專利名稱：一種樹脂和凝膠多極串聯(lián)高效集成分離純化蘋果多酚新工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蘋果多酚分離純化新工藝，尤其是涉及將樹脂和凝膠多極串聯(lián)集成純化蘋果多酚工藝。
背景技術(shù)：
現(xiàn)代醫(yī)學(xué)試驗(yàn)證明，蘋果多酚作為一類具有生物活性的天然化合物，具有強(qiáng)抗氧化性、抗齲齒、抗癌細(xì)胞增生、預(yù)防心血管、哮喘、糖尿病等慢性疾病，調(diào)節(jié)脂類代謝、改善肺功能、抑菌、抑病毒消除口臭，防脫發(fā)、生發(fā)、美容等生理功能，性質(zhì)穩(wěn)定，性能優(yōu)于茶多酚，可廣泛應(yīng)用于食品、藥品、化妝品等工業(yè)中，是一種優(yōu)良的功能性基材，對(duì)人們?cè)趶?qiáng)身健體、防病治病、延年益壽等方面具有巨大的潛在價(jià)值。
據(jù)資料報(bào)道，當(dāng)前全球的多酚需求約在每年4萬噸，而生產(chǎn)能力不足1萬噸，市場(chǎng)遠(yuǎn)未飽和，據(jù)專家預(yù)計(jì)，需求量還會(huì)以每年40％的速度增長。因此，蘋果多酚產(chǎn)品具有廣闊的市場(chǎng)前景。
國內(nèi)外對(duì)蘋果多酚的研究，無論是提取、分離純化還是功效研究都剛剛起步，大多尚處實(shí)驗(yàn)室階段。目前，純化蘋果多酚多采用溶劑萃取、復(fù)鹽沉淀、樹脂吸附等方法，得到的蘋果多酚制品，純度低，品種少，多為初級(jí)產(chǎn)品，難以滿足國內(nèi)外市場(chǎng)要求。如中國專利00120528.5使用硫酸鋅和氯化鈣復(fù)鹽沉淀多酚再用有機(jī)溶劑萃取，方法簡便但有機(jī)溶劑或金屬離子殘留較多，多酚制品純度不高。孫建霞用大孔吸附脂AB-8純化蘋果粗提液，得到純度48.67％的蘋果多酚；任靜用聚酰胺層析法純化蘋果渣提取液，得到純度43.95％的蘋果原花青素；雖然都得到了蘋果多酚制品，但純度過低不能直接應(yīng)用，還需進(jìn)一步精制。因此，開展高純蘋果多酚的生產(chǎn)工藝研究，生產(chǎn)出符合要求的產(chǎn)品迫在眉睫。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種連續(xù)、高效生產(chǎn)出高純蘋果多酚制品的新工藝。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為一種樹脂和凝膠多極串聯(lián)集成連續(xù)分離純化蘋果多酚的新工藝，包括將蘋果多酚粗液用樹脂吸附洗脫，再用凝膠吸附洗脫，真空濃縮，得到蘋果多酚的濃縮液制品。
用未成熟和成熟蘋果全果、蘋果果肉、蘋果皮籽、蘋果加工廢料-蘋果渣中提取的蘋果多酚粗液及蘋果汁生產(chǎn)中脫除的蘋果多酚粗液作為原料生產(chǎn)高純蘋果多酚制品。
調(diào)節(jié)蘋果多酚粗液的濃度、pH值和上柱流速條件，使大孔吸附樹脂柱體吸附至飽和，用水洗去可溶性糖等雜質(zhì)，再調(diào)節(jié)洗脫劑濃度、洗脫流速和洗脫劑體積條件，洗脫大孔吸附樹脂柱體吸附的蘋果多酚，洗脫的蘋果多酚經(jīng)真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚。
上柱蘋果多酚粗液的濃度0.5～3.0mg/ml，pH值范圍2.0～6.0，上柱流速0.5～2.5ml/min；洗脫劑使用甲醇或乙醇或丙酮，洗脫劑濃度10～100％，洗脫劑用量5～15BV(BV，柱床體積)，洗脫速度0.5～2.5ml/min。
調(diào)節(jié)初步純化蘋果多酚的濃度、pH值和上樣體積條件，上凝膠柱，先用水洗去可溶性糖等雜質(zhì)，后調(diào)節(jié)洗脫劑濃度、洗脫流速和洗脫劑體積條件，洗脫凝膠柱吸附的蘋果多酚，洗脫的蘋果多酚經(jīng)真空濃縮，得到精制的蘋果多酚制品。
過凝膠柱的蘋果多酚濃度0.5～3.0mg/ml，pH值2.0～6.0，上樣體積0.5～10％BV；洗脫劑使用甲醇或乙醇或丙酮均可，洗脫劑濃度10～100％，洗脫劑用量2～5BV，洗脫流速0.5～2.5ml/min。
所用樹脂為聚苯乙烯系或聚酰胺系極性或非極性大孔吸附樹脂，凝膠為葡聚糖系凝膠；采用固定床式吸附；純化工藝采用樹脂柱床和凝膠柱床串聯(lián)，樹脂柱床可采用單組或多組集成。
經(jīng)過樹脂和凝膠串聯(lián)純化的蘋果多酚濃縮液再經(jīng)噴霧干燥或冷凍干燥得到蘋果多酚含量≥80％的粉狀制品。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于將分離純化天然產(chǎn)物所單獨(dú)使用的樹脂和凝膠技術(shù)串聯(lián)集成使用，結(jié)合兩者優(yōu)點(diǎn)，達(dá)到連續(xù)生產(chǎn)高純蘋果多酚的目的，工藝簡單，操作簡便，有利于蘋果多酚的工業(yè)化連續(xù)生產(chǎn)，有利于蘋果多酚活性的保持；另外，分離純化在常溫常壓下進(jìn)行，可以節(jié)省能源；洗脫劑可以回收使用，沒有污染，屬環(huán)境友好型技術(shù)。本發(fā)明研究成功，不僅可以提升我國果蔬加工行業(yè)整體水平，增強(qiáng)企業(yè)創(chuàng)新能力和市場(chǎng)競(jìng)爭力，快速延長蘋果產(chǎn)業(yè)鏈條，生產(chǎn)出高附加值蘋果多酚產(chǎn)品，還可優(yōu)化食品工業(yè)結(jié)構(gòu)，帶動(dòng)農(nóng)業(yè)增產(chǎn)、農(nóng)民增收、農(nóng)村持續(xù)快速發(fā)展，具有極為重要的經(jīng)濟(jì)及社會(huì)意義。