shù))，以95～99.7％為好。市售無水乙醇中乙醇的含量為99.7％。
在分離器中所收集到的蛋黃磷脂的乙醇溶液經減壓蒸餾，回收乙醇，而得到蛋黃磷脂固體產品。減壓蒸餾控制的壓力為0.06～0.08MPa，控制的溫度為40-80℃。減壓蒸餾所制得的蛋黃磷脂于20-30Pa的壓力，-15～-35℃的溫度下進行低溫干燥。低溫干燥后的蛋黃磷脂于-15～40℃的溫度下進行貯藏。
從分離器中出來的二氧化碳可以回收，循環(huán)使用。在本發(fā)明的方法中也可以用丙酮、石油醚等有機溶劑來代替乙醇與超臨界二氧化碳來萃取蛋黃粉中的蛋黃磷脂，但以乙醇為佳。
超臨界流體二氧化碳萃取蛋黃磷脂的流程示意圖見

圖1。圖1中A為二氧化碳貯罐用于貯存二氧化碳。二氧化碳貯罐A中的二氧化碳經閥門開關G進入制冷裝置F中，使二氧化碳再一次液化進行提純。若二氧化碳貯罐中的二氧化碳的純度為95～98％時，經制冷裝置F再一次的液化后二氧化碳的純度為可達99～99.5％。液態(tài)二氧化碳在柱塞泵B中加壓到30-45MPa，又以加壓到35-42MPa為佳。柱塞泵B上有流量針，由流量計控制二氧化碳的流量，使其達到所需要的二氧化碳的流量，進入萃取器C中進行萃取，除去蛋黃粉中的甘油三酯和膽固醇。使甘油三酯和膽固醇收集到分離器D中，二氧化碳從分離器D中出來再回到二氧化碳貯罐A中使二氧化碳得以回收。
若用含有乙醇的臨界二氧化碳來萃取分離蛋黃磷脂時，在改性劑泵E中將乙醇加壓到8～10MPa，改性劑泵上設有流量計，控制乙醇的流量，將需要量的乙醇和來自制冷裝置F的二氧化碳形成含有乙醇的二氧化碳，使乙醇與二氧化碳的摩爾比為1∶5～15，又以其摩爾比1∶6～13為好，含有乙醇的二氧化碳進入柱塞泵B中，加壓到30～45MPa，又以加壓到35～42MPa為好，形成含有乙醇的超臨界二氧化碳進入萃取器C中，萃取分離蛋黃磷脂，使蛋黃磷脂收集到分離器D中，二氧化碳從分離室D回到二氧化碳貯罐A中，在萃取器C中留下殘余物蛋白粉。
以200克蛋黃粉為原料，用本發(fā)明的工藝制得的三種產品，它們是甘油三酯和膽固醇、蛋黃磷脂、蛋白粉。通過分析天平測出這三種產品的重量和所占的重量百分數(shù)見表1。
表1 三種產品的重量和所占的重量百分數(shù)產品名稱重量(克) 所占的重量百分數(shù)(％)甘油三酯和82.7 41.4膽固醇蛋黃磷脂 27.7 13.9蛋白粉86.0 43.0從表1中可以看出蛋黃粉中的蛋黃磷脂的含量為13.9％，符合一般的含有14％左右的文獻記載。
用磷鉬酸法測定了用本發(fā)明的工藝制得的蛋黃磷脂、化學萃取法制得的蛋黃磷脂和市售的蛋黃磷脂中的磷，用微量凱氏定氮法測定了它們的含氮量，并計算出了N/P的克分子比，其結果見表2。
表2 三種蛋黃磷脂中氮、磷含量及N/P克分子比產品 P(％) N(％) N/P(克分子比)本發(fā)明工藝制 3.77 1.711.003得的蛋黃磷脂化學萃取法制 3.79 1.781.038得的蛋黃磷脂市售蛋黃磷脂 3.49 1.85 1.196注P、N的百分數(shù)均為重量百分數(shù)。
