專利名稱：制備和構建抗各種呼吸道病毒感染的重大創(chuàng)新性Ab₂β抗體庫的方法
制備和構建抗各種呼吸道病毒感染的重大創(chuàng)新性Ab2 β抗
體庫的方法本發(fā)明涉及防治人類呼吸系統(tǒng)任何急性病毒性傳染病的特效“新式武器"，即全部由專一阻斷病毒一呼吸道靶細胞結合位點的抗體組成的、具有特殊功能和用途的 "Ab2 β抗體庫”的制備和構建方法(特別涉及本發(fā)明獨創(chuàng)性免疫學實驗技術)。目前呼吸道致命性病毒，如“甲型Hmi流感、非典、禽流感”等病毒或其變異體引起的突發(fā)事件對世界各國人民造成了嚴重危害。其中世界著名“科學”雜志把攻克“病毒變異”做為生命科學領域首選世界難題。對此目前全世界抗病毒研究現(xiàn)狀①無任何特效的抗病毒藥。②尚無任何有希望的抗病毒研究計劃。本發(fā)明與目前全世界抗病毒研究相比，在許多方面諸如事物整體觀和認識論、多學科交叉指導理論、發(fā)明思維、研究方法、技術手段等都是截然相反的，這直接導致不同的發(fā)明原理。為使相關人士和廠家了解發(fā)明原理，本文用通俗語言闡述由于人體呼吸道靶細胞膜表面分子空間結構和位置有限，所以任何已知或未知病毒入侵人體呼吸道靶細胞的途徑都是有限的。假設任何病毒包括變異病毒入侵人體呼吸道靶細胞的全部途徑共有“1千條”，那么任何特定病毒必須通過其中的1-幾條途徑入侵人體細胞，沒有任何病毒列外。如果我們項目研究的科學目的，是在呼吸道靶細胞膜表面所有不同結構都安排相對應的抗體守衛(wèi)，那么其中就包括一千個不同的抗體分別對應守衛(wèi)著一千條不同病毒的入侵途徑，即阻斷了全部病毒入侵途徑。因此任何病毒不管如何變異，都不可能避開這些不同的守衛(wèi)抗體而進入人體呼吸道細胞。于是如何制備守衛(wèi)呼吸道靶細胞膜表面所有不同結構(其中包括一千條不同病毒的入侵途徑)的新型抗體，并且由這些抗體構建成具有特殊功能和用途的抗體庫，就是本發(fā)明的目的。用通俗語言講就是構建一個抗呼吸道病毒的抗體庫，庫中有抗各種病毒的最有效抗體。對付任何急性病毒性傳染病時，只需用致病病毒從抗體庫中“釣取”專門與該病毒相結合的抗體，就可以最有效防治任何急性病毒性傳染病。需要強調的是，本發(fā)明項目與世界上所有抗病毒疫苗產生的抗體最大區(qū)別在于本發(fā)明的抗體都是最有效的特異性中和抗體(不存在任何增強抗體或無效抗體)，完全是為阻斷不同病毒的不同入侵途徑而設計的。因此有兩個舉世無雙的重大創(chuàng)造點①制備的每一個單克隆抗體的病毒中和位點都是最有效的、原因在于中和位點的空間結構就是入侵人體呼吸道細胞的必經途徑，即抗體阻斷了病毒一靴細胞的結合位點。②構建包含阻斷任何病毒入侵人體呼吸道靶細胞全部途徑的具有特殊功能和用途的“抗體庫”。該項研究看似十分困難，如果僅有正向思維或僅以傳統(tǒng)研究方式來“求解”，則不可能完成該工程。那種經典的傳統(tǒng)的實驗方式，即把病毒或其疫苗分別免疫動物和人，然后從抗病毒血清中篩選僅抗病毒一靶細胞結合位點的中和性抗體的實驗方式，是目前通用的，雖然可以間接說明本項目的可行性，但肯定是最笨的研究方法，或許100年也不可能真正獲得問題“解”。本發(fā)明的設想， 曾在中國醫(yī)師協(xié)會網-熱點新聞，以“生命科學需要高度關注一種離經叛道的思維模式”一文(3萬字中的部分內容——重大抗呼吸道病毒創(chuàng)意)中發(fā)表，引起轟動，讓網站工作人員都感到吃驚。