專利名稱：：一種抗腫瘤活性斑蟄素衍生物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種新的具有抗腫瘤活性的斑鰲素衍生物及其制備方法。技術(shù)背景斑鰲素(cantharidin，CA)是廣泛存在于1500多種斑鰲體內(nèi)的一種天然防御性毒素。斑鰲屬芫青科昆蟲，性寒味辛，為劇毒中藥材，除具有抗癌活性外，尚有抗病毒、壯陽、升高白細(xì)胞等多種活性。我國是世界上最早認(rèn)識斑鰲藥用價(jià)值的國家，在《本草綱目》中就其形態(tài)、習(xí)性及用法有詳細(xì)記載。從斑鰲中提取或者實(shí)驗(yàn)室合成的斑鰲素本身是一種半帖烯毒素，其毒性強(qiáng)烈。內(nèi)服可引起胃腸炎癥、粘膜壞死，可使腎小球上皮細(xì)胞嚴(yán)重?fù)p傷，出現(xiàn)蛋白尿、管型尿、血尿、及血清蛋白氮升高，用藥不當(dāng)易使人中毒甚至死亡，至今未能臨床使用。因而，設(shè)計(jì)合成一些選擇性抑制腫瘤細(xì)胞，對機(jī)體毒性小的斑鶩素衍生物具有重大意義。同時(shí)本申請人通過大量的實(shí)驗(yàn)不斷摸索斑鶩素衍生物的制備方法。專利號200510034018.4"斑蟄素衍生物及其制備方法"中提供了一種斑蟄素衍生物的制備方法，但必須使用劇毒的氰化鉀，很不安全。這些因素很大程度上限制了斑鰲素衍生物在醫(yī)藥方面的廣泛應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種新的斑鰲素衍生物，具有選擇性抑制腫瘤細(xì)胞活性，對機(jī)體毒性小。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供所述斑鰲素衍生物的制備方法，采用去甲斑蝥素、甘氨酸、金剛垸胺為原料分步合成，安全、簡單、易行。本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種抗腫瘤活性斑蟄素衍生物，具有以下結(jié)構(gòu)式所述抗腫瘤活性斑蟄素衍生物的制備方法包括以下步驟(l)去甲斑蝥素和甘氨酸加入圓底燒瓶于油浴中反應(yīng)，冷卻固化，重結(jié)晶；(2)將(1)產(chǎn)物加入三口燒瓶，緩慢滴加氯化亞砜及N，N-二甲基甲酰胺，反應(yīng)穩(wěn)定后升溫至4(TC反應(yīng)約4h，至干燥管出口無HC1冒出，減壓抽干殘余氯化亞砜；(3)將裝有(2)歩產(chǎn)物的三口燒瓶置冰浴中冷卻至05°C，緩慢滴加金剛垸胺與吡啶的混懸液，滴加完畢后冰浴反應(yīng)20min，室溫下繼續(xù)反應(yīng)18h，將反應(yīng)液揮干，得黃褐色固體，洗滌，過濾，濾渣烘千得產(chǎn)品。步驟(1)去甲斑蝥素和甘氨酸以113:55的重量比例充分研碎混勻，于180。C油浴中反應(yīng)20min。步驟(1)所述重結(jié)晶采用1:4乙醇水溶液，用量按照甘氨酸重量克數(shù)乙醇水溶液體積毫升數(shù)=1:30。步驟(2)所述三口燒瓶冷凝管上口安裝干燥管，另一上口安裝分液漏斗，是將(1)產(chǎn)物和轉(zhuǎn)子一起加入三口燒瓶。步驟(2)所述緩慢滴加氯化亞砜及N，N-二甲基甲酰胺是將三口燒瓶置于冷水浴中，從分液漏斗中緩慢滴加。步驟(3)所述緩慢滴加金剛烷胺與吡啶的混懸液是從分液漏斗中滴加。步驟(3)所述金剛烷胺與吡啶的混懸液是將步驟(1)所用去甲斑蝥素2倍重量份的金剛烷胺研碎加入分液漏斗中，再按照金剛垸胺重量克數(shù)吡啶體積毫升數(shù)二l:25的比例加入吡啶充分振搖得混懸步驟(3)所述洗滌用5:250的稀HC1、乙醚、NaC03依次洗滌。本發(fā)明制備方法產(chǎn)率為6.2%，即249252X:。本發(fā)明的合成路線為(1)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>本發(fā)明步驟(1)產(chǎn)物光譜數(shù)據(jù)oN~CH2COOHIR(KBr，cm-1):v3466(-COOH)、2978(飽和C—H)，1733(C=0)，1689(五元環(huán)內(nèi)酰胺),1418(C一N)，1222(C—0—C)本發(fā)明斑蟄素衍生物光譜數(shù)據(jù)IR(KBr，cm-1):v3319(仲胺一NH-)、2907(飽和C—H)，1703(五元環(huán)內(nèi)酰胺)、vl657(0=CNH)，1418(C—N)，1181(C—O—C)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>1H-NMR(CC13):S5.44(1H，8-H)，4.90(2H