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1粉碎過100目篩的蘋果渣用60％乙醇提取得粗提液，把處理好的30.0g(1Bv＝100ml)NKA-9大孔吸附樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)蘋果多酚粗液濃度1.5mg/ml，pH值4.5，流速1.0ml/min，上NKA-9樹脂柱，定時(shí)測(cè)定粗提液蘋果多酚濃度，至0.15～0.2mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖測(cè)出，換用60％乙醇溶液洗脫，洗脫劑用量10BV，洗脫速度1.0ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將2.5mg/ml pH值4.5的經(jīng)初步純化的蘋果多酚溶液5ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用80％乙醇溶液洗脫，洗脫劑用量3BV，洗脫速度0.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品，純度達(dá)到84.12％。
實(shí)施例2粉碎過100目篩的蘋果渣用60％乙醇提取得粗提液，將處理好的30.0g(1Bv＝100ml)NKA-9大孔吸附樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度2.0mg/ml，pH值5.5，流速1.5ml/min上NKA-9樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.2～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用60％乙醇溶液洗脫，洗脫劑用量10BV，洗脫速度1.0ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將2.5mg/ml pH值4.5的經(jīng)初步純化的蘋果多酚溶液5ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸餾水洗脫至無糖檢出，換用80％乙醇溶液洗脫，洗脫劑用量3BV，洗脫速度0.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品，純度達(dá)到84.12％。
實(shí)施例3粉碎過100目篩的蘋果渣用70％乙醇提取得粗提液，把處理好的30.0g(1Bv＝100ml)NKA-9大孔吸附樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度2.5mg/ml，pH值4.5，流速0.5ml/min上NKA-9樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.20～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用60％乙醇溶液洗脫，洗脫劑用量10BV，洗脫速度1.0ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將2.0mg/ml pH值3.5的初步純化后蘋果多酚溶液10ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用80％乙醇溶液洗脫，洗脫劑用量3BV，洗脫速度0.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品，純度達(dá)到82.65％。
實(shí)施例4將未成熟和成熟蘋果全果用60％乙醇萃取得粗提液，將處理好的30.0g(1Bv＝100ml)XAD-5大孔吸附樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度1.0mg/ml，pH值4.0，流速2.0ml/min上XAD-5樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.20～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用10％乙醇溶液洗脫，洗脫劑用量5BV，洗脫速度0.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將1.0mg/ml pH值3.0的初步純化后蘋果多酚溶液10ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用100％乙醇溶液洗脫，洗脫劑用量5BV，洗脫流速2.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品。
實(shí)施例5將蘋果果肉和蘋果皮籽用80％乙醇提取得粗提液，把處理好的30.0g(1Bv＝100ml)XAD-5吸附樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度0.5mg/ml，pH值6.0，流速0.5ml/min上XAD-5樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.20～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用10％乙醇溶液洗脫，洗脫劑用量15BV，洗脫速度2.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將0.5mg/ml pH值2.0的初步純化后蘋果多酚溶液10ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用10％乙醇溶液洗脫，洗脫劑用量2BV，洗脫流速1.0ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品。
