專利名稱：作為lxr調(diào)節(jié)劑的化合物和組合物的制作方法
相關(guān)申請(qǐng)的交叉參考本申請(qǐng)要求2004年2月11日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)US60/543,848和2004年10月27日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)US60/623,021的優(yōu)先權(quán)。將這些申請(qǐng)的全部披露內(nèi)容完整地并且為所有目的引入本文作為參考。
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明提供了化合物、包含這類化合物的藥物組合物和使用這類化合物治療或預(yù)防與肝X受體(LXR)活性相關(guān)的疾病或病癥的方法。
背景技術(shù)：
肝X受體(LXR)LXRα和LXRβ為調(diào)節(jié)幾種重要脂質(zhì)、包括膽固醇和膽汁酸代謝的核受體。盡管LXRβ在體內(nèi)普遍表達(dá)，但是LXRα在肝內(nèi)表達(dá)并且在腎、小腸、脂肪組織、脾和腎上腺中以較小程度表達(dá)。
LXR結(jié)合于ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1(ABCA1)啟動(dòng)子并且增加基因表達(dá)以產(chǎn)生ABCA1蛋白。ABCA1為一種膜結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，其參與調(diào)節(jié)膽固醇從肝外細(xì)胞外流至新生高密度脂蛋白(HDL)顆粒上。ABCA1基因中的突變導(dǎo)致低水平的HDL并且伴隨心血管疾病如動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗死和缺血性發(fā)作的危險(xiǎn)增加。LXRα和β激動(dòng)劑已經(jīng)顯示增加ABCA1基因表達(dá)，由此增加HDL膽固醇，因而同時(shí)減少膽固醇的凈吸收并且降低心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。LXR激動(dòng)劑還增量調(diào)節(jié)載脂蛋白E(apoE)和ABCG1的巨噬細(xì)胞表達(dá)，它們兩者均對(duì)細(xì)胞膽固醇外流起作用。通過(guò)增量調(diào)節(jié)ABCA1、ABCG1和/或apoE表達(dá)來(lái)刺激巨噬細(xì)胞膽固醇外流以及增加其它靶基因、包括膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白和脂蛋白脂酶的表達(dá)，LXR激動(dòng)劑可影響血漿脂蛋白。
本發(fā)明的新化合物調(diào)節(jié)LXR的活性并且因此有望用于治療LXR-相關(guān)疾病，如心血管疾病、炎癥和葡萄糖代謝障礙如胰島素抵抗和肥胖。
發(fā)明概述本發(fā)明一方面提供了式I化合物及其N-氧化物衍生物、前體藥物衍生物、被保護(hù)的衍生物、各異構(gòu)體和異構(gòu)體混合物以及這類化合物的藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物(例如水合物) 其中n選自0、1、2和3；Z選自C和S(O)；每個(gè)Y獨(dú)立地選自-CR4＝和-N＝；其中R4選自氫、氰基、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素-取代的-C1-6烷基和鹵素-取代的-C1-6烷氧基；R1選自鹵素、氰基、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素-取代的-C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷氧基和-C(O)OR4；其中R4如上所述；R2選自C6-10芳基、C5-10雜芳基、C3-12環(huán)烷基和C3-8雜環(huán)烷基；其中R2的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基可選地被1-5個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素-取代的-C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷氧基、-C(O)NR5R5、-OR5、-OC(O)R5、-NR5R6、-C(O)R5和-NR5C(O)R5；其中R5和R6獨(dú)立地選自氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素-取代的-C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷氧基、C6-10芳基-C0-4烷基、C3-8雜芳基-C0-4烷基、C3-12環(huán)烷基-C0-4烷基和C3-8雜環(huán)烷基-C0-4烷基；或R5和R6與R5和R6所連接的氮原子一起形成C5-10雜芳基或C3-8雜環(huán)烷基；其中R5的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基或R5和R6的組合可選地被1-4個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素-取代的-C1-6烷基和鹵素-取代的-C1-6烷氧基；R3選自C6-10芳基、C5-10雜芳基、C3-12環(huán)烷基和C3-8雜環(huán)烷基；其中R3的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基被1-5個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素、C1-6烷氧基、鹵素-取代的-C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷氧基、-OXR7、-OXC(O)NR7R8、-OXC(O)NR7XC(O)OR8、-OXC(O)NR7XOR8、-OXC(O)NR7XNR7R8、-OXC(O)NR7XS(O)0-2R8、-OXC(O)NR7XNR7C(O)R8、-OXC(O)NR7XC(O)XC(O)OR8、-OXC(O)NR7R9、-OXC(O)OR7、-OXOR7、-OXR9、-XR9、-OXC(O)R9、-OXS(O)0-2R9和-OXC(O)NR7CR7[C(O)R8]2；其中X選自鍵或C1-6亞烷基，其中X的任意亞甲基可以可選地被選自C(O)、NR7、S(O)2和O的二價(jià)基團(tuán)替代；R7和R8獨(dú)立地選自氫、氰基、C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷基、C2-6鏈烯基和C3-12環(huán)烷基-C0-4烷基；R9選自C6-10芳基-C0-4烷基、C5-10雜芳基-C0-4烷基、C3-12環(huán)烷基-C0-4烷基和C3-8雜環(huán)烷基-C0-4烷基；其中R9的任意烷基可以帶有被-C(O)OR10替代的氫；且R9的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基可選地被1-4個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素、C1-6烷基、C3-12環(huán)烷基、鹵素-取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素-取代的-C1-6烷氧基、-XC(O)OR10、-XC(O)R10、-XC(O)NR10R10、-XS(O)0-2NR10R10和-XS(O)0-2R10；其中R10獨(dú)立地選自氫和C1-6烷基。
本發(fā)明第二方面提供了藥物組合物，它含有式I化合物或其N-氧化物衍生物、各異構(gòu)體和異構(gòu)體混合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及一種或多種合適的賦形劑。
本發(fā)明第三方面提供了治療動(dòng)物疾病的方法，其中調(diào)節(jié)LXR活性可以預(yù)防、抑制或改善所述疾病的病理學(xué)和/或癥狀學(xué)，該方法包括對(duì)所述動(dòng)物給予治療有效量的式I化合物或其N-氧化物衍生物、各異構(gòu)體和異構(gòu)體混合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明第四方面提供了式I化合物在制備用于治療動(dòng)物疾病的藥物中的用途，其中LXR活性對(duì)所述疾病的病理學(xué)和/或癥狀學(xué)起作用。
本發(fā)明第五方面提供了制備式I化合物及其N-氧化物衍生物、前體藥物衍生物、綴合物、被保護(hù)的衍生物、各異構(gòu)體和異構(gòu)體混合物及其藥學(xué)上可接受的鹽的方法。
發(fā)明詳述定義“烷基”作為基團(tuán)和作為其它基團(tuán)例如鹵素-取代的-烷基和烷氧基的結(jié)構(gòu)部分，可以為直鏈或支鏈的。C1-6-烷氧基包括甲氧基、乙氧基等。鹵素-取代的烷基包括三氟甲基、五氟乙基等。
“芳基”指的是含有6-10個(gè)環(huán)碳原子的單環(huán)或稠合雙環(huán)芳族環(huán)組合。例如，芳基可以為苯基或萘基，優(yōu)選苯基?！皝喎蓟敝傅氖茄苌苑蓟亩r(jià)基團(tuán)?！半s芳基”如對(duì)芳基所定義，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)成員為雜原子。例如雜芳基包括吡啶基、吲哚基、吲唑基、喹喔啉基、喹啉基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯、咪唑基、苯并-咪唑基、嘧啶基、呋喃基、噁唑基、異噁唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、噻吩基等。“C6-10芳基-C0-4烷基”指的是通過(guò)亞烷基連接的如上所述芳基。例如C6-10芳基-C0-4烷基包括苯乙基、芐基等。
“環(huán)烷基”指的是含有所示環(huán)原子數(shù)的飽和或部分不飽和的單環(huán)、稠合雙環(huán)或橋連多環(huán)組合。例如，C3-10環(huán)烷基包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。“雜環(huán)烷基”指的是如本申請(qǐng)中所定義的環(huán)烷基，條件是所示環(huán)原子中的一個(gè)或多個(gè)被選自-O-、-N＝、-NR-、-C(O)-、-S-、-S(O)-或-S(O)2-的部分替代，其中R為氫、C1-4烷基或氮保護(hù)基。例如，作為本申請(qǐng)中用于描述本發(fā)明化合物的C3-8雜環(huán)烷基包括嗎啉代、吡咯烷基、哌嗪基、哌啶基、哌啶基酮、1，4-二氧雜-8-氮雜-螺[4.5]癸-8-基等。
“鹵素”(或鹵代)優(yōu)選表示氯或氟，也可以為溴或碘。
就LXR受體而言的術(shù)語(yǔ)“調(diào)節(jié)”指的是調(diào)節(jié)LXR受體及其與LXR途徑相關(guān)的生物活性(例如靶基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié))。LXR受體的調(diào)節(jié)可以為增量調(diào)節(jié)(即激動(dòng)、活化或刺激)或減量調(diào)節(jié)(即拮抗、抑制或阻滯)。LXR調(diào)節(jié)劑的作用方式可以為直接的，例如作為配體通過(guò)與LXR受體結(jié)合。調(diào)節(jié)也可以為間接的，例如通過(guò)結(jié)合和/或修飾另一種分子，否則該分子就結(jié)合和活化LXR受體，或通過(guò)刺激內(nèi)源性LXR受體配體的生成。因此，調(diào)節(jié)LXR包括LXR激動(dòng)劑配體生物活性的改變(即其結(jié)合和/或活化LXR受體的活性)或配體細(xì)胞水平的改變。
“治療”指的是減輕或緩解疾病和/或其伴隨癥狀的方法。
優(yōu)選實(shí)施方案的描述本發(fā)明提供了化合物、組合物和治療疾病的方法，其中調(diào)節(jié)LXR活性可以預(yù)防、抑制或改善所述疾病的病理學(xué)和/或癥狀學(xué)，該方法包括對(duì)所述動(dòng)物給予治療有效量的式I化合物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物為式Ia的化合物 其中n選自1、2和3；Y選自-CH＝和-N＝；R1選自鹵素、C1-6烷基和-C(O)OR4；其中R4選自氫和C1-6烷基；R2選自C6-10芳基、C5-10雜芳基、C3-12環(huán)烷基和C3-8雜環(huán)烷基；其中R2的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基可選地被1-4個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素、羥基、C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷基和-OC(O)R5；其中R5選自氫和C1-6烷基；且R3選自C6-10芳基、C5-10雜芳基、C3-12環(huán)烷基和C3-8雜環(huán)烷基；其中R3的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基被1-5個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素、羥基、C1-6烷氧基、鹵素-取代的-C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷氧基、-OXR7、-OXC(O)NR7R8、-OXC(O)NR7XC(O)OR8、-OXC(O)NR7XOR8、-OXC(O)NR7XNR7R8、-OXC(O)NR7XS(O)0-2R8、-OXC(O)NR7XNR7C(O)R8、-OXC(O)NR7XC(O)XC(O)OR8、-OXC(O)NR7R9、-OXC(O)OR7、-OXOR7、-OXR9、-XR9、-OXC(O)R9和-OXC(O)NR7CR7[C(O)R8]2；其中X選自鍵或C1-6亞烷基；R7和R8獨(dú)立地選自氫、氰基、C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷基、C2-6鏈烯基和C3-12環(huán)烷基-C0-4烷基；R9選自C6-10芳基-C0-4烷基、C5-10雜芳基-C0-4烷基、C3-12環(huán)烷基-C0-4烷基和C3-8雜環(huán)烷基-C0-4烷基；其中R9的任意烷基可以帶有被-C(O)OR10替代的氫；且R9的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基可選地被1-4個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素、C1-6烷基、C3-12環(huán)烷基、鹵素-取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素-取代的-C1-6烷氧基、-XC(O)OR10、-XC(O)R10、-XC(O)NR10R10、-XS(O)0-2NR10R10和-XS(O)0-2R10；其中R10獨(dú)立地選自氫和C1-6烷基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R1選自氟、氯、甲基和-C(O)OCH3；且R2選自苯基、環(huán)己基、環(huán)戊基、吡咯基、吡唑基、萘基、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯、噻吩基、呋喃基和吡啶基；其中R2的任意芳基、雜芳基或環(huán)烷基可選地被1-4個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自氟、氯、溴、羥基、甲基、乙基、丙基、叔丁基、氨基、二甲氨基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基和-OC(O)CH3。