專利名稱：用抗il－2受體的抗體治療呼吸道疾病的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明總地涉及抗體治療領(lǐng)域，具體是抗-IL-2受體抗體，也涉及用這些抗體療法治療T-細(xì)胞介導(dǎo)的呼吸道疾病和過(guò)敏性疾病，具體是Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞介導(dǎo)的過(guò)敏性疾病和/或癥狀，最優(yōu)選哮喘的方法。
背景技術(shù)：
T細(xì)胞的活化和細(xì)胞因子分泌在許多呼吸道疾病和過(guò)敏性疾病，包括最令人注意的哮喘中起著關(guān)鍵作用。哮喘是一種復(fù)雜的疾病，其特征是氣道炎癥伴有間歇性、可逆性氣道阻塞和氣道超敏反應(yīng)。雖然其病因未知，包含淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞的氣道炎癥是慢性持續(xù)性哮喘所有患者的共同特征。大部分由活化T細(xì)胞合成和釋放的細(xì)胞因子，引起和維持了氣道的炎癥過(guò)程(Drazen J.M.等，J Exp.Med.1831-5(1996))。CD4+/CD25+T細(xì)胞所分泌的各種細(xì)胞因子參與了慢性哮喘炎癥，包括IL-3、IL-4、IL-5和粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(Kon O.M.等，Inflamm.Res.48516-23(1999))。在導(dǎo)致氣道纖維化的哮喘中，活化的T細(xì)胞可能是引起和調(diào)節(jié)氣道修復(fù)過(guò)程的中心環(huán)節(jié)。因此，特異性導(dǎo)向抑制活化T細(xì)胞的治療方案對(duì)哮喘患者可能有益。
尸體解剖研究以及支氣管活檢標(biāo)本資料，證實(shí)在哮喘氣道中T細(xì)胞數(shù)量增加。對(duì)15例哮喘患者的驗(yàn)尸研究揭示，哮喘患者氣道中T細(xì)胞數(shù)量大約是10例無(wú)哮喘年齡相匹配個(gè)體的兩倍(Azzawi M.等，Am.Rev.Respir.Dis.1451477-82(1992))。這些細(xì)胞是活化的，如表達(dá)白介素-2(IL-2)受體(CD25)、人白細(xì)胞抗原-DR、極晚期抗原-1和IL-5mRNA所表明的那樣。嚴(yán)重哮喘患者外周血研究證明CD4+/CD25+T細(xì)胞數(shù)量增加(Corrigan C.J.等，Lancet 11129-32(1988))。哮喘患者支氣管肺泡灌洗液研究也證明活化的CD25+T細(xì)胞數(shù)量增加，以及IL-2和可溶性IL-2受體的水平升高(Alexander A.G.等，J.Eur.Respir.8574-8(1995)；Park C.S.等，Chest.106400-6(1994)；Walker C.等，J.Allergy Clin.Immunol.88935-42(1991))。
達(dá)珠單抗(Daclizumab)是一種免疫抑制劑，它是用重組DNA技術(shù)生產(chǎn)的人源化免疫球蛋白IgGl單克隆抗體。達(dá)珠單抗能與活化淋巴細(xì)胞表面表達(dá)的人高親和力IL-2受體的α亞基(p55α、CD25或Tac亞基)特異性結(jié)合。Tac亞基僅在與外源抗原或與IL-2相互作用后才表達(dá)。因?yàn)檫_(dá)珠單抗由90％人免疫球蛋白序列和僅10％的鼠序列構(gòu)成，所以它的免疫原性很低。美國(guó)專利號(hào)5,530,101和5,693,761中公開了達(dá)珠單抗的氨基酸和核酸序列，將其各自以全文納入本文作為參考。
美國(guó)食品和藥品管理管理局已經(jīng)批準(zhǔn)可將達(dá)珠單抗用于接受環(huán)孢霉素和類固醇，和或不和咪唑硫嘌呤或霉酚酸酯(ZENEPAX，Package Insert，RocheLaboratories(2000))治療而伴有免疫抑制的患者中預(yù)防腎同種異體移植排斥。與2位在第一次接受尸體腎同種異體移植患者的雙盲對(duì)照試驗(yàn)中采用安慰劑相比，接受5個(gè)劑量(1mg/kg)達(dá)珠單抗的患者在移植后6個(gè)月內(nèi)急性排斥發(fā)生率降低至40％。采用達(dá)珠單抗不伴有其它毒性，發(fā)生機(jī)會(huì)性感染或淋巴瘤也不增加(Vincenti F.等，J.Med.N.Engl.338161-5(1998)；Nashan B.等，Transplantation 67110-5(1999))。
也在接受環(huán)孢霉素和/或類固醇而伴有免疫抑制的自身免疫性眼葡萄膜炎患者中評(píng)價(jià)了達(dá)珠單抗。讓患者停用全身性免疫抑制劑，最終每4周接受一次達(dá)珠單抗輸液?？磥?lái)在治療12個(gè)月期間10位患者中達(dá)珠單抗防止了8位沒(méi)有出現(xiàn)嚴(yán)重的威脅視力的眼內(nèi)炎癥疾病，視力無(wú)加重。對(duì)該治療病人的耐受性良好(Nussenblatt R.B.等，Proc.Nat’l.Acad Sci U.S.A.967462-6(1999))。
在19例中度到重度牛皮癬患者中進(jìn)行的達(dá)珠單抗I期多劑量研究，顯示該藥物耐受性良好，沒(méi)有伴隨其給藥的特定副反應(yīng)。在第2、4、8、12和16周給病人輸液達(dá)珠單抗(2mg/kg加載劑量，然后是1mg/kg)。該研究顯示，在每2周給藥的前4周治療期間，均阻斷了外周血和組織中的CD25。經(jīng)預(yù)先治療的病人PASI評(píng)分小于36表明8周時(shí)嚴(yán)重性平均降低了30％(P＝0.02)。4周后開始程度不同地使受體去飽和，這與疾病改善逆轉(zhuǎn)相關(guān)。在16周治療期間，IL-2受體α-亞基的表達(dá)降低了44.8％。在本研究過(guò)程中T細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)沒(méi)有顯示明顯改變。本研究期間達(dá)珠單抗沒(méi)有產(chǎn)生明顯的副反應(yīng)(Krueger J.G.等，J.Am.Acad.Dermatol.43448-58(2000))。
由于呼吸道疾病，尤其是T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病如哮喘的流行，以及缺少治療呼吸道疾病的有效方法，所以非常需要本發(fā)明所提供的更有效的治療方法和制劑。特別需要新的治療方法和制劑，來(lái)治療對(duì)常規(guī)非特異性免疫抑制療法無(wú)反應(yīng)的更嚴(yán)重的頑固性哮喘和其它T細(xì)胞介導(dǎo)的呼吸道疾病和過(guò)敏性疾病。本發(fā)明包括治療T細(xì)胞介導(dǎo)的呼吸道疾病和過(guò)敏性疾病，尤其是呼吸道疾病如哮喘的方法，還包括治療許多Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞介導(dǎo)的過(guò)敏性疾病和/或癥狀的方法。該方法包括給予抗IL-2受體的抗體，優(yōu)選人源化抗體，達(dá)珠單抗和與達(dá)珠單抗相同的能結(jié)合IL-2受體表位的抗體。如本文公開的II期臨床研究結(jié)果所證明的那樣，與現(xiàn)有治療方法相比，達(dá)珠單抗為治療中度到重度哮喘提供了優(yōu)異的臨床效力和長(zhǎng)期的有益效果。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了治療或預(yù)防性冶療T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病，尤其是由IL-2受體介導(dǎo)的(T細(xì)胞)活化而引起或加重的呼吸道疾病和/或過(guò)敏性疾病，如Th1細(xì)胞或Th2細(xì)胞介導(dǎo)的過(guò)敏性疾病或癥狀的方法。治療或預(yù)防性冶療呼吸道疾病和/或過(guò)敏性疾病和/或癥狀的方法包括將治療或預(yù)防有效量的含有能與IL-2受體特異性結(jié)合的抗體的藥物制劑給予需要這種治療的病人。在另一實(shí)施方式中，該治療方法還包括將治療所述疾病的聯(lián)用藥物給予病人。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，可用本發(fā)明方法來(lái)治療選自以下的疾病哮喘、過(guò)敏性鼻炎、特應(yīng)性皮炎、鼻息肉病、Churg-Strauss綜合征(變應(yīng)性肉芽腫性脈管炎)、鼻竇炎和慢性阻塞性肺病(COPD)。
在其它優(yōu)選實(shí)施方式中，可用本發(fā)明治療方法治療的疾病是Th2-細(xì)胞介導(dǎo)的過(guò)敏性疾病和/或癥狀，選自哮喘、特應(yīng)性皮炎、過(guò)敏反應(yīng)、風(fēng)疹(蕁麻疹)、過(guò)敏性鼻炎、鼻息肉病、鼻竇炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、皮膚過(guò)敏癥、濕疹、枯草熱、過(guò)敏性腸胃炎或Churg-Strauss綜合征。
在另一實(shí)施方式中，可用本發(fā)明治療方法治療的疾病是Th1細(xì)胞介導(dǎo)的疾病和/或癥狀，選自間質(zhì)性肺病(ILD)(如特發(fā)性肺纖維癥)、超敏性肺病和超敏性肺炎。在優(yōu)選實(shí)施方式中，此治療方法可用于任何類型的病因或發(fā)病機(jī)制所引起的輕度、中度或重度哮喘患者。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，該方法用于慢性持續(xù)性哮喘患者或中度到重度哮喘患者。具體說(shuō)，可將本方法用于皮質(zhì)類固醇控制不佳的哮喘患者。在其它特定實(shí)施方式中，可用本發(fā)明方法治療特應(yīng)性或非特應(yīng)性哮喘患者，特應(yīng)性或非特應(yīng)性哮喘包括但不限于過(guò)敏性哮喘、支氣管哮喘、鍛煉引起的哮喘、職業(yè)性哮喘、細(xì)菌感染引起的哮喘和“嬰兒氣喘(wheezy-infant)綜合征”。在一個(gè)實(shí)施方式中，治療哮喘的方法還包括將聯(lián)用的哮喘藥物給予患者。在優(yōu)選實(shí)施方式中，所述聯(lián)用哮喘藥物選自吸入或口服類固醇，白三烯改良劑，吸入或口服β2-激動(dòng)劑和吸入性異丙托銨。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，聯(lián)用哮喘藥物是吸入性類固醇，選自倍氯米松、布地縮松、氟尼縮松、氟替卡松、曲安西龍、莫米松和奈德(acetonide)。
在優(yōu)選實(shí)施方式中，用單克隆抗體，具體是嵌合的人源化抗體或人抗體實(shí)施本發(fā)明方法。在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，該抗體能中和IL-2受體的一種或多種生物學(xué)活性。
在尤其優(yōu)選的實(shí)施方式中，實(shí)施本發(fā)明治療方法中與IL-2受體特異性結(jié)合的抗體是達(dá)珠單抗，或與達(dá)珠單抗結(jié)合于相同表位的抗體。在另一實(shí)施方式中，可采用含有與達(dá)珠單抗的CDR氨基酸序列至少60％相同的抗體來(lái)實(shí)施該治療方法。在其它實(shí)施方式中，實(shí)施該方法所用的抗-IL2受體抗體的CDR中至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或甚至99％氨基酸序列與達(dá)珠單抗CDR相同。在優(yōu)選實(shí)施方式中，實(shí)施本發(fā)明方法所用的抗體與所述人IL-2受體的結(jié)合親和力至少為108M-1，更優(yōu)選至少109M-1。