國內外許多專業(yè)和非專業(yè)網站和大學都進行了轉載，數(shù)萬醫(yī)師和相關人士閱讀了本文，沒有任何國內外權威和專家能夠提出疑議，只是認為實現(xiàn)這一目標太難了，都希望本人能夠公開更多創(chuàng)新內容，但因保密問題拖到現(xiàn)在。今天借助專利申請書，公開實驗方案。1.本發(fā)明理論依據(jù)1. 1本發(fā)明間接理論依據(jù)1. 1. 1制備專一阻斷病毒入侵靶細胞途徑的“最好抗體“的理論依據(jù)1. 1. 1. 1抗體覆蓋理論指抗體覆蓋率與中和作用的相關性，如對狂犬病毒的中和，每個毒粒200個以上 IgG分子，才能占據(jù)其表面結構(表位)，使之不能與靶細胞受體相互作用。而對另一個狂犬病毒中和逃逸突變株分析發(fā)現(xiàn)，每個毒粒結合1000以上的IgG分子，但仍然不能被中和。1. 1. 1.2病毒“配體”與靶細胞“病毒受體”的相互作用理論病毒之所以能夠吸附于細胞而開始感染，其主要的結構原因是病毒表面結構蛋白的特定位點，能夠以特定的拓撲學性質與細胞表面某種受體發(fā)生相應結合，該結合使病毒有了借以進入細胞的橋梁。而在病毒感染中，機體產生的抗病毒特異性抗體之所以能夠抑制病毒的再感染，一條主要原因就是有的抗體可以用特定的對應結構，與病毒表面與受體發(fā)生結合作用的位點結構產生特異結合，從而在拓撲學上阻斷病毒與細胞受體的結合， 因此終止了病毒對細胞的感染，這樣一個自然的機理顯然提供了尋找病毒感染治療藥物 (注包括化學藥品)的理論基礎。1. 1. 1. 3抗體與病毒的相互作用理論HA蛋白是流感病毒的主要抗原之一，其頭部有5個抗原位點，分別稱A、B、C、D和 E位點，其中B位點為靶細胞受體結合位點。在研究病毒特別是HIV-細胞間相互作用中發(fā)現(xiàn)，除病毒包膜“配體”與靶細胞“病毒受體”間直接接觸的氨基酸殘基外，其他病毒部位誘生的抗體很難界定是中和性抗體還是非中和性抗體或增強性抗體，原因在于①能被中和的病毒毒株可突變?yōu)閷ν豢贵w具有抗性或被此抗體增強的毒株。②用某一毒株免疫個體產生的抗體可能對該毒株是中和抗體但對其他毒株是增強抗體。③明確只誘導中和抗體而不誘導增強抗體的病毒包膜區(qū)是很困難的。最終病毒與抗體相互作用的結果要取決于產生中和性抗體與增強性抗體之比，即兩者對病毒總體作用的“凈”效應。1. 1. 1.4結論抗體中和病毒的關鍵，是需要找好中和病毒的位置(作用點)，而最好的位置就是病毒——靴細胞的結合部位，即病毒“配體”的結合位點，而針對病毒“配體” 結合位點的抗體就是最好的抗體。1. 1. 2構建具有特殊功能和用途“抗體庫”的理論依據(jù)1. 1. 2、1病毒或其變異體入侵人體呼吸道細胞的全部途徑任何已知或未知的病毒變異如流感病毒血凝素蛋白上一個氨基酸殘基的變化，就可以使病毒與所結合的唾液酸受體類型發(fā)生變化。這種變化的實質就是增加入侵呼吸道細胞的新途徑，特別指出這種新途徑都必須是通過靶細胞表面相對應的“病毒受體”完成的， 而“病毒受體”又是呼吸道靶細胞表面已知或未知的膜蛋白分子，(蛋白質組分)。正由于各種不同類型的“病毒受體”在呼吸道靶細胞表面的數(shù)量是有限的，所以病毒入侵呼吸道的途徑也是有限的，因此可以說任何病毒通過變異產生的新途徑都隱藏在這些“病毒受體” 中。本項目預期產品——構建具有特殊功能和用途的’抗體庫"，其抗體克隆數(shù)量包括對應病毒入侵靶細胞全部可能或潛在的入侵途徑，這就是本發(fā)明項目的大框架。
