St2蛋白抑制劑多肽及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有抑制ST2蛋白表達(dá)，治療子宮癌的多肽。其序列為RNLHGLRRHTVR是全新的序列，該多肽可體外抑制子宮癌細(xì)胞Hela細(xì)胞增殖，治療子宮癌；在體內(nèi)可以抑制荷瘤模型實(shí)驗(yàn)的腫瘤ST2蛋白表達(dá)，并能增加了小鼠的生存率，具有潛在的新藥開發(fā)價(jià)值。
【專利說明】ST2蛋白抑制劑多肽及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及ST2蛋白抑制劑多肽及其應(yīng)用，具體涉及具有抑制ST2蛋白表達(dá)，治療子宮癌的多肽。
【背景技術(shù)】
[0002]子宮癌子宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一。治療半年以手術(shù)為主輔，以放射治療、化學(xué)治療、孕酮抗雌激素等藥物為輔。但是手術(shù)難以完全切除癌組織與亞臨床病灶。其次就是放化療，但是這兩種治療方式均對(duì)正常組織器官有明顯副反應(yīng)，進(jìn)一步提高療效并減少對(duì)正常組織的損傷是值得研究的課題。目前生物靶向治療腫瘤是非常有前景的，靶向治療是針對(duì)腫瘤發(fā)生過程中阻斷某個(gè)或多個(gè)信號(hào)通路，達(dá)到治療腫瘤的目的。
[0003]直到現(xiàn)在醫(yī)學(xué)界還未可以確定是什么原因引致子宮癌，一般認(rèn)為可能是多項(xiàng)因素的交叉協(xié)同作用所引起的，其危險(xiǎn)因子有:子宮頸糜爛、性行為頻繁、或性生活紊亂、或忽略性行為之清潔、忽略經(jīng)期衛(wèi)生、性伴侶包皮過長(zhǎng)、且可能與皰疹二型病毒(HSV_2)及人乳頭瘤(HPS)有密切關(guān)系，甚至連性病、披衣菌感染等炎癥有關(guān)。腫瘤患者外周血淋巴細(xì)胞處于Th2型細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)的狀態(tài)，并且腫瘤細(xì)胞本身也處于Th2占優(yōu)勢(shì)的狀態(tài)，由于Thl細(xì)胞受到抑制，細(xì)胞免疫功能不能有效地激活，抗腫瘤免疫能力下降，從而不利于機(jī)體組織以細(xì)胞免疫為主的抗腫瘤免疫反應(yīng)，使腫瘤細(xì)胞得以生存發(fā)展。ST2是比較強(qiáng)的Th2細(xì)胞誘導(dǎo)劑，在子宮癌中Th2型細(xì)胞因子的大量釋放，促成了 ThO細(xì)胞向Th2方向極化，而Th2極化又會(huì)產(chǎn)生大量的諸如IL-6的促炎細(xì)胞因子，引發(fā)和加劇了全身炎癥反應(yīng)。此外，在Th2型細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)時(shí)常伴隨著 免疫耐受，這也促成了子宮出血壞死加重。刪除小鼠的子宮腫瘤的跨膜型ST2受體(ST2L)可導(dǎo)致腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的降低，并增加了循環(huán)水平的促炎性細(xì)胞因子、活化的NK細(xì)胞和⑶8 + T細(xì)胞。ST2蛋白功能升高是子宮癌生的一個(gè)重要因素。因此，抑制ST2蛋白表達(dá)，抑制子宮癌發(fā)展，是治療子宮癌的新靶點(diǎn)。但是，尚未有開發(fā)成熟的ST2蛋白抑制劑多肽的治療子宮癌的藥物
本專利中的ST2蛋白抑制劑多肽已證明在子宮癌中有效，具有在其他腫瘤模型中開發(fā)的前景。
[0004]
【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]發(fā)明目的
本發(fā)明提供全新的序列，該序列抑制ST2蛋白表達(dá)，對(duì)子宮癌具有很好的療效。
[0006]技術(shù)方案
ST2蛋白抑制劑多肽，其特征在于其序列為RNLHGLRRHTVR。
[0007]一種藥物組合物，其特征在于其包含如權(quán)利要求1所述多肽與一種以上藥學(xué)上可接受的賦形劑、填充劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、或穩(wěn)定劑。
[0008]所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物為注射劑。[0009]所述的多肽，其特征在于有效劑量為10mg/kg。
[0010]ST2蛋白抑制劑多肽在治療子宮癌藥物中的應(yīng)用。
[0011]有益效果
ST2蛋白抑制劑多肽2，該多肽具有全新的序列，該多肽可體外抑制子宮癌細(xì)胞Hela細(xì)胞增殖，治療子宮癌；在體內(nèi)可以抑制荷瘤模型實(shí)驗(yàn)的腫瘤ST2蛋白表達(dá)，并能增加了小鼠的生存率，具有潛在的新藥開發(fā)價(jià)值。