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R3選自苯基、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯、吡啶基、2，2-二氟-苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-基和苯并噁唑基；其中R3的任意芳基或雜芳基被1-5個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自氟、氯、溴、甲氧基、羥基、二氟甲氧基、-OCH2C(O)NH2、-OCH2C(O)OCH3、-OCH2C(O)NHCH3、-OCH2C(O)N(CH3)2、-R9、-OR9、-OCH2R9、-OCH2C(O)R9、-OCH2C(O)NHR9、-OCH2C(O)N(CH3)R9、-OCH2C(O)NHCH2R9、-OCH2CN、-OCH2C2H3、-OCH2C2H4、-O(CH2)2OH、-OCH2C(O)NH(CH2)2C(O)OC2H5、-OCH2C(O)NH(CH2)2CH2F、-OCH2C(O)NHCH2CH2F、-OCH2C(O)NH(CH2)2C(O)OH、-OCH2C(O)NHCH(CH2R9)C(O)OC2H5、-OCH2C(O)NHC(O)(CH2)2C(O)OCH3、-OCH2C(O)NH(CH2)2NHC(O)CH3、-OCH2C(O)NHCH2C(O)C2H5、-OCH2C(O)NH(CH2)2C(O)OC4H9、-OCH2C(O)NHCH2C(O)OC2H5、-OCH2C(O)NHCH[C(O)OC2H5]2、-S(O)2CH3、-OCH2C(O)NHCH2CF3、-OCH2C(O)NHCH2C(O)(CH2)2C(O)OCH3、-OCH2C(O)N(CH3)CH2C(O)OCH3、-OCH2C(O)NH(CH2)3OC2H5、-OCH2C(O)NH(CH2)3OCH(CH3)2、-OCH2C(O)NH(CH2)2SCH3、-OCH2C(O)NHCH2CH(CH3)2、-OCH2C(O)NHCH(CH3)CH2OH、-OCH2C(O)NHCH2CH(CH3)C2H5、-OCH2C(O)NHCH(CH3)C(O)OC2H5、-OCH2C(O)NHCH2CH(CH3)2和-OCH2C(O)(CH2)3OCH(CH3)2；其中R9為苯基、環(huán)丙基-甲基、異噁唑基、苯并噻唑基、呋喃基、呋喃基-甲基、四氫-呋喃基、吡啶基、4-氧代-4，5-二氫-噻唑-2-基、吡唑基、異噻唑基、1，3，4-噻二唑基、噻唑基、苯乙基、嗎啉代、嗎啉代-丙基、異噁唑基-甲基、嘧啶基、四氫-吡喃基、2-氧代-2，3-二氫-嘧啶-4-基、哌嗪基、吡咯基、哌啶基、吡嗪基、咪唑基、咪唑基-丙基、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯基、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯基-丙基、2-氧代-吡咯烷-1-基和2-氧代-吡咯烷-1-基-丙基；其中R9的任意烷基可以帶有被-C(O)OC2H5替代的氫；其中R9的任意芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基可選地被1-4個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自甲基、乙基、環(huán)丙基、甲氧基、三氟甲基、-OC(O)CH3、-COOH、-S(O)2NH2、-CH(NH2)＝NOH、-C(O)OC2H5、-CH2C(O)OH、-CH2C(O)OC2H5、-CH2C(O)OCH3、-C(O)OCH3、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3和-C(O)CH3。
下文的實(shí)施例和表I中詳細(xì)描述了優(yōu)選的式I化合物。
藥理學(xué)和應(yīng)用本發(fā)明的化合物調(diào)節(jié)LXR的活性并且照此可用于治療其中LXR對(duì)所述疾病的病理學(xué)和/或癥狀學(xué)有作用的疾病或病癥。本發(fā)明進(jìn)一步提供了本發(fā)明化合物在制備用于治療其中LXR對(duì)所述疾病的病理學(xué)和/或癥狀學(xué)有作用的疾病或病癥的藥物中的用途。LXR介導(dǎo)的疾病或病患包括炎癥；心血管疾病，包括動(dòng)脈粥樣硬化、動(dòng)脈硬化、高膽固醇血癥、高脂血癥和葡萄糖內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定障礙，包括胰島素抵抗、II型糖尿病，和肥胖。
脂蛋白代謝是一種組成如下的動(dòng)態(tài)過(guò)程從肝產(chǎn)生富含甘油三酯和膽固醇的顆粒作為極低密度脂蛋白(VLDL)、再由肝修飾這些血漿內(nèi)的脂蛋白顆粒(VLDL至中間密度(IDL)至低密度脂蛋白(LDL))以及從血漿中清除所述顆粒。該過(guò)程提供了甘油三酯類和游離膽固醇向體細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)。膽固醇的逆行轉(zhuǎn)運(yùn)即所建議的機(jī)制，通過(guò)該機(jī)制過(guò)量的膽固醇被從肝組織外部返回到肝中。
該過(guò)程通過(guò)高密度脂蛋白(HDL)膽固醇進(jìn)行。脂蛋白(VLDL、HDL)從肝中產(chǎn)生、血漿內(nèi)顆粒(所有的)的修飾和隨后清除返回到肝的組合是血漿中穩(wěn)態(tài)膽固醇濃度的原因。本發(fā)明的化合物通過(guò)增加膽固醇自動(dòng)脈的外流而增加膽固醇的逆行轉(zhuǎn)運(yùn)。本發(fā)明包括本發(fā)明化合物在制備用于增加膽固醇逆行轉(zhuǎn)運(yùn)的藥物中的用途。另外，本發(fā)明提供了用于抑制膽固醇吸收的化合物和本發(fā)明的化合物在制備用于抑制凈膽固醇吸收的藥物中的用途。
本發(fā)明的化合物還可以用于預(yù)防或治療炎癥和神經(jīng)變性疾病或神經(jīng)病癥。因此，本發(fā)明還提供了預(yù)防或治療炎癥的方法和預(yù)防或治療神經(jīng)變性疾病或神經(jīng)病癥的方法，特別是以CNS中的神經(jīng)元變性、神經(jīng)元損傷或可塑性受損或炎癥為特征的神經(jīng)變性疾病或病癥。特征在于腦中神經(jīng)元變性、炎癥、膽固醇和脂質(zhì)異常且因此得益于神經(jīng)元生長(zhǎng)和/或修復(fù)的特定疾病或病患包括中風(fēng)、阿爾茨海默病、額顳性癡呆(tauopathy)、外周神經(jīng)病、帕金森病、帶有向心性多層的圓形小體的癡呆、亨廷頓舞蹈病、肌萎縮性側(cè)索硬化和多發(fā)性硬化和尼-皮病。特征在于神經(jīng)元變性和/或可塑性受損的疾病或病患包括精神病，如精神分裂癥和抑郁癥。特征在于神經(jīng)元損傷的特定疾病或病患包括那些與腦和/或脊髓損傷、包括創(chuàng)傷相關(guān)的病患。此外，本發(fā)明的化合物可以用于治療或預(yù)防各種具有炎性成分的疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、銀屑病、哮喘等。
LXR激動(dòng)劑改善葡萄糖耐量并且增強(qiáng)glut4表達(dá)(12/23/2002提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)US60/436,112；12/22/2002提交的美國(guó)專利申請(qǐng)US10/745,334)。存在肝和脂肪組織中葡萄糖代謝所涉及基因的協(xié)同調(diào)節(jié)。在肝中，LXR激動(dòng)劑抑制對(duì)肝糖元異生而言重要的幾種基因的表達(dá)，例如PGC-1α、烯醇丙酮酸磷酸羧激酶(PEPCK)和葡糖-6-磷酸酶的表達(dá)。抑制這些糖元異生基因伴隨葡糖激酶表達(dá)的誘導(dǎo)，這種酶可促進(jìn)肝葡萄糖利用。還發(fā)現(xiàn)脂肪組織中g(shù)lut4 mRNA水平被LXR激動(dòng)劑增量調(diào)節(jié)并且在體外3T3-L1脂肪細(xì)胞中的葡萄糖攝取被增強(qiáng)。
按照這些發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供了增強(qiáng)受試者細(xì)胞中g(shù)lut4表達(dá)的方法，通過(guò)對(duì)所述受試者給予本發(fā)明的化合物來(lái)進(jìn)行。本發(fā)明還提供了治療糖尿病和相關(guān)病癥如肥胖或高血糖的方法，通過(guò)對(duì)受試者給予有效量的本發(fā)明化合物以改善所述疾病的癥狀來(lái)進(jìn)行。例如，II型糖尿病適合于用本發(fā)明的方法治療。通過(guò)增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)胰島素和葡萄糖攝取的敏感性，施用本發(fā)明的化合物還可以治療其他特征在于胰島素機(jī)能障礙(例如抵抗、失活或缺乏)和/或葡萄糖轉(zhuǎn)入細(xì)胞不足的疾病。
本發(fā)明的化合物還調(diào)節(jié)在肝糖元異生中起重要作用的許多基因的表達(dá)水平。因此，本發(fā)明進(jìn)一步提供了通過(guò)調(diào)節(jié)這些基因(例如PGC-1和PEPCK)的表達(dá)來(lái)減少受試者糖元異生的方法。
在胰腺中，LXR活化通過(guò)調(diào)節(jié)胰腺β-細(xì)胞中葡萄糖和脂質(zhì)的代謝刺激胰島素分泌，從而提示了LXR抗糖尿病作用的另一種機(jī)制。LXR調(diào)節(jié)劑由此還可以通過(guò)增加胰島素從胰腺中分泌而調(diào)節(jié)葡萄糖耐量。
按照上述描述，本發(fā)明進(jìn)一步提供了在需要這類治療的受試者中預(yù)防或治療上述任意疾病或病癥的方法，該方法包括對(duì)所述受試者給予治療有效量的(參見下文中的“給藥和藥物組合物”部分)式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。對(duì)任意上述用途而言，所需的劑量隨給藥方式、所治療的特定疾病和所需作用而異。
給藥和藥物組合物一般而言，本發(fā)明化合物以治療有效量、經(jīng)由本領(lǐng)域中已知的任意常用和可接受的方式單獨(dú)或與一種或多種治療劑組合給予。治療有效量可以隨疾病的嚴(yán)重程度、受試者年齡和相對(duì)健康情況、所用化合物的功效和其它因素而寬泛變化。一般而言，在約0.03-2.5mg/kg/體重的每日劑量下獲得令人滿意的全身效果。在較大哺乳動(dòng)物例如人中的適用每日劑量在約0.5mg-約100mg范圍內(nèi)，例如，以至多每日4次的分次劑量或以延緩形式便利地給藥。用于口服給藥的合適的單位劑型包含約1-50mg活性成分。
本發(fā)明的化合物可以通過(guò)任意常規(guī)的途徑作為藥物組合物給藥，特別是通過(guò)腸，例如口服，例如為片劑或膠囊形式；或通過(guò)胃腸外，例如為可注射溶液或混懸液形式；局部，例如為洗劑、凝膠、軟膏劑或霜?jiǎng)┬问交蛞员怯没蛩▌┬问交蛭胄问?。包括游離形式或藥學(xué)上可接受鹽形式的本發(fā)明化合物與至少一種藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑的藥物組合物可以通過(guò)常規(guī)方式、經(jīng)混合、制?；虬路椒ㄖ苽?。例如，口服組合物可以為片劑或明膠膠囊，它們包含活性組分以及a)稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨醇、纖維素和/或甘氨酸；b)潤(rùn)滑劑，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其鎂或鈣鹽和/或聚乙二醇；就片劑而言還包括c)粘合劑，例如硅酸鎂鋁、淀粉糊、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要，還有d)崩解劑，例如淀粉、瓊脂、藻酸或其鈉鹽或泡騰混合物；和/或e)吸收劑、著色劑、矯味劑和增甜劑?？勺⑸浣M合物可以為水性等滲溶液或混懸液，且栓劑可以由脂肪乳劑或混懸液制備。這些組合物可以為無(wú)菌的和/或含有佐劑，如防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤(rùn)劑或乳化劑、溶解促進(jìn)劑、用于調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。此外，它們還可以含有其它治療上有價(jià)值的物質(zhì)。用于透皮應(yīng)用的合適的制劑包括有效量的本發(fā)明化合物與載體。載體可以包括可吸收的藥學(xué)上可接受的溶劑以幫助通過(guò)宿主皮膚。例如，透皮裝置為繃帶形式，包括裱背部件(backingmember)、含有可選地混有載體的化合物的貯器、可選的速率控制屏障以在延長(zhǎng)時(shí)間期限內(nèi)以受控和預(yù)定速率將化合物遞送至宿主皮膚和使裝置與皮膚固定的用具。還可以使用基質(zhì)透皮制劑。用于局部應(yīng)用、例如施用在皮膚和眼部的合適的制劑優(yōu)選為本領(lǐng)域眾所周知的水溶液、軟膏劑、霜?jiǎng)┗蚰z。這類制劑可以含有增溶劑、穩(wěn)定劑、張力增強(qiáng)劑、緩沖劑和防腐劑。
本發(fā)明的化合物可以以治療有效量與一種或多種治療劑共同給藥(藥物組合)。例如，使用其它用于治療心血管、炎癥和/或神經(jīng)變性疾病的物質(zhì)，可以發(fā)生協(xié)同作用。這類化合物的實(shí)例包括貝特類(fibrates)、TZD、二甲雙胍等。如果將本發(fā)明的化合物與其它療法共同給予，那么共同給予的化合物的劑量當(dāng)然隨共同使用的藥物的類型、所用的具體藥物、所治療的疾病等而異。
