專利名稱：：2-吡喃酮-4,6-二羧酸的大量純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及由發(fā)酵生產(chǎn)獲得的2-吡喃酮_4，6-二羧酸的工業(yè)化純化方法。
背景技術(shù)：
：植物的主要成分木質(zhì)素作為芳族高分子化合物，是普遍含在植物細胞壁中的生物質(zhì)資源。但是，以木質(zhì)素為主成分的來自植物的芳族成分由化學結(jié)構(gòu)多樣的成分構(gòu)成，或具有復雜的高分子結(jié)構(gòu)，因此尚未開發(fā)出有效的利用技術(shù)。目前已知的利用技術(shù)是從對該芳族成分進行堿分解等化學分解生成的低分子芳族分解產(chǎn)物中分離制備作為香料原料的香草醛。但是，目前尚未得知化學分解生成的香草醛以外的、大量低分子芳族物質(zhì)的有效利用方法。因此，在造紙步驟中大量生成的木質(zhì)素未經(jīng)有效利用，只是作為重油的替代品燃燒。另一方面，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)通過水解或氧化分解、溶劑分解等化學分解法，用超臨界水或超臨界有機溶劑進行的物理化學分解法等，木質(zhì)素等的植物芳族成分被變換為含有香草醛、丁香醛、香草酸、丁香酸、原兒茶酸等的低分子混合物，這5種化合物進一步被變換為可成為功能性塑料原料或化學制品原料的單一的中間物質(zhì)2-吡喃酮-4，6_二羧酸。本發(fā)明人報道了使用轉(zhuǎn)化細胞，由這5種化合物制備2-吡喃酮-4，6-二羧酸的方法(例如參照日本特開2005-278549號公報)，其中，所述轉(zhuǎn)化細胞保有編碼構(gòu)成用于發(fā)酵生產(chǎn)2-吡喃酮-4，6-二羧酸的多步反應(yīng)工藝的4種酶(苯甲醛脫氫酶、脫甲基酶、原兒茶酸4，5-二加氧酶、4-羧基-2-羥基粘康酸-6-半醛脫氫酶)的基因。但是，專利文獻1中，作為2-吡喃酮-4，6-二羧酸的純化方法，只記載了活性碳處理，詳細情況不明確。另外，日本特開2000-32988號公報中公開了在a_羥基_Y_羧基粘康酸_e半醛的存在下制備2-吡喃酮-4，6-二羧酸的方法，但完全未言及純化方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的課題在于提供可用作功能性塑料原料或化學制品的原料的、由發(fā)酵生產(chǎn)得到的2-吡喃酮-4，6-二羧酸的工業(yè)化純化方法。本發(fā)明人針對現(xiàn)狀進行了深入的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過使特定的鹽存在于含有2_吡喃酮_4，6-二羧酸的微生物發(fā)酵液中，則可以以高純度、高收率分離對應(yīng)的2-吡喃酮_4，6-二羧酸鹽，從而完成了本發(fā)明。本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)無需形成2-吡喃酮-4，6_二羧酸鹽，通過用特定的有機溶劑萃取該微生物發(fā)酵液，則可以以高純度、高收率分離2-吡喃酮-4，6-二羧酸，從而完成了本發(fā)明。即，(1)本發(fā)明提供2-吡喃酮-4，6-二羧酸的純化方法，其特征在于使選自一價、二價、三價和四價的陽離子的鹽存在于由微生物生產(chǎn)的含有2-吡喃酮-4，6-二羧酸的發(fā)酵液中。(2)本發(fā)明提供(1)所述的純化方法，其中，上述一價、二價、三價或四價的陽離子是金屬離子、或銨離子或烷基銨離子。(3)本發(fā)明提供(1)或(2)所述的純化方法，其中，上述一價的陽離子選自鈉、鉀、銣、銀、鋰和銫。