1. 1. 2. 2結論構建阻斷病毒入侵呼吸道全部途徑的抗體庫，可能提供了一種解決未知病毒或變異病毒世界難題的最好途徑。1. 2本發(fā)明的直接理論依據(jù)1. 2. 1病毒配體——靴細胞“受體”相互作用理論實驗證明，病毒感染細胞的前提是與細胞表面的受體相結合，這個結合在反映與結構蛋白的空間構象與受體空間構象之間的生物化學意義上的配構關系之外，在生物意義上則反映了病毒的組織和細胞特異嗜性的現(xiàn)象。如果病毒不能進入細胞，或被阻止于吸附細胞受體之前，則病毒對宿主細胞的影響是極小的，而對病毒——細胞受體的研究正好提供了這樣一種可能。僅對本發(fā)明而言，正是這樣的一種類似正常生理配體與受體結合的細胞生物效應導致病毒進入細胞。1. 2. 2抗體獨特型與抗獨特型抗體模擬抗原理論數(shù)字龐大的Id或AId抗體可以摸擬整個外來抗原世界，這是構建“Ab2i3抗體庫” 的主要理論基礎。利用這一理論，特別是通過創(chuàng)造性應用相關理論和免疫學實驗技術，就可以制備模擬靶細胞膜表面全部分子的易接觸的空間結構，其中包括模擬全部病毒受體的抗體。另外，不管病毒抗原如何千變萬化，活的細胞表面病毒受體是不變的，因此本發(fā)明模擬靶細胞病毒受體的抗體，就能以“抗體的不變應對病毒抗原的萬變”。而且本發(fā)明理論上推測，這種抗體本身還可能或多或少預留著可以結合病毒變異氨基酸殘基所需的空間位置。1. 2. 3多態(tài)性MHC免疫識別理論多態(tài)性MHC的生物學功能和意義，決定了不同品系動物特別是某些品系動物具有更廣和更深的免疫識別功能，應用多態(tài)性MHC免疫識別理論，同樣是為最大限度增加對呼吸道上皮細胞膜表面全部分子易接觸空間結構的免疫識別，并以此制備模擬靶細胞全部 “潛在病毒受體”的抗體，構建Ab2 β抗體庫。多態(tài)性MHC免疫識別理論同樣是構建"Ab2 β 抗體庫”的重要理論基礎。本發(fā)明從病毒配體——靶細胞“受體”相互作用理論和抗體獨特型與抗獨特型抗體模擬抗原理論中導出如下重要結論①抗靶細胞“病毒受體”的抗體，就是模擬病毒配體的抗體；抗病毒配體的抗體，就是模擬靶細胞“病毒受體”的抗體。②病毒組織嗜性，即組織特異性，決定了呼吸系統(tǒng)主要靶細胞——上皮細胞為本發(fā)明的研究對象。本發(fā)明采用獨創(chuàng)性免疫學和細胞生物學技術，首先應用呼吸道病毒重要靶細胞——上皮細胞分別免疫大量不同動物，制備抗上皮細胞膜表面不同蛋白分子不同抗原決定簇的抗體。然后再利用這些抗體，制備能夠模擬上皮細胞不同蛋白分子不同表位(注其中包含潛在病毒受體)的抗體，這就是能夠專一阻斷任何病毒——靶細胞全部結合位點的抗體。最后由所有這種抗體組成具有特殊功能和用途的"Ab2 β抗體庫”。這樣就可以隨時從庫中篩選針對任何引起呼吸系統(tǒng)急性傳染病的病毒(包括未知病毒)或其變異體的特異性中和抗體了。2.實驗方案2. 1第一個實驗方案2. 1. 1全方位抗呼吸道靶細胞膜表面不同表位抗體(Abl抗體)的制備應用人呼吸道完好上皮細胞或相應癌細胞，分別免疫大量不同品系的兔子和小鼠，從中提取不同品系兔子和小鼠的抗人血清，然后用人呼吸道上皮細胞吸收其中抗體，并用新方法洗脫、提取和純化這些抗體，本發(fā)明把這種抗體稱“Abl抗體”.