本發(fā)明還提供了藥物組合，例如藥盒，包括a)為本文披露的本發(fā)明化合物的第一種活性劑，它為游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式；和b)至少一種共同使用的活性劑(co-agent)。該藥盒包括其給藥說(shuō)明書。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“共同給藥”或“聯(lián)合給藥”等指的是包括對(duì)單一患者給予選擇的治療劑并且用以包括其中活性劑不一定通過(guò)相同給藥途徑或同時(shí)給予的治療方案。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“藥物組合”指的是混合或合并一種以上活性組分而得到的產(chǎn)品并且包括固定和非固定活性組分組合的產(chǎn)品。術(shù)語(yǔ)“固定組合”指的是以單一實(shí)體或劑量同時(shí)對(duì)患者給予活性成分，例如式I化合物和共同使用的活性劑。術(shù)語(yǔ)“非固定組合”指的是活性成分、例如式I化合物和共同使用的活性劑作為單獨(dú)的實(shí)體同時(shí)、伴隨或沒(méi)有具體的時(shí)間限制依次對(duì)患者給予，其中這類給藥在患者體內(nèi)提供了治療有效水平的2種化合物。后者還可應(yīng)用于雞尾酒療法，例如給予3種或3種以上活性成分。
制備本發(fā)明化合物的方法本發(fā)明還包括制備本發(fā)明化合物的方法。在所述的反應(yīng)中，如果在終產(chǎn)物中需要，可能有必要保護(hù)反應(yīng)性官能基，例如羥基、氨基、亞氨基、硫代或羧基，以便避免它們參與不需要的反應(yīng)?？梢园凑諛?biāo)準(zhǔn)實(shí)踐使用常用的保護(hù)基，例如，參見T.W.Greene和P.G.M.Wuts在“ProtectiveGroups in Organic Chemistry”，John Wiley和Sons，1991中所述。
式I化合物可以通過(guò)下列反應(yīng)方案I中的進(jìn)程制備反應(yīng)方案I 其中n、Y、Z、R1、R2和R3如發(fā)明概述中所定義。式I化合物可以如下制備使式2化合物與式3化合物反應(yīng)而生成式4化合物，使式4化合物進(jìn)一步與式5或6的化合物反應(yīng)。全部反應(yīng)在合適的溶劑(例如二氯甲烷等)和合適的堿(例如DIEA等)存在下進(jìn)行。該反應(yīng)在約5-約30℃的溫度下進(jìn)行并且持續(xù)達(dá)20小時(shí)完成。
制備本發(fā)明化合物的其它方法通過(guò)使化合物的游離堿形式與藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸反應(yīng)，可以將本發(fā)明的化合物制成藥學(xué)上可接受的酸加成鹽?；蛘?，通過(guò)使化合物的游離酸形式與藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)堿或有機(jī)堿反應(yīng)，可以制備本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的堿加成鹽?；蛘撸景l(fā)明化合物的鹽形式可以使用原料或中間體的鹽制備。
本發(fā)明化合物的游離酸或游離堿形式可以分別由相應(yīng)的堿加成鹽或酸加成鹽形式制備。例如，通過(guò)用合適的堿(例如氫氧化銨溶液、氫氧化鈉等)處理，可以將本發(fā)明化合物的酸加成鹽形式轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的游離堿。通過(guò)用合適的酸(例如鹽酸等)處理，可以將本發(fā)明化合物的堿加成鹽形式轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的游離酸。
通過(guò)在0-80℃用還原劑(例如硫、二氧化硫、三苯膦、硼氫化鋰、硼氫化鈉、三氯化磷、三溴化磷等)在合適的惰性有機(jī)溶劑(例如乙腈、乙醇、二噁烷水溶液等)中處理，可以由本發(fā)明化合物的N-氧化物制備本發(fā)明化合物的未氧化形式。
通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法可以制備本發(fā)明化合物的前體藥物衍生物(例如進(jìn)一步的詳細(xì)描述參見Saulnier等，(1994)，Bioorganic andMedicinal Chemistry Letters，Vol.4，p.1985)。例如，通過(guò)使本發(fā)明的未衍生的化合物與合適的氨基甲?；噭?例如1，1-酰氧基烷基carbanochloridate、碳酸對(duì)-硝基苯酯等)反應(yīng)，可以制備合適的前體藥物。
通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方式可以制備本發(fā)明化合物的被保護(hù)衍生物。適合于生成保護(hù)基及其除去技術(shù)的詳細(xì)描述可見于T.W.Greene，“Protecting Groups in Organic Chemistry”，第3版，John Wiley和Sons，Inc.，1999中。
本發(fā)明的化合物可以在本發(fā)明的方法中便利地作為溶劑合物(例如水合物)制備或形成。通過(guò)使用有機(jī)溶劑如二氧芑、四氫呋喃或甲醇從水/有機(jī)溶劑混合物中重結(jié)晶，可以便利地制備本發(fā)明化合物的水合物。
本發(fā)明的化合物可以如下制成其各立體異構(gòu)體通過(guò)使化合物的外消旋混合物與旋光活性拆分試劑反應(yīng)，以便形成非對(duì)映體化合物對(duì)，分離非對(duì)映體并且回收光學(xué)純的對(duì)映體。盡管使用本發(fā)明化合物的共價(jià)非對(duì)映體衍生物可以拆分對(duì)映體，但是優(yōu)選可解離的復(fù)合物(例如結(jié)晶非對(duì)映體鹽)。非對(duì)映體具有不同的物理特性(例如熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、溶解度、反應(yīng)性等)并且可利用這些差異容易地分離。非對(duì)映體可以通過(guò)色譜法或優(yōu)選通過(guò)基于溶解度不同的分離/拆分技術(shù)分離。然后通過(guò)不會(huì)導(dǎo)致外消旋化的任意實(shí)用方式回收光學(xué)純的對(duì)映體與拆分試劑。外消旋混合物可以使用手性HPLC拆分。用于從外消旋混合物中拆分化合物的立體異構(gòu)體的技術(shù)的更為詳細(xì)的描述可見于Jean Jacques，Andre Collet，Samuel H.Wilen，“Enantiomers，Racemates and Resolutions”，John Wiley和Sons，Inc.，1981。
概括而言，式I化合物可以通過(guò)以下方法制備，該方法包括(a)反應(yīng)方案I的方法；和(b)可選地將本發(fā)明的化合物轉(zhuǎn)化成藥學(xué)上可接受的鹽；(c)可選地將本發(fā)明化合物的鹽形式轉(zhuǎn)化成非鹽形式；(d)可選地將本發(fā)明化合物的未氧化形式轉(zhuǎn)化成藥學(xué)上可接受的N-氧化物；(e)可選地將本發(fā)明化合物的N-氧化物形式轉(zhuǎn)化成其未氧化形式；(f)可選地從異構(gòu)體混合物中拆分本發(fā)明化合物的各異構(gòu)體；(g)可選地將本發(fā)明化合物的未衍生形式轉(zhuǎn)化成藥學(xué)上可接受的前體藥物衍生物；(h)可選地將本發(fā)明化合物的前體藥物衍生物轉(zhuǎn)化成其非衍生形式。
如果原料的制備沒(méi)有特別地描述，則這些化合物是已知的或可以按照與本領(lǐng)域公知方法類似的方式或下文實(shí)施例中披露的方式制備。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解上述轉(zhuǎn)化僅是制備本發(fā)明化合物的代表方法，可以類似地使用其它眾所周知的方法。
實(shí)施例通過(guò)下列實(shí)施例進(jìn)一步舉例說(shuō)明本發(fā)明但不起限定作用，這些實(shí)施例用于解釋本發(fā)明通式I化合物的制備。
實(shí)施例15-(4-氯-苯基)-2-(2-二氟甲氧基-苯基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2-氟-苯基)-甲酮
4-氯-硫代苯甲酸酰肼的制備 將一半體積的KOH(1.06mol)在400mL EtOH中的溶液用H2S飽和。將該溶液再與另一半KOH溶液合并，將所得溶液在45-50℃和N2環(huán)境中攪拌，然后加入4-氯三氯甲苯(0.25mol)，加入的速率使溫度保持在50-60℃(～1.5小時(shí))。將該深紅色混合物回流30分鐘，然后用氯乙酸(0.35mol)和NaHCO3(0.35mol)在H2O(200mL)中的溶液處理。將該反應(yīng)混合物在回流狀態(tài)下再加熱另外5分鐘。從粘性樹脂中潷析所得的棕紅色溶液，用濃HCl酸化至pH＝1。該紅色溶液在結(jié)晶時(shí)產(chǎn)生(4-氯-硫代苯甲?；蚧?-乙酸1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.75(d，2H)，7.15(d，2H)，4.04(s，2H)。
向(4-氯-硫代苯甲酰基硫基)-乙酸(8.31mmol)在9mL NaOH(1N)中的混合物中加入肼水合物(36.7mL)。然后向該溶液中加入冰醋酸(2.7mL)，劇烈攪拌該混合物。用CH2Cl2稀釋該反應(yīng)混合物，用MgSO4干燥有機(jī)層，得到4-氯-硫代苯甲酸酰肼LC/MS(ES+)186.9(M+1)+。
向4-氯-硫代苯甲酸酰肼(0.107mmol)在CH2Cl2(1mL)中的不均勻混合物中加入2-二氟甲氧基-苯甲醛(0.128mmol)和DIEA(0.128mmol)。10分鐘后，該混合物變均勻，通過(guò)TLC和LCMS證實(shí)反應(yīng)完成，得到5-(4-氯-苯基)-2-(2-二氟甲氧基-苯基)-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑，不蒸發(fā)溶劑將其用于下一步。
向5-(4-氯-苯基)-2-(2-二氟甲氧基-苯基)-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑的溶液中加入DIEA(0.16mmol)和2-氟苯甲酰氯(0.16mmol)，將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?2小時(shí)。在蒸發(fā)溶劑后，通過(guò)自動(dòng)色譜法純化殘余物(己烷/EtOAc)，得到5-(4-氯-苯基)-2-(2-二氟甲氧基-苯基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2-氟-苯基)-甲酮1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.39-7.35(m，1H)，7.34-7.29(m，4H)，7.25(dd，J1＝7.8Hz，J2＝1.2Hz，1H)，7.19-7.13(m，3H)，7.04(m，1H)，6.97(m，2H)，6.50(dd，J1＝71.6Hz，J2＝71.2Hz，1H)。LC/MS(ES+)462.8(M+1)+。
實(shí)施例22-{2-[5-(4-氯-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基-苯氧基]-乙酰胺 向4-氯-硫代苯甲酸酰肼(1.3mmol)在12mL CH2Cl2中的不均勻混合物中加入2-(2-甲?；窖趸?乙酰胺(1.53mmol)和DIEA(1.53mmol)。10分鐘后，該混合物變均勻，通過(guò)TLC和LCMS證實(shí)反應(yīng)完成，得到2-(2-(5-(4-氯苯基)-2，3-二氫-1，3，4-噻二唑-2-基)苯氧基)-乙酰胺，照此不蒸發(fā)溶劑將其用于下一步。
向2-(2-(5-(4-氯苯基)-2，3-二氫-1，3，4-噻二唑-2-基)苯氧基)乙酰胺的溶液中加入DIEA(2.0mmol)和2，4，6-三-氟苯甲酰氯(2.0mmol)，將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?2小時(shí)。在蒸發(fā)溶劑后，通過(guò)自動(dòng)色譜法純化殘余物(己烷/EtOAc)，得到2-{2-[5-(4-氯-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯氧基}-乙酰胺1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.43(s，1H)，7.27(d，J＝8.8，2H)，7.15(m，2H)，7.14(d，J＝8.4Hz，2H)，6.99(bs，1H)，6.84(t，J＝6.4Hz，3H)，6.66(d，J＝8.4Hz，1H)，6.53(t，J＝8.0Hz，2H)，5.29(bs，1H)，4.47(d，J＝1.6Hz，2H)；LC/MS(ES+)506.2(M+1)+。
實(shí)施例32-{2-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲酰基)-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-6-甲氧基-苯氧基}-乙酰胺 4-氟苯硫代酰肼三氟乙酸鹽或鹽酸鹽的制備 向4-氟苯甲酸(35.7mmol)在72mL DMF和THF(1∶1)混合物中的溶液中加入肼基甲酸叔丁酯(37.5mmol)、EDC(39.3mmol)和N，N-二甲氨基吡啶(0.54mmol)。10分鐘后，該混合物變均勻，持續(xù)攪拌3小時(shí)，直到通過(guò)TLC和LC/MS證實(shí)反應(yīng)完成。將該反應(yīng)混合物傾入冰。在加入乙醚后，分離有機(jī)層。用硫酸氫鈉、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉溶液洗滌有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，濃縮，得到N′-(4-氟-苯甲?；?-肼甲酸叔丁酯MS(ES+)255(M+1)+。
向N′-(4-氟-苯甲?；?-肼甲酸叔丁酯(11.1mmol)在10mL無(wú)水THF中的混合物中加入Lawesson′s試劑(11.6mmol)，將該混合物在80℃微波爐中加熱20分鐘。濃縮該反應(yīng)混合物，通過(guò)使用己烷/EtOAc的自動(dòng)化柱色譜法純化1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.8(bs，1H)，9.05(bs，1H)；8.0-7.97(m，2H)，7.31(t，J＝8.4Hz，2H)，1.73(s，9H).LC/MS(ES+)271(M+1)+。
