一種檢測乳腺癌標志物Annexin A1抗原表位氨基酸序列及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】一種檢測乳腺癌標志物Annexin A1抗原表位的氨基酸序列及應(yīng)用，屬于免疫學【技術(shù)領(lǐng)域】，本發(fā)明提供了一種乳腺癌相關(guān)基因Annexin A1的抗原氨基酸序列。應(yīng)用Annexin A1多肽抗原檢測乳腺癌患者血中相應(yīng)的特異性自身抗體，這種自身抗體可作為乳腺癌標志物評估乳腺癌發(fā)生的危險度。這種抗原多肽及其抗體可用于制備乳腺癌早期診斷試劑和開發(fā)治療乳腺癌的靶向藥物。
【專利說明】-種檢測乳腺癌標志物Annex in A1抗原表位氨基酸序列 及應(yīng)用
[0001]

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明屬于免疫學【技術(shù)領(lǐng)域】，是一種用于制備腫瘤早期診斷試劑和開發(fā)治療腫瘤 的靶向藥物。

【背景技術(shù)】
[0003] 大量研究表明，血清或血漿中的腫瘤相關(guān)抗原能誘導機體產(chǎn)生自身抗體，在腫瘤 患者血清中既存在腫瘤抗原，也存在針對該腫瘤抗原的自身抗體。因此，既可以利用抗體 檢測腫瘤抗原，也可以利用抗原檢測腫瘤抗原的自身抗體，但利用腫瘤自身抗體檢測腫瘤 的特異性和敏感性均比利用腫瘤抗原檢測腫瘤要高得多。很多腫瘤相關(guān)抗原不僅在腫瘤患 者體內(nèi)存在，在正常人體內(nèi)也存在，因此檢測腫瘤相關(guān)抗原作為診斷依據(jù)可信性差。而腫瘤 自身抗體在正常人體內(nèi)含量很低檢測不到或根本不存在，若體內(nèi)腫瘤自身抗體水平明顯增 高，則表明體內(nèi)存在異常免疫情況，表明體內(nèi)相關(guān)抗原水平發(fā)生波動，預示疾病的存在或原 有疾病加重。
[0004] 近年來的研究表明，在惡性腫瘤體積發(fā)展到可用現(xiàn)代影像學技術(shù)檢出之前3-5 年，患者血中可出現(xiàn)高濃度的腫瘤相關(guān)抗原自身抗體。因此，檢測血中腫瘤相關(guān)抗原自身抗 體具有預測腫瘤發(fā)病風險和早期診斷腫瘤的重要價值。是腫瘤臨床診斷領(lǐng)域的重點發(fā)展方 向之一。在國外已有診斷肺癌和乳腺癌的早期診斷試劑盒市售。然而，目前所報道的自身 抗體檢測方法敏感度低，特異性差，假陰性比率可高達50%以上。其主要原因是由于每一種 腫瘤相關(guān)抗原自身抗體在癌癥患者中的陽性檢測率平均在10%左右。如何提高診斷試劑敏 感度是當前需要亟待解決的關(guān)鍵問題。比較行之有效的方法是尋找新的可充當腫瘤標志物 的自身抗體，然后與現(xiàn)有已知的腫瘤相關(guān)抗原自身抗體組合成具有敏感度高和特異性強的 診斷試劑盒。
[0005] 乳腺癌相關(guān)基因 Annexin Al定位于人染色體9ql2?q21. 2,由13個外顯子和12 個內(nèi)含子組成，Annexin Al的N端2?12位氨基酸可以和S100C蛋白相互作用。與其他 膜聯(lián)蛋白（ANX)最主要的結(jié)構(gòu)區(qū)別在于其第III重復序列與N-端的疏水結(jié)構(gòu)域沒有結(jié)合鈣 離子的時候，該螺旋結(jié)構(gòu)由N-端前12殘基構(gòu)成并代替D-螺旋包埋入第III重復序列的核心 位點中，而D-螺旋則懸掛于N-端螺旋外。研究表明，Annexin Al參與細胞的生理調(diào)節(jié)過 程，包括炎癥反應(yīng)、細胞增殖分化凋亡、吞噬分泌過程以及細胞死亡信號的調(diào)節(jié)，并發(fā)揮巨 大作用，并且與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。體外實驗表明，Annexin Al C端結(jié)構(gòu)域通過疏 水作用與cPLA2的特異位點結(jié)合，從而干擾cPLA2與質(zhì)膜結(jié)合，抑制cPLA2的活性進而阻 遏c-fos等原癌基因的表達。學者們用組織微陣列分析了乳腺正常組織、乳腺癌組織及轉(zhuǎn) 移淋巴結(jié)組織中AnnexinAl的表達情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：Annexin Al在乳腺正常組織中表達強 陽性，乳腺癌組織中表達下調(diào)，而在腋窩淋巴結(jié)中表達增強，顯示Annexin Al的表達隨乳 腺癌的發(fā)生發(fā)展而變化。最近研究顯示：Annexin Al在乳腺癌高轉(zhuǎn)移、激素敏感細胞系中 高表達，干擾此細胞中Annexin Al的表達后導致細胞遷移和侵襲能力下降。在細胞水平證 明了 Annexin Al可促進乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移。Annexin Al在乳腺腫癌中表達的特異性，提 示我們其在乳腺癌早期診斷的應(yīng)用價值較好，以及作為潛在生物標志物的可能。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是公開一種檢測乳腺癌標志物Annexin Al自身抗體的 抗原表位序列。
[0007] 本發(fā)明同時公開了 Annexin Al抗原表位的用途。
[0008] 本發(fā)明提供的一種檢測乳腺癌標志物Annexin Al自身抗體的抗原表位氨基酸序 列為： H-DITSDTS⑶FRNALLSEATIIDILTKRNNAQDC -OH 其純度 >95%，pH>7. 0。
[0009] 本發(fā)明所述的Annexin Al抗原表位多肽在制備乳腺癌早期診斷試劑盒中的應(yīng)用。
[0010] 本發(fā)明利用自行設(shè)計的Annexin Al蛋白的線性多肽，采用ELISA法檢測乳腺癌患 者血清及血漿中Annexin Al蛋白的特異性自身IgG抗體。自身IgG抗體水平升高表明腫 瘤患者體內(nèi)Annexin Al蛋白的表達量增加，預示患者可能出現(xiàn)原發(fā)性或繼發(fā)性乳腺癌，可 以預測乳腺癌發(fā)生與復發(fā)的危險性，指導臨床醫(yī)生對乳腺癌的早期診斷。

【權(quán)利要求】
1. 一種檢測乳腺癌標志物Annexin A1抗原表位多肽，其特征在于：氨基酸序列為 H-DITSDTS⑶FRNALLSEATIIDILTKRNNAQDC -0H 其純度 >95%，pH>7. 0。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測乳腺癌標志物Annexin A1抗原表位多肽在制備乳腺癌 早期診斷試劑盒中的應(yīng)用。
【文檔編號】C07K14/47GK104277102SQ201410293597
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2014年6月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月27日
【發(fā)明者】孫世龍, 李光輝, 尉軍 申請人:李光輝