在優(yōu)選實(shí)施方式中，實(shí)施本發(fā)明方法可通過(guò)胃腸道外、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下給予含有抗IL2受體抗體的藥物制劑。在優(yōu)選實(shí)施方式中，所述制劑含有達(dá)珠單抗。在優(yōu)選實(shí)施方式中，實(shí)施該方法所用藥物制劑是含有約100mg/ml達(dá)珠單抗，約20-60mM琥珀酸緩沖液(或20-70mM組氨酸緩沖液)，pH約為5.5-6.5，約含0.01％-0.1％聚山梨醇酯和維持等滲性的張力緩沖劑(例如約75-150mM NaCl或約1-100mM MgCl2)的液體。
在其它實(shí)施方式中，實(shí)施本發(fā)明方法的藥物制劑的治療有效量是0.001mg/kg至10mg/kg，優(yōu)選約0.5mg/kg至4.0mg/kg。在一些實(shí)施方式中，治療有效量是約100mg和200mg之間的固定劑量。
附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1描述了實(shí)施例1所述中度到重度慢性持續(xù)性哮喘患者的達(dá)珠單抗II期研究的研究方案。
圖2描述了實(shí)施例1所述中度到重度慢性持續(xù)性哮喘患者的達(dá)珠單抗II期研究的預(yù)備(run-in)期間進(jìn)行吸入性皮質(zhì)類固醇滴定的方案。
圖3是實(shí)施例1所述II期研究對(duì)患者評(píng)價(jià)的時(shí)間表。
發(fā)明詳述定義本文所用“抗體”指與某具體抗原特異性結(jié)合，或與某具體抗原產(chǎn)生免疫反應(yīng)的免疫球蛋白分子，包括多克隆和單克隆抗體。該術(shù)語(yǔ)也包括免疫球蛋白的遺傳工程改造形式或修飾形式，如嵌合抗體、人源化抗體、異質(zhì)偶聯(lián)抗體(如雙特異性抗體、二抗體、三抗體和四抗體)和抗體的抗原結(jié)合片段，包括例如Fab’、F(ab’)2、Fab、Fv、rIgG和scFv片段。術(shù)語(yǔ)“scFv”指單鏈Fv抗體，此抗體中傳統(tǒng)的雙鏈抗體的重鏈和輕鏈的可變區(qū)連接成一條鏈。一般地，將接頭肽插入兩條鏈之間，使之適當(dāng)折疊而產(chǎn)生活性結(jié)合位點(diǎn)。此外，本文所用術(shù)語(yǔ)“抗體”的意思也包括對(duì)特異性抗原有反應(yīng)性的一種以上抗體的混合物(如能與IL-2受體反應(yīng)的不同類型單克隆抗體的混合物)。
本文所用術(shù)語(yǔ)“特異性結(jié)合”、“選擇性結(jié)合”、“特異性反應(yīng)”或“特異性免疫反應(yīng)”指可用于在異源性蛋白和其它生物分子群體中確定抗體存在的結(jié)合反應(yīng)。換句話說(shuō)，是指抗體基本上不與特定抗原以外的任何抗原發(fā)生交叉反應(yīng)的結(jié)合反應(yīng)。因此，例如，當(dāng)抗體與所需抗原結(jié)合的親和力至少比背景(即非特異性/交叉反應(yīng)結(jié)合水平)高兩倍，更通常比背景高10-100倍以上時(shí)發(fā)生特異性結(jié)合?？贵w與所需抗原的特異性結(jié)合通常需要為具體抗原選擇抗體。例如，可選擇產(chǎn)生能與某具體蛋白或其多態(tài)性變體、等位基因、直向同源物、保守性修飾變體、剪接變體特異性結(jié)合的多克隆抗體，來(lái)獲得僅與所選蛋白質(zhì)(如IL-2受體)而不與其它蛋白質(zhì)發(fā)生特異性免疫反應(yīng)的抗體?？赏ㄟ^(guò)去掉與其它分子發(fā)生交叉反應(yīng)的抗體來(lái)實(shí)現(xiàn)此種選擇?？刹捎酶鞣N形式的免疫測(cè)定來(lái)選擇與某具體蛋白發(fā)生特異性反應(yīng)的抗體。例如，常采用固相ELISA免疫測(cè)定來(lái)選擇與某蛋白起特異性反應(yīng)的抗體(參見(jiàn)例如，Harlow和Lane，《抗體，實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》(Antibodies，A Laboratory Manual)(1988)中對(duì)可用于確定特異性免疫反應(yīng)的免疫測(cè)定形式和條件的描述)。
本文所用的“IgG類抗體”指IgGl、IgG2、IgG3和IgG4抗體。重鏈和輕鏈中的氨基酸殘基編號(hào)是EU指數(shù)編號(hào)(Kabat等，“免疫學(xué)感興趣蛋白質(zhì)的序列”(序列of Proteins of Immunological Interest)，第5版，國(guó)立衛(wèi)生研究院，Bethesda，MD(1991)；本文采用了EU編號(hào))。
“表位”或“抗原決定簇”指抗原上的抗體結(jié)合位點(diǎn)。蛋白質(zhì)的毗連氨基酸或非毗連氨基酸可通過(guò)三維折疊并列形成表位。通常毗連氨基酸形成的表位在接觸變性溶劑時(shí)可保存下來(lái)，而由三維折疊形成的表位用變性溶劑處理時(shí)常丟失。一個(gè)表位一般包含具有獨(dú)特空間構(gòu)象的至少三個(gè)，更常至少5個(gè)或6-10個(gè)氨基酸。確定表位的空間構(gòu)象的方法包括，例如，X射線晶體學(xué)和二維核磁共振。參見(jiàn)例如分子生物學(xué)方法中的表位制圖方案(Epitope Mapping Protocols in Methods in MolecularBiology，第66卷，Glenn E.Morris編，(1996)。如果某蛋白中的氨基酸突變降低或消除了一種抗體的結(jié)合也可降低或消除另一種抗體的結(jié)合，和/或如果兩種抗體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合該蛋白，即一種抗體與該蛋白的結(jié)合能降低或消除另一種抗體的結(jié)合，則稱這兩種抗體能與該蛋白的同一表位結(jié)合。
本文所用“VH”或“VH”指抗體免疫球蛋白的重鏈可變區(qū)，包括抗體重鏈的抗原結(jié)合片段，例如Fv、scFv或Fab。提到“VL”或“VL”指免疫球蛋白的輕鏈可變區(qū)，包括抗體輕鏈的抗原結(jié)合片段，例如Fv、scFv、dsFv或Fab。
抗體的輕鏈和重鏈可變區(qū)含有被三個(gè)超變區(qū)隔開的四個(gè)“構(gòu)架”區(qū)，三個(gè)超變區(qū)也稱為“互補(bǔ)決定區(qū)”或“CDR”。構(gòu)架區(qū)和CDR的含義是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的(參見(jiàn)例如Kabat等，“免疫學(xué)感興趣的蛋白質(zhì)序列”(Sequences of Proteins ofImmunological Interest)，第5版，國(guó)立衛(wèi)生研究院，Bethesda，MD(1991))。不同輕鏈或重鏈的構(gòu)架區(qū)序列在一種動(dòng)物中相對(duì)保守。抗體的構(gòu)架區(qū)，即組成輕鏈和重鏈的聯(lián)合構(gòu)架區(qū)作用是以三維空間定位和排列CDR。CDR主要負(fù)責(zé)結(jié)合抗原表位。各鏈的CDR一般稱為CDR1、CDR2和CDR3，從N末端開始依次編號(hào)，一般也用具體CDR所在的鏈標(biāo)識(shí)。因此，VHCDR3位于抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域中，而VLCDR1是抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR1。
本文所用術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”不限于通過(guò)雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生的抗體，還指由單克隆，包括真核、原核或噬菌體克隆衍生的抗體，而不是生產(chǎn)它的方法?？捎帽绢I(lǐng)域已知的各種技術(shù)，包括雜交瘤、重組和噬菌體呈現(xiàn)技術(shù)或其組合來(lái)制備用于本發(fā)明的單克隆抗體。例如，可用雜交瘤技術(shù)，包括本領(lǐng)域已知技術(shù)和，例如，Harlow和Lane，《抗體實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》(AntibodiesA Laboratory Manual)，Cold Spring HarborLaboratory Press，New York(1988)；Hammerling等，《單克隆抗體和T細(xì)胞雜交瘤》(Monoclonal Antibodies and T-cell Hybridomas)，Elsevier，New York(1981)，第563-681頁(yè)(將其全文納入本文作為參考)中所述的技術(shù)來(lái)生產(chǎn)單克隆抗體?？赏ㄟ^(guò)選擇重組抗體的噬菌體或類似載體文庫(kù)，參見(jiàn)例如，Huse等，Science 2461275-1281(1989)；Ward等，Nature 341544-546(1989)和Vaughan等，NatureBiotech.14309-314(1996)或通過(guò)用抗原或用編碼該抗原的DNA免疫動(dòng)物來(lái)生產(chǎn)抗體。
術(shù)語(yǔ)“遺傳方法改變的抗體”指其氨基酸序列不同于親代(即未改變)抗體的抗體。因此，本發(fā)明方法所用的抗IL2受體的抗體的氨基酸序列不只限于天然抗體中發(fā)現(xiàn)的序列；可用熟知的重組DNA技術(shù)重新設(shè)計(jì)抗體，使其獲得所需特性?？赡艿淖兓菑膬H改變一個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸到完全重新設(shè)計(jì)，例如可變區(qū)或恒定區(qū)。可通過(guò)定位突變?cè)诤愣▍^(qū)中引入改變，以提高或改變治療性抗體的功能特性，如免疫原性、藥代動(dòng)力學(xué)特性(如血清半衰期)、補(bǔ)體結(jié)合、與膜的相互作用和其它效應(yīng)器功能。通常，可對(duì)抗體可變區(qū)進(jìn)行改變以提高抗原結(jié)合特性。
“基本相同的恒定區(qū)”指抗體恒定區(qū)中至少約85-90％，優(yōu)選至少95％的氨基酸序列與天然或未改變抗體恒定區(qū)相同。
本文所用術(shù)語(yǔ)“嵌合抗體”指一種免疫球蛋白分子(a)它的恒定區(qū)或其一部分被改變、替換或交換，使其抗原結(jié)合位點(diǎn)(可變區(qū))連接于不同類型或類型、效應(yīng)功能改變的和/或另一種動(dòng)物的恒定區(qū)，或連接于能賦予該嵌合抗體新特性的完全不同的分子，例如酶、毒素、激素、生長(zhǎng)因子、藥物等；或(b)它的可變區(qū)或其一部分被抗原特異性不同或改變的可變區(qū)所改變、替換或交換。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知產(chǎn)生嵌合抗體的方法。參見(jiàn)例如Morrison等，Science 2291202-1207(1985)；Oi等，BioTechniques 4214-221(1986)；Gillies等，J.Immunol.Methods 125191-202(1989)；和美國(guó)專利號(hào)5,807,715；4,816,567和4,816,397，各自以全文納入本文作為參考。