2. 1. 2專一篩選結合“Abl抗體”抗原結合位點的B細胞①應用常規(guī)免疫學實驗技術，分別提取純化大量不同人和不同品系兔子的B細胞。②通過本發(fā)明非常簡單的、獨創(chuàng)性免疫學新試驗技術，巧妙處理上述試驗獲得的人、兔子的B細胞和2. 1. 1試驗獲得的“Abl 抗體”，解決B細胞與“Abl抗體”兩者之間的相互作用關系問題，即從這些B細細中完全清除掉與“Abl抗體”本身的抗原結合部位不能結合的任何無關的B細胞，目的是保留其它剩余的與本發(fā)明相關的B細胞。③將保留的與本發(fā)明相關的B細胞與2. 1.1試驗獲得的“Abl 抗體”混合，再通過流式細胞術(FCM)，篩選出專一結合“Abl抗體”抗原結合部位的B細胞， 即本發(fā)明所需的“Ab2i3抗體”產生細胞。特別說明的是“Abl抗體”本身既是抗體又是抗原， 注意本試驗的關鍵在于“Abl抗體”的抗原結合部位是作為唯一抗原結合BCR-B細胞的，在免役學理論與實際結合中不能忘記這一點，否則不能理解本試驗——如何專一篩選出結合 "Abl抗體”抗原結合部位的B細胞。2. 1.3構建具有特殊功能和用途的初級"Ab2 β抗體庫"將能夠與Abl抗體抗原結合部位結合的B細胞進行體外培養(yǎng)，在特定的不同時間內，通過2個途徑①將體外培養(yǎng)的B細胞，通過噬菌體抗體庫技術制備噬菌體"Ab2 β抗體”。②通過體外培養(yǎng)B細胞技術獲得分泌性“Ab2i3抗體”。盡可能獲得模擬人呼吸道上皮細胞膜表面不同蛋白分子不同表位 (注其中包含潛在病毒受體)的全部“Ab2i3抗體"，并以此構建初級“Ab2i3抗體庫"2. 1.4驗證初級"Ab2 β抗體庫"的功能和效果利用特定病毒或減毒活疫苗等從初級“Ab2i3抗體庫"中篩選抗體，提取和純化專一抗特定呼吸道病毒-靶細胞結合位點的抗體，即模擬靶細胞“病毒受體”的Abj抗體，以此檢驗初級"Ab2 β抗體庫"的功能和效^ ο2. 1.5病毒中和試驗利用某些已知病毒或減毒活疫苗等從"Ab2 β抗體庫〃中篩選特異性抗體，并進行病毒中和實驗，確證“Ab2i3抗體”的功能和效果，制備針對某些已知特定病毒的特異性中和抗體(特異性免疫球蛋白)，構建具有特殊功能和用途的"Ab2 β抗體庫〃。2. 1. 6附圖
是該實驗方案的技術路線圖。 2. 2第二個實驗方案2. 2. 1全方位抗呼吸道靶細胞膜表面不同表位抗體(Abl抗體)的制備應用人呼吸道完好上皮細胞或相應癌細胞，分別免疫大量不同品系的兔子和小鼠，從中提取不同品系兔子和小鼠的抗人血清，然后用人呼吸道上皮細胞吸收其中抗體，并用新方法洗脫、提取和純化這些抗體，本發(fā)明把這種抗體稱“Abl抗體”。2. 2. 2專一篩選結合“Abl抗體"抗原結合位點的噬菌體"Ab2 β抗體”，構建初級噬菌體"Ab2 β抗體庫”利用市場現(xiàn)成商品——噬菌體抗體庫，并通過噬菌體抗體庫篩選技術，專一篩選結合“Abl抗體”抗原結合位點的噬菌體"Ab2 β抗體”，該試驗過程需兩步驟 ①采用本發(fā)明獨創(chuàng)性篩選技術，清除掉與“Abl抗體”本身的抗原結合部位不能結合的任何無關的噬菌體抗體，目的是保留其它與本發(fā)明相關的噬菌體抗體。②采用經典篩選方法，利用“Abl抗體”本身的抗原結合部位作為唯一抗原，從保留的與本發(fā)明相關的噬菌體抗體中， 專一篩選出結合該部位的噬菌體"Ab2 β抗體”，并以此構建初級噬菌體"Ab2 β抗體庫”。2. 2. 