實(shí)施例6將蘋果皮籽用60％甲醇提取得粗提液，把處理好的30.0g(1Bv＝100ml)XAD-5大孔吸附樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度0.5mg/ml，pH值2.0，流速0.5ml/min上XAD-5樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.20～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用10％甲醇溶液洗脫，洗脫劑用量5BV，洗脫速度0.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將0.5mg/ml pH值2.0的初步純化后蘋果多酚溶液3ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用10％甲醇溶液洗脫，洗脫劑用量2BV，洗脫流速0.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品。
實(shí)施例7將成熟蘋果全果用60％丙酮提取得粗提液，把處理好的30.0g(1Bv＝100ml)聚酰胺樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度0.5mg/ml，pH值2.0，流速0.5ml/min上聚酰胺樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.20～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用100％丙酮溶液洗脫，洗脫劑用量5BV，洗脫速度0.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將0.5mg/mlpH值2.0的初步純化后蘋果多酚溶液3ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用10％丙酮溶液洗脫，洗脫劑用量2BV，洗脫流速1.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品。
實(shí)施例8將蘋果果肉用60％甲醇提取得粗提液，把處理好的30.0g(1Bv＝100ml)聚酰胺樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度1.0mg/ml，pH值2.0，流速2.0ml/min上聚酰胺樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.20～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用100％甲醇溶液洗脫，洗脫劑用量15BV，洗脫速度2.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將1.0mg/ml pH值3.0的初步純化后蘋果多酚溶液8ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用100％甲醇溶液洗脫，洗脫劑用量5BV，洗脫流速2.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品。
實(shí)施例9將未成熟蘋果全果用60％丙酮提取得粗提液，把處理好的30.0g(1Bv＝100ml)聚酰胺樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度3.0mg/ml，pH值4.0，流速2.0ml/min上聚酰胺樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.20～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用100％丙酮溶液洗脫，洗脫劑用量15BV，洗脫速度2.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將1.0mg/mlpH值6.0的初步純化后蘋果多酚溶液8ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用100％丙酮溶液洗脫，洗脫劑用量5BV，洗脫流速2.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品。
實(shí)施例10將未成熟和成熟蘋果全果、蘋果果肉、蘋果皮籽、蘋果加工廢料-蘋果渣用60％丙酮提取得粗提液，把處理好的30.0g(1Bv＝100ml)S-8大孔吸附樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度1.0mg/ml，pH值4.0，流速2.0ml/min上S-8樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.20～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用30％丙酮溶液洗脫，洗脫劑用量10BV，洗脫速度1.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將1.0mg/ml pH值3.5的初步純化后蘋果多酚溶液4ml加入葡聚糖LH-20柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用30％丙酮溶液洗脫，洗脫劑用量3BV，洗脫流速1ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品。