術(shù)語(yǔ)“人源化抗體”指包含人構(gòu)架、和非人抗體的至少一個(gè)CDR優(yōu)選所有CDR的免疫球蛋白，其恒定區(qū)與人免疫球蛋白恒定區(qū)基本相同，即至少約85-90％，優(yōu)選至少95％相同。因此，可能除CDR外，人源化免疫球蛋白的所有部分均與一種或多種天然人免疫球蛋白序列的相應(yīng)部分基本相同。因此，這種人源化抗體是嵌合抗體，這種抗體中基本上整個(gè)人可變區(qū)幾乎都被非人動(dòng)物的相應(yīng)序列取代。人構(gòu)架區(qū)中的構(gòu)架殘基可被CDR供體抗體的相應(yīng)殘基所取代，以改變，優(yōu)選提高其抗原結(jié)合性能?？捎帽绢I(lǐng)域熟知方法，例如，可通過(guò)模擬CDR和構(gòu)架殘基的相互作用，鑒定出對(duì)抗原結(jié)合很重要的構(gòu)架殘基，和通過(guò)序列比較鑒定具體位置上不尋常的構(gòu)架殘基來(lái)鑒定這些構(gòu)架的取代。參見(jiàn)例如，Queen等，美國(guó)專利號(hào)5,530,101；5,585,089；5,693,761；5,693,762；6,180,370(各自全文納入本文作為參考)?？捎帽绢I(lǐng)域已知的各種技術(shù)，包括例如，CDR-移植(EP 239，400；PCT公告WO 91/09967；美國(guó)專利號(hào)5,225,539；5,530,101和5,585,089)、表面鑲飾或更新表面(EP 592,106；EP519,596；Padlan，Mol.Immunol.，28489-498(1991)；Studnicka等，Prot.Eng.7805-814(1994)；Roguska等，Proc.Natl.Acad.Sci.91969-973(1994)和鏈改組(美國(guó)專利號(hào)5,565,332)使抗體人源化，將它們以全文納入本文作為參考。
術(shù)語(yǔ)“人抗體”指含有人可變區(qū)和恒定區(qū)的抗體。在用本發(fā)明方法治療人類患者時(shí)，可能需要人抗體?？捎帽绢I(lǐng)域已知的各種方法，包括上述噬菌體呈現(xiàn)法，用衍生自人免疫球蛋白序列的抗體文庫(kù)產(chǎn)生或獲得人抗體。參見(jiàn)美國(guó)專利號(hào)4,444,887和4,716,111；和PCT公告WO 98/46645；WO 98/50433；WO 98/24893；WO 98/16654；WO 96/34096；WO 96/33735和WO 91/10741，各自以全文納入本文作為參考。也可用不能表達(dá)功能性內(nèi)源性免疫球蛋白，但可表達(dá)人免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因小鼠生產(chǎn)人抗體。生產(chǎn)人抗體技術(shù)的綜述參見(jiàn)Lonberg和Huszar，Int.Rev.Immunol.1365-93(1995)。生產(chǎn)人抗體和人單克隆抗體的技術(shù)和生產(chǎn)這種抗體的方法詳細(xì)討論參見(jiàn)例如，PCT公告WO 98/24893；WO 92/01047；WO 96/34096；WO 96/33735；歐洲專利號(hào)0 598 877；美國(guó)專利號(hào)5,413,923；5,625,126；5,633,425；5,569,825；5,661,016；5,545,806；5,814,318；5,885,793；5,916,771和5,939,598，將其全文納入本文作為參考。此外，一些公司如Abgenix，Inc.(Fremont，CA)和Medarex(Princeton，NJ)從事于用上述技術(shù)相類似技術(shù)來(lái)提供針對(duì)所選抗原的抗體。也可用稱為“導(dǎo)向選擇”的技術(shù)產(chǎn)生能識(shí)別所選表位的完全人抗體。在此方法中，利用所選的非人單克隆抗體，如小鼠抗體來(lái)指導(dǎo)識(shí)別相同表位的完全人抗體的選擇(Jespers等，Biotechnology 12899-903(1988)。
術(shù)語(yǔ)“靈長(zhǎng)類化抗體”指含有猴可變區(qū)和人恒定區(qū)的抗體。生產(chǎn)靈長(zhǎng)類化抗體的方法是本領(lǐng)域已知的。參見(jiàn)例如，美國(guó)專利號(hào)5,658,570；5,681,722和5,693,780，將其全文納入本文作為參考。
術(shù)語(yǔ)“氨基酸”指天然產(chǎn)生的氨基酸和合成的氨基酸，以及與天然產(chǎn)生的氨基酸功能類似的氨基酸類似物和氨基酸模擬物。本文中用通常所知的三字母符號(hào)或IUPAC-IUB生物化學(xué)命名委員會(huì)推薦的單字母符號(hào)代表氨基酸。同樣，可用通常所接受的單字母代碼代表核苷酸。
“天然產(chǎn)生的氨基酸”指由遺傳密碼編碼的氨基酸，以及后來(lái)被修飾的氨基酸，如羥脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和鄰-磷酸絲氨酸。
“氨基酸類似物”指與天然產(chǎn)生的氨基酸的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)相同的化合物，例如，其α碳結(jié)合于氫、羧基、氨基和R基團(tuán)的氨基酸，如高絲氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亞砜、甲硫氨酸甲基锍。這些類似物可具有修飾的R基團(tuán)(如正亮氨酸)或修飾的酰胺基，但保留了與天然產(chǎn)生的氨基酸相同的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)。“氨基酸模擬物”指其結(jié)構(gòu)與氨基酸的通?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)不同的化合物，但其功能與天然產(chǎn)生的氨基酸類似。
本文中術(shù)語(yǔ)“多肽”、“肽”和“蛋白質(zhì)”可互換地使用，指通過(guò)肽鍵連接的氨基酸殘基聚合物。該術(shù)語(yǔ)應(yīng)用于其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基是相應(yīng)的天然產(chǎn)生氨基酸的人工化學(xué)模擬物的氨基酸聚合物，也用于天然產(chǎn)生的含有修飾殘基的氨基酸聚合物和非天然產(chǎn)生的氨基酸聚合物。
在兩種或多種氨基酸或核苷酸序列中，術(shù)語(yǔ)“相同”或“相同性”百分?jǐn)?shù)指兩種或多種序列或亞序列相同或一定百分?jǐn)?shù)的氨基酸殘基或核苷酸相同(即在比較和比對(duì)的比較窗口區(qū)域或指定區(qū)域最大程度相對(duì)應(yīng)時(shí)，在指定區(qū)域上約有60％相同，優(yōu)選70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的相同性)，如用BLAST或BLAST 2.0序列比較算法以下述默認(rèn)參數(shù)測(cè)量，或通過(guò)手工排列比對(duì)和目測(cè)觀察(參見(jiàn)例如，位于www.ncbi.nlm.nih.govNCBI網(wǎng)站上的BLAST說(shuō)明)。然后稱這些序列“基本相同”。此定義也指，或可應(yīng)用于，測(cè)試序列的互補(bǔ)物。該定義也包括含有缺失和/或加入的序列，以及含有取代的序列，以及天然產(chǎn)生的序列，例如，多肽性變體或等位基因變體和人造變體。測(cè)定序列相同性的熟知算法可算出空格等。優(yōu)選地，在長(zhǎng)至少約25個(gè)氨基酸或核苷酸的區(qū)域上，或更優(yōu)選在長(zhǎng)50-100個(gè)氨基酸或核苷酸的區(qū)域上存在相同性。
本文所用“保守性修飾的變體”可應(yīng)用于氨基酸或核酸序列變體。對(duì)氨基酸序列而言，保守性修飾的變體序列包括含有加入或缺失一個(gè)或小百分?jǐn)?shù)的氨基酸，或用化學(xué)上相似的氨基酸取代一個(gè)或小百分?jǐn)?shù)的氨基酸的取代、缺失或加入的序列。保守取代表提供了功能上類似的氨基酸，它是本領(lǐng)域熟知的。一般來(lái)說(shuō)，一種氨基酸與另一種氨基酸的保守性取代包括1)丙氨酸(A)，甘氨酸(G)；2)天冬氨酸(D)，谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)，谷胺酰胺(Q)；4)精氨酸(R)，賴氨酸(K)；5)異亮氨酸(I)，亮氨酸(L)，甲硫氨酸(M)，纈氨酸(V)；6)苯丙氨酸(F)，酪氨酸(Y)，色氨酸(W)；7)絲氨酸(S)，蘇氨酸(T)；和8)半胱氨酸(C)，甲硫氨酸(M)(參見(jiàn)例如，ThomasE。Creighton，“蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和分子特性”(ProteinsStructures and MolecularProperties)(ISBN 071677030X，W.H.Freeman，1992))。此外這些氨基酸序列的保守性修飾變體不包括本發(fā)明的多肽性變體、種間同源物和等位基因。
對(duì)核酸序列而言，保守性修飾的變體指編碼相同或基本相同的氨基酸序列的序列(如編碼保守性修飾變體氨基酸序列的核酸序列)。當(dāng)核酸序列不編碼氨基酸序列時(shí)，基本相同或相關(guān)的，例如，天然毗連的序列。由于遺傳密碼的簡(jiǎn)并性，許多保守性修飾的變體核酸序列可編碼大部分蛋白質(zhì)。例如，密碼子GCA、GCC、GCG和GCU都編碼氨基酸丙氨酸。因此，在一個(gè)密碼子所確定的每個(gè)位置丙氨酸，可將該密碼子改變?yōu)榱硪粋€(gè)所述的相應(yīng)密碼子，而不會(huì)改變編碼的多肽。這種核酸變異是“沉默變異”，它是保守性修飾變異的一種。本文中對(duì)每個(gè)編碼多肽的核酸序列也描述了該核酸的沉默變異。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道，在某些內(nèi)容中，可修飾核酸中各密碼子(除了AUG和TGG，前者通常是甲硫氨酸唯一的密碼子，后者通常是色氨酸唯一的密碼子)，而產(chǎn)生功能相同的分子。因此，編碼某多肽的核酸中常有沉默變異隱含在表達(dá)產(chǎn)物的所述序列中，但在實(shí)際探針序列方面不能隱含。
術(shù)語(yǔ)“分離”、“純化”或“生物純”指基本或?qū)嵸|(zhì)上不含通常見(jiàn)于其天然狀態(tài)時(shí)相伴隨成分的材料。一般用分析化學(xué)技術(shù)如聚丙烯酰胺凝膠電泳或高效液相色譜來(lái)測(cè)定純度和均一性?；旧霞兓侵破分写嬖诘闹饕镔|(zhì)為蛋白質(zhì)或核酸。具體說(shuō)，從一些開放閱讀框中分離核酸，這些開放閱讀框天然側(cè)接有基因，該基因編碼的蛋白不同于閱讀框所編碼的蛋白。在一些實(shí)施方式中，術(shù)語(yǔ)“純化的”核酸或蛋白指其在凝膠電泳中基本上只產(chǎn)生一條條帶。優(yōu)選地，指核酸或蛋白至少為85％純，更優(yōu)選至少95％純，最優(yōu)選至少99％純。在其它實(shí)施方式中，“純化”指去除待純化組合物中的至少一種污染物。在這種情況下，純化不需要純化的化合物是均一的，例如100％純。