三氟乙酸鹽向N′-(4-氟-硫代苯甲?；?-肼甲酸叔丁酯(1.97mmol)在CH2Cl2中的溶液中加入三氟乙酸(3mL)和茴香硫醚(2.7mmol)。將該混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。蒸發(fā)溶劑后，通過(guò)自動(dòng)化柱色譜法純化該混合物(己烷/EtOAc)，得到4-氟-硫代苯甲酸酰肼三氟乙酸鹽1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.5(bs，3H)，7.8-7.76(m，2H)，7.05(t，J＝8.4Hz，2H)；LC/MS(ES+)171(M+1)+。
鹽酸鹽向N′-(4-氟-硫代苯甲?；?-肼甲酸叔丁酯(18.5mmol)中加入含HCl(4N)的1，4-二噁烷(185mmol)。將該混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。加入己烷以進(jìn)一步沉淀產(chǎn)物。過(guò)濾出產(chǎn)物，得到4-氟-硫代苯甲酸酰肼鹽酸鹽1HNMR(400MHz，CH3OD)δ7.8-7.75(m，2H)，7.09(t，J＝11.6Hz，2H).LC/MS(ES+)171(M+1)+。
3-甲氧基-2-三異丙基硅烷氧基-苯甲醛的制備 將O-香草醛(26.3mmol)與TIPSCl(39.6mmol)和咪唑(78.7mmol)在微波容器內(nèi)混合。將該混合物在100℃微波中加熱3分鐘。用EtOAc(100mL)稀釋油狀混合物，用NaHSO4(1M)(2×50mL)和鹽水(50mL)稀釋。用MgSO4干燥后，濃縮濾液。通過(guò)二氧化硅快速色譜法純化所得粗混合物(2％EtOAc/己烷)，得到3-甲氧基-2-三異丙基硅烷氧基-苯甲醛，為油狀物1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.6(s，1H)，7.38(dd，J1＝1.6Hz，J2＝8Hz，1H)，7.04(dd，J1＝1.6Hz，J2＝8Hz，1H)，6.93(td，J1＝8Hz，J2＝0.8Hz，1H)，3.82(s，3H)，1.34-1.25(m，3H)，1.1(s，18H)；LC/MS(ES+)309(M+1)+。
向4-氟-硫代苯甲酸酰肼鹽(2.06mmol)在8mL CH2Cl2中的不均勻混合物中加入3-甲氧基-2-三異丙基硅烷氧基-苯甲醛(2.27mmol)和DIEA(4.13mmol)。15分鐘后，該混合物變均勻，通過(guò)TLC和LCMS證實(shí)反應(yīng)完成，得到5-(4-氟-苯基)-2-(3-甲氧基-2-三異丙基硅烷氧基-苯基)-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑，不蒸發(fā)溶劑將其用于下一步。
向5-(4-氟-苯基)-2-(3-甲氧基-2-三異丙基硅烷氧基-苯基)-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑的溶液中加入DIEA(3.09mmol)和2，4，6-三-氟苯甲酰氯(3.09mmol)，將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?2小時(shí)。濃縮后，通過(guò)自動(dòng)化柱色譜法純化殘余物(己烷/EtOAc)，得到[5-(4-氟-苯基)-2-(3-甲氧基-2-三異丙基硅烷氧基-苯基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮。
向[5-(4-氟-苯基)-2-(3-甲氧基-2-三異丙基硅烷氧基-苯基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮(32.3mol)中加入含四丁基氟化銨(1M)(48.5mol)的四氫呋喃。將該混合物攪拌1小時(shí)，加入2-溴-乙酰胺(48.5μmol)。將該混合物在室溫?cái)嚢?2小時(shí)。蒸發(fā)溶劑后，通過(guò)制備型LC/MS(200-100％MeCN/H2O)純化殘余物，得到2-{2-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-6-甲氧基-苯氧基-乙酰胺1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.63-7.62(m，2H)，7.57(s，1H)，7.22-7.12(m，3H)，7.02(dd，J1＝8.4Hz，J2＝2Hz，2H)，6.9(bs，1H)，6.85(t，J＝8.4Hz，2H)，6.10(s，1H)，4.83(d，J＝15.2Hz，1H)，4.68(d，J＝15.2Hz，1H)，3.94(s，3H)。
實(shí)施例43-{3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-2-甲氧基-苯氧基甲基}-苯甲酸甲酯 2-甲氧基-3-三異丙基硅烷氧基-苯甲醛的制備
將愈創(chuàng)木酚(2-甲氧基-苯酚，34.6mmol)與TIPSCl(51.9mmol)和咪唑(103.8mmol)在試管中混合。將該混合物在180℃微波爐中加熱3分鐘。用EtOAc(100mL)稀釋油狀混合物，用NaHSO4(1M)(2×50mL)和鹽水(50mL)洗滌。用無(wú)水Na2SO4干燥后，濃縮濾液。通過(guò)二氧化硅快速色譜法純化所得的粗混合物(2％EtOAc/己烷)，得到三異丙基-(2-甲氧基-苯氧基)-硅烷，為無(wú)色油狀物。產(chǎn)率69％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.8-6.89(m，4H)，3.8(s，3H)，1.22-1.28(m，3H)，1.1(s，9H)，1.08(s，9H).LC/MS(ES+)(M+1)，281.2。Rf＝0.8(5％EtOAc/己烷)。(注意或者可以采用常規(guī)加熱，在這種情況下NMP為所選溶劑)。
將nBuLi(在己烷中2.5M)(36mmol)與TMEDA(36mmol)在0℃于干燥的圓底燒瓶中混合10分鐘。向上述混合物中加入三異丙基-(2-甲氧基-苯氧基)-硅烷(24mmol)在25mL無(wú)水THF中的溶液。在2小時(shí)內(nèi)通過(guò)除去冰浴將該混合物溫至室溫。然后在室溫將該淡黃色溶液轉(zhuǎn)入另一含有7.5mLDMF的干燥容器中。將該混合物攪拌過(guò)夜。向該混合物中加入HCl(1M)以使反應(yīng)猝滅。用EtOAc(100mL)稀釋該混合物，用HCl(1M)(2×100mL)和鹽水(50mL)洗滌，最終用無(wú)水Na2SO4干燥。通過(guò)二氧化硅快速色譜法進(jìn)行純化(5％EtOAc/己烷)，得到3-甲氧基-2-三異丙基硅烷氧基-苯甲醛，為無(wú)色油狀物，其需要在低溫貯存1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.4(s，1H)，7.42(dd，J1＝7.7Hz，J2＝1.7Hz，1H)，7.67(d，J1＝8Hz，J2＝1.7Hz，1H)，7.04(t，J＝8.4Hz，1H)，3.96(s，3H)，1.26-1.35(m，3H)，1.13(s，9H)，1.12(s，9H)。LC/MS(ES+)(M+1)309.2。Rf＝0.4(5％EtOAc/己烷)。
在室溫和干燥的圓底燒瓶中，將N′-(4-氟-硫代苯甲?；?-肼甲酸叔丁酯(1.23mmol)溶于5mL CH2Cl2。在室溫向該溶液中加入TFA(2mL)而除去酯基。如LC/MS所測(cè)定，30分鐘后反應(yīng)完成。在真空中除去溶劑。在真空管上將所得油狀物干燥30分鐘，溶于1mL無(wú)水CH2Cl2。將該溶液加入到3-甲氧基-2-三異丙基硅烷氧基-苯甲醛(1.23mmol)和DIEA(4.9mmol)在1mL無(wú)水CH2Cl2的混合物中。使混合物在室溫和有分子篩存在下放置5分鐘。加入2，4，6-三氟苯甲酰氯(1.6mmol)，將該反應(yīng)混合物在室溫保持16小時(shí)。向該混合物中加入HCl(1M)(10mL)以使反應(yīng)猝滅。用EtOAc(50mL)稀釋該混合物，用HCl(1M)(2×10mL)和鹽水(50mL)洗滌，用無(wú)水Na2SO4干燥。通過(guò)二氧化硅快速色譜法進(jìn)行純化(5％EtOAc/己烷)，得到[5-(4-氟-苯基)-2-(2-甲氧基-3-三異丙基硅烷氧基-苯基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮，為無(wú)色油狀物1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.54(dd，J1＝8.8Hz，J2＝5.3Hz，2H)，7.51(s，1H)，7.04(t，J＝8.6Hz，2H)，6.95(t，J＝7.8Hz，1H)，6.87(t，J＝8.8Hz，2H)，6.77(t，J＝7.9Hz，2H)，4.03(s，3H)，1.27-1.36(m，3H)，1.14(dd，J1＝J2＝6.3Hz，18H)；LC/MS(ES+)(M+1)309.2。Rf＝0.4(5％EtOAc/己烷)。
在室溫用四丁基氟化銨(在THF中1M)(0.04mmol)將[5-(4-氟-苯基)-2-(2-甲氧基-3-三異丙基硅烷氧基-苯基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮(0.02mmol)處理30分鐘。然后加入3-溴甲基-苯甲酸甲酯(0.04mmol)。30分鐘后，如LC/MS所測(cè)定，反應(yīng)完成。用乙腈稀釋該混合物，通過(guò)制備型LC/MS純化(20-100％MeCN/H2O)，蒸發(fā)溶劑后，得到3-{3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-2-甲氧基-苯氧基甲基}-苯甲酸甲酯，為白色固體1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.14(s，1H)，8.02(d，J＝7.8Hz，1H)，7.67(d，J＝7.7Hz，1H)，7.47-7.55(m，4H)，7.01-7.07(m，3H)，6.94(t，J＝8.3Hz，2H)，6.77(t，J＝8.5Hz，2H)，5.16(s，2H)，4.07(s，3H)，3.94(s，3H)。LC/MS(ES+)(M+1)610.9。
實(shí)施例54-{3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-2-甲氧基-苯氧基甲基}-苯甲酸
在室溫用四丁基氟化銨(在THF中1M)(0.04mmol)將[5-(4-氟-苯基)-2-(2-甲氧基-3-三異丙基硅烷氧基-苯基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮(0.02mmol)處理30分鐘。通過(guò)/MS分析證實(shí)反應(yīng)完成。加入4-溴甲基-苯甲酸甲酯(0.04mmol)。30分鐘后，如LC/MS測(cè)定，反應(yīng)完成。用MeOH(0.5mL)稀釋后，加入LiOH(1M)(0.5mL)。攪拌1小時(shí)后，從反應(yīng)混合物中除去溶劑。向殘余物中加入MeOH/DMSO的混合物，過(guò)濾所得溶液。通過(guò)制備型LC/MS(20-100％MeCN/H2O)純化澄清溶液，除去溶劑后，得到4-{3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-2-甲氧基-苯氧基甲基}-苯甲酸，為白色固體1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.14(d，J＝8Hz，2H)，7.53-7.58(m，5H)，7.03-7.05(m，3H)，6.94-6.95(m，2H)，6.77(t，J＝8.2Hz，2H)，5.2(s，2H)，4.08(s，3H)；LC/MS(ES+)(M+1)597.3。
實(shí)施例62-{2-[5-(4-氯-苯基-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基)-苯氧基]-N-甲基-乙酰胺
將(2-甲?；?苯氧基)-乙酸(0.5mmol)溶于1mL CH2Cl2。加入草酰氯(0.066mL)與1滴DMF。1小時(shí)后，從該混合物中除去溶劑。將所得殘余物溶于1mL CH2Cl2，在環(huán)境溫度加入到1mL在THF中的NH2Me(2M)中。攪拌16小時(shí)后，除去溶劑，通過(guò)制備型TLC(10％MeOH/EtOAc)純化該混合物，得到產(chǎn)物2-(2-甲酰基-苯氧基)-N-甲基-乙酰胺，為黃白色固體LC/MS(ES+)194.1(M+1)+。
將2-(2-甲?；?苯氧基)-N-甲基-乙酰胺(0.0311mmol)加入到含4-氯-硫代苯甲酸酰肼(0.0342mmol)的0.1mL CH2Cl2中。10分鐘后，加入DIEA(0.05mL)和2，4，6-三氟-苯甲酰氯(0.0467mmol)。將該混合物保持在室溫過(guò)夜。除去溶劑后，通過(guò)制備型HPLC(20-100％MeCN/H2O梯度)純化殘余物，得到產(chǎn)物2-{2-[5-(4-氯-苯基-3-(2，4，6-三氟-苯甲酰基)-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基)-苯氧基]-N-甲基-乙酰胺，為灰白色固體LC/MS(ES+)520.1(M+1)+。
實(shí)施例7N-環(huán)丙基甲基-2-{3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-2-甲氧基-苯氧基}-乙酰胺 在室溫用四丁基氟化銨(在THF中1M)(4.97mmol)將如實(shí)施例4中所述制備的[5-(4-氟-苯基)-2-(2-甲氧基-3-三異丙基硅烷氧基-苯基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮(3.31mmol)處理40分鐘。然后加入溴乙酸甲酯(4.97mmol)。12小時(shí)后，如LC/MS測(cè)定，反應(yīng)完成。通過(guò)二氧化硅快速色譜法(25％EtOAc/己烷)進(jìn)行純化，得到{3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-2-甲氧基-苯氧基}-乙酸甲酯1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.52(m，3H)，7.04(m，3H)，6.95(dd，J1＝8.4Hz，J2＝1.6Hz，1H)，6.82(dd，J1＝8Hz，J2＝1.6Hz)，6.76(m，2H)，4.7(s，2H)，4.1(s，3H)；LC/MS(ES+)505.1(M+1)+。