(4)本發(fā)明提供(1)或(2)所述的純化方法，其中，上述二價的陽離子選自鎂、牽丐、鐵(ii)、銅(n)、鋅、鋇、鈷、鎳(n)、錳和鉻(n)。(5)本發(fā)明提供(1)或(2)所述的純化方法，其中，上述三價的陽離子選自鐵(ni)、鋁和鎵。(6)本發(fā)明提供(1)或(2)所述的純化方法，其中，上述四價的陽離子選自錫(iv)、鉛(iv)、鈦(iv)和鍺(iv)。(7)本發(fā)明提供(i)-(e)中任一項所述的純化方法，其中，上述一價、二價、三價或四價的陽離子的鹽是選自氯化物、溴化物、硫酸鹽、磷酸鹽和碳酸鹽的單鹽；氰基配合物；或復鹽。(8)本發(fā)明提供(7)所述的純化方法，其中，上述復鹽是含有2種陽離子的復鹽。(9)本發(fā)明提供(7)所述的純化方法，其中，上述一價的陽離子的鹽是氯化鈉、氯化鉀、氯化銣、氯化銀、溴化鈉、硫酸鈉、磷酸氫二鈉或磷酸氫二鉀。(10)本發(fā)明提供(7)所述的純化方法，其中，上述二價的陽離子的鹽是氯化鎂或硫酸銅、或六氰基鐵(ii)酸鉀。(11)本發(fā)明提供(7)所述的純化方法，其中，上述三價的陽離子的鹽是氯化鐵(iii)或六氰基鐵(iii)酸鉀。(12)本發(fā)明提供(7)或(8)所述的純化方法，其中，上述四價的陽離子的鹽是錫(iv)酸鉀。(13)本發(fā)明提供(1)_(12)中任一項所述的純化方法，該方法包括回收由于上述陽離子的鹽的存在而析出的2-吡喃酮-4，6-二羧酸鹽、溶解于水、接著在酸性條件下用乙酸乙酯、環(huán)戊酮或環(huán)己酮萃取的步驟。(14)本發(fā)明提供(13)所述的純化方法，其中，在上述萃取步驟時添加過量的強酸。(15)本發(fā)明提供(1)_(14)中任一項所述的純化方法，該方法包括回收由于上述陽離子的鹽的存在而析出的2-吡喃酮-4，6-二羧酸鹽、溶解于水、接著將該溶液用陽離子交換樹脂處理的步驟。(16)本發(fā)明提供(1)_(15)中任一項所述的純化方法，其中，相對于上述發(fā)酵液中的2-吡喃酮-4，6-二羧酸，使用至少2倍摩爾的上述陽離子的鹽。(17)本發(fā)明提供2-吡喃酮-4，6-二羧酸的純化方法，其特征在于不從由微生物生產(chǎn)的含有2-吡喃酮-4，6-二羧酸的發(fā)酵液中形成2-吡喃酮-4，6-二羧酸鹽，而是萃取2_吡喃酮-4，6-二羧酸。(18)本發(fā)明提供(17)所述的純化方法，其中，用乙酸乙酯、環(huán)戊酮或環(huán)己酮萃取。(19)本發(fā)明提供(17)或(18)所述的純化方法，其中，用乙酸乙酯萃取。(20)本發(fā)明提供(17)_(19)中任一項所述的純化方法，其中，在上述萃取步驟時添加過量的強酸。(21)本發(fā)明提供(20)所述的純化方法，其中，相對于上述發(fā)酵液，至少使用3重量％上述強酸。附圖簡述圖1表示PDC_Na+復鹽的結(jié)構(gòu)。圖2表示各種PDC復鹽的水溶解度。根據(jù)本發(fā)明，可以以高純度、高收率、且廉價地從含有2-吡喃酮-4，6-二羧酸的微生物發(fā)酵液中大量純化2-吡喃酮-4，6-二羧酸。實施發(fā)明的最佳方式本發(fā)明的PDC的純化法的特征在于使一價、二價、三價或四價的陽離子的鹽存在于由微生物生產(chǎn)的含有2-吡喃酮-4，6-二羧酸(以下稱為"PDC")的發(fā)酵液中，以鹽的形式獲得PDC;或在該發(fā)酵液中阻礙PDC鹽的形成，以游離體的形式獲得PDC。對于由微生物生產(chǎn)的含有PDC的發(fā)酵液，為了以單一化合物的形式獲得PDC，只要是在香草醛、丁香醛、香草酸、丁香酸、原兒茶酸等來自植物的低分子化合物或它們的混合物的存在下培養(yǎng)轉(zhuǎn)化細胞獲得的發(fā)酵液即可，沒有特別限定。