本文所用“運(yùn)載體”包括藥學(xué)上可接受的運(yùn)載體、賦形劑或穩(wěn)定劑，它們?cè)谒捎玫膭┝亢蜐舛葧r(shí)對(duì)接觸的細(xì)胞或哺乳動(dòng)物無(wú)毒。生理上可接受的運(yùn)載體常常是pH緩沖水溶液。生理上可接受的運(yùn)載體的例子包括緩沖液如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機(jī)酸，抗氧化劑包括抗壞血酸；低分子量(約少于10個(gè)殘基)多肽；蛋白，如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸、谷胺酰胺、天冬酰胺、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或右旋糖苷；螯合劑如EDTA；糖醇如甘露醇或山梨醇；成鹽反離子如鈉；和/或非離子表面活性劑如吐溫、聚乙二醇(PEG)和PLURONICSTM。
本文所用“治療有效量”指足以治愈、緩解、減弱或至少部分抑制疾病和/或其癥狀和/或并發(fā)癥的藥物、藥物活性物質(zhì)、藥物制劑或組合物的量。
“治療”指治療性處理和預(yù)防性措施。需要治療的對(duì)象包括已患有該疾病的對(duì)象以及需要預(yù)防該疾病的對(duì)象。
本文中可互換地使用“對(duì)象”或“患者”，它們指脊椎動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選人。
本文所用術(shù)語(yǔ)“衍生自”指“獲自”或“由...產(chǎn)生”或“從...傳下來(lái)”。
發(fā)明描述疾病指征本發(fā)明提供了在需要治療或預(yù)防的對(duì)象中治療或預(yù)防呼吸道疾病的方法。該治療方法包括給予治療有效量的抗體，該抗體能夠特異性抑制IL-2與IL-2受體的結(jié)合和/或抑制IL-2介導(dǎo)的淋巴細(xì)胞活化。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，靶向的呼吸道疾病是哮喘。本方法可用于治療任何類型、病因或發(fā)病機(jī)制的輕度、中度或重度哮喘。如本文公開的數(shù)據(jù)所證明，本方法對(duì)慢性持續(xù)性哮喘特別有效，尤其是對(duì)皮質(zhì)類固醇控制不佳的哮喘患者。而且，可采用本發(fā)明方法治療特應(yīng)性或非特應(yīng)性哮喘，包括過(guò)敏性哮喘、支氣管哮喘、鍛煉引起的哮喘、職業(yè)性哮喘、細(xì)菌感染引起的哮喘、“嬰兒氣喘綜合征”(即也可鑒定為初期或早期4歲或5歲以下哮喘患兒觀察到的夜間氣喘癥狀)，和其它非過(guò)敏性哮喘。
可用本領(lǐng)域熟知方法衡量哮喘的療效。已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的哮喘治療方法可產(chǎn)生表明其療效的以下一種或多種結(jié)果肺功能提高(肺活量測(cè)定法)，哮喘加重減緩，早晨峰值呼氣流速提高，救援藥物使用減少，白天和夜間哮喘癥狀減少，無(wú)哮喘天數(shù)增加，發(fā)展至哮喘加重的時(shí)間延長(zhǎng)和一秒內(nèi)用力呼氣量(FEV1)增加。
本治療方法還可包括將聯(lián)用的哮喘藥物(如吸入性類固醇)給予患者。優(yōu)選地，在類固醇治療呼吸道疾病，如哮喘中采用的一種藥物。更優(yōu)選地，該類固醇選自倍氯米松，布地縮松，氟尼縮松，氟替卡松和曲安西龍的一種或多種。在一個(gè)實(shí)施方式中，類固醇可以配制在抗IL-2受體的抗體同一劑型中。在另一實(shí)施方式中，分別給予病人類固醇和給予抗IL-2受體的抗體。在一個(gè)實(shí)施方式中，當(dāng)沒(méi)有抗IL-2受體的抗體時(shí)，給予類固醇的量不足以治療或預(yù)防呼吸道疾病，如哮喘。
在一個(gè)實(shí)施方式中，給予類固醇的量不足以使患者發(fā)生任何副反應(yīng)或潮紅。優(yōu)選給予類固醇的最高可能劑量是不足以使患者發(fā)生任何副反應(yīng)或潮紅的劑量。
根據(jù)抗IL2受體的抗體所證明的療效，達(dá)珠單抗能降低嚴(yán)重哮喘患者的嗜酸性粒細(xì)胞水平，可合理地預(yù)計(jì)本發(fā)明方法能夠用于治療其它呼吸道或過(guò)敏性疾病和/或癥狀。嗜酸性粒細(xì)胞水平提高是許多T細(xì)胞介導(dǎo)的過(guò)敏性疾病的特征。也知道達(dá)珠單抗能夠降低T細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的產(chǎn)生。因此，根據(jù)本發(fā)明方法，可用達(dá)珠單抗(或其它抗IL2受體的抗體)治療T細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)相關(guān)的疾病或癥狀。
可治療的T細(xì)胞介導(dǎo)的呼吸道和/或過(guò)敏性疾病和/或癥狀包括Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞介導(dǎo)的疾病。例如，可根據(jù)本發(fā)明方法用達(dá)珠單抗治療的特異性Th2細(xì)胞介導(dǎo)的過(guò)敏性疾病和/或癥狀包括但不限于哮喘、特應(yīng)性皮炎、過(guò)敏反應(yīng)、風(fēng)疹(蕁麻疹)、過(guò)敏性鼻炎、鼻息肉病、鼻竇炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、皮膚過(guò)敏癥、濕疹、枯草熱、過(guò)敏性腸胃炎、Churg-Strauss綜合征?？捎帽景l(fā)明達(dá)珠單抗療法治療的Th1細(xì)胞介導(dǎo)的呼吸道疾病和/或癥狀包括但不限于間質(zhì)性肺病(ILD)(例如，特應(yīng)性肺纖維癥)，超敏性肺病和超敏性肺炎。
此外，間質(zhì)性肺病(ILD)常伴有各種全身性自身免疫疾病，包括但不限于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、強(qiáng)直性脊柱炎、系統(tǒng)性硬化、舍格倫綜合征、花粉病、硬皮病、結(jié)節(jié)病、多肌炎或皮肌炎。結(jié)果，本發(fā)明的抗IL2受體的抗體療法可單獨(dú)或與其它治療相結(jié)合地用于治療這些全身性自身免疫疾病伴有的疾病和/或癥狀。
嗜酸性粒細(xì)胞介導(dǎo)的疾病和/或癥狀包括但不限于肺嗜酸性粒細(xì)胞增多、嗜酸性粒細(xì)胞性肌痛綜合征、熱帶嗜酸性粒細(xì)胞增多、高嗜酸性粒細(xì)胞綜合征和寄生蟲感染，包括但不限于血吸蟲病。目前，采用IL-5療法治療許多這些嗜酸性粒細(xì)胞介導(dǎo)的疾病。根據(jù)其降低T細(xì)胞介導(dǎo)疾病(如哮喘)中嗜酸性粒細(xì)胞水平的效果，本發(fā)明的抗IL2受體的抗體療法也可單獨(dú)或與其它治療相結(jié)合地用于治療這些嗜酸性粒細(xì)胞介導(dǎo)的疾病。
慢性阻塞性肺部(或呼吸道)疾病(COPD)是生理學(xué)上定義為氣道阻塞的疾病，這通常由肺氣腫和慢性支氣管炎引起的外周氣道阻塞相混合而造成。COPD是世界上第五位的主要死亡原因，極需要有效的藥物和療法。COPD是慢性肺病的一個(gè)亞群，也包括哮喘，其特征是氣道組織慢性炎癥和/或纖維化。這些疾病具有許多共同的病理學(xué)特征，因此，可合理地預(yù)計(jì)本發(fā)明的抗IL2受體的抗體療法可用于治療COPD。
抗IL-2受體的抗體用于本發(fā)明的抗IL-2受體的抗體包括能結(jié)合IL-2受體任何表位的抗體。優(yōu)選該表位發(fā)現(xiàn)于IL-2受體的α亞基(p55α、CD25或Tac亞基)上。這些抗體包括天然抗IL-2受體的抗體(由宿主動(dòng)物產(chǎn)生的抗體)和重組的抗IL-2受體的抗體。包括所有動(dòng)物來(lái)源的抗IL-2受體的抗體。非限制性示范性天然抗IL-2受體的抗體包括人、雞、山羊和嚙齒動(dòng)物(例如大鼠、小鼠、倉(cāng)鼠和兔)產(chǎn)生的，包括經(jīng)遺傳工程改造的轉(zhuǎn)基因嚙齒動(dòng)物所產(chǎn)生的(參見(jiàn)例如，美國(guó)專利號(hào)6,300,129 B1(Lonberg等)，和美國(guó)專利號(hào)6,114,598(Kucherlapati等)，各自以全文納入本文作為參考)抗IL-2受體的人抗體。也可用噬菌體呈現(xiàn)方法制造用于本發(fā)明的抗體(參見(jiàn)例如，美國(guó)專利號(hào)5,427,908(Dower等)和美國(guó)專利號(hào)5,969,108(Bonnert等)，各自以全文納入本文作為參考)。為了用于人類患者，該抗體必須能特異性結(jié)合人IL-2受體。該抗體與IL-2受體的結(jié)合親和力應(yīng)該至少為107M-1，但優(yōu)選至少108M-1，更優(yōu)選至少108M-1，最優(yōu)選109M-1，理想是1010M-1或更高。用噬菌體呈現(xiàn)法或其它方法體外誘變可提高抗體的親和力(參見(jiàn)例如，Co等，美國(guó)專利號(hào)5,714,350，將其全文納入本文作為參考)。
優(yōu)選該抗體能特異性結(jié)合IL-2受體的α亞基(p55α、CD25或Tac亞基)。更優(yōu)選IL-2受體是在活化淋巴細(xì)胞表面上表達(dá)的IL-2受體。淋巴細(xì)胞優(yōu)選T細(xì)胞。
優(yōu)選該抗體能中和IL-2受體的至少一種生物學(xué)特性，但最優(yōu)選能中和所有生物學(xué)特性，例如IL-2介導(dǎo)的淋巴細(xì)胞活化。該抗體通常會(huì)抑制或阻斷IL-2受體與IL-2的結(jié)合。該抗體應(yīng)能抑制活化T細(xì)胞的增殖和活化，或誘導(dǎo)活化的T細(xì)胞調(diào)亡。
優(yōu)選該抗體不能特異性結(jié)合Fcγ受體，因此在大多數(shù)或所有患者中，該抗體基本上不激活T細(xì)胞的促有絲分裂反應(yīng)。優(yōu)選該抗體作為免疫抑制劑具有以下優(yōu)良特性至少能抑制大多數(shù)(例如至少67％、75％、90％或95％)患者的T細(xì)胞的免疫應(yīng)答反應(yīng)，而不誘導(dǎo)可引起釋放有害細(xì)胞因子的促有絲分裂活性。