，1，4—H)，4.03(2H，7-H)，2.97(2H，2，3-H)，2.10(3H，2，-H)，1.95(6H，1，-H)，1.651.71(9H，5，6-H、3，-H)本發(fā)明的有益效果是(1)設(shè)計(jì)合成了新的具有抗腫瘤活性斑鶩素衍生物，結(jié)構(gòu)新穎、抗腫瘤活性強(qiáng)，填補(bǔ)了本領(lǐng)域空白，為制備選擇性抑制腫瘤細(xì)胞、對機(jī)體毒性小的斑鶩素衍生物類藥物打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，具有重要的潛在產(chǎn)業(yè)化開發(fā)價(jià)值以及對人類研究抗癌藥物的重大貢獻(xiàn)；(2)本發(fā)明提供的制備方法采用原料安全，設(shè)備簡單，生產(chǎn)方法簡單易行，具有良好的市場前景。圖l斑蟄素衍生物的紅外光譜2斑蟄素衍生物的核磁共振光譜3斑蟄素衍生物的核磁共振光譜4三口燒瓶示意5斑蟄素衍生物的半抑制濃度分析圖其中，橫坐標(biāo)為終濃度值umo1/1，縱坐標(biāo)為IR。/4直。圖6斑蟄素衍生物合成路線圖具體實(shí)施方式實(shí)施例1一、按照圖6所示合成路線(1)在25ml圓底燒瓶中加入充分研碎混勻的1.13g去甲斑蝥素和O.55克甘氨酸，18(TC油浴20iiiin后停止反應(yīng)，冷卻固化，用15mll:4乙醇水溶液重結(jié)晶，得白色針狀晶體，產(chǎn)率80%，mp202204°C。產(chǎn)物的光譜數(shù)據(jù)為IR(KBr，cm-1):v3466(-COOH)、2978(飽和C—H)，1733(C=0)，1689(五元環(huán)內(nèi)酰胺)，1418(C—N)，1222(C—0—C)(2)在三口燒瓶中加入2g(1)步反應(yīng)產(chǎn)物及轉(zhuǎn)子，反應(yīng)裝置如圖4所示，冷凝管上口安裝干燥管，另一上口安裝分液漏斗。分液漏斗中加入8ml氯化亞砜及2滴N，N-二甲基甲酰胺，冷水浴中緩慢滴加，反應(yīng)穩(wěn)定后升溫至4(TC反應(yīng)約4h，至干燥管出口無HC1冒出。停止反應(yīng)，減壓抽干殘余氯化亞砜，得淡黃色至褐色固體，直接用于下一步反應(yīng)。(3)將裝有(2)步產(chǎn)物的三口燒瓶置冰浴中冷卻至05°C。將2g金剛垸胺研碎加入250ml分液漏斗中，加入50ml吡啶充分振搖得混懸液，緩慢滴入三口瓶中，產(chǎn)生大量白煙，控制滴加速度防止反應(yīng)過于劇烈，滴加完畢后冰浴反應(yīng)20min，室溫下繼續(xù)反應(yīng)18h。將反應(yīng)液揮干，得黃褐色固體。用30ml稀HC1(5250)、30ml乙醚、30mlNaC03依次洗滌，過濾，濾渣烘干得灰白至黃白色粉末0.2g，產(chǎn)率6.2%，mp249252。C。光譜數(shù)據(jù)為如圖1，IR(KBr，cm-1):v3319(仲胺一NH-)、2907(飽和C—H)，1703(五元環(huán)內(nèi)酰胺)、v1657(。=CNH)，1418(C—N)，1181(C—0—C)MS:m/z381(M+Na)如圖2、圖3，1H-麗R(CCU):S5.44(1H，8-H)，4.90(2H，1，4-H),4.03(2H，7-H)，2.97(2H，2，3-H)，2.10(3H，2，-H)，1.95(6H，1，-H)，1.651.71(9H，5，6-H、3，-H)二、本發(fā)明斑蟄素衍生物對神經(jīng)膠質(zhì)瘤UW28細(xì)胞的抑制試驗(yàn)按藥劑學(xué)方法，可以將本發(fā)明斑蟄素衍生物用于制備作為抗腫瘤的藥物。下述的藥理實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明提取物具有抑制腫瘤生長的藥理活性采用廣州中山大學(xué)腫瘤醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室提供的神經(jīng)膠質(zhì)瘤UW28以本發(fā)明斑蟄素衍生物不同終濃度以及空白對照組實(shí)驗(yàn)，記錄數(shù)據(jù)，并求出各個(gè)不同濃度藥物平均0D值，運(yùn)用公式11=(1-實(shí)驗(yàn)組0D值/對照組0D值)X100%求出各個(gè)藥物濃度的IR值。結(jié)果見表1。