向{3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-2-甲氧基-苯氧基}-乙酸甲酯(2.47mmol)在30mL THF和MeOH(3∶2)的混合物中的溶液中加入LiOH(1M)(25mL)。在攪拌12小時(shí)后，如LC/MS測(cè)定，反應(yīng)完成。用乙酸乙酯和水稀釋該反應(yīng)，用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，從該反應(yīng)混合物中除去溶劑，得到{3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-2-甲氧基-苯氧基}-乙酸LC/MS(ES+)521.1(M+1)+。
向{3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-2-甲氧基-苯氧基}-乙酸(0.029mmol)在1mL DMF中的溶液中加入DIEA(0.058mmol)、HATU(0.058mmol)和環(huán)丙基甲胺(0.058mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌12小時(shí)。通過(guò)制備型LC/MS(20-100％MeCN/H2O)純化該混合物，得到N-環(huán)丙基甲基-2-{3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基}-2-甲氧基-苯氧基}-乙酰胺1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.55-7.51(m，3H)，7.12-6.99(m，4H)，6.9(d，J＝7.6Hz，2H)，6.77(t，J＝8.4Hz，2H)，4.56(s，2H)，4.08(s，3H)，3.26-3.2(m，2H)，1.02-0.99(m，1H)，0.57-0.52(m，2H)，0.25(m，2H)；LC/MS(ES+)574.1(M+1)+。
實(shí)施例82-{2-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯氧基-N-(5-甲基-異噁唑-3-基)-乙酰胺
在室溫將按照與實(shí)施例3中對(duì)[5-(4-氟-苯基)-2-(3-甲氧基-2-三異丙基硅烷氧基-苯基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮所述類似的方式制備的[5-(4-氟-苯基)-2-(2-三異丙基硅烷氧基-苯基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮(3.4mmol)用四丁基氟化銨(在THF中1M)(5.1mmol)處理40分鐘。然后加入溴乙酸甲酯(5.1mmol)。12小時(shí)后，如LC/MS測(cè)定，反應(yīng)完成。通過(guò)二氧化硅快速色譜法(25％EtOAc/己烷)進(jìn)行純化，得到{2-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲酰基)-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯氧基}-乙酸甲酯1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.61(s，1H)，7.54(m，2H)，7.04(m，3H)，7.01(d，J＝8.4Hz，1H)，6.95(bs，2H)，4.94(s，2H)，4.01(s，3H).MS(ES+)535.1(M+1)；LC/MS(ES+)535.1(M+1)+。
向{2-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯氧基}-乙酸甲酯(2.93mmol)在30mL THF和MeOH(3∶2)的混合物中的溶液中加入LiOH(1M)(30mL)。在攪拌12小時(shí)后，如LC/MS測(cè)定，反應(yīng)完成。用乙酸乙酯和水稀釋該反應(yīng)，用MgSO4干燥，從該反應(yīng)混合物中除去溶劑，得到{2-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯氧基}-乙酸1H NMR(400MHz，丙酮-d6)δ7.66(m，3H)，7.39(m，1H)，7.3(dd，J1＝7.6Hz，J2＝1.6Hz，1H)，7.22(m，4H)，7.13(m，1H)，7.07(t，J＝7.6Hz，1H)，4.94(s，2H)；LC/MS(ES+)491.0(M+1)+。
向{2-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯氧基}-乙酸(0.031mmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入DIEA(0.058mmol)、HATU(0.058mmol)和5-甲基-異噁唑-3-基胺(0.058mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌12小時(shí)。通過(guò)制備型LC/MS(20-100％MeCN/H2O)純化該混合物，得到2-{2-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯氧基}-N-(5-甲基-異噁唑-3-基)-乙酰胺1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.55-7.51(m，3H)，7.35-7.26(m，2H)，7.05-6.96(m，3H)，6.85(d，J＝8Hz，1H)，6.69(t，J＝7.6Hz，2H)，6.56(s，1H)，4.72(s，2H)，2.33(s，3H)；LC/MS(ES+)571.1(M+1)+。
實(shí)施例93-{2-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯氧基甲基}-苯甲酰胺 在室溫，將按照與實(shí)施例3中對(duì)[5-(4-氟-苯基)-2-(3-甲氧基-2-三異丙基硅烷氧基-苯基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮所述類似的方式制備的[5-(4-氟-苯基)-2-(2-三異丙基硅烷氧基-苯基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮(41μmol)用四丁基氟化銨(在THF中1M)(48μmol)處理40分鐘。在真空中除去溶劑，用MgSO4干燥，得到[5-(4-氟-苯基)-2-(2-羥基-苯基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化使用。
向溶于乙腈(1mL)中的[5-(4-氟-苯基)-2-(2-羥基-苯基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮(41μmol)中加入K2CO3(61.5μmol)和3-溴甲基-苯甲酰胺(94.2μmol)，在90℃加熱該混合物。12小時(shí)后，如LC/MS測(cè)定，反應(yīng)完成。通過(guò)制備型LC/MS(20-100％MeCN/H2O)進(jìn)行純化，得到3-{2-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基)-苯氧基甲基]-苯甲酰胺1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.09(s，1H)，7.9(d，J＝7.6Hz，1H)，7.7(s，1H)，7.6-7.5(m，4H)，7.35(d，J＝7.6Hz，1H)，7.06(t，J＝8.4Hz，1H)，6.99(t，J＝7.6Hz，2H)，6.88(d，J＝8Hz)，6.79(t，J＝8.4Hz，2H)，6.26(bs，1H)，5.33(d，J＝7.6Hz)；LC/MS(ES+)566.1(M+1)+。
實(shí)施例10
2-{2-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯氧基甲基}-呋喃-3-甲酸 在室溫，將按照與實(shí)施例3中對(duì)[5-(4-氟-苯基)-2-(3-甲氧基-2-三異丙基硅烷氧基-苯基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮所述類似的方式制備的[5-(4-氟-苯基)-2-(2-三異丙基硅烷氧基-苯基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮(0.67mmol)用四丁基氟化銨(在THF中1M)(1.3mmol)處理。15分鐘后，加入2-(溴甲基)-3-糠酸甲酯(0.74mmol)，將該混合物再攪拌12小時(shí)。在真空中除去溶劑，用二氧化硅純化殘余物，得到2-{2-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯氧基甲基}-呋喃-3-甲酸甲酯，為黃色固體LC/MS(ES+)571.1(M+1)+。
向2-{2-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯氧基甲基}-呋喃-3-甲酸甲酯(0.49mmol)在THF/MeOH/H2O(3∶2∶1)中的溶液中加入LiOH(3N)(4.9mmol)。在攪拌12小時(shí)后，用HCl(1N)酸化該反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取。用MgSO4干燥有機(jī)層，過(guò)濾，濃縮。使用制備型LC/MS純化殘余物，得到2-{2-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲酰基)-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯氧基甲基}-呋喃-3-甲酸，為白色固體1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.26-7.23(m，3H)，7.20(d，J＝1.9，1H)，7.10-7.05(m，1H)，7.03-6.99(m，1H)，6.86(d，J＝8.1，1H)，6.78-6.74(m，3H)，6.55(d，J＝1.9，1H)，6.55-6.50(m，2H)，5.38-5.21(m，2H)；LC/MS(ES+)557.1(M+1)+。
實(shí)施例11[2-(2-二氟甲氧基-苯基)-5-(6-甲基-吡啶-3-基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮 在室溫，將如實(shí)施例3中對(duì)N′-(4-氟-苯甲?；?-肼甲酸叔丁酯所述制備的N′-(6-甲基-吡啶-3-硫羰酰基(carbothioyD)-肼甲酸叔丁酯(0.1mmol)用含TFA(1mmol)的無(wú)水CH2Cl2(1mL)處理30分鐘。除去溶劑，將殘余物溶于無(wú)水CH2Cl2(1mL)。向該溶液中加入DIEA(0.287mmol)，用2-二氟甲氧基-苯甲醛(0.12mmol)在4分子篩存在下處理該混合物。5分鐘后加入2，4，6-三氟苯甲酰氯(0.15mmol)。將該混合物保持在環(huán)境溫度16小時(shí)，通過(guò)制備型HPLC(20-100％MeCN/H2O)純化，得到[2-(2-二氟甲氧基-苯基)-5-(6-甲基-吡啶-3-基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮1HNMR(400MHz，CDCl3)8.71(d，J＝2.1Hz，1H)，7.81(dd，J1＝8.2Hz，J2＝2.2Hz，1H)，7.53(s，1H)，7.36-7.4(m，2H)，7.26(d，J＝8.1Hz，2H)，7.18(d，J＝8.3Hz，1H)，6.78(t，J＝8.3Hz，2H)，6.67(dd，J1＝75.0Hz，J2＝71.7Hz，1H)，2.64(s，3H)；LC/MS(ES+)(M+1)480.1。
實(shí)施例12[2-(2-二氟甲氧基-苯基)-5-(6-甲基-吡啶-3-基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2-羥基-苯基)-甲酮
在室溫，將按照如實(shí)驗(yàn)11中對(duì)[2-(2-二氟甲氧基-苯基)-5-(6-甲基-吡啶-3-基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮所述類似的方式制備的(2-(2-(二氟甲氧基)苯基)-5-(6-甲基吡啶-3-基)-1，3，4-噻二唑-3(2H)-基)(2-乙酰氧基苯基)甲酮(0.02mmol)溶于THF/MeOH(1mL/0.5mL)，用LiOH水溶液(1M)(0.5mL)處理30分鐘。加入HCl水溶液(3M)，將pH調(diào)節(jié)至5-6。除去溶劑，通過(guò)制備型HPLC(20-100％MeCN/H2O)純化殘余物，得到[2-(2-二氟甲氧基-苯基)-5-(6-甲基-吡啶-3-基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2-羥基-苯基)-甲酮1H NMR(400MHz，CDCl3)，9.02(d，J＝2.0Hz，1H)，8.41(d，J＝8.6Hz，1H)，8.23(dd，J1＝8.2Hz，J2＝2.2Hz，1H)，7.77(d，J＝7.5Hz，1H)，7.65(s，1H)，7.62(dd，J1＝7.8Hz，J2＝1.3Hz，1H)，7.45-7.53(m，5H)，6.97-7.01(m，2H)，2.79(s，3H)；LC/MS(ES+)(M+1)442.1。
實(shí)施例13[2-(2-二氟甲氧基-苯基)-5-(6-氟-吡啶-3-基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮 在室溫，將如實(shí)施例3中對(duì)N′-(4-氟-苯甲酰基)-肼甲酸叔丁酯所述制備的N′-(6-氟-吡啶-3-硫羰?；?-肼甲酸叔丁酯(0.044mmol)用含TFA(0.44mmol)和茴香硫醚(0.44mmol)的無(wú)水CH2Cl2(1mL)處理30分鐘。除去溶劑，將殘余物溶于無(wú)水CH2Cl2(1mL)。向該溶液中加入DIEA(0.22mmol)，用2-二氟甲氧基-苯甲醛(0.067mmol)在4分子篩存在下處理該混合物。5分鐘后加入2，4，6-三氟苯甲酰氯(0.089mmol)。將該混合物保持在室溫16小時(shí)，用制備型硅膠TLC(30％EtOAc/己烷)純化，得到[2-(2-二氟甲氧基-苯基)-5-(6-氟-吡啶-3-基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮1H NMR(400MHz，CDCl3)，8.39(s，1H)，7.93-7.97(m，1H)，7.54(s，1H)，7.37-7.41(m，2H)，7.24-7.27(m，1H)，7.19(d，J＝8.1Hz，1H)，6.97(dd，J1＝8.6Hz，J2＝2.7Hz，1H)，6.78(t，J＝8.3Hz，2H)，6.67(dd，J1＝75.0Hz，J2＝71.7Hz，1H)；LC/MS(ES+)(M+1)484.1。