可通過(guò)用人IL-2受體免疫非人宿主動(dòng)物而產(chǎn)生抗IL-2受體的多克隆抗體?？捎帽绢I(lǐng)域熟知的免疫和雜交瘤方法產(chǎn)生該單克隆抗體(參見(jiàn)例如，Harlow和Lane，“抗體實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)”(AntibodiesA Laboratory Manual)，Cold Spring HarborLaboratory Press，New York(1988)；Hammering等，“單克隆抗體和T細(xì)胞雜交瘤”(Monoclonal Antibodies And T-Cell Hybridomas)，Elsevier，New York(1981)，第563-681頁(yè))。例如，可如Uchiyama等，J.Immunol.126(4)，1393(1981)所述方法產(chǎn)生和初步篩選單克隆抗體，以獲得IL-2受體的特異性抗體。另一種適合的單克隆抗體是M7/20單克隆抗體，如Gaulton等(Clin.Immunol.和Immunopath(1985))所述，它是L-2受體的特異性單克隆大鼠抗小鼠κ、u、Ig抗體見(jiàn)美國(guó)專利號(hào)5,916,559，將其全文納入本文作為參考)。另一合適的單克隆抗體是雜交瘤ATCCHB-8555產(chǎn)生的2A3單克隆抗體，公開于美國(guó)專利號(hào)4,845,198，將其全文納入本文作為參考。美國(guó)專利號(hào)4,411,993和4,473,493中描述了其它合適的抗IL-2抗體，各自以全文納入本文作為參考。
也可采用重組DNA技術(shù)產(chǎn)生重組的抗IL-2受體的抗體，用于本發(fā)明。這種重組抗體的可變區(qū)和/或恒定區(qū)氨基酸序列不需要經(jīng)遺傳改變，但可與天然抗體的序列相同。用于本發(fā)明的重組抗IL-2受體的抗體包括任何表達(dá)系統(tǒng)包括原核和真核表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生的抗體。
示范性原核系統(tǒng)一般是能夠表達(dá)外部引入的核酸序列的細(xì)菌系統(tǒng)。示范性真核表達(dá)系統(tǒng)包括真菌表達(dá)系統(tǒng)，病毒表達(dá)系統(tǒng)包括真核細(xì)胞如昆蟲細(xì)胞、植物細(xì)胞、尤其是哺乳動(dòng)物細(xì)胞(如CHO細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞如NSO和SP2/0)，這些是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的。參見(jiàn)例如，Morrison等，Science 2291202-1207(1985)；Oi等，BioTechniques 4214-221(1986)；Gillies等，J.Immunol.Methods 125191-202(1989)和美國(guó)專利號(hào)5,807,715；4,816,567和4,816,397，各自以全文納入本文作為參考。也可通過(guò)化學(xué)合成生產(chǎn)該抗體。無(wú)論如何生產(chǎn)抗體，可用本領(lǐng)域熟知方法，如過(guò)濾、層析(如親和層析，如通過(guò)蛋白A、陽(yáng)離子交換層析、陰離子交換層析和凝膠過(guò)濾)純化抗IL-2受體的抗體。通常，用于藥物制劑的抗體的最小可接受純度是90％，優(yōu)選95％，更優(yōu)選98％，最優(yōu)選99％或更高。
或者，可通過(guò)遺傳方法改變?cè)撝亟M構(gòu)建物的可變區(qū)和/或恒定區(qū)序列。優(yōu)選用于本發(fā)明的遺傳方法改變的抗IL-2受體的抗體包括能結(jié)合并中和IL-2受體的嵌合性或人源化抗體。示范性優(yōu)選的人源化抗IL-2受體的抗體是達(dá)珠單抗。達(dá)珠單抗的氨基酸和核苷酸序列公開于美國(guó)專利號(hào)5,530,101和5,693,761中，各自以全文納入本文作為參考。達(dá)珠單抗的成熟輕鏈和重鏈的氨基酸序列顯示如下達(dá)珠單抗成熟的κ輕鏈(SEQ ID NO1)DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCSASSSISYMHWYQQKPGKAPKLLIYTTSNLASGVPARFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCHQRSTYPLTFGQGTKVEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC成熟的γ-1重鏈(SEQ ID NO2)QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYRMHWVRQAPGQGLEWIGYINPSTGYTEYNQKFKDKATITADESTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGGVFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVKGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK達(dá)珠單抗(商標(biāo)ZENAPAX)是能特異性結(jié)合人高親和力IL-2受體α亞基(p55α、CD25或Tac亞基)的人源化單克隆抗體，該受體表達(dá)在活化的淋巴細(xì)胞表面。ZENAPAX由Protein Design Labs，Inc.(以下稱為“PDL”；Fremont，CA)創(chuàng)立，并由RocheLaboratories(Hoffmann-La Roche Inc.，Nutley，NJ)開發(fā)和出售。在當(dāng)前臨床實(shí)施方式中，達(dá)珠單抗是IgGl同種型抗體，然而也可產(chǎn)生具有類似治療特征的達(dá)珠單抗的IgG2M3同種型。
其它優(yōu)選抗體包括與達(dá)珠單抗相同能結(jié)合IL-2受體表位的抗體。優(yōu)選地，與達(dá)珠單抗相同能結(jié)合IL-2受體表位的該抗體的氨基酸序列與達(dá)珠單抗的氨基酸序列至少60％相同。在其它優(yōu)選實(shí)施方式中，其氨基酸序列與達(dá)珠單抗的序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％相同。
在其它優(yōu)選實(shí)施方式中，與達(dá)珠單抗相同能結(jié)合IL-2受體表位的抗體的CDR氨基酸序列與達(dá)珠單抗CDR的氨基酸序列至少60％相同。在其它優(yōu)選實(shí)施方式中，其CDR氨基酸序列與達(dá)珠單抗的CDR序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％相同。抗IL-2受體的抗體可以是任何一種已知的同種型，但四種IgG同種型中特別優(yōu)選IgG2。
也可采用遺傳方法改變的抗IL-2受體的抗體，包括結(jié)合和中和IL-2受體，或防止IL-2受體與IL-2結(jié)合的嵌合抗體來(lái)實(shí)施本發(fā)明方法。優(yōu)選該嵌合抗體含有衍生自小鼠或大鼠的可變區(qū)和衍生自人的恒定區(qū)，以使當(dāng)給予人類對(duì)象時(shí)，該嵌合抗體具有更長(zhǎng)的半衰期，且免疫原性更小。制作嵌合抗體的方法是本領(lǐng)域已知的。
本發(fā)明也包括采用能保持上述完整的抗IL-2受體的抗體的結(jié)合特異性的抗IL-2受體的抗體片段。例子包括但不限于重鏈、輕鏈和可變區(qū)，以及本文所述抗體的Fab和(Fab’)2。
也可采用抗IL2受體的抗體經(jīng)過(guò)修飾(如通過(guò)定位誘變)但功能相同(如具有相當(dāng)?shù)腎L-2受體結(jié)合親和力)的抗體實(shí)施本發(fā)明方法。例如，可修飾抗體，使其穩(wěn)定性(如血清半衰期)和/或療效提高。修飾抗體的例子包括具有氨基酸殘基的保守取代，和一個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失或加入的抗體，這些修飾不會(huì)明顯有害地改變其抗原結(jié)合用途。
取代包括在能維持療效(如特異性結(jié)合能力)的前提下改變或修飾一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基至完全重新設(shè)計(jì)該區(qū)域。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，可利用在FcRn結(jié)合區(qū)中定位突變來(lái)產(chǎn)生血清半衰期顯著延長(zhǎng)的達(dá)珠單抗(或任何其它IL2受體的結(jié)合抗體)，如2003年10月15日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)序列號(hào)10/687,118所述，將其納入本文作為參考。也可通過(guò)翻譯后修飾(如乙?；土姿峄?或合成(如連接標(biāo)記基團(tuán))本發(fā)明抗體。也可采用保持該結(jié)合特異性的這些修飾抗體的片段。
藥物制劑或組合物可將本發(fā)明抗體制成藥學(xué)組合物。因此，本發(fā)明也提供給予治療有效劑量的抗IL2受體的抗體的方法和組合物。確切的劑量將取決于治療目的，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可利用熟知技術(shù)(參見(jiàn)例如Ansel等，《藥物劑型和藥物遞送》(PharmaceuticalDosage Forms and Drug Delivery)(第6版，Media，Pa.Williams和Wilkins，1995)；《藥物劑型》(Pharmaceutical Dosage Forms)(第1-3卷，ISBN號(hào)0824785762，082476918X，0824712692，0824716981)，Lieberman等編(New YorkMarcel Dekker，Inc.，1992)；Loyd V.Allen，Jr.，《藥物組合的藝術(shù)、科學(xué)和技術(shù)》(The Art，Science and Technology of Pharmaceutical Compounding)，(AmericanPharmaceutical Association，1999)和Gloria Pickar，“劑量計(jì)算”(DosageCalculations)(Delmar Learning，1999))確定此劑量。如本領(lǐng)域所熟知的那樣，需要根據(jù)生理性降解，全身與定位遞送，和新蛋白酶合成速率，以及年齡、體重、總體健康狀況、性別、飲食、給藥時(shí)間、藥物相互作用和癥狀的嚴(yán)重程度調(diào)整，這些因素是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員用常規(guī)實(shí)驗(yàn)可確定的。
本發(fā)明的藥物制劑或組合物包含的本發(fā)明抗體可以適合劑型給予病人。在優(yōu)選實(shí)施方式中，該藥物制劑是水溶性形式，如藥學(xué)上可接受的鹽，即包括酸加成鹽和堿加成鹽提供?！八帉W(xué)上可接受的酸加成鹽”指保留了游離堿的有利生物學(xué)作用但沒(méi)有生物學(xué)其它不良作用的鹽，它們是由無(wú)機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硫磺酸、硝酸、磷酸等，和有機(jī)酸如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、馬來(lái)酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、苦杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、水楊酸等形成的鹽?！八帉W(xué)上可接受的堿加成鹽”包括衍生自無(wú)機(jī)堿的鹽，如鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、錳鹽、鋁鹽等。尤其優(yōu)選的是銨鹽、鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽和鎂鹽。衍生自藥學(xué)上可接受的有機(jī)無(wú)毒堿的鹽包括伯胺、仲胺和叔胺鹽以及取代的胺鹽，取代胺包括天然產(chǎn)生的取代胺、環(huán)胺和堿性離子交換樹脂，如異丙基胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺和乙醇胺。