從表2可以看出三種產品中磷、氮的含量的分析結果。本發(fā)明的工藝制得的產品中磷含量值與化學萃取法制得的產品中的磷含量值相似，均高于市售產品中的磷含量值。本發(fā)明工藝生產的蛋黃磷脂的N/P(克分子比)非常接近1.000理論值。這就表明化學萃取法生產出來的蛋黃磷脂中可能存在除蛋黃磷脂以外的含氮化合物。
表3 三種產品中蛋黃磷脂的重量百分含量產品 按P計算(％) 按N計算(％)本發(fā)明的工藝 95.095.0生產的蛋黃磷脂化學萃取法生產出的 95.498.8蛋黃磷脂市售蛋黃磷脂 86.1102.4用薄層層析法對蛋黃磷脂進行了定性分析，其圖譜見圖2。從定性分析的結果表明，用本發(fā)明的工藝方法生產出來的蛋黃磷脂至少有四種磷脂磷脂酰膽堿(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、神經鞘磷脂(SM)、溶血卵磷脂(LPS)。
用本發(fā)明的工藝生產出的蛋黃磷脂經薄層層析后，用島津CS-930雙波長薄層層析掃描儀掃描定量，結果見表4。
表4 本發(fā)明工藝生產的蛋黃磷脂中四種磷脂的含量組份平均含量(％) CV(％)PC 75.44 1.18SM 2.823.14LPS6.642.50PE 12.40 2.31從表4中可以看出這四種磷脂的含量各不相等，以PC(磷脂酰膽堿)含量最高，占蛋黃磷脂量的75.44％，其后依次是PE(磷脂酰乙醇胺)含量為12.4％，LPS(溶血卵磷脂)為6.64％，SM(神經鞘磷脂)為2.82％，此結果與文獻報導卵黃磷脂中PC占70％左右的結果相似。
用GC/MS法(氣相色譜-質譜法)分析鑒定了用本發(fā)明的工藝制出的蛋黃磷脂樣品。分析結果表明樣品中含有8種脂肪酸，它們是軟脂酸、硬脂酸、棕櫚油酸、油酸、亞油酸，花生四烯酸、DHA、未確定不飽和脂肪酸，其中不飽和脂肪酸占52％，飽和脂肪酸占48％。不飽和脂肪酸中營養(yǎng)必需脂肪酸量約為20％。
通過內標法測定了本發(fā)明工藝生產的蛋黃磷脂樣品中花生四烯酸含量為6.27％，DHA為2.52％，而且不含膽固醇。
用本發(fā)明的工藝生產出來的蛋黃膦脂溶于無水乙醇中，濃度為0.1％，用紫外分光光度計測定其吸收光譜，其最大吸收峰位于214nm，與文獻報導非常相近。
用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法及化學法測定了用本發(fā)明工藝生產出來的蛋黃磷脂樣品中的各種元素的含量，結果見表5。
表5蛋黃磷脂中各種元素的含量元素名稱 含量(μg/g) 元素名稱 含量(μg/g)鈣(Ca) 181.0 鎳(Ni)4.06鐵(Fe) 66.5砷(As)0.095鈉(Na) 2105.0 鉛(Ph)0.178鉀(K) 465.0 釩(V) 5.25銅(Cu) 2.90汞(Hg)0.0046鋅(Zn) 8.03鋁(Al)63.10錳(Mn) 1.18鎘(Cd)0.0012硼(B) 6.70磷(P) 37400.0鈷(Co) 0.57本發(fā)明的高純度蛋黃磷脂的精制工藝的優(yōu)點就在于1.本發(fā)明的工藝除了具有超臨二氧化碳萃取法所有的特點外，還具有其自己的優(yōu)點，本發(fā)明的工藝設備簡化，尤其是供料設備得以簡化，易于操作，萃取與分離同時進行，易于操作，產品純度和回收率高。制出的產品蛋黃磷脂不含膽固醇和乙醇，乙醇和二氧化碳可循環(huán)使用，降低了產品的成本。