【具體實(shí)施方式】 [0012]本發(fā)明多肽由吉爾生化(上海)合成 實(shí)施例1
用腫瘤模型檢測(cè)ST2蛋白抑制劑多肽對(duì)腫瘤中ST2蛋白表達(dá)的影響。
[0013]建立人子宮癌細(xì)胞Hela腫瘤模型，陽性對(duì)照藥物長(zhǎng)春新堿；空白組加入相同體積的溶劑，實(shí)驗(yàn)組設(shè)3個(gè)劑量:5、10、20 mg/Kg。21天后，處死，取腫瘤組織進(jìn)行ST2蛋白免疫結(jié)果實(shí)驗(yàn)，采用Motic Images Advanced 3.2圖像分析儀，在200倍鏡下連續(xù)觀察5個(gè)視野檢測(cè)，測(cè)量灰度值，以灰度值表示ST2蛋白陽性表達(dá)的高低，灰度值越小，說明ST2蛋白陽性表達(dá)越低；灰度值越大，說明ST2蛋白陽性表達(dá)越高。結(jié)果，ST2蛋白抑制劑多肽2具有抑制腫瘤ST2蛋白表達(dá)的作用。
[0014]實(shí)施例2
ST2蛋白抑制劑多肽對(duì)人子宮癌細(xì)胞Hela增殖的作用。
[0015]采用MTT比色法。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的Hela細(xì)胞，以1.0X 105加入96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實(shí)驗(yàn)孔、陽性藥物對(duì)照孔分別加入不同濃度的實(shí)驗(yàn)藥物ST2蛋白抑制劑多肽2和陽性對(duì)照藥物長(zhǎng)春新堿；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設(shè)五個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)48h，分別在Oh、2h、8h、14h、20h、24h、36h、48h每孔加入MTT，作用4h后，加入DMS0，孵育30min，在酶標(biāo)儀620nm處測(cè)定吸光度A值，按公式腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=(1_實(shí)驗(yàn)組吸光值/對(duì)照組吸光值)X 100%。對(duì)Hela的最大增殖抑制率為69.09%。
[0016]實(shí)施例3
ST2蛋白抑制劑多肽對(duì)人宮頸癌HeLa裸鼠異種移植腫瘤生長(zhǎng)的抑制試驗(yàn)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人宮頸癌HeLa細(xì)胞株，在無菌條件下制備成5XlOVml細(xì)胞懸液，以0.1ml接種于裸鼠右側(cè)腋窩皮下。用游標(biāo)卡尺測(cè)量裸鼠移植瘤直徑，待腫瘤生長(zhǎng)至100-200mm3后將動(dòng)物隨機(jī)分組。使用測(cè)量瘤徑的方法，動(dòng)態(tài)觀察被試多肽的抗腫瘤效果。腫瘤直徑的測(cè)量次數(shù)為每2天測(cè)I次。給藥方式均采用尾靜脈注射。陰性對(duì)照組注射等量生理鹽水，每天I次；紫杉醇組10mg/kg,每周給藥I次；恩度組2.5mg/kg,每天給藥I次；多肽高中低組分別以20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg,每天給藥I次。試驗(yàn)結(jié)束后，小鼠處死,手術(shù)剝?nèi)×鰤K稱重。
[0017]表1.多肽對(duì)人宮頸癌HeLa裸鼠異種移植腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用
【權(quán)利要求】
1.ST2蛋白抑制劑多肽，其特征在于其序列為RNLHGLRRHTVR。
2.一種藥物組合物，其特征在于其包含如權(quán)利要求1所述多肽與一種以上藥學(xué)上可接受的賦形劑、填充劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、或穩(wěn)定劑。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物為注射劑。
4.如權(quán)利要求1所述的多肽，其特征在于有效劑量為10mg/kg。
5.如權(quán)利 要求1所述的ST2蛋白抑制劑多肽在治療子宮癌藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C07K7/08GK104017056SQ201410293554
【公開日】2014年9月3日 申請(qǐng)日期:2014年6月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月27日
【發(fā)明者】羅瑞雪 申請(qǐng)人:蘇州普羅達(dá)生物科技有限公司