該藥物制劑或組合物也可包括以下物質(zhì)的一種或多種運(yùn)載體蛋白如血清白蛋白；緩沖液；填料如微晶纖維素、乳糖、玉米和其它淀粉；粘合劑；甜味劑和其它調(diào)味劑；著色劑和聚乙二醇。
可根據(jù)給藥方法以各種單位劑量形式給予該藥物制劑。例如，適合于口服給藥的單位劑量形式包括但不限于粉劑、片劑、丸劑、膠囊和錠劑。認(rèn)識(shí)到，當(dāng)口服給予抗體時(shí)，應(yīng)該保護(hù)其不被消化。一般可通過(guò)以下方式實(shí)現(xiàn)此種保護(hù)使該分子與某化合物復(fù)合以使其能抵抗酸水解和酶水解，或?qū)⒃摲肿影b到合適的耐受性運(yùn)載體，如脂質(zhì)體或保護(hù)屏障中。保護(hù)藥物不被消化的方法是本領(lǐng)域熟知的。
給予的該藥劑通常包含溶解于藥學(xué)上可接受運(yùn)載體或賦形劑，優(yōu)選水性運(yùn)載體中的本發(fā)明抗體。可采用各種水性運(yùn)載體，例如，緩沖鹽水等。這些溶液應(yīng)滅菌，通常不含不良物質(zhì)?？赏ㄟ^(guò)常規(guī)的熟知滅菌技術(shù)使這些組合物無(wú)菌。這些組合物可含有藥學(xué)上可接受的輔助物質(zhì)，這些物質(zhì)是接近生理?xiàng)l件所需要的，如pH調(diào)節(jié)和緩沖劑、毒性調(diào)節(jié)劑等，如醋酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、乳酸鈉等。在這些制劑中活性物質(zhì)的濃度可以有很大不同，主要根據(jù)液體的體積、粘度、體重等，所選的具體給藥方式和患者需要來(lái)選擇(參見(jiàn)例如，《雷明頓藥物科學(xué)》(Remington’sPharmaceutical Science)(第15版，Mack Publ.Co.，Easton PA，1980)；和Goodman和Gillman，《治療的藥理基礎(chǔ)》(The Pharmacologial Basis ofTherapeutics)(Hardman等編，TheMcGraw-Hill Companies，Inc.，1996))。
本文提供的制劑也可按照待治療的具體疾病所需含有一種以上的活性成分，優(yōu)選含有互相之間不會(huì)發(fā)生不良影響的具有互補(bǔ)活性的成分。合適地包括能有效達(dá)到預(yù)期目的量的這種分子。
可將上述藥物制劑的活性成分包裹在微膠囊、膠體藥物遞送系統(tǒng)(如脂質(zhì)體、清蛋白微球、微乳液、納米顆粒和納米膠囊)、粗乳液或緩釋制劑中。這些技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的(參見(jiàn)例如，《雷明頓藥物科學(xué)》(Remington’s PharmaceuticalScience)(第15版，Mack Publ.Co.，Easton PA，1980))。
可給予含有本發(fā)明抗IL2受體的抗體的藥物制劑或組合物，用于治療或預(yù)防性冶療。在治療應(yīng)用中，將該組合物給予患有疾病(如哮喘)的患者，給予量足以治愈或至少部分抑制疾病，或緩解其癥狀和/或并發(fā)癥。將足以完成此目的的量定義為“治療有效劑量”。所用的治療有效量取決于具體的呼吸道疾病指征、藥物制劑的類型、疾病的嚴(yán)重程度和患者的總體健康狀態(tài)?？筛鶕?jù)病人所需和所耐受的劑量和頻率給予單劑或多劑藥物制劑。在任何情況下，該制劑應(yīng)提供足量的活性成分，以有效治療患者。
能夠預(yù)防或緩解哺乳動(dòng)物疾病發(fā)展的藥物制劑的量稱為“預(yù)防有效劑量”。預(yù)防性冶療所需的具體劑量取決于醫(yī)療條件和哺乳動(dòng)物病史、所預(yù)防的具體疾病、以及其它因素如年齡、體重、性別、給藥途徑、藥效等。例如，可對(duì)先前曾患過(guò)疾病的哺乳動(dòng)物實(shí)施這種預(yù)防性冶療以預(yù)防疾病復(fù)發(fā)，或?qū)岩珊芸赡馨l(fā)生疾病的哺乳動(dòng)物實(shí)施這種預(yù)防性冶療。
劑量和給予制劑通?？赏ㄟ^(guò)將具有所需純度的抗體與任選的生理上可接受的運(yùn)載體、賦形劑或穩(wěn)定劑相混合制備凍干或水溶液形式的可儲(chǔ)存的抗體藥物制劑。可接受的運(yùn)載體、賦形劑或穩(wěn)定劑在所用劑量和濃度下應(yīng)對(duì)接受者無(wú)毒，包括緩沖液如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機(jī)酸；抗氧化劑、防腐劑、低分子量多肽、蛋白、親水聚合物、氨基酸、碳水化合物、螯合劑、糖和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它標(biāo)準(zhǔn)成分(上述《雷明頓藥物科學(xué)》)。
本文所述用于體內(nèi)給藥的達(dá)珠單抗制劑通常儲(chǔ)存于2-8℃。該制劑常常不含防腐劑，應(yīng)該在從小瓶中取出并稀釋成鹽水后4、12或24小時(shí)內(nèi)使用。優(yōu)選靜脈內(nèi)或皮下給予經(jīng)過(guò)濾或未經(jīng)過(guò)濾的該制劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，根據(jù)2002年7月25日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)序列號(hào)10/206，469中所述可將抗IL2受體的抗體制劑以穩(wěn)定的凍干形式儲(chǔ)存，將其全文納入本文作為參考。
優(yōu)選將人源化抗IL-2受體的抗體達(dá)珠單抗儲(chǔ)存在一次性使用的小瓶中，該瓶中裝有5.0mL達(dá)珠單抗的無(wú)菌鹽水緩沖液溶液，濃度為5.0mg/mL。然而，本發(fā)明也包括1-10mg/mL(如1、2、5或10)，20-50mg/mL(如20、30、40或50)或60-100mg/mL(如60、70、80、90或100)的濃度。在用于儲(chǔ)存的優(yōu)選制劑中，該制劑含有5mg/mL的抗體，3.6mg/mL一水合磷酸二氫鈉，11mg/mL七水合磷酸氫二鈉，4.6mg/mL氯化鈉，0.2mg/mL聚山梨醇酯。該制劑還可包含鹽酸或氫氧化鈉，以將該制劑的pH調(diào)整到約6.9。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，可將達(dá)珠單抗制作成穩(wěn)定的液體制劑。如2002年9月8日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)序列號(hào)10/291,528(美國(guó)出版的申請(qǐng)?zhí)?003/0138417Al，2003年7月24日出版)所述，將其全文納入本文作為參考。這種穩(wěn)定的液體制劑尤其適用于皮下給予達(dá)珠單抗，可用于治療本發(fā)明呼吸道疾病的方法中。在優(yōu)選實(shí)施方式中，這種達(dá)珠單抗的穩(wěn)定液體制劑含有約100mg/ml達(dá)珠單抗，約20-60mM pH為5.5-6.5的琥珀酸鹽緩沖液(或約20-70mM組氨酸緩沖液)，約0.01％-0.1％聚山梨醇酯，和維持制劑等滲性的張力緩沖劑(如約75-150mM NaCl，或約1-100mM MgCl2)。
可通過(guò)任何合適途徑，包括口服、直腸、鼻腔、局部(包括透皮、氣霧劑、含服和舌下)、胃腸道外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)和皮內(nèi))或通過(guò)吸入療法給予制備在藥物制劑中的治療性抗體。在一個(gè)實(shí)施方式中，可用無(wú)針頭氣壓注射給予該制劑。也可理解，優(yōu)選途徑可因接受者的癥狀和年齡而不同。優(yōu)選經(jīng)胃腸道外，如靜脈內(nèi)藥團(tuán)注射遞送該藥物制劑，以便通過(guò)全身吸收和循環(huán)系統(tǒng)遞送治療有效量的所述制劑。
該制劑的治療有效量取決于具體的呼吸道疾病的嚴(yán)重程度(如重度慢性哮喘)、患者的臨床病史和反應(yīng)，以及主治醫(yī)師的判斷力?？梢淮位蚪?jīng)一系列治療將該制劑給予患者。起初，可給予患者候選劑量，通過(guò)用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的常規(guī)技術(shù)監(jiān)測(cè)此患者病情的發(fā)展來(lái)確定合適的劑量和治療方案。
與運(yùn)載體材料混合產(chǎn)生單一劑型的活性成分的量，取決于治療對(duì)象和具體的給藥方式。然而應(yīng)理解，對(duì)某具體患者的特定劑量水平取決于各種因素，包括所用具體制劑的活性、年齡、體重、總體健康狀況、性別、飲食、給藥時(shí)間、給藥途徑、排泄速率、藥物組合和正在治療的具體疾病的嚴(yán)重程度，本領(lǐng)域技術(shù)人員可確定這些因素。
具體說(shuō)，治療哮喘的示范性有效劑量約為0.001mg/kg(即毫克每千克體重)-100mg/kg，優(yōu)選約0.001mg/kg-10mg/kg，更優(yōu)選約0.005mg/kg-0.100mg/kg。優(yōu)選的劑量水平包括約0.001mg/kg、約0.005mg/kg、約0.0075mg/kg、約0.010mg/kg、約0.015mg/kg、約0.020mg/kg、約0.030mg/kg、約0.045mg/kg、約0.050mg/kg、約0.060mg/kg、約0.070mg/kg、約0.080mg/kg和約0.1mg/kg。優(yōu)選的劑量可等于或小于約0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg或5mg/kg。優(yōu)選劑量可位于上述任意兩個(gè)劑量水平之間。
也可制備和給予病人抗IL2受體的抗體的“固定劑量”劑型。例如，可將預(yù)先裝滿100或200mg/ml達(dá)珠單抗制劑的1ml注射器給予所有哮喘患者，無(wú)論患者體重多少。假設(shè)典型的成年患者人群體重在50和100kg之間，以100mg固定劑量遞送1mg/kg-2mg/kg。固定劑量劑型在給藥中可使可能發(fā)生的劑量誤差最小，尤其優(yōu)選用于患者自己給藥的哮喘治療。
通常，可采用較高劑量(如每個(gè)患者每日0.1mg-高達(dá)約100mg)的治療性抗體，尤其當(dāng)給藥于隱蔽部位而不進(jìn)入血流時(shí)，如進(jìn)入體腔或進(jìn)入器官內(nèi)腔時(shí)。局部給藥可采用相當(dāng)高的劑量。本領(lǐng)域技術(shù)人員了解或明白制備經(jīng)胃腸道外給藥的組合物的實(shí)際方法，參見(jiàn)例如《雷明頓藥物科學(xué)》(Remington’s Pharmaceutical Science)和Goodman和Gillman，《治療的藥理基礎(chǔ)》(The Pharmacologial Basis ofTherapeutics)，見(jiàn)上。