2.用本發(fā)明的工藝生產出的蛋黃磷脂由于不含有害的有機溶劑，可用于臨床和食品工業(yè)中。
3.本發(fā)明的工藝由于二氧化碳、乙醇循環(huán)使用，不污染環(huán)境，不損害實驗工作人員的健康。
4.本發(fā)明的工藝可以生產出甘油三酯和膽固醇、蛋黃磷脂和蛋白粉三種產品，除蛋黃磷脂外，其他二種產品亦有應用開發(fā)價值，對蛋黃粉原料進行了綜合利用。
圖1為超臨界流體二氧化碳萃取蛋黃磷脂流程示意圖。
圖2為超臨界流體二氧化碳萃取出的蛋黃磷脂的薄層層析圖譜。
PC(磷脂酰膽堿)，PE(磷脂酰乙醇胺)，SM(神經鞘磷脂)，LPS(溶血卵磷脂)。
用以下實施例對本發(fā)明的工藝作進一步的說明，將有助于對本發(fā)明及其優(yōu)點的進一步理解，而不作為對本發(fā)明的限定，本發(fā)明的保護范圍由權利要求書來決定。
實施例1以150克蛋黃粉為原料，將蛋黃粉裝入萃取器C中，二氧化碳從二氧化碳貯罐A中經閥門開關G直接導入柱塞泵B中，將二氧化碳加壓到31MPa形成超臨界二氧化碳進入到萃取器C中，在萃取器C中于萃取壓力31MPa和50℃的超臨界條件下連續(xù)萃取，在分離器D中收集甘油三酯和膽固醇產品，至不再分離出甘油三酯和膽固醇為止，二氧化碳從分離器D中回收二氧化碳到二氧化碳貯罐A中得到回收。收集完甘油三酯和膽固醇產品后，來自二氧化碳貯罐A的純度為95％的二氧化碳和來自改性劑泵E中加壓到8MPa的乙醇直接導入柱塞泵B中加壓到44MPa，形成含有乙醇的超臨界二氧化碳進入盛有除去了甘油三酯和膽固醇的蛋黃粉的萃取器C中，乙醇與二氧化碳的摩爾比為1∶5.5，在萃取器C中于萃取壓力44MPa，48℃的超臨界條件下連續(xù)萃取，萃取至蛋黃磷脂的乙醇溶液完全收集在分離器D中為止。二氧化碳從分離器D中回到二氧化碳貯罐A中。萃取器C中的殘留物為蛋白粉產品。將蛋黃磷脂經減壓蒸餾得蛋黃磷脂產品20.10克，其含磷量(重量百分數(shù)，下同)為3.76％，蛋黃磷脂的純度為94.7％，回收率為95.7％。
實施例2其設備與操作過程同實施例1，唯不同的是以250克蛋黃粉為原料，將二氧化碳加壓到38MPa，形成超臨界二氧化碳，進入到萃取器C中，在萃取器C中于萃取壓力38MPa和40℃的超臨界條件下連續(xù)萃取，二氧化碳平均流量保持在1.5升/分，得到甘油三酯和膽固醇。來自二氧化碳貯罐A的二氧化碳和來自改性劑泵E的純度為93％的乙醇在柱塞泵B中加壓到32MPa形成乙醇與二氧化碳的摩爾比為1∶14.5的含乙醇的超臨界二氧化碳進入到萃取器C中，于萃取壓力32MPa，溫度38℃的超臨界條件下連續(xù)萃取。含乙醇的超臨界二氧化碳的平均流量保持在1.5升/分。收集蛋黃磷脂的乙醇溶液于分離器D中。得到產品蛋黃磷脂33.75克，其含磷量(重量百分數(shù)，下同)為3.74％，蛋黃磷脂的純度為94.2％，回收率為96.4％。
