一種印楝素干粉的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種印楝素干粉的制備方法，通過將干燥的印楝種子與石油醚混合后進行攪拌萃取印楝油，再將萃取剩余物風(fēng)干即為印楝餅，然后與甲醇混合后進行攪拌萃取，再過濾收集濾液并濃縮，然后與蒸餾水震蕩混合，以二氯甲烷萃取得到印楝素浸膏，加入極性有機溶劑A溶解并與溶劑B混合，然后經(jīng)減壓過濾得到固體沉淀，用溶劑C淋洗后將固體沉淀進行干燥，即得到印楝素干粉。本發(fā)明提供的方法工藝簡單、溶劑回收率高、印楝素活性成分含量高、成本較低。本發(fā)明避免了有機溶劑的交叉污染，利于溶劑的回收利用，降低了原料成本和減少了環(huán)境污染，適用于大規(guī)模生產(chǎn)。
【專利說明】一種印楝素干粉的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生物農(nóng)藥的制備方法，特別是涉及一種印楝素干粉的制備方法?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]印楝(Azadirachta indica A.Juss.)為楝科楝屬植物，含有300多種活性成分，其中殺蟲活性最高的是印楝素(Azadirachtin)。印楝素(C35H44O16)是一類高度氧化的四環(huán)三職類化合物(朽1檬苦素類)，具有Azadirachtin A — G七種分子異構(gòu)體，Azadirachtin A是其中含量最高、活性最高的印楝素化合物。印楝樹整株植物均含印楝素，尤其種仁中含量最豐富(0.2%~ 0.6%)0
[0003]印楝素對200多種昆蟲(包括幾乎所有重要的農(nóng)林、倉儲、衛(wèi)生害蟲)具有很強的生物活性，同時對高等動物無害，對昆蟲的天敵比較安全，是目前研究和應(yīng)用得最為廣泛的生物農(nóng)藥。印楝種籽含印楝油40 %，先用烴類溶劑除去印楝油有利于印楝素的提取，也有用壓榨法提取印楝油的生產(chǎn)工藝。除去印楝油的印楝餅用有機溶劑提取印楝素，通常采用的有機溶劑是甲醇，再經(jīng)過液一液萃取得到印楝素原藥，這是一種含有印楝素的浸膏狀物質(zhì)，其印楝素的含量隨提取方法、提取工藝和印楝樹種源的不同而有所差異。印楝素浸膏中含有大量極性分子化合物，如水分、蛋白質(zhì)、糖類等，所以粘稠度大，穩(wěn)定性差，不利于貯存和運輸。最好的方式是把印楝素浸膏制成印楝素干粉，方便貯存、運輸和利用。
[0004]中國專利申請CN1423938A涉及高含量印楝素干粉的制備，將印楝種子磨碎去殼壓榨得到印楝油和印楝餅，再用固相萃取法和常規(guī)溶劑提取法處理印楝餅，得到印楝抽提物，把印楝油或印楝抽提物加入到非極性溶劑中，印楝油或印楝抽提物與非極性溶劑的質(zhì)量比為1:3~15，過濾 或離心收集沉淀物，干燥后得到印楝素干粉。該方法在60°C下提取5小時以及將抽提物在50°C水浴中加熱10分鐘的過程會使熱不穩(wěn)定的印楝素部分分解，不利于得到高含量的印楝素干粉，并且方法中沒有提及溶劑的回收率情況。中國專利申請CN1423939A公布了不含黃曲霉毒素的印楝素干粉的制備方法，其制備過程中加入了堿性氧化劑，由于印楝素在PH3~5的弱酸性條件下較穩(wěn)定，而在堿性環(huán)境中不穩(wěn)定，加入堿性氧化劑對印楝素的穩(wěn)定性造成一定影響。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為解決現(xiàn)有技術(shù)所得印楝素干粉不穩(wěn)定、印楝素含量低等問題，本發(fā)明提供一種印楝素干粉的制備方法，能實現(xiàn)快速、連續(xù)提取印楝素干粉。
[0006]本發(fā)明通過下列技術(shù)方案實現(xiàn):一種印楝素干粉的制備方法，其特征在于經(jīng)過下列各步驟:
(1)將干燥的印楝種子與石油醚按1:廣3的質(zhì)量比混合后，進行攪拌萃取印楝油，過濾得濾液及濾渣，在濾渣中按1:廣3的質(zhì)量比加入石油醚繼續(xù)萃取印楝油，過濾得濾液及濾渣，合并二次濾液，濾渣風(fēng)干后即為印楝餅；