實(shí)施例11將蘋果果肉用60％甲醇提取得粗提液，把處理好的30.0g(1Bv＝100ml)S-8大孔吸附樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度1.0mg/ml，pH值3.5，流速2.0ml/min上S-8樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.20～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用50％甲醇溶液洗脫，洗脫劑用量8BV，洗脫速度2.0ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖凝膠(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將1.5mg/ml pH值3.5的初步純化后蘋果多酚溶液4ml加入葡聚糖凝膠柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用50％甲醇溶液洗脫，洗脫劑用量4BV，洗脫流速2.0ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品。
實(shí)施例12將蘋果全果用80％甲醇提取得粗提液，把處理好的30.0g(1Bv＝100ml)S-8大孔吸附樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度2.0mg/ml，pH值3.5，流速2.5ml/min上S-8樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.20～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用50％丙酮溶液洗脫，洗脫劑用量10BV，洗脫速度2.0ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖凝膠(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將1.5mg/ml pH值2.5的初步純化后蘋果多酚溶液6ml加入葡聚糖凝膠柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用50％甲醇溶液洗脫，洗脫劑用量3BV，洗脫流速2.0ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品。
實(shí)施例13粉碎過100目篩的蘋果渣用80％甲醇提取得粗提液，把處理好的30.0g(1Bv＝100ml)AB-8大孔吸附樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度2.0mg/ml，pH值3.5，流速1.5ml/min上AB-8樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.20～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用50％丙酮溶液洗脫，洗脫劑用量9BV，洗脫速度2.0ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖凝膠(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將1.5mg/ml pH值2.5的初步純化后蘋果多酚溶液6ml加入葡聚糖凝膠柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用50％甲醇溶液洗脫，洗脫劑用量3BV，洗脫流速2.0ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品。
實(shí)施例14將蘋果全果用80％丙酮提取得粗提液，把處理好的30.0g(1Bv＝100ml)AB-8大孔吸附樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度2.0mg/ml，pH值5.5，流速1.5ml/min上聚酰胺樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.20～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用80％甲醇溶液洗脫，洗脫劑用量9BV，洗脫速度1.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖凝膠(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將2.0mg/ml pH值2.5的初步純化后蘋果多酚溶液0.5ml加入葡聚糖凝膠柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用50％丙酮溶液洗脫，洗脫劑用量3BV，洗脫流速1.0ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品。
實(shí)施例15將蘋果全果用80％丙酮提取得粗提液，把處理好的30.0g(1Bv＝100ml)AB-8大孔吸附樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度2.0mg/ml，pH值5.5，流速2.5ml/min上AB-8樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.20～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用80％甲醇溶液洗脫，洗脫劑用量9BV，洗脫速度1.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖凝膠(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將2.0mg/ml pH值5.0的初步純化后蘋果多酚溶液0.5ml加入葡聚糖凝膠柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用100％乙醇溶液洗脫，洗脫劑用量4BV，洗脫流速1.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品。