實施例3以含水份為3％的200克蛋黃粉為原料，將蛋黃粉裝入萃取器C中，所用的二氧化碳為市售的純度為96.5％的二氧化碳。純度為96.5％的二氧化碳從二氧化碳貯罐A中經閥門開關G進入制冷裝置F中。在制冷裝置F中使二氧化碳再一次液化進行提純，經提純后的二氧化碳的純度為99.5％，提純到99.5％的二氧化碳導入柱塞泵B中，將純度99.5％的二氧化碳加壓到42MPa形成超臨界二氧化碳進入到萃取器C中。在萃取器C中于萃取壓力42MPa和48℃的超臨界條件下連續(xù)萃取，二氧化碳的平均流量保持在4升/分，萃取6小時，至不再分離出甘油三酯和膽固醇。在分離器D中將甘油三酯(TG)和膽固醇(Ch)收集完全。二氧化碳從分離器D中回收二氧化碳到二氧化碳貯罐A中。在改性劑泵E中將乙醇加壓到9MPa，乙醇的含量為99.7％的乙醇。純度為96.5％的二氧化碳從二氧化碳貯罐A中經閥門開關G進入到制冷裝置F中，使CO2再一次液化進行提純，經提純使其純度為99.5％的二氧化碳?？刂苼碜愿男詣┍肊的加壓到9MPa的乙醇的流量與經提純使其純度為99.5％的二氧化碳形成乙醇與二氧化碳的摩爾比為1∶10的含乙醇的二氧化碳，進入到柱塞泵B中加壓到42MPa形成含乙醇的超臨界二氧化碳，進入到盛有除去了甘油三酯和膽固醇的蛋黃粉的萃取器C中，在萃取器C中于萃取壓力42MPa，溫度45℃的超臨界條件下連續(xù)萃取，含有乙醇的超臨界二氧化碳的平均流量為5升/分。在分離器D中收集蛋黃磷脂的乙醇溶液，收集時間為0.5小時。分離器D中的二氧化碳回收到二氧化碳貯罐A中。萃取器C中留下的殘余物為蛋白粉。在分離器D中收集到的蛋黃磷脂的乙醇溶液于0.07MPa，48℃的溫度下進行減壓蒸餾后，再于25Pa，-25℃的條件下進行低溫干燥，干燥后的蛋黃磷脂于-40℃的溫度下進行貯藏。得到的蛋黃磷脂產品27.80克，其含磷量(重量百分數(shù)，下同)為3.83％，蛋黃磷脂的純度為96.5％，回收率為99.3％。
實施例4其設備與操作過程同實施例3，唯不同的是以含水份5％的100克新鮮蛋黃粉(北京禽蛋廠)為原料，裝在萃取器C中。所用二氧化碳的純度為99.5％(北京酒精廠生產)，經制冷裝置F進行液化提純到100％，在柱塞泵B中將100％的二氧化碳加壓到42MPa形成臨界二氧化碳進入萃取器C中，在萃取器C中于萃取壓力42MPa和49℃的超臨界條件下連續(xù)萃取，二氧化碳的平均流量保持在3升/分，萃取8小時。在分離器D中將甘油三酯和膽固醇收集完全。在改性劑泵E中將乙醇含量為95％的乙醇加壓到8MPa，將乙醇與經提純使其純度為100％的二氧化碳形成乙醇與二氧化碳的摩爾比為1∶8.33的含乙醇的二氧化碳進入到柱塞泵B中加壓到42MPa，形成含乙醇的超臨界二氧化碳進入到萃取器C中，在萃取器C中于萃取壓力42MPa，溫度42℃的超臨界條件下連續(xù)萃取，含有乙醇的超臨界二氧化碳的平均流量為3升/分。在分離器D中收集蛋黃磷脂的乙醇溶液，收集時間為0.7小時。分離器D中的二氧化碳回收到二氧化碳貯罐A中。萃取器C中留下殘余物為蛋白粉，于0.065MPa，60℃的溫度下進行減壓蒸餾，于20Pa的壓力，-20℃的溫度下進行低溫干燥，于-25℃的溫度下貯藏。得到的蛋黃磷脂產品為14.10克，其含磷量(重量百分數(shù)，下同)為3.82％，蛋黃磷脂的純度為96.2％，回收率為100％。