3驗證初級噬菌體"Ab2 β抗體庫"的功能和效果利用特定病毒或減毒活疫苗等從初級噬菌體“Ab2i3抗體庫"中篩選抗體，提取和純化專一抗特定呼吸道病毒-靶細胞結合位點的特異性噬菌體抗體，即模擬靶細胞“病毒受體”的Ab2 β抗體，以此檢驗初級噬菌體"Ab2 β抗體庫”的功能和效果。2. 2. 4病毒中和試驗利用某些已知病毒或減毒活疫苗等從初級噬菌體"Ab2 β抗體庫"中篩選特異性噬菌體抗體，并進行病毒中和試驗，確證噬菌體"Ab2 β抗體”的功能和效果。制備針對某些已知特定病毒的特異性中和抗體(特異性免疫球蛋白)，構建具有特殊功能和用途的噬菌體"Ab2 β抗體庫"。2. 3 備注2. 3. 1本發(fā)明只采用第一個實驗方案，該實驗方案檢測抗不同病毒的確證試驗越成功，說明"Ab2 β抗體庫”的構建越完善，客觀講"Ab2 β抗體庫”的構建不會有失敗，只有不斷完善。2. 3. 2由于第二個實驗方案成功率相對較低，本發(fā)明不采用，因此也沒有標出相應技術路線圖。只是因為預見到有這樣一種實驗方法，為保護本發(fā)明，特在本發(fā)明中闡述出來。3.預期實驗兩年和預算經費3. 1第一年，初步構建一個具有特殊功能和用途的人源及兔子源的"Ab2 β抗體庫”，可有一定效果的從抗體庫中提取針對某特定病毒的特異性抗體。所需經費80-100萬人民幣。3. 2第二年，進一步完善上述"Ab2 β抗體庫”。利用某些已知的呼吸道病毒或減毒活疫苗等從抗體庫中篩選特異性抗體，并進行病毒中和實驗，確證抗體的功能和效果，并制備針對特定病毒的特異性中和抗體(特異性免疫球蛋白)以備用，同時構建針對某些已知呼吸道病毒的“特異性Ab2 β抗體庫”。所需經費90-110萬人民幣。4.證明本發(fā)明項目可行性的重要預試驗在具有免疫學常規(guī)實驗條件和熟練科研試驗人員情況下，只需15萬人民幣的預試驗，在1個月時間內就可檢測和驗證本發(fā)明在技術上是否具有可行性的問題。如在1個月時間內，以不同生物公司購買的動物源抗人CD4分子單克隆抗體作為抗原材料，通過本發(fā)明獨創(chuàng)的免疫學試驗技術，篩選專一結合CD4單抗本身抗原結合部位的BCR——B細胞， 并以此獲得抗CD4分子的抗抗體-Ab2 β抗體。這一試驗過程就是證明本發(fā)明項目可行性的重要預試驗。有趣的是這種特別挑選的預試驗，其本身價值就與制備專一阻斷艾滋病毒感染途徑的超級抗體有關。如果預試驗成功除說明本發(fā)明項目可行外，在生物醫(yī)學上還有其他重要戰(zhàn)略意義。本發(fā)明聲明僅一個預試驗本身就有重要用途和意義。5.預期成果——本發(fā)明項目的重要用途和意義眾所周知“非典”時期，北京某著名軍醫(yī)利用廣東感染SARS病毒痊愈患者的抗病毒血清自救獲得新生的故事，本發(fā)明項目預期產品-特異性免疫球蛋白，比之上述抗病毒血清強百倍、千倍。與人感染病毒或接種了疫苗后提取的抗病毒血清相比，克服了抗病毒血清存在的四大問題①安全性問題，抗病毒血清中可能存在病毒，由此可能增加受者感染病毒的機會，并由于同種異體血清中存在眾多物質也可能會給受者帶來過敏反應。②有效性問題，抗病毒血清中的抗病毒抗體是不純的，而且由于不同個體存在不同的免疫應答格局的原因，病毒或疫苗在宿主體內產生的抗體有“好”抗體和“壞”抗體之分，而真正抗病毒作用取決于“好”抗體與“壞”抗體兩者作用的“凈”效應。③抗原“原罪”問題，這一問題很重要，即感染某一特定病毒或接種了某一特定病毒的疫苗后，再次接觸感染了該特定病毒的 “變異體”(病毒變異了)后，很可能某些個體對變異病毒不產生免疫應答，如果出現(xiàn)這種免疫延遲現(xiàn)象真不如當初不接種疫苗，因此疫苗接種是有原則和條件的。