(2)將步驟(1)所得印楝餅與甲醇按1:f 3的質(zhì)量比混合后，進行攪拌萃取2~5分鐘，過濾得濾液及濾渣，在濾渣中按1: f 3的質(zhì)量比，加入甲醇后攪拌萃取2~5分鐘，如此反復(fù)萃取三次，收集三次濾液，然后將濾液按常規(guī)濃縮至濾液體積的1/3~1/4，得到濃縮液；
(3)將步驟(2)的濃縮液與等體積的蒸餾水震蕩混合，再加入與該混合液等體積的二氯甲烷進行萃取，靜置分層，收集下層的二氯甲烷層，上層再次加入相同體積二氯甲烷萃取，靜置分層，收集二氯甲烷層，合并二次的二氯甲烷層并濃縮回收二氯甲烷，剩余物即為印楝素浸膏；
(4)按印楝素浸膏與極性有機溶劑A的質(zhì)量比為1:3~9，用極性有機溶劑A溶解步驟
(3)所得印楝素浸膏，再按溶劑B與印楝素浸膏的質(zhì)量比為15~60:1，將溶解后的印楝素浸膏在攪拌狀態(tài)下加入到溶劑B中，得到混合物；
(5)將步驟(4)所得混合物進行減壓過濾，得到固體沉淀和混合溶劑，再按印楝素浸膏與溶劑C的質(zhì)量比為1:1~3，用溶劑C淋洗固體沉淀，并收集淋洗液，然后將固體沉淀進行干燥，即得到印楝素干粉。
[0007]所述步驟(1)合并的二次濾液經(jīng)常規(guī)減壓回收石油醚后，剩余物即為印楝油。
[0008]所述步驟(4)的極性有機溶劑A為乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、氯仿、二氯甲烷中的一種或幾種，且?guī)追N的比例是任意的。
[0009]所述步驟(4)的溶劑B為蒸餾水、質(zhì)量濃度為1%的醋酸溶液、pH值為4的酸性硫酸鈣水溶液中的一種或幾種，且?guī)追N的比例是任意的。 [0010]所述步驟(4)的攪拌狀態(tài)是指攪拌速度為180~1500轉(zhuǎn)/分鐘的狀態(tài)。
[0011]所述步驟(5)得到的混合溶劑經(jīng)常規(guī)減壓濃縮后，回收溶劑。
[0012]所述步驟(5)的溶劑C為正己烷、石油醚、乙醚、環(huán)己烷中的一種或幾種，且?guī)追N的比例是任意的。
[0013]所述步驟(5)收集的淋洗液經(jīng)減壓濃縮后，回收溶劑C。
[0014]本發(fā)明通過快速、連續(xù)的方法提取印楝種子中的印楝油和印楝素浸膏，把印楝素浸膏溶于有機溶劑A、B，再把該溶液加進溶劑C中，形成印楝素沉淀，過濾后干燥沉淀，得到印楝素干粉。本發(fā)明提供的方法工藝簡單、溶劑回收率高、印楝素活性成分含量高、成本較低。與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點:
1、避免了有機溶劑的交叉污染，有利于溶劑的回收再利用，三廢較少，從而大幅度降低了成本、減少了環(huán)境污染；
2、工藝步驟較少，過程簡單，設(shè)備要求不高，便于轉(zhuǎn)化；
3、適用于大規(guī)模生產(chǎn)，為印楝生物農(nóng)藥的發(fā)展提供了強有力的保障。
【具體實施方式】
[0015]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步描述。
[0016]實施例1
(1)將干燥的印楝種子Ikg與石油醚Ikg混合后，置于中國專利ZL200820080967.5所述的快速萃取器中進行攪拌萃取印楝油，過濾得濾液及濾渣，在濾渣中加入石油醚Ikg繼續(xù)萃取印楝油，過濾得濾液及濾渣，合并二次濾液，濾渣風(fēng)干后即為印楝餅700g;合并的二次濾液經(jīng)減壓回收石油醚后，得到印楝油300g ；
(2)將步驟(1)所得印楝餅700g與甲醇700g混合后，置于步驟(1)的快速萃取器中進行攪拌萃取3分鐘，過濾得濾液及濾渣，在濾渣中加入甲醇700g混合后，攪拌萃取3分鐘，如此反復(fù)萃取三次，收集三次濾液2100mL，然后將濾液按常規(guī)真空濃縮至濾液體積的1/4，得到濃縮液；
(3)將步驟(2)的濃縮液與等體積的蒸餾水震蕩混合，再加入與該混合液等體積的二氯甲烷進行萃取，靜置分層，收集下層的二氯甲烷層，在分出的上層物中再次加入相同體積的二氯甲烷萃取，靜置分層，收集二氯甲烷層，合并二次的二氯甲烷層并濃縮回收二氯甲烷，剩余物即為印楝素浸膏30g;
(4)將30g印楝素浸膏用甲醇90g溶解，再將溶解后的印楝素浸膏在1500轉(zhuǎn)/分鐘的攪拌狀態(tài)下，加入到450g的pH值=4的酸性硫酸鈣水溶液中，得到混合物；