實(shí)施例143-{4-[5-(3，4-二氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯并噁唑-2-基}-苯甲酸 在60℃，將2-氨基-3-甲基-苯酚(6.09mmol)與3-甲?；?苯甲酸甲酯(6.09mmol)在MeOH(6mL)中加熱30分鐘。從該混合物中除去溶劑而得到深紅色油狀物，將其在室溫溶于無(wú)水CH2Cl2(6mL)，用DDQ(6.4mmol)處理16小時(shí)。用EtOAc稀釋該混合物并且傾倒在飽和NaHCO3水溶液上。用EtOAc進(jìn)一步萃取水相，用Na2SO4干燥合并的有機(jī)相。過(guò)濾，除去溶劑，得到殘余物，將其通過(guò)硅膠色譜法純化(5-10％EtOAc/己烷)，得到3-(4-甲基-苯并噁唑-2-基)-苯甲酸甲酯，為白色固體1H NMR(400MHz，CDCl3)8.92(d，J＝1.6Hz，1H)，8.47(dt，J1＝7.8Hz，J2＝1.5Hz，1H)，8.2(dt，J1＝7.8Hz，J2＝1.4Hz，1H)，7.61(t，J＝7.9Hz，1H)，7.43(d，J＝8.1Hz，1H)，7.27(t，J＝7.7Hz，1H)，7.17(t，J＝7.5Hz，1H)，3.99(s，3H)，2.69(s，3H)；LC/MS(ES+)(M+1)268.1。
將3-(4-甲基-苯并噁唑-2-基)-苯甲酸甲酯(1.2mmol)、N-溴琥珀酰亞胺(1.5mmol)和AIBN(0.3mmol)在CCl4中的溶液在100℃微波中加熱30分鐘(1mL)。過(guò)濾該混合物，濃縮，得到3-(4-溴甲基-苯并噁唑-2-基)-苯甲酸甲酯粗品。LC/MS(ES+)(M+)346.1，348.1，(M-Br)266.1，268.1。
在130℃微波爐中，用含HMTA(1.8mmol)的乙酸/H2O(3mL/1.5mL)將3-(4-溴甲基-苯并噁唑-2-基)-苯甲酸甲酯處理20分鐘。除去溶劑，通過(guò)硅膠色譜法純化該混合物(10-20％EtOAc/己烷)，得到3-(4-甲酰基-苯并噁唑-2-基)-苯甲酸甲酯，為白色固體。產(chǎn)率32％。1H NMR(400MHz，CDCl3)10.8(s，1H)，8.97(s，1H)，8.53(d，J＝7.8Hz，1H)，8.26(d，J＝7.8Hz，1H)，7.94(dd，J1＝7.7Hz，J2＝1Hz，1H)，7.86(d，J＝8.1Hz，1H)，7.66(t，J＝7.8Hz，1H)，7.51(t，J＝7.9Hz，1H)，4.0(s，3H)。
LC/MS(ES+)(M+1)282.1，(M+Na)304.1。
在室溫，將如實(shí)施例3中對(duì)N′-(4-氟-苯甲?；?-肼甲酸叔丁酯所述制備的N′-(3，4-二氟-硫代苯甲酰基)-肼甲酸叔丁酯(0.1mmol)用含TFA(1mmol)的無(wú)水CH2Cl2(1mL)處理30分鐘。除去溶劑，將殘余物溶于無(wú)水CH2Cl2(1mL)。向該溶液中加入DIEA(0.57mmol)，用3-(4-甲?；?苯并噁唑-2-基)-苯甲酸甲酯(0.064mmol)在4分子篩存在下處理該混合物。5分鐘后加入2，4，6-三氟苯甲酰氯(0.15mmol)。將該混合物保持在室溫16小時(shí)，通過(guò)制備型HPLC(20-100％MeCN/H2O)純化，得到3-{4-[5-(3，4-二氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯并噁唑-2-基}-苯甲酸甲酯。LC/MS(ES+)(M+1)610.0，(M+Na)632.0。
將3-{4-[5-(3，4-二氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯并噁唑-2-基}-苯甲酸甲酯(0.02mmol)溶于THF/MeOH(1mL/0.5mL)，在室溫用LiOH水溶液(1M)(0.5mL)處理30分鐘。加入HCl水溶液(3M)，將pH調(diào)節(jié)至5-6。除去溶劑，通過(guò)制備型HPLC(20-100％MeCN/H2O)純化殘余物，得到3-{4-[5-(3，4-二氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯并噁唑-2-基}-苯甲酸1H NMR(400MHz，CDCl3)，8.95(s，1H)，8.48(d，J＝7.9Hz，1H)，8.27(d，J＝7.8Hz，1H)，7.92(s，1H)，7.66(t，J＝7.8Hz，1H)，7.6(dd，J1＝7.7Hz，J2＝1.2Hz，1H)，7.46(m，1H)，7.29-7.42(m，3H)，7.19(q，J＝8.2Hz，1H)，6.76-6.81(m，2H)；LC/MS(ES+)(M+1)596.0，(M+Na)618.0。
實(shí)施例154-{3-[5-4-氟-苯基]-3-(2-羥基-苯甲酰基)-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基}-2-甲氧基-苯氧基甲基}-苯磺酰胺 4-(3-甲?；?2-甲氧基-苯氧基甲基)-N，N-雙-(4-甲氧基-芐基)-苯磺酰胺 用Et3N(8.4mmol)、隨后用雙-(4-甲氧基-芐基)-胺(5.8mmol)處理25℃的4-(溴甲基)苯磺酰氯(5.6mmol)在5mL CH2Cl2中的溶液。將該反應(yīng)攪拌12小時(shí)，用H2O稀釋，用CH2Cl2萃取，干燥(MgSO4)，過(guò)濾，濃縮。通過(guò)二氧化硅快速色譜法純化所得粗物質(zhì)(20％EtOAc/己烷)，得到4-溴甲基-N，N-雙-(4-甲氧基-芐基)-苯磺酰胺1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.72(明顯t，J＝8.4Hz，2H)，7.44(dd，J1＝1.6Hz，J2＝8.4Hz，2H)，6.91-6.86(m，4H)，6.69(d，J＝8.8Hz，4H)，4.5(s，2H)，4.19(s，4H)，3.71(s，3H)；LC/MS(ES+)490.1(M+1)+。
用4.4mL 1.0M TBAF在THF中的溶液處理在無(wú)水THF(4mL)中的如實(shí)施例4中所述制備的2-甲氧基-3-三異丙基硅烷氧基-苯甲醛(2.9mmol)和4-溴甲基-N，N-雙-(4-甲氧基-芐基)-苯磺酰胺(3.0mmol)。將該反應(yīng)在環(huán)境溫度攪拌12小時(shí)，濃縮。通過(guò)二氧化硅快速色譜法純化所得物質(zhì)(30％EtOAc/己烷)，得到4-(3-甲酰基-2-甲氧基-苯氧基甲基)-N，N-雙(4-甲氧基-芐基)-苯甲酰胺1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.45(s，1H)，7.85(d，J＝8Hz，2H)，7.58(d，J＝8Hz，2H)，7.48(dd，J1＝1.2Hz，J2＝7.6Hz，1H)，7.11-7.19(m，2H)，6.97(d，J＝8.8Hz，4H)，6.74(d，J＝8.4Hz，4H)，5.23(s，2H)，4.26(s，4H)，4.05(s，3H)，3.77(s，6H)；LC/MS(ES+)562.6(M+1)+。
將如實(shí)施例3中所述制備的4-氟苯硫酰肼鹽酸鹽(0.045mmol)溶于CH2Cl2(1mL)。向該溶液中加入DIEA(0.133mmol)，用4-(3-甲酰基-2-甲氧基-苯氧基甲基)-N，N-雙(4-甲氧基-芐基)-苯甲酰胺(0.047mmol)在4分子篩存在下處理該混合物。5分鐘后加入乙酸2-氯羰基-苯酯(0.047mmol)。將該混合物保持在環(huán)境溫度16小時(shí)，濃縮。將所得物質(zhì)溶于三氟乙酸。3小時(shí)后，濃縮該反應(yīng)混合物。將粗物質(zhì)溶于DMSO，通過(guò)制備型LC/MS(20-100％MeCN/H2O)純化，蒸發(fā)溶劑后得到4-{3-[5-4-氟-苯基]-3-(2-羥基-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基}-2-甲氧基-苯氧基甲基}-苯磺酰胺，為白色固體1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.27(s，1H)，8.55(dd，J1＝1.2Hz，J2＝8Hz，1H)，7.96(d，J＝8Hz，2H)，7.71-7.77(m，2H)，7.59-7.64(m，3H)，7.42-7.47(m，1H)，7.12-7.8(m，2H)，6.95-7.03(m，3H)，6.86-6.92(m，2H)，5.2(s，2H)，4.77(s，2H)，4.07(s，3H)；LC/MS(ES+)594.0(M+1)+。
實(shí)施例163-{3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-2-甲氧基-苯氧基甲基}-N-羥基-芐脒
向3-{2-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯氧基甲基}-苯甲酰胺(0.1mmol)中加入1mL SOCl2。將該混合物在100℃的微波爐中加熱25分鐘。除去溶劑。將殘余物溶于EtOH(1mL)。加入NH2OH(50％水溶液，0.06mL)。將該混合物在100℃的微波爐中加熱25分鐘。通過(guò)制備型LC/MS(20-100％MeCN/H2O)純化，得到3-{3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-2-甲氧基-苯氧基甲基}-N-羥基-芐脒。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.7(d，J＝7Hz，1H)，7.64(s，1H)，7.52-7.61(m，4H)，7.5(s，1H)，7.03-7.08(m，2H)，7.0(d，J＝8.2Hz，1H)，6.95(d，J＝7.9Hz，1H)，6.9(d，J＝6.8Hz，1H)，6.76(t，J＝8Hz，2H)，6.41(bs，2NH)，5.21(dd，J＝14.5，12.8Hz，2H)，4.04(s，3H)；LC/MS(ES+)611.1(M+1)+。
實(shí)施例172-{3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2-羥基-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-2-甲氧基-苯氧基}-N-(2-羥基-1-甲基-乙基)-乙酰胺
向無(wú)水DMF(0.5mL)中的{3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2-羥基-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-2-甲氧基-苯氧基}-乙酸(0.27mmol)中加入HATU(1.35mmol)、DIEA(0.45mL，2.7mmol)和2-氨基-丙-1-醇。將該混合物保持在環(huán)境溫度16小時(shí)。用EtOH(1mL)稀釋殘余物。通過(guò)制備型LC/MS(30-100％MeCN/H2O)純化該混合物，得到2-{3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2-羥基-苯甲酰基)-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-2-甲氧基-苯氧基}-N-(2-羥基-1-甲基-乙基)-乙酰胺。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.2(s，1H)，8.53(m，1H)，7.73(m，2H)，7.6(s，1H)，7.44(t，J＝8.4Hz，1H)，7.15(t，J＝8Hz，2H)，6.9-7.1(m，5H)，4.58(s，2H)，4.14(m，1H)，4.06(s，3H)，3.69(m，1H)，3.59(m，1H)，2.1(bs，2H)，1.23(m，3H)；LC/MS(ES+)540.1(M+1)+。
實(shí)施例186-{2-氰基甲氧基-3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯氧基甲基-吡啶-2-甲酸乙酯 向無(wú)水DMSO(2.5mL)中的2，3-二羥基苯甲醛(1mmol)中加入NaH(60％油混懸液，2.5mmol)。10分鐘后，加入6-溴甲基-吡啶-2-甲酸乙酯(1mmol)。1小時(shí)后，在環(huán)境溫度引入溴乙腈(0.07mL，1mmol)，將該混合物攪拌16小時(shí)。使用飽和NH4Cl水溶液使反應(yīng)猝滅，用EtOAc萃取該混合物。用硫酸鈉干燥后，除去溶劑。通過(guò)制備型HPLC(20-70％MeCN/H2O)純化該混合物，得到6-(2-氰基甲氧基-3-甲?；?苯氧基甲基)-吡啶-2-甲酸乙酯。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.4(s，1H)，8.1(d，J＝7.7Hz，1H)，7.9(t，J＝7.9Hz，1H)，7.7(d，J＝8.2Hz，1H)，7.5(dd，J＝8.2，2.4Hz，1H)，7.24(m，2H)，5.42(s，2H)，5.14(s，2H)，4.5(q，J＝7.2Hz，2H)，1.45(t，J＝7Hz，3H)；LC/MS(ES+)341.2(M+1)+。
使用6-(2-氰基甲氧基-3-甲酰基-苯氧基甲基)-吡啶-2-甲酸乙酯，按照實(shí)施例3中對(duì)[5-(4-氟-苯基)-2-(3-甲氧基-2-三異丙基硅烷氧基-苯基)-[1，3，4]噻二唑-3-基]-(2，4，6-三氟-苯基)-甲酮所述類似的方式制備6-{2-氰基甲氧基-3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯氧基甲基}-吡啶-2-甲酸乙酯。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.1(d，J＝7.9Hz，1H)，7.94(t，J＝7.9Hz，1H)，7.76(d，J＝7.5Hz，1H)，7.54-7.58(m，3H)，7.05-7.14(m，3H)，7.01(d，J＝7.3Hz，1H)，6.96(d，J＝8.9Hz，1H)，6.76(t，J＝8.5Hz，2H)，5.4(s，2H)，5.12(d，J＝4.4Hz，2H)，4.5(q，J＝7.2Hz，2H)，1.45(t，J＝7.3Hz，3H)；LC/MS(ES+)651.2(M+1)+。