④從具有特殊功能和用途的“抗體庫”篩選和大量制備特異性抗病毒抗體，體現(xiàn)了多、快、好和省的原則，可以快捷有效特別是防治任何呼吸道病毒引起的突發(fā)事件，這是任何病毒疫苗和抗病毒血清無法做到的、也是任何抗病毒物質包括化學藥品所不能做到的。5. 1本發(fā)明項目預期產品-"Ab2 β抗體庫”可在最短時間提供大量最有效抗體，防治人類呼吸系統(tǒng)的任何急性病毒性傳染病。特別是如Hmi流感、禽流感、SARS或生物武器等致命性疾病引起的突發(fā)事件。5. 2應用從"Ab2 β抗體庫”中篩選的特異性抗病毒抗體，制備抗體芯片。5. 3本發(fā)明獨創(chuàng)性技術還特別與制備雙重阻斷艾滋病毒感染的超級抗體有關，如制備模擬HIV主要靶分子——⑶4和SIGN “病毒受體”的Ab2 β抗體，甚至應用抗癌領域制備專一殺傷癌細胞的高精準性CTL抗癌細胞(注前所未有的從多態(tài)性MHC群體提取的大量不同克隆的CTL細胞中進行篩選，)有關。5. 4制備抗體疫苗等如以痘苗天壇株為載體的基因工程疫苗。5. 5 "Ab2 β抗體庫”可以防治生物武器或基因靶向性武器對特定人種群的攻擊。5. 6本發(fā)明獨創(chuàng)的免疫學試驗技術，可以有的放矢地促進病毒——靴細胞間“配體和受體”的研究如兩者相互作用關系和作用規(guī)律以及空間結構。另外也會促進正常生理配體與受體結合的細胞生物學研究。5. 7最后特別指出本發(fā)明獨創(chuàng)的免疫學試驗技術，在生命科學領域為高分辨任何物質間微細差異提供了一個重要方法。由于本發(fā)明保密原因而且投入經費不多，故不申請地方和國家科研經費。本發(fā)明人不為錢，只為做一番事業(yè)。歡迎想做一番轟轟烈烈事業(yè)的各行各業(yè)有識之士和任何商家廠家與我合作(如需要我可以提供有實力科研單位合作)，讓我們共創(chuàng)舉世偉業(yè)，震驚世界吧！
權利要求
1.一種制備和構建抗各種呼吸道病毒感染的重大創(chuàng)新性Ab2 β抗體庫的方法，其特征在于第一個實驗方案包括全方位抗呼吸道靶細胞膜表面不同表位抗體(Abl抗體)的制備、專一篩選結合“Abl抗體”抗原結合位點的B細胞、構建具有特殊功能和用途的初級 "Ab2^抗體庫”、驗證初級"Ab2 β抗體庫”的功能和效果、病毒中和試驗五個步驟即一方面應用人呼吸道完好上皮細胞或相應癌細胞，分別免疫大量不同品系的兔子和小鼠，從中提取不同品系兔子和小鼠的抗人血清，然后用人呼吸道上皮細胞吸收其中抗體，并用新方法洗脫、提取和純化這些抗體，本發(fā)明把這種抗體稱“Abl抗體”.另一方面應用常規(guī)免疫學實驗技術，分別提取純化大量不同人和不同品系兔子的B細胞。然后通過本發(fā)明非常簡單的、獨創(chuàng)性免疫學新試驗技術，巧妙處理上述兩個試驗獲得的人、兔子的B細胞和“Abl抗體”，解決B細胞與Abl抗體兩者之間的相互作用關系問題，即從這些B細細中完全清除掉與“Abl抗體”本身的抗原結合部位不能結合的任何無關的B細胞，目的是保留其它剩余的與本發(fā)明相關的B細胞。接著將保留的與本發(fā)明相關的B細胞與“Abl抗體”混合，再通過流式細胞術(FCM)，篩選出專一結合“Abl抗體”抗原結合部位的B細胞，即本發(fā)明所需的 "Ab2^抗體”產生細胞。特別說明的是“Abl抗體”本身既是抗體又是抗原，注意本試驗的關鍵在于“Abl抗體”的抗原結合部位是作為唯一抗原結合BCR-B細胞的，在免役學理論與實際應用中不能忘記這一點，否則不能理解本試驗——如何專一篩選出結合Abl抗體抗原結合部位的B細胞。