實施例5其設備與操作同實施例3，唯不同的是以含水份7％的200克蛋黃粉為原料，裝在萃取器C中，所用二氧化碳的純度為95％，經制冷裝置F進行液化提純到99％，在柱塞泵B中將純度99％的二氧化碳加壓到38MPa形成臨界二氧化碳，進入萃取器C中。在萃取器C中于萃取壓力38MPa，55℃的超臨界條件下連續(xù)萃取，超臨界二氧化碳的平均流量為2升/分，萃取4小時。在分離器D中將甘油三酯和膽固醇收集完全。在改性劑泵E中將乙醇含量為95％的乙醇加壓到10MPa，將乙醇與經提純使其純度為99％的二氧化碳形成乙醇與二氧化碳的摩爾比為1∶10的含有乙醇的二氧化碳進入到柱塞泵B中加壓到38MPa，形成含乙醇的超臨界二氧化碳，進入到萃取器C中。在萃取器C中于萃取壓力38MPa，55℃的超臨界條件下連續(xù)萃取，含有乙醇的超臨界二氧化碳的平均流量為2升/分。在分離器D中收集蛋黃磷脂的乙醇溶液，收集時間為0.5小時。分離器D中的二氧化碳回收到二氧化碳貯罐A中。萃取器C中留有的殘余物為蛋白粉，于0.07MPa，45℃的溫度下進行減壓蒸餾，于25Pa，-30℃的條件下進行低溫干燥，于-30℃的溫度下貯藏。得到的蛋黃磷脂產品為27.40克，其含磷量(重量百分數(shù)，下同)為3.77％，蛋黃磷脂的純度為95.0％，回收率為97.9％。
實施例6其設備與操作同實施例3，唯不同的是以含水份2％的100克蛋黃粉為原料，裝在萃取器C中，所用二氧化碳的純度為95％，經制冷裝置F進行液化提純到99％，在柱塞泵B中將純度99％的二氧化碳加壓到42MPa形成臨界二氧化碳，進入萃取器C中。在萃取器C中于萃取壓力42MPa，45℃的超臨界條件下連續(xù)萃取，超臨界二氧化碳的平均流量為2.5升/分，萃取10小時。在分離器D中將甘油三酯和膽固醇收集完全。在改性劑泵中將乙醇含量為95％的乙醇加壓到9MPa，將乙醇與經提純使其純度為99％的二氧化碳形成乙醇與二氧化碳的摩爾比為1∶6.67的含有乙醇的二氧化碳進入到柱塞泵B中，加壓到42MPa，形成含有乙醇的超臨界二氧化碳，進入到萃取器C中，在萃取器C中于萃取壓力42MPa，45℃的超臨界條件下連續(xù)萃取，含有乙醇的超臨界二氧化碳的平均流量為2升/分。在分離器D中收集蛋黃磷脂的乙醇溶液，收集的時間為0.5小時。萃取器C中留有的殘余物為蛋白粉。于0.07MPa，58℃的條件下進行減壓蒸餾。于25Pa，-30℃的條件下進行低溫干燥，于-35℃的溫度下貯藏，得到的蛋黃磷脂產品為13.80克，其含磷量(重量百分數(shù)，下同)為3.79％，蛋黃磷脂的純度為95.5％，回收率為98.5％。