表l組別斑蟄素衍生物平均0D值細(xì)胞生長抑制終濃度umol/1率IR空白對照組一1.0050濃度1組0.0251.136-13.03%濃度2組0.051.072-6.73%濃度3組0.10.9753.03%濃度4組0.20.9832.23%濃度5組0.40.8416.53%<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>以生長抑制率為縱軸，對應(yīng)的藥物濃度為橫軸做圖，并計(jì)算藥物的半數(shù)抑制濃度(inhibitoryconcentration50%，ICso),結(jié)果見圖5。從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中可知，本發(fā)明斑蟄素衍生物在終濃度0.4umo1/1以下時(shí)對神經(jīng)膠質(zhì)瘤UW28的生長抑制率低于50%，即本發(fā)明斑蟄素衍生物在終濃度0.4umo1/1以下時(shí)對神經(jīng)膠質(zhì)瘤而28生長無明顯抑制作用，但終濃度0.4umo1/1以上對神經(jīng)膠質(zhì)瘤UW28生長抑制作用逐漸增強(qiáng)。權(quán)利要求1、一種抗腫瘤活性斑蟄素衍生物，其特征在于具有以下結(jié)構(gòu)式2、權(quán)利要求1所述抗腫瘤活性斑蟄素衍生物的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)去甲斑蝥素和甘氨酸加入圓底燒瓶于油浴中反應(yīng)，冷卻固化，歪仕曰里￡口日日；(2)將(1)產(chǎn)物入三口燒瓶，緩慢滴加氯化亞砜及N，N-二甲基甲酰胺，反應(yīng)穩(wěn)定后升溫至4(TC反應(yīng)約4h，至干燥管出口無HC1冒出，減壓抽干殘余氯化亞砜；(3)將裝有(2)歩產(chǎn)物的三口燒瓶置冰浴中冷卻至05°C，緩慢滴加金剛垸胺與吡啶的混懸液，滴加完畢后冰浴反應(yīng)20min，室溫下繼續(xù)反應(yīng)18h，將反應(yīng)液揮干，得黃褐色固體，洗滌，過濾，濾渣烘干得產(chǎn)品。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述抗腫瘤活性斑蟄素衍生物的制備方法，其特征在于步驟(1)去甲斑蝥素和甘氨酸以113:55的重量比例充分研碎混勻，于18(TC油浴中反應(yīng)20min。4、根據(jù)權(quán)利要求2所述斑蟄素衍生物的制備方法，其特征在于步驟(1)所述重結(jié)晶采用1:4乙醇水溶液，用量按照甘氨酸重量克數(shù)乙醇水溶液體積毫升數(shù)=1:30。5、根據(jù)權(quán)利要求2所述抗腫瘤活性斑蟄素衍生物的制備方法，其特征在于步驟(2)所述三口燒瓶冷凝管上口安裝干燥管，另一上口安裝分液漏斗。6、根據(jù)權(quán)利要求2所述抗腫瘤活性斑蟄素衍生物的制備方法，其特征在于步驟(2)是將(1)產(chǎn)物和轉(zhuǎn)子一起加入三口燒瓶。7、根據(jù)權(quán)利要求2所述抗腫瘤活性斑蟄素衍生物的制備方法，其特征在于步驟(2)所述緩慢滴加氯化亞砜及N，N-二甲基甲酰胺是將三口燒瓶置于冷水浴中，從分液漏斗中緩慢滴加。8、根據(jù)權(quán)利要求2所述抗腫瘤活性斑蟄素衍生物的制備方法，其特征在—f步驟(3)所述緩慢滴加金剛烷胺與吡啶的混懸液是從分液漏斗中滴加。9、根據(jù)權(quán)利要求2所述抗腫瘤活性斑蟄素衍生物的制備方法，其特征在于步驟(3)所述金剛烷胺與吡啶的混懸液是將步驟(1)所用去甲斑蝥素2倍重量份的金剛烷胺研碎加入分液漏斗中，再按照金剛垸胺重量克數(shù)吡啶體積毫升數(shù)=1:25的比例加入吡啶充分振搖得混懸液。10、根據(jù)權(quán)利要求2所述抗腫瘤活性斑蟄素衍生物的制備方法，其特征在于步驟(3)所述洗滌用5:250的稀HC1、乙醚、NaC03依次洗滌。全文摘要本發(fā)明公開了一種新的斑鰲素衍生物，具有選擇性抑制腫瘤細(xì)胞活性，對機(jī)體毒性小，本發(fā)明同時(shí)公開了所述斑鰲素衍生物的制備方法，采用去甲斑蝥素、甘氨酸、金剛烷胺為原料分步合成，制備方法安全、簡單、易行。所述具有抗腫瘤活性斑鶩素衍生物，結(jié)構(gòu)新穎、抗腫瘤活性強(qiáng)，填補(bǔ)了本領(lǐng)域空白，為制備選擇性抑制腫瘤細(xì)胞、對機(jī)體毒性小的斑鶩素衍生物類藥物打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，具有重要的潛在產(chǎn)業(yè)化開發(fā)價(jià)值以及對人類研究抗癌藥物的重大貢獻(xiàn)。文檔編號C07D491/18GK101161654SQ20071002973公開日2008年4月16日申請日期2007年8月16日優(yōu)先權(quán)日2007年8月16日發(fā)明者浩張,張志華,勝曾,可梁,王曉明,譚載友,彥黃申請人:廣東藥學(xué)院;廣東一力藥業(yè)有限公司