其中，所述轉(zhuǎn)化細胞含有編碼適合多步或一步發(fā)酵生產(chǎn)PDC的酶的基因。該發(fā)酵液例如有按照日本特開2005-278549號公報所述的方法獲得的發(fā)酵液。在該公報記載的方法中，通常在IL該發(fā)酵液中產(chǎn)生10-20gPDC。下述的PDC純化之前，優(yōu)選通過離心分離、活性碳吸附等從該發(fā)酵液中除去菌體?；钚蕴嘉絻?yōu)選如下進行向該發(fā)酵液中添加活性碳、混合攪拌，然后通過過濾等除去活性碳；或者使該發(fā)酵液從活性碳填充層中通過。〈形成PDC鹽的方法>使一價、二價、三價或四價的陽離子的鹽存在于含有PDC的微生物發(fā)酵液中，析出PDC所對應(yīng)的鹽?！獌r、二價、三價或四價的陽離子有一價、二價、三價或四價的金屬離子；銨離子；六亞甲基二胺、乙二胺、二乙醇胺、三乙醇胺等烷基銨離子等?！獌r的陽離子例如有鈉、鉀、銣、銀、鋰、銫等金屬離子，其中優(yōu)選鈉離子、鉀離子、銣離子或銀離子。二價的陽離子例如有鎂、鈣、鐵(II)、銅(II)、鋅、鋇、鈷、鎳(II)、錳、鉻(II)等金屬離子。三價的陽離子例如有鐵(III)、鋁、鎵等離子。四價的陽離子有錫(IV)、鉛(IV)、鈦(IV)、鍺(IV)等離子?！獌r、二價、三價或四價的陽離子的鹽有氯化物、溴化物、氫氧化物、硝酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、碳酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、擰檬酸鹽、酒石酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、氰酸鹽、硫氰酸鹽等單鹽；氨配合物(例如四氨合銅配合物)、氰基配合物(例如六氰基合鐵配合物)、鹵素配合物(例如四氯合鐵配合物)、羥基配合物(例如氧化鋁配合物)等配合物；復鹽(優(yōu)選含有2種陽離子的復鹽)等。一價陽離子的鹽具體有氯化鉀、氯化銣、氯化銀、溴化鈉、硫酸鈉、磷酸氫二鈉、或磷酸氫二鉀，優(yōu)選氯化鈉、氯化鉀、氯化銣、氯化銀或溴化鈉。二價陽離子的鹽具體有氯化鎂或硫酸銅、或六氰基鐵(II)酸鉀。三價陽離子的鹽具體有氯化鐵(ni)、六氰基鐵(III)酸鉀、或明礬(例如鉀明礬、鐵明礬、銨鐵礬等。四價陽離子的鹽具體有錫(IV)酸鉀。這些一價、二價、三價或四價的陽離子的鹽也可以兩種以上混合使用。除上述一價、二價、三價或四價的陽離子之外，也可以使用氧釩離子(V0"、鈦酸(Ti02)離子、氰離子、硫氰離子、含有硫羰基的離子性化合物等。PDC在其2和4位具有羧酸基，這些羧酸基通過與上述的陽離子的鹽接觸，不是形成單一的PDC的羧酸鹽，而是如圖1所示，在PDC兩個分子之間形成氫鍵，形成兩個羰基在金屬離子(圖1中為鈉離子)的周圍配位的具有八面體六配位結(jié)構(gòu)的復鹽。以下，為了與在陽離子的鹽項下記載的復鹽區(qū)分，有時將PDC的以羰基為中心形成的復鹽稱為"PDC的復鹽"。PDC的復鹽結(jié)構(gòu)已在各種文獻(例如Acta.Cryst.(1992)C48，460-465)中有報道。圖2表示PDC和一價陽離子形成的PDC的復鹽的水溶解度。由圖2可知，在由PDC和一價陽離子形成的復鹽中，特別是PDC的鈉鹽、鉀鹽、銣鹽或銀鹽，與游離的PDC、微生物培養(yǎng)基成分、由各種植物萃取的水溶性成分相比，水溶解度非常低(游離的PDC的水溶解度182mM)。由此表明，特別是PDC的鈉鹽、鉀鹽、銣鹽或銀鹽，可以使PDC容易地與大部分培養(yǎng)基成分或植物萃取水溶性成分分離、鹽析，適合PDC的分離。