實施例7其設備與操作同實施例3，唯不同的是以含水份4％的200克的蛋黃粉為原料，裝在萃取器C中。所用二氧化碳的純度為95％，經制冷裝置F進行液化提純到99.5％。在柱塞泵B中將純度99.5％的二氧化碳加壓到40MPa形成臨界二氧化碳，進入萃取器C中。在萃取器C中于萃取壓力40MPa，45℃的超臨界條件下連續(xù)萃取。超臨界二氧化碳的平均流量為3升/分，萃取6小時。在分離器D中將甘油三酯和膽固醇分離完全。在改性劑泵E中將乙醇含量為95％的乙醇加壓到9MPa。將乙醇與經提純使其純度為99.5％的二氧化碳形成乙醇與二氧化碳的摩爾比為1∶10的含乙醇的二氧化碳進入到柱塞泵B中，加壓到40MPa，形成含乙醇的超臨界二氧化碳進入到萃取器C中。在萃取器C中于萃取壓力40MPa，45℃的超臨界條件下連續(xù)萃取，含有乙醇的超臨界二氧化碳的平均流量為3升/分。在分離器D中收集蛋黃磷脂的乙醇溶液，收集的時間為0.5小時。在萃取器C中留有殘余物為蛋白粉。于0.07MPa，50℃的條件下進行減壓蒸餾。于25Pa，-30℃的條件下進行低溫干燥。于-35℃的溫度下貯藏。得到的蛋黃磷脂產品為27.80克，其含磷量(重量百分數(shù)，下同)為3.80％，蛋黃磷脂的純度為95.7％，回收率為99.3％。
實施例8其設備與操作同實施例3。唯不同的是以含水份6％的100克蛋黃粉為原料，裝在萃取器C中。所用二氧化碳的純度為95％，經制冷裝置F進行液化提純到99.5％。在柱塞泵B中將純度99.5％的二氧化碳加壓到41MPa形成臨界二氧化碳進入萃取器C中。在萃取器C中于萃取壓力41MPa，46℃的超臨界條件下連續(xù)萃取，超臨界二氧化碳的平均流量為2.5升/分，萃取4小時。在分離器D中將甘油三酯和膽固醇分離完全。在改性劑泵E中把乙醇含量為95％的乙醇加壓到9MPa后，把加壓到9MPa的乙醇與經提純使其純度為99.5％的二氧化碳形成乙醇與二氧化碳的摩爾比為1∶10的含乙醇的二氧化碳進入到柱塞泵B中，加壓到41MPa，形成含乙醇的超臨界二氧化碳進入到萃取器C中。在萃取器C中于萃取壓力41MPa，46℃的超臨界條件下連續(xù)萃取。含有乙醇的超臨界二氧化碳的平均流量為2.5升/分，在分離器D中收集蛋黃磷脂的乙醇溶液，收集的時間為0.5小時。在萃取器C中留有的殘余物為蛋白粉。于0.07MPa，50℃的條件下進行減壓蒸餾，于25Pa，-30℃的條件下進行低溫干燥。于-35℃的溫度下貯藏，得到的蛋黃磷脂產品為13.60克，其含磷量(重量百分數(shù)，下同)為3.77％，蛋黃磷脂的純度為95.0％，回收率為97.1％。
權利要求
1.一種高純度蛋黃磷脂的精制工藝，其特征是，以蛋黃粉為原料，將蛋黃粉裝入萃取器中，向盛有蛋黃粉的萃取器中通入超臨界二氧化碳，在萃取器中于萃取壓力30～45MPa，溫度35～55℃的超臨界條件下連續(xù)萃取，在分離器中收集甘油三酯和膽固醇，連續(xù)萃取至不再分離出甘油三酯和膽固醇為止；向盛有除去了甘油三酯和膽固醇的蛋黃粉的萃取器中通入含有乙醇的超臨界二氧化碳，在萃取器中于萃取壓力30～45MPa，溫度35～55℃的超臨界條件下連續(xù)萃取，在分離器中收集蛋黃磷脂的乙醇溶液，連續(xù)萃取至蛋黃磷脂的乙醇溶液在分離器中收集完全為止，在含有乙醇的超臨界二氧化碳中，乙醇與二氧化碳的摩爾比為1∶5～15，萃取器中的殘余物為蛋白粉。