(5)將步驟(4)所得混合物進行減壓過濾，得到固體沉淀和混合溶劑，再按印楝素浸膏與溶劑C的質(zhì)量比為1:1，用正己烷30g淋洗固體沉淀，并收集淋洗液，然后將固體沉淀進行干燥，即得到印楝素干粉21g，其中，混合溶劑經(jīng)減壓濃縮后，回收溶劑，淋洗液經(jīng)減壓濃縮后，回收正己烷。經(jīng)HPLC檢測，所得印楝素干粉中印楝素A的含量為14.6%。
[0017]而用現(xiàn)有技術(shù)對上述干燥的印楝種子進行處理后，得到的印楝素干粉中印楝素A的含量只為8%。
[0018]實施例2
(1)將干燥的印楝種子10kg與石油醚200kg混合后，置于中國專利ZL200820080967.5所述的快速萃取器中進行攪拌萃取印楝油，過濾得濾液及濾渣，在濾渣中加入石油醚200kg繼續(xù)萃取印楝油，過濾得濾液及濾渣，合并二次濾液，濾渣風(fēng)干后即為印楝餅70kg;合并的二次濾液經(jīng)減壓回收石油醚后，得到印楝油30kg ；
(2)將步驟(1)所得印楝餅70kg與甲醇140kg混合后，置于步驟(1)的快速萃取器中進行攪拌萃取3分鐘，過濾得濾液及濾渣，在濾渣中加入甲醇140kg混合后，攪拌萃取3分鐘，如此反復(fù)萃取三次，收集三次濾液420L，然后將濾液按常規(guī)真空濃縮至濾液體積的1/3，得到濃縮液；
(3)將步驟(2)的濃縮液與等體積的蒸餾水震蕩混合，再加入與該混合液等體積的二氯甲烷進行萃取，靜置分層，收集下層的二氯甲烷層，在分出的上層物中再次加入相同體積的二氯甲烷萃取，靜置分層，收集二氯甲烷層，合并二次的二氯甲烷層并濃縮回收二氯甲烷，剩余物即為印楝素浸膏3kg;
(4)將3kg印楝素浸膏用乙酸乙酯27kg溶解，再將溶解后的印楝素浸膏在180轉(zhuǎn)/分鐘的攪拌狀態(tài)下，加入到180kg的蒸餾水中，得到混合物；
(5)將步驟(4)所得混合物進行減壓過濾，得到固體沉淀和混合溶劑，再按印楝素浸膏與石油醚的質(zhì)量比為1:3，用石油醚9kg淋洗固體沉淀，并收集淋洗液，然后將固體沉淀進行干燥，即得到印楝素干粉2kg，其中，混合溶劑經(jīng)減壓濃縮后，回收溶劑，淋洗液經(jīng)減壓濃縮后，回收石油醚。經(jīng)HPLC檢測，所得印楝素干粉中印楝素A的含量為16.2%。
[0019]而用現(xiàn)有技術(shù)對上述干燥的印楝種子進行處理后，得到的印楝素干粉中印楝素A的含量只為7%。
[0020]實施例3
(1)將干燥的印楝種子Ikg與石油醚3kg混合后，置于中國專利ZL200820080967.5所述的快速萃取器中進行攪拌萃取印楝油，過濾得濾液及濾渣，在濾渣中加入石油醚3kg繼續(xù)萃取印楝油，過濾得濾液及濾渣，合并二次濾液，濾渣風(fēng)干后即為印楝餅700g;合并的二次濾液經(jīng)減壓回收石油醚后，得到印楝油300g ；
(2)將步驟(1)所得印楝餅700g與甲醇700g混合后，置于步驟(1)的快速萃取器中進行攪拌萃取3分鐘，過濾得濾液及濾渣，在濾渣中加入甲醇700g混合后，攪拌萃取3分鐘，如此反復(fù)萃取三次，收集三次濾液2100mL，然后將濾液按常規(guī)真空濃縮至濾液體積的1/4，得到濃縮液；
(3)將步驟(2)的濃縮液與等體積的蒸餾水震蕩混合，再加入與該混合液等體積的二氯甲烷進行萃取，靜置分層，收集下層的二氯甲烷層，在分出的上層物中再次加入相同體積的二氯甲烷萃取，靜置分層，收集二氯甲烷層，合并二次的二氯甲烷層并濃縮回收二氯甲烷，剩余物即為印楝素浸膏30g;
(4)將30g印楝素浸膏用丙酮180g溶解，再將溶解后的印楝素浸膏在1000轉(zhuǎn)/分鐘的攪拌狀態(tài)下，加入到500g的質(zhì)量濃度為1%的醋酸溶液和400g的pH值=4的酸性硫酸鈣水溶液的混合溶液中，得到混合物；
(5)將步驟(4)所得混合物進行減壓過濾，得到固體沉淀和混合溶劑，再按印楝素浸膏與溶劑C的質(zhì)量比為1:2，用30g乙醚和30g環(huán)己烷的混合物淋洗固體沉淀，并收集淋洗液，然后將固體沉淀進行干燥，即得到印楝素干粉22g，其中，混合溶劑經(jīng)減壓濃縮后，回收溶劑，淋洗液經(jīng)減壓濃縮后，回收正己烷。經(jīng)HPLC檢測，所得印楝素干粉中印楝素A的含量為15.9%。 [0021]而用現(xiàn)有技術(shù)對上述干燥的印楝種子進行處理后，得到的印楝素干粉中印楝素A的含量只為8%。
