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一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法

文檔序號:3587947閱讀:2100來源:國知局
專利名稱:一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于中藥制藥領(lǐng)域,涉及一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法。
背景技術(shù)
黑麥草內(nèi)酯(Loliolide),分子式為C11H16O3,分子量196. 25,為針狀結(jié)晶,是從忍冬科(Caprifoliaceae)英蓮Viburnum dilatatum Thunb.的葉中分離得到的單職化合物。藥理研究表明,黑麥草內(nèi)酯具有中等免疫抑制活性,在本品IOii g/ml濃度時,對小鼠T-淋巴細(xì)胞增生抑制率為27. 2%,對B-淋巴細(xì)胞增生抑制率為8. 1% ;黑麥草內(nèi)酯具有強(qiáng)的細(xì)胞毒活性,對艾氏腹水瘤的ED50為0. 5 ii g/ml。目前,國內(nèi)尚未見黑麥草內(nèi)酯的萃取純化方法方面的專利報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在克服上述技術(shù)缺陷,提供一種分離效果好、收率高、產(chǎn)品純度好,適合工業(yè)化生產(chǎn)的黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法。為了實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用以下技術(shù)方案
一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法,其特征是以莢蓮葉為原料,采用亞臨界流體萃取,控制萃取壓力為6-9MPa,萃取溫度為38-55°C,通入丙烷,靜態(tài)萃取25min后動態(tài)萃取30-80min,所得萃取物進(jìn)行高壓硅膠柱層析,用石油醚-丙酮梯度洗脫,薄層層析,收集含黑麥草內(nèi)酯的組分,濃縮成浸膏后用甲醇溶解,經(jīng)制備型液相色譜進(jìn)行純化,甲醇水溶液進(jìn)行洗脫,濃縮相應(yīng)組分,放置結(jié)晶,二氯甲烷-甲醇重結(jié)晶即得黑麥草內(nèi)酯。所述丙燒的流量為5_8g/min。所述高壓硅膠柱的柱壓為2. 2-3. 2MPa,柱內(nèi)徑為150_250mm,層析柱徑高比為1:12-20,硅膠目數(shù)為100-300目,石油醚-丙酮體積比為100 :7-25。所述甲醇水溶液的體積百分比濃度為65-70%。本發(fā)明的有益效果是
1、本發(fā)明方法通過亞臨界流體萃取、柱層析及制備型液相色譜分離、重結(jié)晶等步驟制備黑麥草內(nèi)酯,耗時短,得率高,操作簡單,易于工業(yè)化生產(chǎn);
2、使用特制高壓柱層析,上樣量大,周期短,分離度好,產(chǎn)品純度高;
3、本發(fā)明為黑麥草內(nèi)酯的進(jìn)一步開發(fā)利用提供藥理原料、理論和實(shí)踐支持。
具體實(shí)施例方式 本發(fā)明內(nèi)容通過以下的實(shí)施例作進(jìn)一步的闡述,但并不限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例I :
取干燥莢蓮葉粗粉5kg,裝入萃取釜中,通入丙烷流體,控制丙烷流量為8g/min,萃取壓力為8MPa,萃取溫度為48°C,靜態(tài)萃取25min后動態(tài)萃取80min,溶于丙烷的黑麥草內(nèi)酯在分離釜中減壓析出,所得萃取物用甲醇溶解濕法上樣至填料為300目硅膠高壓柱,其中高壓柱的柱壓為2. 2MPa,柱內(nèi)徑為150mm,層析柱徑高比為1:18,以石油醚-丙酮的混合溶劑,依次按體積比100:10、100:15、100:20、100:25洗脫,分段收集各流分,將含黑麥草內(nèi)酯流分合并,減壓回收溶劑,加甲醇溶解,注入制備型液相色譜中,以70%的甲醇水溶液為流動相,流速為15ml/min,紫外檢測器在線監(jiān)測,檢測波長214nm,收集高純度黑麥草內(nèi)酯流分,濃縮,放置結(jié)晶,濾出結(jié)晶,用二氯甲烷-甲醇(5:1)重結(jié)晶即得黑麥草內(nèi)酯,HPLC檢測,含量為98. 7%。實(shí)施例2:
取干燥莢蓮葉粗粉5kg,裝入萃取釜中,通入丙烷流體,控制丙烷流量為8g/min,萃取壓力為7MPa,萃取溫度為55°C,靜態(tài)萃取25min后動態(tài)萃取30min,溶于丙烷的黑麥草內(nèi)酯在分離釜中減壓析出,所得萃取物用甲醇溶解濕法上樣至填料為200目硅膠高壓柱,其中高壓柱的柱壓為3. 2MPa,柱內(nèi)徑為200mm,層析柱徑高比為1:12,以石油醚-丙酮的混合溶劑,依次按體積比100:7、100:15、100:20、100:24洗脫,分段收集各流分,將含黑麥草內(nèi)酯流分合并,減壓回收溶劑,加甲醇溶解,注入制備型液相色譜中,以65%的甲醇水溶液為流動相,流速為25ml/min,紫外檢測器在線監(jiān)測,檢測波長214nm,收集高純度黑麥草內(nèi)酯流 分,濃縮,放置結(jié)晶,濾出結(jié)晶,用二氯甲烷-甲醇(5:1)重結(jié)晶即得黑麥草內(nèi)酯,HPLC檢測,含量為98. 4%。實(shí)施例3:
取干燥莢蓮葉粗粉5kg,裝入萃取釜中,通入丙烷流體,控制丙烷流量為5g/min,萃取壓力為6MPa,萃取溫度為38°C,靜態(tài)萃取25min后動態(tài)萃取50min,溶于丙烷的黑麥草內(nèi)酯在分離釜中減壓析出,所得萃取物用甲醇溶解濕法上樣至填料為100目硅膠高壓柱,其中高壓柱的柱壓為2. 8MPa,柱內(nèi)徑為250mm,層析柱徑高比為1:20,以石油醚-丙酮的混合溶劑,依次按體積比100:8、100:12、100:18、100:25洗脫,分段收集各流分,將含黑麥草內(nèi)酯流分合并,減壓回收溶劑,加甲醇溶解,注入制備型液相色譜中,以65%的甲醇水溶液為流動相,流速為20ml/min,紫外檢測器在線監(jiān)測,檢測波長214nm,收集高純度黑麥草內(nèi)酯流分,濃縮,放置結(jié)晶,濾出結(jié)晶,用二氯甲烷-甲醇(5:1)重結(jié)晶即得黑麥草內(nèi)酯,HPLC檢測,含量為98. 2%。實(shí)施例4:
取干燥莢蓮葉粗粉5kg,裝入萃取釜中,通入丙烷流體,控制丙烷流量為6g/min,萃取壓力為9MPa,萃取溫度為45°C,靜態(tài)萃取25min后動態(tài)萃取60min,溶于丙烷的黑麥草內(nèi)酯在分離釜中減壓析出,所得萃取物用甲醇溶解濕法上樣至填料為300目硅膠高壓柱,其中高壓柱的柱壓為2. 5MPa,柱內(nèi)徑為180mm,層析柱徑高比為1:18,以石油醚-丙酮的混合溶劑,依次按體積比100:7、100:12、100:20、100:25洗脫,分段收集各流分,將含黑麥草內(nèi)酯流分合并,減壓回收溶劑,加甲醇溶解,注入制備型液相色譜中,以68%的甲醇水溶液為流動相,流速為25ml/min,紫外檢測器在線監(jiān)測,檢測波長214nm,收集高純度黑麥草內(nèi)酯流分,濃縮,放置結(jié)晶,濾出結(jié)晶,用二氯甲烷-甲醇(5:1)重結(jié)晶即得黑麥草內(nèi)酯,HPLC檢測,含量為98. 1%。
權(quán)利要求
1.一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法,其特征是以莢蓮葉為原料,采用亞臨界流體萃取,控制萃取壓力為6-9MPa,萃取溫度為38-55 °C,通入丙烷,靜態(tài)萃取25min后動態(tài)萃取30-80min,所得萃取物進(jìn)行高壓硅膠柱層析,用石油醚-丙酮梯度洗脫,薄層層析,收集含黑麥草內(nèi)酯的組分,濃縮成浸膏后用甲醇溶解,經(jīng)制備型液相色譜進(jìn)行純化,甲醇水溶液進(jìn)行洗脫,濃縮相應(yīng)組分,放置結(jié)晶,二氯甲烷-甲醇重結(jié)晶即得黑麥草內(nèi)酯。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法,其特征在于所述丙烷的流量為 5-8g/min。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法,其特征在于所述高壓硅膠柱的柱壓為2. 2-3. 2MPa,柱內(nèi)徑為150_250mm,層析柱徑高比為1:12-20,硅膠目數(shù)為100-300目,石油醚-丙酮體積比為100 :7-25。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法,其特征在于所述甲醇水溶 液的體積百分比濃度為65-70%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法,其特征是以莢蒾葉為原料,采用亞臨界流體萃取,控制萃取壓力為6-9MPa,萃取溫度為38-55℃,通入丙烷,靜態(tài)萃取25min后動態(tài)萃取30-80min,所得萃取物進(jìn)行高壓硅膠柱層析,用石油醚-丙酮梯度洗脫,薄層層析,收集含黑麥草內(nèi)酯的組分,濃縮成浸膏后用甲醇溶解,經(jīng)制備型液相色譜進(jìn)行純化,甲醇水溶液進(jìn)行洗脫,濃縮相應(yīng)組分,放置結(jié)晶,二氯甲烷-甲醇重結(jié)晶即得黑麥草內(nèi)酯。本發(fā)明生產(chǎn)周期短,制備量大、收率高、產(chǎn)品純度好,適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07D307/83GK102827119SQ20121037123
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月29日
發(fā)明者劉東鋒, 萬冬梅 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
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