實(shí)施例16粉碎過100目篩的蘋果渣用50％甲醇提取得粗提液，把處理好的30.0g(1Bv＝100ml)NKA大孔吸附樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度1.5mg/ml，pH值6.0，流速1.0ml/min上NKA樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.20～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用40％乙醇溶液洗脫，洗脫劑用量6BV，洗脫速度1.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖凝膠(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將2.0mg/ml pH值5.0的初步純化后蘋果多酚溶液0.5ml加入葡聚糖凝膠柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用40％丙酮溶液洗脫，洗脫劑用量4BV，洗脫流速1.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品。
實(shí)施例17將蘋果皮渣用50％甲醇提取得粗提液，把處理好的30.0g(1Bv＝100ml)NKA大孔吸附樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度1.5mg/ml，pH值6.0，流速1.0ml/min上NKA樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.20～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用40％乙醇溶液洗脫，洗脫劑用量6BV，洗脫速度0.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖凝膠(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將3.0mg/ml pH值5.0的初步純化后蘋果多酚溶液2.0ml加入葡聚糖凝膠柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用40％丙酮溶液洗脫，洗脫劑用量4BV，洗脫流速2.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品。
實(shí)施例18將蘋果果肉用50％丙酮提取得粗提液，把處理好的30.0g(1Bv＝100ml)NKA大孔吸附樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度2.5mg/ml，pH值5.0，流速2.5ml/min上NKA樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.20～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用70％丙酮溶液洗脫，洗脫劑用量6BV，洗脫速度0.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖凝膠(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將3.0mg/ml pH值5.5的初步純化后蘋果多酚溶液2.0ml加入葡聚糖凝膠柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用40％乙醇溶液洗脫，洗脫劑用量2BV，洗脫流速2.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品。
實(shí)施例19將未成熟和成熟蘋果全果用100％丙酮提取得粗提液，把處理好的30.0g(1Bv＝100ml)D4020極性大孔吸附樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度3.0mg/ml，pH值2.5，流速1.0ml/min上D4020樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.20～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用70％丙酮溶液洗脫，洗脫劑用量12BV，洗脫速度2.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖凝膠(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將3.0mg/ml pH值5.5的初步純化后蘋果多酚溶液3.0ml加入葡聚糖凝膠柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用60％乙醇溶液洗脫，洗脫劑用量2BV，洗脫流速1.0ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品。