【權(quán)利要求】
1.一種印楝素干粉的制備方法，其特征在于經(jīng)過下列各步驟: (1)將干燥的印楝種子與石油醚按1:廣3的質(zhì)量比混合后，進行攪拌萃取印楝油，過濾得濾液及濾渣，在濾渣中按1:廣3的質(zhì)量比加入石油醚繼續(xù)萃取印楝油，過濾得濾液及濾渣，合并二次濾液，濾渣風(fēng)干后即為印楝餅； (2)將步驟(1)所得印楝餅與甲醇按1:f 3的質(zhì)量比混合后，進行攪拌萃取2~5分鐘，過濾得濾液及濾渣，在濾渣中按1:廣3的質(zhì)量比，加入甲醇后攪拌萃取2~5分鐘，如此反復(fù)萃取三次，收集三次濾液，然后將濾液按常規(guī)濃縮至濾液體積的1/3~1/4，得到濃縮液； (3)將步驟(2)的濃縮液與等體積的蒸餾水震蕩混合，再加入與該混合液等體積的二氯甲烷進行萃取，靜置分層，收集下層的二氯甲烷層，上層再次加入相同體積二氯甲烷萃取，靜置分層，收集二氯甲烷層，合并二次的二氯甲烷層并濃縮回收二氯甲烷，剩余物即為印楝素浸膏； (4)按印楝素浸膏與極性有機溶劑A的質(zhì)量比為1:3~9，用極性有機溶劑A溶解步驟(3)所得印楝素浸膏，再按溶劑B與印楝素浸膏的質(zhì)量比為15~60:1，將溶解后的印楝素浸膏在攪拌狀態(tài)下加入到溶劑B中，得到混合物； (5)將步驟(4)所得混合物進行減壓過濾，得到固體沉淀和混合溶劑，再按印楝素浸膏與溶劑C的質(zhì)量比為1:1~3，用溶劑C淋洗固體沉淀，并收集淋洗液，然后將固體沉淀進行干燥，即得到印楝 素干粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的印楝素干粉的制備方法，其特征在于:所述步驟(1)合并的二次濾液經(jīng)常規(guī)減壓回收石油醚后，剩余物即為印楝油。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的印楝素干粉的制備方法，其特征在于:所述步驟(4)的極性有機溶劑A為乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、氯仿、二氯甲烷中的一種或幾種，且?guī)追N的比例是任意的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的印楝素干粉的制備方法，其特征在于:所述步驟(4)的溶劑B為蒸餾水、質(zhì)量濃度為1%的醋酸溶液、PH值為4的酸性硫酸鈣水溶液中的一種或幾種，且?guī)追N的比例是任意的。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的印楝素干粉的制備方法，其特征在于:所述步驟(4)的攪拌狀態(tài)是指攪拌速度為180~1500轉(zhuǎn)/分鐘的狀態(tài)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的印楝素干粉的制備方法，其特征在于:所述步驟(5)得到的混合溶劑經(jīng)常規(guī)減壓濃縮后，回收溶劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的印楝素干粉的制備方法，其特征在于:所述步驟(5)的溶劑C為正己烷、石油醚、乙醚、環(huán)己烷中的一種或幾種，且?guī)追N的比例是任意的。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的印楝素干粉的制備方法，其特征在于:所述步驟(5)收集的淋洗液經(jīng)減壓濃縮后，回收溶劑C。
【文檔編號】C07D519/00GK104031073SQ201410275257
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年6月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月19日
【發(fā)明者】段瓊芬, 王有瓊, 馬李一, 張重權(quán) 申請人:中國林業(yè)科學(xué)研究院資源昆蟲研究所