2.根據(jù)權利要求1的一種高純度蛋黃磷脂的精制工藝，其特征是，原料蛋黃粉中含有水份10％以下(重量百分數(shù)，下同)。
3.根據(jù)權利要求2的一種高純度蛋黃磷脂的精制工藝，其特征是，原料蛋黃粉中含有水份1～10％。
4.根據(jù)權利要求3的一種高純度蛋黃磷脂的精制工藝，其特征是，原料蛋黃粉中含有水份1～5％。
5.根據(jù)權利要求1的一種高純度蛋黃磷脂的精制工藝，其特征是，向盛有原料蛋黃粉的萃取器中通入超臨界二氧化碳，在萃取器中于萃取壓力35-42MPa，溫度36～48℃的超臨界條件下連續(xù)萃取。
6.根據(jù)權利要求1的一種高純度蛋黃磷脂的精制工藝，其特征是，向盛有除去了甘油三酯和膽固醇的蛋黃粉的萃取器中通入含有乙醇的超臨界二氧化碳，在萃取器中于萃取壓力35-42MPa，溫度36～48℃的超臨界條件下連續(xù)萃取。
7.根據(jù)權利要求1或6的一種高純度蛋黃磷脂的精制工藝，其特征是，在含有乙醇的超臨界二氧化碳中乙醇與二氧化碳的摩爾比為1∶6～13。
8.根據(jù)權利要求1的一種高純度蛋黃磷脂的精制工藝，其特征是，超臨界二氧化碳的平均流量保持在0.5-50升/分。
9.根據(jù)權利要求3的一種高純度蛋黃磷脂的精制工藝，其特征是，超臨界二氧化碳的平均流量保持在2.5-20升/分。
10.根據(jù)權利要求1的一種高純度蛋黃磷脂的精制工藝，其特征是，含有乙醇的超臨界二氧化碳的平均流量保持在0.5-50升/分。
11.根據(jù)權利要求10的一種高純度蛋黃磷脂的精制工藝，其特征是，含有乙醇的超臨界二氧化碳的平均流量保持在2-20升/分。
12.根據(jù)權利要求1的一種高純度蛋黃磷脂的精制工藝，其特征是，二氧化碳的純度為92～100％(體積百分數(shù)，下同)。
13.根據(jù)權利要求12的一種高純度蛋黃磷脂的精制工藝，其特征是，二氧化碳的純度為95～98％。
14.根據(jù)權利要求12的一種高純度蛋黃磷脂的精制工藝，其特征是，二氧化碳的純度為99～99.5％。
15.根據(jù)權利要求1或3或5或6或8或10或12的一種高純度蛋黃磷脂的精制工藝，其特征是，收集的蛋黃磷脂的乙醇溶液于0.06～0.08MPa，溫度40-80℃的條件下減壓蒸餾。
16.根據(jù)權利要求15的一種高純度蛋黃磷脂的精制工藝，其特征是，減壓蒸餾后得到的蛋黃磷脂于20-30Pa，-15～-35℃的溫度下進行低溫干燥。
全文摘要
本發(fā)明涉及高純度蛋黃磷脂的制備方法。該法是以蛋黃粉為原料,置于萃取器中,向萃取器中通入超臨界的二氧化碳。在超臨界條件下除去甘油三酯和膽固醇。向盛有除去了甘油三酯和膽固醇的蛋黃粉的萃取器中,通入含有乙醇的超臨界二氧化碳,在超臨界條件下分離出蛋黃磷脂。本法設備簡化,易于操作,產品純度及回收率高。產品中不含有膽固醇。本法可生產出三種產品使蛋黃粉得以綜合利用。
文檔編號C07F9/10GK1179426SQ9612008
公開日1998年4月22日 申請日期1996年10月15日 優(yōu)先權日1996年10月15日
發(fā)明者賴炳森, 毛中興, 沈曉京, 路萍, 孫樹秦 申請人:中國人民解放軍北京醫(yī)學高等?？茖W校