實(shí)施例20將未成熟蘋果全果用100％乙醇提取得粗提液，把處理好的30.0g(1Bv＝100ml)D4020極性大孔吸附樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度3.0mg/ml，pH值2.5，流速1.5ml/min上D4020樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.20～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用30％甲醇溶液洗脫，洗脫劑用量12BV，洗脫速度1.0ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖凝膠(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將1.5mg/ml pH值5.5的初步純化后蘋果多酚溶液4.0ml加入葡聚糖凝膠柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用60％甲醇溶液洗脫，洗脫劑用量5BV，洗脫流速1.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品。
實(shí)施例21將蘋果皮渣用100％乙醇提取得粗提液，把處理好的30.0g(1Bv＝100ml)D4020極性大孔吸附樹脂裝入層析柱，平衡后，調(diào)節(jié)粗提液濃度1.0mg/ml，pH值3.0，流速2.5ml/min上D4020樹脂柱，定時(shí)測(cè)定蘋果多酚溶液濃度，至0.20～0.25mg/ml時(shí)，停止上樣；用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用30％甲醇溶液洗脫，洗脫劑用量12BV，洗脫速度2.0ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚溶液。將充分溶脹好的葡聚糖LH-20(1Bv＝100ml)裝入層析柱，平衡后，將1.5mg/ml pH值6.0的初步純化后蘋果多酚溶液8.0ml加入葡聚糖凝膠柱中，用蒸餾水洗脫至無總糖檢出，換用60％甲醇溶液洗脫，洗脫劑用量5BV，洗脫流速1.5ml/min。收集洗脫液，在真空度0.096MPa溫度45℃下真空濃縮，得到精制的蘋果多酚溶液，冷凍濃縮得到蘋果多酚粉末制品。
權(quán)利要求
1.一種樹脂和凝膠多極串聯(lián)集成連續(xù)分離純化蘋果多酚的新工藝，包括將蘋果多酚粗液用樹脂吸附洗脫，其特征是再用凝膠吸附洗脫，真空濃縮，得到蘋果多酚的濃縮液制品。
2.根據(jù)權(quán)利1所述的工藝，其特征在于用未成熟和成熟蘋果全果、蘋果果肉、蘋果皮籽、蘋果加工廢料-蘋果渣中提取的蘋果多酚粗液及蘋果汁生產(chǎn)中脫除的蘋果多酚粗液作為原料生產(chǎn)高純蘋果多酚制品。
3.根據(jù)權(quán)利2所述的工藝，其特征在于調(diào)節(jié)蘋果多酚粗液的濃度、pH值和上柱流速條件，使大孔吸附樹脂柱體吸附至飽和，用水洗去可溶性糖等雜質(zhì)，再調(diào)節(jié)洗脫劑濃度、洗脫流速和洗脫劑體積條件，洗脫大孔吸附樹脂柱體吸附的蘋果多酚，洗脫的蘋果多酚經(jīng)真空濃縮，得到初步純化的蘋果多酚。
4.根據(jù)權(quán)利3所述的工藝，其特征在于上柱蘋果多酚粗液的濃度0.5～3.0mg/ml，pH值范圍2.0～6.0，上柱流速0.5～2.5ml/min；洗脫劑使用甲醇或乙醇或丙酮，洗脫劑濃度10～100％，洗脫劑用量5～15BV，洗脫速度0.5～2.5ml/min。
5.根據(jù)權(quán)利3所述的工藝，其特征在于調(diào)節(jié)初步純化蘋果多酚的濃度、pH值和上樣體積條件，上凝膠柱，先用水洗去可溶性糖等雜質(zhì)，后調(diào)節(jié)洗脫劑濃度、洗脫流速和洗脫劑體積條件，洗脫凝膠柱吸附的蘋果多酚，洗脫的蘋果多酚經(jīng)真空濃縮，得到精制的蘋果多酚制品。
6.根據(jù)權(quán)利5所述的工藝，其特征在于過凝膠柱的蘋果多酚濃度0.5～3.0mg/ml，pH值2.0～6.0，上樣體積0.5～10％BV；洗脫劑使用甲醇或乙醇或丙酮均可，洗脫劑濃度10～100％，洗脫劑用量2～5BV，洗脫流速0.5～2.5ml/min。
7.根據(jù)權(quán)利1至6任一所述的工藝，其特征在于所用樹脂為聚苯乙烯系或聚酰胺系極性或非極性大孔吸附樹脂，凝膠為葡聚糖系凝膠；采用固定床式吸附；純化工藝采用樹脂柱床和凝膠柱床串聯(lián)，樹脂柱床可采用單組或多組集成。
8.根據(jù)權(quán)利1所述的工藝，其特征在于經(jīng)過樹脂和凝膠串聯(lián)純化的蘋果多酚濃縮液經(jīng)噴霧干燥或冷凍干燥得到蘋果多酚含量≥80％的粉狀制品。
全文摘要
一種樹脂和凝膠多極串聯(lián)集成連續(xù)分離純化蘋果多酚的新工藝，包括將蘋果多酚粗液用樹脂吸附洗脫，再用凝膠吸附洗脫，真空濃縮，得到蘋果多酚的濃縮液制品。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于將分離純化天然產(chǎn)物所單獨(dú)使用的樹脂和凝膠技術(shù)串聯(lián)集成使用，結(jié)合兩者優(yōu)點(diǎn)，達(dá)到連續(xù)生產(chǎn)高純蘋果多酚的目的，工藝簡單，操作簡便，有利于蘋果多酚的工業(yè)化連續(xù)生產(chǎn)，有利于蘋果多酚活性的保持；另外，分離純化在常溫常壓下進(jìn)行，可以節(jié)省能源；洗脫劑可以回收使用，沒有污染，屬環(huán)境友好型技術(shù)。本發(fā)明不僅可以延長蘋果產(chǎn)業(yè)鏈條，生產(chǎn)出高附加值蘋果多酚產(chǎn)品，還可優(yōu)化食品工業(yè)結(jié)構(gòu)，帶動(dòng)農(nóng)業(yè)增產(chǎn)、農(nóng)民增收、農(nóng)村持續(xù)快速發(fā)展，具有極為重要的經(jīng)濟(jì)及社會(huì)意義。
文檔編號(hào)C07H17/06GK101058570SQ200610160009
公開日2007年10月24日 申請(qǐng)日期2006年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月29日
發(fā)明者艾志錄, 王育紅, 郭娟, 潘治利, 崔建濤, 王娜 申請(qǐng)人:河南農(nóng)業(yè)大學(xué)