相對于微生物發(fā)酵液中存在的PDC，優(yōu)選將上述的陽離子的鹽大量地過量使用，例如優(yōu)選至少使用2倍摩爾、特別優(yōu)選使用2倍摩爾-10倍摩爾。為了提高鹽析效果，也可以使存在有該陽離子的鹽的發(fā)酵液冷卻或濃縮。冷卻時，將該發(fā)酵液在0-4t:左右靜置12-24小時。鹽析的PDC的復鹽可通過過濾回收。上述PDC的復鹽可通過進一步實施以下兩種不同的純化步驟，以純度更高的游離的PDC的形式獲得。(I)將上述PDC的復鹽溶解于水、例如純水中，在酸性條件下(pHl-2左右)用有機溶劑萃取，可以以游離的PDC的形式萃取PDC的復鹽。萃取溶劑例如有乙酸乙酯、環(huán)己酮、環(huán)戊酮、己烷、庚烷、甲苯、苯、二乙醚、四氫呋喃、氯仿和二氯甲烷，優(yōu)選乙酸乙酯、環(huán)己酮或環(huán)戊酮，從沸點低的角度考慮，特別優(yōu)選乙酸乙酯。在形成酸性條件時，可使用過量、優(yōu)選水層的3%以上、更優(yōu)選水層的3%_7%的強酸水溶液。強酸有鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸等，特別優(yōu)選鹽酸。也可以根據(jù)需要，將所得的有機層用強酸水溶液處理多次。所得PDC可根據(jù)需要反復重結(jié)晶，由此可進一步提高純度。(II)將上述PDC的復鹽溶解于水、例如純水中，將該溶液用H型陽離子交換樹脂進行處理，由此也可得到游離的PDC。H型陽離子交換樹脂例如可使用凝膠型聚苯乙烯*磺酸型離子交換樹脂——離子交換容量為2.Omeq/ml左右的Amberlite(注冊商標)IR120B、DIAI0N(注冊商標)SK1B等?？赏ㄟ^重結(jié)晶從所得的PDC的溶劑濃縮物或離子交換樹脂的流出物的濃縮物中以晶體的形式獲得PDC。根據(jù)需要反復重結(jié)晶，可進一步提高晶體的純度。形成PDC的復鹽的本純化方法無需大容量的微生物發(fā)酵液的萃取操作，通過鹽析即可簡便地以鹽的形式純化PDC，同時可以容易地除去比PDC的復鹽的水溶解度高的有機分子等。〈不形成PDC的復鹽的方法>在酸性條件下，通過用有機溶劑萃取含有PDC的微生物發(fā)酵液，可以以游離的PDC的形式分離PDC。本發(fā)明中使用的有機溶劑例如有乙酸乙酯、環(huán)己酮、環(huán)戊酮、己烷、庚烷、甲苯、苯、二乙醚、四氫呋喃、氯仿和二氯甲烷，優(yōu)選乙酸乙酯、環(huán)戊酮或環(huán)己酮，從沸點低的角度考慮，特別優(yōu)選乙酸乙酯。在用上述有機溶劑萃取之前，為了防止PDC的復鹽的萃取，優(yōu)選使該發(fā)酵液為強酸性，且將萃取后的有機溶劑用強酸水溶液清洗。強酸可使用鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸等，特別優(yōu)選鹽酸。優(yōu)選在用有機溶劑萃取前后使用的強酸相對于微生物發(fā)酵液共計3-7%，特別優(yōu)選3-5%。為了除去上述發(fā)酵液中的蛋白質(zhì)，在上述萃取步驟之前，可以使該發(fā)酵液中進一步存在丙酮；甲醇、乙醇等醇類等沸點較低的極性溶劑。存在醇類時，酸的添加優(yōu)選在除去醇之后進行。按照常規(guī)方法減壓濃縮上述有機層，在純水中使?jié)饪s干燥固化物重結(jié)晶，由此可以以晶體的形式獲得PDC。該PDC晶體通過反復重結(jié)晶，可以進一步提高純度。根據(jù)不包括PDC的復鹽的形成的本純化方法，通過一次萃取操作，可以以高的PDC純度(99.5%-99.9%)、以完全的游離體形式獲得PDC。根據(jù)本純化方法獲得的PDC不含有其鹽，因此容易溶解于各種溶劑中，有望作為聚合物或化學制品的合成材料等，獲得廣泛的應(yīng)用。