在上述試驗基礎上將能夠與“Abl抗體”抗原結合部位結合的B細胞進行體外培養(yǎng)，在特定的不同時間內，通過2個途徑①將體外培養(yǎng)的B細胞，通過噬菌體抗體庫技術制備噬菌體抗體。②通過體外培養(yǎng)B細胞技術獲得分泌性抗體。盡可能獲得模擬人呼吸道上皮細胞膜表面不同蛋白分子不同表位(注其中包含潛在病毒受體)的全部“Ab2i3 抗體"，以此構建初級“Ab2i3抗體庫”。然后利用特定病毒或減毒活疫苗等從初級"Ab2 β 抗體庫”中篩選抗體，提取和純化專一抗特定呼吸道病毒-靶細胞結合位點的抗體，即模擬靶細胞“病毒受體”的Ab2 β抗體，以此檢驗初級"Ab2 β抗體庫”的功能和效果。最后利用某些已知病毒和從初級"Ab2 β抗體庫”中篩選的相應特異性抗體，進行病毒中和試驗，以此確證抗體的功能和效果，制備針對某些已知特定病毒的特異性中和抗體(特異性免疫球蛋白)，構建具有特殊功能和用途的"Ab2 β抗體庫"，
2.一種制備和構建抗各種呼吸道病毒感染的重大創(chuàng)新性Ab2 β抗體庫的方法，其特征在于第二個實驗方案包括全方位抗呼吸道靶細胞膜表面不同表位抗體(Abl抗體)的制備、專一篩選結合“Abl抗體”抗原結合位點的噬菌體抗體，構建初級噬菌體"Abj抗體庫"、驗證初級噬菌體"Abj抗體庫"的功能和效果、病毒中和試驗四個步驟即一方面應用人呼吸道完好上皮細胞或相應癌細胞，分別免疫大量不同品系的兔子和小鼠，從中提取不同品系兔子和小鼠的抗人血清，然后用人呼吸道上皮細胞吸收其中抗體，并用新方法洗脫、提取和純化這些抗體，本發(fā)明把這種抗體稱“Abl抗體”。另一方面利用市場現(xiàn)成商品——噬菌體抗體庫，并通過噬菌體抗體庫篩選技術，專一篩選結合上述“Abl抗體”抗原結合位點的噬菌體抗體，該試驗需要兩個過程①采用本發(fā)明獨創(chuàng)性篩選技術，清除掉與 "Abl抗體”本身的抗原結合部位不能結合的任何無關的噬菌體抗體，目的是保留其它與本發(fā)明相關的噬菌體抗體。②采用經典篩選方法，利用“Abl抗體”本身的抗原結合部位作為唯一抗原，從保留的與本發(fā)明相關的噬菌體抗體中，專一篩選出結合該部位的噬菌體抗體， 并盡可能獲得模擬人呼吸道上皮細胞膜表面不同蛋白分子不同表位(注其中包含潛在病毒受體)的全部噬菌體“Ab2i3抗體"，以此構建初級噬菌體"Ab2 β抗體庫”。然后利用特定病毒或減毒活疫苗等從初級噬菌體"Ab2 β抗體庫”中篩選抗體，提取和純化專一抗特定呼吸道病毒-靶細胞結合位點的特異性抗體，即模擬靶細胞“病毒受體”的噬菌體Ab2 β抗體，以此檢驗初級噬菌體"Ab2 β抗體庫”的功能和效果。最后利用某些已知病毒和從噬菌體 "Ab2 β抗體庫”中篩選的相應特異性噬菌體抗體，進行病毒中和試驗，確證噬菌體"Ab2 β抗體”的功能和效果。制備針對某些已知特定病毒的特異性中和抗體(特異性免疫球蛋白)， 構建具有特殊功能和用途的噬菌體"Ab2 β抗體庫"。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種制備和構建抗各種呼吸道病毒感染的重大創(chuàng)新性Ab2β 抗體庫的方法，其特征在于第一個實驗方案所述的分別免疫大量不同品系的兔子和小鼠， 用分別免疫大量其它不同種系的動物所代替。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種制備和構建抗各種呼吸道病毒感染的重大創(chuàng)新性Ab2β 抗體庫的方法，其特征在于第一個實驗方案所述的常規(guī)免疫學實驗技術，分別提取純化大量不同人和不同品系兔子的B細胞，用常規(guī)免疫學實驗技術，分別提取純化大量其它不同種系動物的B細胞所代替。