實(shí)施例196-{3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-2-甲氧基羰基甲氧基-苯氧基甲基}-吡啶-2-甲酸 將6-{2-氰基甲氧基-3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-苯氧基甲基}-吡啶-2-甲酸乙酯溶于THF(1.5mL)和MeOH(1.0mL)，加入LiOH(1M)(0.5mL)。在攪拌1小時(shí)后，從該反應(yīng)混合物中除去溶劑。向殘余物中加入MeOH/DMSO的混合物，過(guò)濾所得溶液。通過(guò)制備型LC/MS(20-100％MeCN/H2O)純化澄清的溶液，除去溶劑后得到6-{3-[5-(4-氟-苯基)-3-(2，4，6-三氟-苯甲?；?-2，3-二氫-[1，3，4]噻二唑-2-基]-2-甲氧基羰基甲氧基-苯氧基甲基}-吡啶-2-甲酸，為白色固體1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.21(d，J＝7.9Hz，1H)，8.03(t，J＝7.3Hz，1H)，7.81(d，10.1Hz，1H)，7.8(s，1H)，7.55(dd，J＝8.9，5.3Hz，2H)，7.0-7.1(m，4H)，6.92(d，J＝8Hz，1H)，6.76(t，J＝7.5Hz，2H)，5.31(s，2H)，4.94(d，J＝7.8Hz，2H)，4.8(bs，1H)，3.8(s，3H)；LC/MS(ES+)(M+1)656.3。
通過(guò)重復(fù)上述實(shí)施例中所述的操作步驟，使用合適的原料獲得下列表1和2中鑒定的式I化合物。
表1















表2



















試驗(yàn)1-轉(zhuǎn)錄試驗(yàn)轉(zhuǎn)染試驗(yàn)用于評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物調(diào)節(jié)LXR轉(zhuǎn)錄活性的能力。簡(jiǎn)言之，通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染將嵌合蛋白的表達(dá)載體與熒光素酶基因處于GAL4結(jié)合位點(diǎn)控制下的報(bào)道質(zhì)粒一起導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞，所述嵌合蛋白含有與LXRα或LXRβ的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(LBD)融合的酵母GAL4的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域。在暴露于LXR調(diào)節(jié)劑后，LXR轉(zhuǎn)錄活性改變，這可以通過(guò)熒光素酶水平的改變進(jìn)行監(jiān)測(cè)。如果轉(zhuǎn)染的細(xì)胞暴露于LXR激動(dòng)劑，那么LXR-依賴性轉(zhuǎn)錄活性增加并且熒光素酶水平升高。
在開始本實(shí)驗(yàn)前2天，將293T人胚腎細(xì)胞(8×106)接種于175cm2燒瓶中的10％FBS、1％青霉素/鏈霉素/Fungizome的DMEM培養(yǎng)基中。使用GAL4-LXR LBD表達(dá)質(zhì)粒(4μg)、UAS-熒光素酶報(bào)道質(zhì)粒(5μg)、Fugene(3∶1比例；27μL)和無(wú)血清的培養(yǎng)基(210μL)制備用于嵌合蛋白的轉(zhuǎn)染混合物。將該轉(zhuǎn)染混合物在室溫溫育20分鐘。通過(guò)用PBS(30mL)洗滌收集細(xì)胞，然后使用胰蛋白酶(0.05％；3mL)分解。通過(guò)添加試驗(yàn)培養(yǎng)基(DMEM，缺乏脂蛋白的胎牛血清(5％)、他汀類(例如洛伐他汀7.5μl)和甲羥戊酸(100μM))(10mL)使胰蛋白酶失活。使用1∶10稀釋液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)并且將細(xì)胞濃度調(diào)節(jié)至160,000個(gè)細(xì)胞/mL。將細(xì)胞與轉(zhuǎn)染混合物混合(10mL細(xì)胞/250μl轉(zhuǎn)染混合物)并且在室溫下再溫育30分鐘，定期反轉(zhuǎn)混合。然后將細(xì)胞(50μl/孔)平板固定入384白色實(shí)心底的TC-處理的平板。將細(xì)胞在37℃和5.0％CO2下進(jìn)一步溫育24小時(shí)。對(duì)每種測(cè)試化合物而言，制備在DMSO中的12-點(diǎn)系列稀釋液(半對(duì)數(shù)系列稀釋液)，其中化合物的起始濃度為1μM。將測(cè)試化合物(500nl)加入到試驗(yàn)平板中的各細(xì)胞孔中，將細(xì)胞在37℃和5.0％CO2下溫育24小時(shí)。將細(xì)胞裂解/熒光素酶試驗(yàn)緩沖液Bright-GloTM(25％；25μl；Promega)加入到各孔中。在室溫下進(jìn)一步溫育5分鐘后，測(cè)定熒光素酶活性。
通過(guò)除以每個(gè)平板上的DMSO對(duì)照值，對(duì)原始發(fā)光值進(jìn)行標(biāo)化。使用XLfit3顯示標(biāo)化的數(shù)據(jù)，使用4-參數(shù)Logistic模型或S形單點(diǎn)劑量響應(yīng)方程式(在XLfit3.05中的方程式205)擬合劑量響應(yīng)曲線。將EC50定義為化合物引起最大值與最小值之間一半響應(yīng)的濃度。通過(guò)將化合物引起的響應(yīng)與已知LXR調(diào)節(jié)劑(3-{3-[(2-氯-3-三氟甲基-芐基)-(2，2-二苯基-乙基)-氨基]-丙氧基}-苯基)-乙酸所獲得的最大值相比，計(jì)算相對(duì)功效(或功效百分比)。
試驗(yàn)2-用于評(píng)價(jià)LXR調(diào)節(jié)劑誘導(dǎo)的內(nèi)源性基因表達(dá)的方法ABCA1基因表達(dá)使人THP1細(xì)胞在繁殖培養(yǎng)基(在RPMI 1640中10％確定的FBS、2mM L-谷氨酰胺、10mM HEPES、1.0mM丙酮酸鈉、4.5g/L葡萄糖、1.5g/L碳酸氫鹽、0.05mM 2-巰基乙醇)中生長(zhǎng)。在第1天，在48-孔平皿上的每個(gè)孔中平板固定0.5mL細(xì)胞，濃度為250,000個(gè)細(xì)胞/mL增殖培養(yǎng)基，再加40ng/mL PMA。將平板在37攝氏度溫育24小時(shí)。在第2天，用0.5mL新鮮的試驗(yàn)培養(yǎng)基(與繁殖培養(yǎng)基相同，但含有2％脂蛋白缺乏的FBS作為血清補(bǔ)充物)替換培養(yǎng)基，在6小時(shí)后加入化合物(在DMSO中1或10μM)。然后將平板在37攝氏度溫育24小時(shí)。在第3天，收集細(xì)胞，使用具有可選DnaseI的Rneasy試劑盒(Qiagen)分離RNA。用100μl水洗脫RNA，定量(在260nm處的UV吸收度)，貯存在-80℃待用。
使用TaqMan定量PCR，應(yīng)用下列用于人ABCA1的引物/探針組測(cè)定ABCA1基因表達(dá)正向引物5′TGTCCAGTCCAGTAATGGTTCTGT3′、反向引物5′AAGCGAGATATGGTCCGGATT3′、探針5′FAMACACCTGGAGAGAAGCTTTCAACGAGACTAACCTAMRA3′；和人36B4，正向引物5′CCACGCTGCTGAACATGC3′、反向引物5′TCGAACACCTGCTGGATGAC3′、探針5′VIC AACATCTCCCCCTTCTCCTTTGGGCT TAMRA3′。使用Superscript Platinum III Q-PCR試劑(Invitrogen)在相同樣品混合物中依次進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)。將反應(yīng)混合物(Superscript RT/platinum Taq-0.4μl，2x反應(yīng)混合物-10μl，36B4引物-0.4μl 10μM儲(chǔ)備溶液，ABCA1引物-1.8μl 10μM儲(chǔ)備溶液，ABCA1探針-FAM-0.04μl 100μM儲(chǔ)備溶液，36B4探針-VIC-0.04μl 50μM儲(chǔ)備溶液，RNA(50ng/μl)-2μl，50xROX染料-0.4μl，MgSO4-0.4μl 50mM儲(chǔ)備溶液，水-4.52μl)置于384-孔平板中，使用標(biāo)準(zhǔn)條件在ABI HT7900儀器上進(jìn)行試驗(yàn)。參照稀釋RNA的曲線評(píng)價(jià)ABCA1基因表達(dá)，并標(biāo)化為存在于樣品中的36B4 RNA水平。參照DMSO計(jì)算化合物誘導(dǎo)的折疊誘導(dǎo)。通過(guò)將化合物引起的反應(yīng)與已知LXR調(diào)節(jié)劑(3-{3-[(2-氯-3-三氟甲基-芐基)-(2，2-二苯基-乙基)-氨基]-丙氧基}-苯基)-乙酸獲得的最大值相比，計(jì)算相對(duì)功效(或功效百分比)。
Fas基因表達(dá)使人HepG2細(xì)胞在繁殖培養(yǎng)基(在DMEM中10％FBS、2mM L-谷氨酰胺、1.5g/L碳酸氫鹽、0.1mM非必需氨基酸、1.0mM丙酮酸鈉)中生長(zhǎng)。在第1天，在48-孔平皿上的每個(gè)孔中平板固定0.5mL細(xì)胞，濃度為150,000個(gè)細(xì)胞/mL繁殖培養(yǎng)基。然后將平板在37度溫育24小時(shí)。在第2天，將培養(yǎng)基替換為0.5mL試驗(yàn)培養(yǎng)基(與增殖培養(yǎng)基相同，但含有2％脂蛋白缺乏的FBS作為血清補(bǔ)充物)，在6小時(shí)后加入化合物(在DMSO中1或10μM)。然后將平板在37度溫育36-48小時(shí)。收集細(xì)胞，使用具有可選DnaseI的Rneasy試劑盒(Qiagen)分離RNA。用100μl水洗脫RNA，定量(在260nm處的UV吸收度)并且貯存在-80℃待用。使用TaqMan定量PCR，應(yīng)用下列用于人Fas的引物/探針組測(cè)定Fas基因表達(dá)正向引物5′GCAAATTCGACCTTTCTCAGAAC3′、反向引物5′GGACCCCGTGGAATGTCA3′、探針5′FAM ACCCGCTCGGCATGGCTATCTTCTAMRA3′；和人36B4，正向引物5′CCACGCTGCTGAACATGC3′、反向引物5′TCGAACACCTGCTGGATGAC3′，探針5′VICAACATCTCCCCCTTCTCCTTTGGGCTTAMRA3′。使用SuperscriptPlatinum III Q-PCR試劑(Invitrogen)在相同樣品混合物中依次進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)。將反應(yīng)混合物(Superscript RT/platinum Taq-0.4μl，2x反應(yīng)混合物-10μl，36B4引物-1.2μl 10μM儲(chǔ)備溶液，F(xiàn)as引物-1.2μl 10μM儲(chǔ)備溶液，F(xiàn)as探針-FAM-0.045μl 100μM儲(chǔ)備溶液，36B4探針-VIC-0.08μl50μM儲(chǔ)備溶液，RNA(50ng/μl)-2μl，50x ROX染料-0.4μl，MgSO4-1μl50mM儲(chǔ)備溶液，水-3.68μl)置于384-孔平板，使用標(biāo)準(zhǔn)條件在ABI HT7900儀器上進(jìn)行試驗(yàn)。參照稀釋RNA的曲線評(píng)價(jià)Fas基因表達(dá)，并標(biāo)化為存在于樣品中的36B4RNA水平。參照DMSO計(jì)算化合物誘導(dǎo)的折疊誘導(dǎo)。
試驗(yàn)3-FRET共-激活物補(bǔ)充試驗(yàn)FRET試驗(yàn)用于評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物直接結(jié)合LXR配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(LBD)并且促進(jìn)強(qiáng)化LXR轉(zhuǎn)錄活性的蛋白質(zhì)募集的能力(例如共-激活物)。這種不含細(xì)胞的試驗(yàn)使用由LXR LBD和簡(jiǎn)化其純化的標(biāo)記(例如GST、His、FLAG)組成的重組融合蛋白，以及合成生物素化的肽，該肽來(lái)源于轉(zhuǎn)錄共激活物蛋白如類固醇受體共激活物1(SRC-1)的核受體相互作用結(jié)構(gòu)域。在一種方式中，標(biāo)記LBD融合蛋白可以使用與銪偶聯(lián)的抗LBD標(biāo)記抗體(例如EU-標(biāo)記的抗-GS抗體)進(jìn)行標(biāo)記，共激活物肽可以使用與鏈霉抗生物素蛋白偶聯(lián)的別藻藍(lán)蛋白(APC)標(biāo)記。在LXR激動(dòng)劑存在下，共激活物肽被募集至LXR LBD，從而使EU和APC部分密切接近。用340nM的光激發(fā)該復(fù)合物時(shí)，EU吸收能量并且將其轉(zhuǎn)移至APC部分，導(dǎo)致在665nm處發(fā)射。如果沒(méi)有能量轉(zhuǎn)移(表示缺乏EU-APC親近)，那么EU在615nm處發(fā)射。因此，665與615nm處發(fā)射的光之比給出了共激活物肽募集的強(qiáng)度和由此結(jié)合LXR LBD的激動(dòng)劑的強(qiáng)度的指征。
將融合蛋白，即LXRα的氨基酸205-447(Genbank NM 005693)和LXRβ的氨基酸203-461(β的NM_007121)在pGEX4T-3(27-4583-03Amersham Pharmacia Biotech)的Sal1和Not1位點(diǎn)上進(jìn)行框內(nèi)克隆。生物素化肽序列來(lái)源于SRC-1(氨基酸676-700)生物素-CPSSHSSLTERHKILHRLLQEGSPSC-OH。
在FRET緩沖液(50mM Tris pH 7.5，50mM KCl、1mM DTT、0.1％BSA)中制備主要混合物(5nM GST-LXR-LBD、5nM生物素化SRC-1肽、10nM APC-鏈霉抗生物素蛋白(Prozyme Phycolink鏈霉抗生物素蛋白APC，PJ25S)和5n MEU-抗-GST抗體)。向384孔平板的各孔中加入20μl這種主要混合物。最終FRET反應(yīng)5nM融合蛋白、5nM SRC-1肽、10nM APC-鏈霉抗生物素蛋白、5nm EU-抗-GST抗體(PerkinElmer AD0064)。用DMSO將測(cè)試化合物稀釋為半對(duì)數(shù)的12-點(diǎn)系列稀釋液，起始濃度為1mM，將100nL化合物轉(zhuǎn)入主要混合物中，使得試驗(yàn)孔中的終濃度為5μM-28pM。將平板在室溫溫育3小時(shí)，讀取熒光共振能量轉(zhuǎn)移。將結(jié)果表示為APC熒光與EU熒光之比×1000。
665nm與615nm之比乘以因數(shù)1000以簡(jiǎn)化數(shù)據(jù)分析。從比值中扣除DMSO值作為背景值。使用XLfit3顯示數(shù)據(jù)，使用4-參數(shù)Logistic模型或S形單點(diǎn)劑量響應(yīng)方程式(在XLfit3.05中的方程式205)擬合劑量響應(yīng)曲線。將EC50定義為引起最大值與最小值之間一半響應(yīng)的化合物濃度。通過(guò)將化合物引起的響應(yīng)與參比LXR調(diào)節(jié)劑獲得的最大值相比，計(jì)算相對(duì)功效(或功效百分比)。