實施例下面給出實施例來詳細說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受這些實施例的任何限定。(材料)含有PDC的微生物發(fā)酵液按照日本特開2005-278549號公報所述的方法獲得。實施例1形成PDC鈉鹽的純化方法將1.5L含有PDC的微生物培養(yǎng)液進行離心分離(4000rpm，1小時，4。C)，除去菌體。向所得上清液中添加15g氯化鈉，在4t:下放置12小時，使PDC鈉鹽析出，過濾回收，得到粗制PDC鈉鹽(22g)。接著，將10g該粗制PDC鈉鹽溶解于600ml純水中，用3NHC1調(diào)節(jié)至pH1.5，用乙酸乙酯(100mlX3次)萃取。將乙酸乙酯層用100mlpH1.0的鹽酸水洗滌，減壓濃縮，在4t:下進行結(jié)晶。過濾收集晶體，溶解于純水中進行重結(jié)晶，在6(TC下減壓干燥，得到5.7gPDC(回收率70%)。純度通過HPLC確定，為98.5%。HPLC分析條件裝置Waters;流量0.2ml/分鐘；注射量50iU;柱4.6cpx250mm(七>—〉二々科學制造ods-1251-ss);流動相水乙腈乙酸=74:25:1;檢測波長294nm。實施例2-11在25ml純水中加入0.25g(l.4mmo1)PDC(游離體)，得到PDC水溶液(0.054mol/L)。接著，按照表1所述的量向該PDC水溶液中添加下述表1列舉的金屬鹽。根據(jù)金屬鹽的種類不同，添加后有立即析出的，也有加熱后冷卻而析出的，還有將水濃縮后析出的。過濾析出物(或沉淀物)，然后在6(TC下干燥過夜，以報道的氯化鈉的析出物的組成(Na2PDC2H20)為基準，由析出物的重量計算PDC析出率(回收率)。結(jié)果如表1所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>過由100g離子交換容量2.2meq/ml的H型陽離子交換樹脂(7<卜)制作的柱(40mm(p)。用純水洗滌，用pHl的鹽酸展開，收集流出組分，減壓濃縮，在4t:下進行結(jié)晶。過濾收集晶體，溶解于純水中進行重結(jié)晶，在6(TC下減壓干燥，得到7.2gPDC(回收率88%，純度98.5%)。實施例13不形成PDC鈉鹽的方法在1.5LPDC原液(微生物培養(yǎng)后的濾液)中加入1.5L丙酮和45ml濃鹽酸，攪拌混合。向其中加入20g活性碳(037-02115，和光純藥工業(yè)株式會社)，攪拌15分鐘，然后在#131濾紙上鋪滿Celite(08003-02，Celite503，關(guān)東化學株式會社)，進行吸濾，除去活性碳。從該濾液中減壓餾去丙酮，將溶液量濃縮至1.5L。在濃縮液中加入18ml濃鹽酸，進行乙酸乙酯230mlX3次+150mlX2次的萃取。在乙酸乙酯萃取液中加入36g無水硫酸鎂，干燥，吸濾，減壓干燥固化。將所得固體減壓干燥大約3小時(55°C)后，在6(TC下溶解于15ml的蒸餾水中，加入2ml濃鹽酸，在冰箱中放置，重結(jié)晶。過濾收集固體，減壓干燥(55tO，得到約13.2gPDC(收率68%，純度98.5%)。即使將PDC原液的量按比例增加(PDC原液50L)，也可得到同樣的回收率。產(chǎn)業(yè)實用性本發(fā)明的方法可用作從含有2-吡喃酮-4，6_二羧酸的微生物發(fā)酵液中工業(yè)化純化2-吡喃酮-4，6-二羧酸的方法。9權(quán)利要求2-吡喃酮-4，6-二羧酸的純化方法，其特征在于使選自一價、二價、三價和四價的陽離子的鹽存在于由微生物生產(chǎn)的含有2-吡喃酮-4，6-二羧酸的發(fā)酵液中。2.