治療方案根據(jù)治療進(jìn)程和患者的身體狀況，哮喘的治療方案可明顯不同。一般地，至少將含有本文所述抗體的任何一種的單劑藥物制劑給予患者，如果后面有任何附加劑量(“維持劑量”)則將其稱為“起始劑量”或“起始給藥”或“加載劑量”?？梢裕缑咳?、每周、每?jī)芍?、?周或每月，或者每2、3或6個(gè)月給予次抗體藥物1、2、3或4次或多次。一個(gè)療程的治療時(shí)間應(yīng)持續(xù)至少一天或兩天，如一至數(shù)(2、3、4、5或6)天、數(shù)周、數(shù)月或數(shù)年，或無(wú)限時(shí)間，這取決于疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重性。治療時(shí)間計(jì)算為第一次給予該抗體到最后一次給予該抗體的時(shí)間?；颊呖山邮?、3、4或更多個(gè)療程?？筛鶕?jù)患者的改善進(jìn)程調(diào)整給藥頻率。優(yōu)選的加載劑量約是2mg/kg。在加載劑量后，優(yōu)選的維持劑量約是1mg/kg。在優(yōu)選的劑量方案中，在30分鐘時(shí)間內(nèi)給予加載劑量，在15分鐘時(shí)間內(nèi)給予各維持劑量。
為降低輸液相關(guān)癥狀，含有抗IL-2受體的抗體藥物制劑也可與聯(lián)用的其它藥物分別給予。這些藥物通常包括甲潑尼龍、氫化可的松、昂丹司瓊、對(duì)乙酰氨基酚和具有相似功能的許多其它試劑，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的?？赏ㄟ^(guò)任何合適途徑包括口服、直腸、鼻腔、局部、胃腸道外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)和皮內(nèi))，或通過(guò)吸入療法給予這些其它藥物。
這些藥物的劑量水平也是本領(lǐng)域已知的，例如，每個(gè)患者1mg-100g。示范性劑量包括10-50mg、60-200mg或200-500mg的甲潑尼龍、氫化可的松和昂丹司瓊；和100-500mg、600-1000mg、1-5g的對(duì)乙酰氨基酚。例如，在初始或/和各次給予抗IL-2受體的抗體的藥物制劑之前或/和之后至少約1、2、3、4、5、6、7、8、10、12、14、20、24、36小時(shí)或2、3、4、5、7、10、20、40或60天，可單次或多次額外地給予患者免疫調(diào)節(jié)劑。
在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明治療方法還包括給予目標(biāo)疾病的聯(lián)用藥物。例如，可用于本發(fā)明方法的聯(lián)用哮喘藥物(用于慢性和急性)包括但不限于吸入和口服類固醇(如倍氯米松、布地縮松、氟尼縮松、氟替卡松、曲安西龍、莫米松和奈德)；系統(tǒng)性皮質(zhì)類固醇(如甲潑尼龍、潑尼松龍、潑尼松、地塞米松和地夫可特)；吸入或口服的β2激動(dòng)劑(如沙美特羅、福莫特羅、比托特羅、吡布特羅、特布他林、班布特羅和沙丁胺醇)；色甘酸和奈多羅米；抗過(guò)敏眼科用藥物(如地塞米松)；甲基黃嘌呤(如茶堿和美吡拉敏-乙酸茶堿)；白三烯修飾性藥物(如扎魯司特，齊留通，孟魯司特(montekulast)和普侖司特)；抗膽堿能藥物(如異丙托溴銨)；其它治療性抗體(如抗胞內(nèi)粘著分子或IgE的抗體)；凝血噁烷A2合酶抑制劑；凝血噁烷前列腺素受體拮抗劑；其它類二十烷醇修飾劑(如前列地爾與PGE1、地諾前列酮與PGE2、依前列醇與環(huán)前列腺素和PGI2類似物(如PG12貝前列素)，塞曲司特，奧扎格雷，磷酸二酯酶4同工酶抑制劑，凝血噁烷A2合酶抑制劑(如氮斯汀)；ditec(低劑量色甘酸二鈉和非諾特羅)；血小板活化因子受體拮抗劑；抗組胺劑；抗凝血噁烷A2藥；抗緩激肽藥(如艾替班特)；抑制活化的嗜酸性粒細(xì)胞和T細(xì)胞聚集的藥物(如酮替芬)，IL-13阻斷劑(如可溶性IL-13受體片段)，IL-4阻斷劑(如可溶性IL-4受體片段)；結(jié)合和阻斷IL-13或IL-4的活性的配體，以及黃嘌呤衍生物(如己酮可可堿(pentoxifyolline))。
以說(shuō)明方式而非限制方式提供以下實(shí)施例。特別將說(shuō)明書中所有引用文獻(xiàn)的公開內(nèi)容納入本文作為參考，用于所有目的。
實(shí)施例實(shí)施例1慢性持續(xù)性哮喘患者的達(dá)珠單抗II期、隨機(jī)、雙盲、安慰劑對(duì)照、平行組研究本實(shí)施例描述了II期、劑量逐步提高的前導(dǎo)性研究的設(shè)計(jì)、實(shí)施和結(jié)果，證明了用達(dá)珠單抗治療慢性持續(xù)性哮喘患者方法的有效性。
A.研究概述1.目的該研究的主要目的是評(píng)價(jià)達(dá)珠單抗在吸入性皮質(zhì)類固醇治療控制不佳的慢性持續(xù)性哮喘成年患者中的安全性、耐受性和初步活性。
2.總的研究設(shè)計(jì)該研究是用達(dá)珠單抗治療吸入性皮質(zhì)類固醇控制不佳的(相當(dāng)于每日＞1200微克吸入性曲安西龍)慢性持續(xù)性哮喘患者中的隨機(jī)化、多中心、雙盲、安慰劑對(duì)照、平行組研究。圖1中顯示了該研究的總設(shè)計(jì)示意圖。
長(zhǎng)達(dá)5周的預(yù)備期間后，進(jìn)行篩選訪問(wèn)，在基線上對(duì)活性藥物或安慰劑(3∶1)進(jìn)行隨機(jī)化分組。研究訪問(wèn)發(fā)生在篩選(訪問(wèn)1)，預(yù)備期間(多達(dá)4次訪問(wèn))，治療期1每2周一次(第0-84天，6次訪問(wèn))，治療期2每2周一次(第85-140天，類固醇逐漸減少，4次訪問(wèn))，然后在隨訪期每2-4周一次(第141-239天，5次訪問(wèn))。在指定研究日的前后3日進(jìn)行所有研究訪問(wèn)、劑量和評(píng)價(jià)。
3.病人群體的選擇該研究中登記的合格人員是年齡18-70歲不吸煙男性和女性哮喘患者，其1秒內(nèi)的用力呼氣容量(FEV1)是預(yù)計(jì)值的50％-80％，用β2激動(dòng)劑治療的可逆性為12％，盡管登記前需要每日吸入劑量＞1200微克的曲安西龍奈德(曲安西龍)或其等效物3個(gè)月以上。為了隨機(jī)化分組，在預(yù)備期間，患者必須證明需要吸入皮質(zhì)類固醇治療，篩查時(shí)(絕對(duì)值)FEV1＞90％，和FEV1＞預(yù)計(jì)值大于50％。尤其是，絕對(duì)FEV1值提高≥12％和200mL，然后吸入舒喘寧MDI 2-4次，證明在篩選或預(yù)備期間，需要對(duì)患者進(jìn)行資格判定以進(jìn)行隨機(jī)化分組。所用的樣本大小為120名隨機(jī)患者(活性藥物90名，安慰劑30名)。
符合所有表1所列標(biāo)準(zhǔn)且不符合其中所列任何排除標(biāo)準(zhǔn)的患者認(rèn)為可登記進(jìn)入該研究。
表1包括標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)
表2包括標(biāo)準(zhǔn)要求的每日類固醇等價(jià)吸入劑量
認(rèn)為具有以下特征的患者可予以登記a.登記前30天內(nèi)曾用穩(wěn)定劑量的鼻腔皮質(zhì)類固醇、鼻腔色甘酸、局部抗過(guò)敏性眼科用藥或皮質(zhì)類固醇乳膏或軟膏治療的患者b.曾用茶堿、沙美特羅、口服舒喘寧、Advair(氟替卡松和沙美特羅口服吸入劑)、色甘酸、奈多羅米或白三烯修飾劑治療的患者(在登記時(shí)必須停用這些藥物)。
c.根據(jù)需要用短效吸入性或噴霧性β2激動(dòng)劑治療的患者。
篩選出簽署了知情同意書的患者。將符合這些標(biāo)準(zhǔn)的患者隨機(jī)分配到兩個(gè)研究之一(達(dá)珠單抗或安慰劑)。NRS中心將患者的隨機(jī)化編號(hào)傳送給指定的研究中心藥劑師。將盲法治療(達(dá)珠單抗或安慰劑)的第一天指定為第0天。
4.藥物制備、劑量和遞送用于此研究的達(dá)珠單抗是從市場(chǎng)上購(gòu)得的FDA批準(zhǔn)的達(dá)珠單抗制劑ZENEPAX。安慰劑是對(duì)比藥物。以小瓶裝提供達(dá)珠單抗，瓶中裝有25毫克達(dá)珠單抗的5ml溶液。每毫升溶液含有5mg達(dá)珠單抗和3.6mg一水合磷酸二氫鈉，11mg七水合磷酸氫二鈉e，4.6mg氯化鈉，0.2mg聚山梨醇酯，并可含有鹽酸或氫氧化鈉將pH調(diào)整到6.9。不加入任何防腐劑。
安慰劑包括該活性劑型中所提供的所有成分，減去該活性成分(達(dá)珠單抗)。安慰劑小瓶的充填體積是5mL。
所用劑量是加載劑量2mg/kg，和后續(xù)劑量1mg/kg。在小袋中用50ml生理鹽水(0.9％)稀釋該劑量后，靜脈內(nèi)給予此研究藥物。在30分鐘的時(shí)間中輸入2mg/kg的加載劑量。在15分鐘的時(shí)間中輸入所有后續(xù)1mg/kg劑量。用輸液泵進(jìn)行所有輸液。達(dá)珠單抗不用于直接注射，用前必須稀釋。
第一次研究藥物輸液完成后(第0天)留下患者觀察至少2小時(shí)，所有后續(xù)輸液后觀察至少1小時(shí)。
將達(dá)珠單抗和安慰劑儲(chǔ)存于受控制的冰箱條件下，2-8℃。該制劑不含防腐劑，從小瓶中取出后24小時(shí)內(nèi)使用。當(dāng)制備好輸液時(shí)，應(yīng)該在4小時(shí)內(nèi)靜脈內(nèi)給藥。如果不立即使用該制劑，應(yīng)將其置于2-8℃的冰箱中至多24小時(shí)，或在室溫下維持4小時(shí)。這段時(shí)間過(guò)后，應(yīng)丟棄該制備溶液。
5.研究劑量間隔時(shí)間、劑量逐步提高和隨訪期下表3中小結(jié)了本研究治療劑量方案。
表3治療劑量方案
1.除盲法治療外，所有患者還將接受預(yù)先隨機(jī)化劑量的吸入性曲安西龍(第0-83天)。
2.除接受盲法治療外，從第84天開始，所有患者每隔2周降低預(yù)先隨機(jī)化的曲安西龍劑量25％。
3.第0天在30分鐘中輸注2mg/kg加載劑量，然后在所有其它劑量日，在15分鐘中輸注1mg/kg劑量。N/A＝?jīng)]有應(yīng)用-沒(méi)有輸注研究藥物該研究包括-28--1天的預(yù)備期。預(yù)備期的目的是驗(yàn)證所研究的患者需要吸入皮質(zhì)類固醇。該預(yù)備期間，對(duì)患者進(jìn)行吸入性皮質(zhì)類固醇滴定，如圖2示意圖所小結(jié)。將患者轉(zhuǎn)換到吸入等量的曲安西龍，預(yù)備期開始時(shí)停用所有其它聯(lián)用的哮喘控制藥物。停用白三烯修飾劑的患者等待2周后進(jìn)入此預(yù)備期，回到訪問(wèn)2A。所有其他患者在停用所有其它哮喘控制藥物后僅等待一周回到訪問(wèn)2A。為了進(jìn)行隨機(jī)化分組，要求患者證明他們?cè)陬A(yù)備期間需要吸入皮質(zhì)類固醇、篩選(絕對(duì)值)的FEV1＞90％，F(xiàn)EV1＞預(yù)計(jì)值的50％。需要皮質(zhì)類固醇全身給藥的哮喘加重患者不隨機(jī)分組，而是停止此研究。