游離或藥學(xué)上可接受的鹽形式的式I化合物表現(xiàn)出有價(jià)值的藥理學(xué)特性，如本申請(qǐng)中所述體外試驗(yàn)所證實(shí)。本發(fā)明的化合物表達(dá)內(nèi)源性ABCA1的功效％為10％-130％。應(yīng)理解本文所述的實(shí)施例和實(shí)施方案僅用于解釋目的，本領(lǐng)域技術(shù)人員將可以想到依據(jù)其進(jìn)行各種修改或改變，這些修改或改變也包括在本申請(qǐng)的實(shí)質(zhì)和范圍和所附權(quán)利要求的范圍內(nèi)。本文引述的所有公開文獻(xiàn)、專利和專利申請(qǐng)為所有目的引入本文作為參考。
權(quán)利要求
1.式I化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、溶劑合物和異構(gòu)體 其中n選自0、1、2和3；Z選自C和S(O)；每個(gè)Y獨(dú)立地選自-CR4＝和-N＝；其中R4選自氫、氰基、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素-取代的-C1-6烷基和鹵素-取代的-C1-6烷氧基；R1選自鹵素、氰基、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素-取代的-C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷氧基和-C(O)OR4；其中R4如上所述；R2選自C6-10芳基、C5-10雜芳基、C3-12環(huán)烷基和C3-8雜環(huán)烷基；其中R2的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基可選地被1-5個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素-取代的-C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷氧基、-C(O)NR5R5、-OR5、-OC(O)R5、-NR5R6、-C(O)R5和-NR5C(O)R5；其中R5和R6獨(dú)立地選自氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素-取代的-C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷氧基、C6-10芳基-C0-4烷基、C3-8雜芳基-C0-4烷基、C3-12環(huán)烷基-C0-4烷基和C3-8雜環(huán)烷基-C0-4烷基；或R5和R6與R5和R6所連接的氮原子一起形成C5-10雜芳基或C3-8雜環(huán)烷基；其中R5的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基或R5和R6的組合可選地被1-4個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素、羥基、氰基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素-取代的-C1-6烷基和鹵素-取代的-C1-6烷氧基；R3選自C6-10芳基、C5-10雜芳基、C3-12環(huán)烷基和C3-8雜環(huán)烷基；其中R3的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基被1-5個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素、C1-6烷氧基、鹵素-取代的-C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷氧基、-OXR7、-OXC(O)NR7R8、-OXC(O)NR7XC(O)OR8、-OXC(O)NR7XOR8、-OXC(O)NR7XNR7R8、-OXC(O)NR7XS(O)0-2R8、-OXC(O)NR7XNR7C(O)R8、-OXC(O)NR7XC(O)XC(O)OR8、-OXC(O)NR7R9、-OXC(O)OR7、-OXOR7、-OXR9、-XR9、-OXC(O)R9、-OXS(O)0-2R9和-OXC(O)NR7CR7[C(O)R8]2；其中X選自鍵或C1-6亞烷基，其中X的任意亞甲基可以可選地被選自C(O)、NR7、S(O)2和O的二價(jià)基團(tuán)替代；R7和R8獨(dú)立地選自氫、氰基、C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷基、C2-6鏈烯基和C3-12環(huán)烷基-C0-4烷基；R9選自C6-10芳基-C0-4烷基、C5-10雜芳基-C0-4烷基、C3-12環(huán)烷基-C0-4烷基和C3-8雜環(huán)烷基-C0-4烷基；其中R9的任意烷基可以帶有被-C(O)OR10替代的氫；且其中R9的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基可選地被1-4個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素、C1-6烷基、C3-122環(huán)烷基、鹵素-取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素-取代的-C1-6烷氧基、-XC(O)OR10、-XC(O)R10、-XC(O)NR10R10、-XS(O)0-2NR10R10和-XS(O)0-2R10；其中R10獨(dú)立地選自氫和C1-6烷基。
2.權(quán)利要求1的式Ia化合物 其中n選自1、2和3；Y選自-CH＝和-N＝；R1選自鹵素、C1-6烷基和-C(O)OR4；其中R4選自氫和C1-6烷基；R2選自C6-10芳基、C5-10雜芳基、C3-12環(huán)烷基和C3-8雜環(huán)烷基；其中R2的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基可選地被1-4個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素、羥基、C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷基和-OC(O)R5；其中R5選自氫和C1-6烷基；且R3選自C6-10芳基、C5-10雜芳基、C3-12環(huán)烷基和C3-8雜環(huán)烷基；其中R3的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基被1-5個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素、羥基、C1-6烷氧基、鹵素-取代的-C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷氧基、-OXR7、-OXC(O)NR7R8、-OXC(O)NR7XC(O)OR8、-OXC(O)NR7XOR8、-OXC(O)NR7XNR7R8、-OXC(O)NR7XS(O)0-2R8、-OXC(O)NR7XNR7C(O)R8、-OXC(O)NR7XC(O)XC(O)OR8、-OXC(O)NR7R9、-OXC(O)OR7、-OXOR7、-OXR9、-XR9、-OXC(O)R9和-OXC(O)NR7CR7[C(O)R8]2；其中X選自鍵或C1-6亞烷基；R7和R8獨(dú)立地選自氫、氰基、C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷基、C2-6鏈烯基和C3-12環(huán)烷基-C0-4烷基；R9選自C6-10芳基-C0-4烷基、C5-10雜芳基-C0-4烷基、C3-12環(huán)烷基-C0-4烷基和C3-8雜環(huán)烷基-C0-4烷基；其中R9的任意烷基可以帶有被-C(O)OR10替代的氫；且R9的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基可選地被1-4個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素、C1-6烷基、C3-12環(huán)烷基、鹵素-取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素-取代的-C1-6烷氧基、-XC(O)OR10、-XC(O)R10、-CR10(NR10R10)＝NOR10、-XC(O)NR10R10、-XS(O)0-2NR10R10和-XS(O)0-2R10；其中R10獨(dú)立地選自氫和C1-6烷基。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中R1選自氟、氯、甲基和-C(O)OCH3；且R2選自苯基、環(huán)己基、環(huán)戊基、吡咯基、吡唑基、萘基、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯、噻吩基、呋喃基和吡啶基；其中R2的任意芳基、雜芳基或環(huán)烷基可選地被1-4個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自氟、氯、溴、羥基、甲基、乙基、丙基、叔丁基、氨基、二甲氨基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基和-OC(O)CH3。
4.權(quán)利要求3的化合物，其中R3選自苯基、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯、吡啶基、2，2-二氟-苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-基和苯并噁唑基；其中R3的任意芳基或雜芳基被1-5個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自氟、氯、溴、甲氧基、羥基、二氟甲氧基、-OCH2C(O)NH2、-OCH2C(O)OCH3、-OCH2C(O)NHCH3、-OCH2C(O)N(CH3)2、-R9、-OR9、-OCH2R9、-OCH2C(O)R9、-OCH2C(O)NHR9、-OCH2C(O)N(CH3)R9、-OCH2C(O)NHCH2R9、-OCH2CN、-OCH2C2H3、-OCH2C2H4、-O(CH2)2OH、-OCH2C(O)NH(CH2)2C(O)OC2H5、-OCH2C(O)NH(CH2)2CH2F、-OCH2C(O)NHCH2CH2F、-OCH2C(O)NH(CH2)2C(O)OH、-OCH2C(O)NHCH(CH2R9)C(O)OC2H5、-OCH2C(O)NHC(O)(CH2)2C(O)OCH3、-OCH2C(O)NH(CH2)2NHC(O)CH3、-OCH2C(O)NHCH2C(O)C2H5、-OCH2C(O)NH(CH2)2C(O)OC4H9、-OCH2C(O)NHCH2C(O)OC2H5、-OCH2C(O)NHCH[C(O)OC2H5]2、-S(O)2CH3、-OCH2C(O)NHCH2CF3、-OCH2C(O)NHCH2C(O)(CH2)2C(O)OCH3、-OCH2C(O)N(CH3)CH2C(O)OCH3、-OCH2C(O)NH(CH2)3OC2H5、-OCH2C(O)NH(CH2)3OCH(CH3)2、-OCH2C(O)NH(CH2)2SCH3、-OCH2C(O)NHCH2CH(CH3)2、-OCH2C(O)NHCH(CH3)CH2OH、-OCH2C(O)NHCH2CH(CH3)C2H5、-OCH2C(O)NHCH(CH3)C(O)OC2H5、-OCH2C(O)NHCH2CH(CH3)2和-OCH2C(O)(CH2)3OCH(CH3)2；其中R9為苯基、環(huán)丙基-甲基、異噁唑基、苯并噻唑基、呋喃基、呋喃基-甲基、四氫-呋喃基、吡啶基、4-氧代-4，5-二氫-噻唑-2-基、吡唑基、異噻唑基、1，3，4-噻二唑基、噻唑基、苯乙基、嗎啉代、嗎啉代-丙基、異噁唑基-甲基、嘧啶基、四氫-吡喃基、2-氧代-2，3-二氫-嘧啶-4-基、哌嗪基、吡咯基、哌啶基、吡嗪基、咪唑基、咪唑基-丙基、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯基、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯基-丙基、2-氧代-吡咯烷-1-基和2-氧代-吡咯烷-1-基-丙基；其中R9的任意烷基可以帶有被-C(O)OC2H5替代的氫；其中R9的任意芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基可選地被1-4個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自甲基、乙基、環(huán)丙基、甲氧基、三氟甲基、-OC(O)CH3、-COOH、-S(O)2NH2、-CH(NH2)＝NOH、-C(O)OC2H5、-CH2C(O)OH、-CH2C(O)OC2H5、-CH2C(O)OCH3、-C(O)OCH3、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3和-C(O)CH3。
5.藥物組合物，包括治療有效量的權(quán)利要求1的化合物與藥學(xué)上可接受的賦形劑。
6.治療動(dòng)物疾病或病癥的方法，其中調(diào)節(jié)LXR活性可以預(yù)防、抑制或改善所述疾病的病理學(xué)和/或癥狀學(xué)，該方法包括對(duì)所述動(dòng)物給予治療有效量的權(quán)利要求1的化合物。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述疾病或病癥選自心血管疾病、糖尿病、神經(jīng)變性疾病和炎癥。
8.權(quán)利要求1的化合物在制備用于治療動(dòng)物疾病或病癥的藥物中的用途，其中LXR活性對(duì)所述疾病的病理學(xué)和/或癥狀學(xué)有作用，所述疾病選自心血管疾病、糖尿病、神經(jīng)變性疾病和炎癥。
9.治療動(dòng)物疾病或病癥的方法，其中調(diào)節(jié)LXR活性可以預(yù)防、抑制或改善所述疾病的病理學(xué)和/或癥狀學(xué)，該方法包括對(duì)所述動(dòng)物給予治療有效量的權(quán)利要求1的化合物。
10.權(quán)利要求9的方法，進(jìn)一步包括給予治療有效量的權(quán)利要求1的化合物與另一種治療上相關(guān)活性劑的組合。
全文摘要
本發(fā)明提供了化合物、包括這類化合物的藥物組合物和使用這類化合物治療或預(yù)防與肝X受體(LXR)活性相關(guān)的疾病或病癥的方法。
文檔編號(hào)C07D417/04GK1918155SQ200580004677
公開日2007年2月21日 申請(qǐng)日期2005年2月11日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月11日
發(fā)明者V·莫爾泰尼, 李小林, J·納納卡, D·A·埃里斯, B·安納克勒里奧, E·塞茲, J·維特亞克 申請(qǐng)人:Irm責(zé)任有限公司