權(quán)利要求1所述的純化方法，其中，上述一價、二價、三價或四價的陽離子是金屬離子、或銨離子或烷基銨離子。3.權(quán)利要求1或2所述的純化方法，其中，上述一價的陽離子選自鈉、鉀、銣、銀、鋰和銫。4.權(quán)利要求1或2所述的純化方法，其中，上述二價的陽離子選自鎂、鈣、鐵(n)、銅(n)、鋅、鋇、鈷、鎳(n)、錳和鉻(n)。5.權(quán)利要求i或2所述的純化方法，其中，上述三價的陽離子選自鐵(ni)、鋁和鎵。6.權(quán)利要求1或2所述的純化方法，其中，上述四價的陽離子選自錫(IV)、鉛(IV)、鈦(IV)和鍺(IV)。7.權(quán)利要求1-6中任一項所述的純化方法，其中，上述一價、二價、三價或四價的陽離子的鹽是選自氯化物、溴化物、硫酸鹽、磷酸鹽和碳酸鹽的單鹽；氰基配合物；或復鹽。8.權(quán)利要求7所述的純化方法，其中，上述復鹽是含有2種陽離子的復鹽。9.權(quán)利要求7所述的純化方法，其中，上述一價的陽離子的鹽是氯化鈉、氯化鉀、氯化銣、氯化銀、溴化鈉、硫酸鈉、磷酸氫二鈉或磷酸氫二鉀。10.權(quán)利要求7所述的純化方法，其中，上述二價的陽離子的鹽是氯化鎂或硫酸銅、或六氰基鐵(II)酸鉀。11.權(quán)利要求7所述的純化方法，其中，上述三價的陽離子的鹽是氯化鐵(III)或六氰基鐵(III)酸鉀。12.權(quán)利要求7或8所述的純化方法，其中，上述四價的陽離子的鹽是錫(IV)酸鉀。13.權(quán)利要求1-12中任一項所述的純化方法，該方法包括回收由于上述陽離子的鹽的存在而析出的2-吡喃酮-4，6-二羧酸鹽、溶解于水、接著在酸性條件下用乙酸乙酯、環(huán)戊酮或環(huán)己酮萃取的步驟。14.權(quán)利要求13所述的純化方法，其中，在上述萃取步驟時添加過量的強酸。15.權(quán)利要求1-14中任一項所述的純化方法，該方法包括回收由于上述陽離子的鹽的存在而析出的2-吡喃酮-4，6-二羧酸鹽、溶解于水、接著將該溶液用陽離子交換樹脂處理的步驟。16.權(quán)利要求1-15中任一項所述的純化方法，其中，相對于上述發(fā)酵液中的2-吡喃酮_4，6-二羧酸，使用至少2倍摩爾的上述陽離子的鹽。17.2-吡喃酮-4，6-二羧酸的純化方法，其特征在于不從由微生物生產(chǎn)的含有2-吡喃酮_4，6-二羧酸的發(fā)酵液中形成2-吡喃酮-4，6-二羧酸鹽，而是萃取2-吡喃酮-4，6-二羧酸。18.權(quán)利要求17所述的純化方法，其中，用乙酸乙酯、環(huán)戊酮或環(huán)己酮萃取。19.權(quán)利要求17或18所述的純化方法，其中，用乙酸乙酯萃取。20.權(quán)利要求17-19中任一項所述的純化方法，其中，在上述萃取步驟時添加過量的強酸。21.權(quán)利要求20所述的純化方法，其中，相對于上述發(fā)酵液，至少使用3重量％上述強酸。全文摘要本發(fā)明提供由發(fā)酵生產(chǎn)得到的PDC的工業(yè)化純化方法。2-吡喃酮-4，6-二羧酸的純化方法，其特征為使一價～四價的陽離子的鹽存在于由微生物生產(chǎn)的含有2-吡喃酮-4，6-二羧酸的發(fā)酵液中；以及2-吡喃酮-4，6-二羧酸的純化方法，其特征為無需從由微生物生產(chǎn)的含有2-吡喃酮-4，6-二羧酸的發(fā)酵液中形成2-吡喃酮-4，6-二羧酸鹽，而是萃取2-吡喃酮-4，6-二羧酸。文檔編號C07D309/38GK101796194SQ20088010212公開日2010年8月4日申請日期2008年1月30日優(yōu)先權(quán)日2007年8月8日發(fā)明者下俊久,大原尚己,山本裕輔,村瀨仁俊,片山義博,重原淳孝,間瀨浩平申請人:株式會社豐田自動織機