5.根據(jù)權利要求1所述的一種制備和構建抗各種呼吸道病毒感染的重大創(chuàng)新性Ab2β 抗體庫的方法，其特征在于第一個實驗方案所述的人呼吸道完好上皮細胞或相應癌細胞， 用肺 泡細胞或相應癌細胞、內皮細胞、紅細胞等所代替。
6.根據(jù)權利要求1所述的一種制備和構建抗各種呼吸道病毒感染的重大創(chuàng)新性Ab2β 抗體庫的方法，其特征在于第一個實驗方案所述的①將體外培養(yǎng)的B細胞，通過噬菌體抗體庫技術制備噬菌體抗體。用①將體外培養(yǎng)的B細胞，通過核糖體抗體庫技術制備核糖體抗體所代替。
7.根據(jù)權利要求2所述的一種制備和構建抗各種呼吸道病毒感染的重大創(chuàng)新性Ab2β 抗體庫的方法，其特征在于第二個實驗方案所述的分別免疫大量不同品系的兔子和小鼠， 用分別免疫大量其它不同種系的動物所代替。
8.根據(jù)權利要求2所述的一種制備和構建抗各種呼吸道病毒感染的重大創(chuàng)新性Ab2β 抗體庫的方法，其特征在于第二個實驗方案所述的專一篩選結合“Abl抗體”抗原結合位點的噬菌體"Ab2 β抗體”，構建初級噬菌體"Ab2 β抗體庫”。用專一篩選結合“Abl抗體”抗原結合位點的核糖體“Ab2i3抗體”，并以此構建初級核糖體"Ab2 β抗體庫”所代替。
9.根據(jù)權利要求2所述的一種制備和構建抗各種呼吸道病毒感染的重大創(chuàng)新性Ab2β 抗體庫的方法，其特征在于第二個實驗方案所述的專一篩選結合“Abl抗體”抗原結合位點的噬菌體"Ab2 β抗體”，構建初級噬菌體"Ab2 β抗體庫”。用專一篩選結合“Abl抗體”抗原結合位點的噬菌體隨機多肽片段，并以此構建初級“噬菌體隨機肽庫”所代替。
10.根據(jù)權利要求2所述的一種制備和構建抗各種呼吸道病毒感染的重大創(chuàng)新性 Ab2^抗體庫的方法，其特征在于第二個實驗方案所述的專一篩選結合“Abl抗體”抗原結合位點的噬菌體"Ab2 β抗體”，構建初級噬菌體"Ab2 β抗體庫”。用專一篩選結合“Abl抗體” 抗原結合位點的各種化合物，并以此構建初級“化合物庫”所代替。
全文摘要
這是一個可以在世界造成重要影響的重大發(fā)明項目，本發(fā)明獨創(chuàng)的免疫學試驗技術的應用目的，是為解決任何病毒或變異病毒引起人類呼吸系統(tǒng)急性致命性傳染病的世界難題，通過制備和構建全部阻斷任何呼吸道病毒(包括未知病毒或變異病毒)不同感染途徑的抗體庫，即全部由能夠專一阻斷病毒——靶細胞結合位點的特異性抗體所組成的具有特殊功能和用途的“Ab2β抗體庫”，可在最短時間提供大量最有效中和性抗體，防治人類呼吸系統(tǒng)的任何急性病毒性傳染病。特別是如H1N1流感、禽流感、SARS或生物武器等致命性疾病引起的突發(fā)事件。特別指出制備和構建該抗體庫的投資非常之少(約200萬人民幣)，時間最多兩年，各種效益卻難以估量。實施該發(fā)明項目獲得的“非常規(guī)”技術，在生物醫(yī)學上具有重要戰(zhàn)略意義。
文檔編號C07K16/28GK102260915SQ20111010396
公開日2011年11月30日 申請日期2011年4月26日 優(yōu)先權日2011年4月26日
發(fā)明者王勝軍 申請人:王勝軍