圖3所示表中小結(jié)了劑量間隔和遞增的時(shí)間表以及相關(guān)的患者評(píng)價(jià)。該時(shí)間表分為兩個(gè)治療時(shí)期(1)治療期1(盲法治療，第0-84天)第0天給予達(dá)珠單抗或安慰劑的加載劑量2mg/kg，在30分鐘時(shí)間中輸入，然后在第14、28、42、56和70天給予后續(xù)劑量1mg/kg，在15分鐘時(shí)間中輸入；(2)治療期2(盲法治療加類固醇遞減，第85-140天)第84、98、112和126天給予1mg/kg達(dá)珠單抗或安慰劑，在15分鐘時(shí)間中輸入。
治療期1期間，使合格的患者隨機(jī)化(3∶1，活性藥物∶安慰劑)，在第0、14、28、42、56和70天接受達(dá)珠單抗或安慰劑輸液，同時(shí)維持吸入性曲安西龍的隨機(jī)化前基線劑量。對(duì)接受達(dá)珠單抗的患者而言，第0天給予達(dá)珠單抗的加載劑量2mg/kg，在30分鐘時(shí)間中輸入，然后在隨后的治療日給予1mg/kg的劑量，在15分鐘時(shí)間中輸入。不晚于最后一次預(yù)備期訪問(wèn)后7天讓患者接受盲法研究藥物的第一個(gè)劑量。隨機(jī)化后，每2周觀察一次患者，以評(píng)價(jià)和調(diào)整劑量。
治療期2(即后續(xù)治療期1)期間，使患者的吸入性曲安西龍(TAA)劑量每隔兩周(第84、98和112天)將患者完成治療期1時(shí)的劑量降低25％，直到他們完全取消了吸入類固醇(第126天)，同時(shí)接受達(dá)珠單抗1mg/kg或安慰劑(第84、98、112和126天)輸液，在15分鐘中輸入。每2周觀察一次患者，以評(píng)價(jià)和調(diào)整劑量。
將符合以下標(biāo)準(zhǔn)、在研究的指定時(shí)間點(diǎn)停止治療的的患者從進(jìn)一步調(diào)整研究藥物劑量中撤出，讓他們進(jìn)入隨訪期(1)在治療期1期間經(jīng)歷一次以上哮喘加重，需要全身性類固醇治療；(2)在治療期2期間經(jīng)歷過(guò)一次哮喘加重，需要全身性類固醇治療；(3)在任何哮喘加重期間需要每日＞60mg潑尼松；(4)哮喘加重期間需要用潑尼松治療＞14天；或(5)哮喘加重需要住院過(guò)夜(即需要＞24小時(shí)留院治療)。
在隨訪期(第140-238天)中，監(jiān)測(cè)患者取消研究藥物后16周的情況，在第140、154、168、182、210和238天進(jìn)行評(píng)價(jià)。
在研究位置上的所有個(gè)體都不了解此治療方案。這些個(gè)體包括研究者、研究協(xié)調(diào)者、患者和其它研究人員。PDL醫(yī)學(xué)監(jiān)測(cè)員和CRA也不了解治療方案。不參與此研究進(jìn)行的指定的PDL安全性監(jiān)測(cè)員每月檢查所有2級(jí)或更高級(jí)(即中度、重度或威脅生命的)癥狀，無(wú)論其是否與所研究藥物的給藥相關(guān)。該個(gè)體是了解治療方案的。
6.順從性、安全性和藥效學(xué)測(cè)量在研究工作人員的監(jiān)督下給予研究藥物。通過(guò)讓研究者或合格的被指派者進(jìn)行各次盲法研究藥物輸液來(lái)確保順從性。給每個(gè)病人指定研究人員并記錄分配給患者的所有曲安西龍MDI藥罐來(lái)評(píng)價(jià)吸入性曲安西龍的使用。
研究期間進(jìn)行的安全性測(cè)量包括生命指征、護(hù)士/醫(yī)生觀察、副反應(yīng)評(píng)價(jià)和實(shí)驗(yàn)室安全性情況。
通過(guò)測(cè)量全血嗜酸性粒細(xì)胞來(lái)測(cè)量所有研究患者的藥效學(xué)特征。
通過(guò)該研究獲得了達(dá)珠單抗血清濃度，將其作為達(dá)珠單抗隨時(shí)間推移的有限的藥代動(dòng)力學(xué)特征。從每個(gè)患者的所選部位收集血清樣品，然后進(jìn)行立即和給藥后各時(shí)間點(diǎn)(參見(jiàn)表3)所研究藥物的給藥劑量。
通過(guò)分析各患者血清樣品中抗達(dá)珠單抗抗體(抗Ab)來(lái)評(píng)價(jià)免疫原性。
7.療效測(cè)定用于評(píng)價(jià)達(dá)珠單抗的主要療效參數(shù)是肺功能(肺活量)，通過(guò)治療期1(第0-84天)期間FEV1距離基線的百分?jǐn)?shù)改變來(lái)評(píng)價(jià)。
第二種療效參數(shù)包括(1)治療期1(第0-84天)期間經(jīng)歷哮喘加重的患者比例；(2)治療期1(第0-84天)和2(第85-140天)期間AM PEFR和PM PEFR變化的百分?jǐn)?shù)；(3)治療期1和2期間拯救藥物(β2激動(dòng)劑MDI)的使用情況、白天和夜間的哮喘癥狀以及IVRS中記錄的無(wú)哮喘天數(shù)的變化；(4)治療期1和2期間從此研究中撤出的患者的比例；(5)治療期1和2期間至哮喘加重的時(shí)間；和(6)治療期2和隨訪期期間FEV1變化的百分?jǐn)?shù)。
肺活量測(cè)定根據(jù)圖3的時(shí)間表記錄肺活量的測(cè)定。根據(jù)美國(guó)胸科學(xué)會(huì)指南進(jìn)行所有肺活量測(cè)定。在整個(gè)研究中所用的預(yù)計(jì)值是一致的。不因人種而調(diào)整肺活量值。記錄三次努力中最佳的FEV1。肺活量包括用力呼吸時(shí)的肺活量(FVC)、FEV1和FEV1/FVC，F(xiàn)VC(FEF25-75)中點(diǎn)期間的用力呼氣流。在肺活量測(cè)定前6小時(shí)不給予短效吸入性β2-激動(dòng)劑。將每次訪問(wèn)的肺活量測(cè)定結(jié)果記錄在患者的病案報(bào)告表格中。
治療哮喘加重哮喘加重定義為咳嗽加重、胸部壓迫感或喘鳴，伴有以下1項(xiàng)或多項(xiàng)(1)在48小時(shí)中，基線要使用拯救舒喘寧每24小時(shí)≥8次吹氣(吸入)；(2)在48小時(shí)中，使用拯救舒喘寧每24小時(shí)≥16次吹氣(吸入)；(3)峰值呼氣流(PEF)不到參比水平的65％，即使拯救治療了60分鐘；(4)即使拯救治療(定義為每20分鐘吹氣吸入舒喘寧2-4次，多至1小時(shí))60分鐘仍有癥狀；和/或(5)需要全身給予(口服或注射)皮質(zhì)類固醇。
研究者評(píng)價(jià)了對(duì)全身給予類固醇拯救的需要。除了上述標(biāo)準(zhǔn)以外，研究者也可根據(jù)他的或她的判斷，處方給予全身類固醇來(lái)治療哮喘加重。將全身使用皮質(zhì)類固醇的原因記錄在患者的病案報(bào)告表格(CRF)上。如果患者經(jīng)歷哮喘加重(根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn))，建議患者呼叫研究中心。允許需要用口服皮質(zhì)類固醇治療的哮喘加重的患者使用潑尼松突擊治療，每日至多60毫克，至多14天。停止對(duì)符合中止治療標(biāo)準(zhǔn)的任何患者的進(jìn)一步劑量調(diào)整，也不進(jìn)入隨訪期。訪問(wèn)13作為終末訪問(wèn)。只對(duì)需要全身使用類固醇拯救的加重患者確定中止治療。
在治療期1期間經(jīng)歷過(guò)第一次哮喘加重的患者需要全身給予皮質(zhì)類固醇拯救，也讓其吸入性曲安西龍的劑量從隨機(jī)化前基線提高25％，并維持此劑量，直到治療期1結(jié)束。
哮喘癥狀/每日藥物記錄在研究期間利用各患者每日的日記記錄(通過(guò)交互式聲音反應(yīng)系統(tǒng))評(píng)價(jià)哮喘癥狀、藥物使用情況和峰值氣流記錄。認(rèn)為IVRS是一種源文件；已驗(yàn)證這類日記可用于哮喘臨床試驗(yàn)。
白天平均癥狀范圍為各種問(wèn)題提供了0-6分范圍的反應(yīng)分類，表示最輕微至最嚴(yán)重的哮喘癥狀。夜間日記采用范圍從0分(表示沒(méi)有因哮喘癥狀而覺(jué)醒)至3分(表示整夜未眠)的反應(yīng)分類。根據(jù)白天癥狀范圍中的4個(gè)問(wèn)題的平均值計(jì)算每日白天范圍評(píng)分。計(jì)算出該周總?cè)沼浽u(píng)分是7天每日白天范圍評(píng)分的至少4天的平均值。以類似方式計(jì)算出夜間日記范圍的每周平均評(píng)分。白天每周評(píng)分和夜間評(píng)分的降低表示哮喘有所改善。從治療前預(yù)備期間(第-7--1天)最后一周的平均評(píng)分與治療期1(第77-84天)最后一周和治療期2(第134-140天)最后一周的差異計(jì)算哮喘評(píng)分范圍距基線的變化。
無(wú)哮喘天數(shù)定義為白天和夜間日記都顯示沒(méi)有癥狀的天數(shù)。分析該變量的方法取決于丟失的日記記錄的分布。如果丟失數(shù)據(jù)很少，將分析平均無(wú)哮喘天數(shù)的變化。如果患者報(bào)告的哮喘癥狀不一致，可比較治療組中經(jīng)歷無(wú)哮喘天數(shù)的患者比例。
在白天和夜間癥狀日記中記錄了拯救采用β2激動(dòng)劑MDI。指導(dǎo)患者在白天日記中記錄所用β2激動(dòng)劑MDI的量和睡著后在夜間日記中記錄所用β2激動(dòng)劑MDI的量。利用每周的日記記錄計(jì)算白天和夜間平均每天使用β2激動(dòng)劑MDI的量。由治療前預(yù)備期間(第-7--1天)那周與治療期1(第77-84天)的最后一周和治療期2(第134-140天)的最后一周的平均每天評(píng)分之差計(jì)算出所用β2激動(dòng)劑拯救藥物距基線的變化。
峰值呼氣流的監(jiān)測(cè)在篩選訪問(wèn)期間，指導(dǎo)患者使用小型Wright峰值流計(jì)量器。患者在晚上睡覺(jué)前測(cè)量并在白天日記中記錄最好的3個(gè)PEFR，早晨起床后服用任何藥物之前記錄夜間日記記錄。計(jì)算出每周的總平均每日夜間和早晨峰值氣流。通過(guò)治療前預(yù)備期間的最后一周和治療期1(第77-84天)和治療期2(第134-140天)的最后一周的平均每日PEFR之差計(jì)算夜間和早晨峰值氣流距基線的變化。
8.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)各治療組進(jìn)行描述性統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算出人口統(tǒng)計(jì)變量和基線變量。通過(guò)t檢驗(yàn)或相當(dāng)?shù)姆菂?shù)檢驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)連續(xù)變量，如年齡、疾病持續(xù)時(shí)間和癥狀評(píng)分。按需用卡方或Fisher精確度檢驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)分類變量。
對(duì)于安慰劑與達(dá)珠單抗描述性提供了初步療效(初步療效FEV1距基線的變化，第二療效癥狀評(píng)分、β2激動(dòng)劑拯救藥物的使用、哮喘加重次數(shù)和平均每日AM峰值呼氣流速)的證據(jù)。通過(guò)配對(duì)t檢驗(yàn)或Wilcoxon設(shè)計(jì)的秩次檢驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)組內(nèi)改變。通過(guò)t檢驗(yàn)或Wilcoxon-Mann-Whitney檢驗(yàn)確定組間統(tǒng)計(jì)顯著性。用Kaplan-Meier法和對(duì)數(shù)秩次法評(píng)價(jià)時(shí)間-事件變量。
B.詳細(xì)的研究方法用于此II期研究的方法和方案的更詳細(xì)說(shuō)明公開于2004年3月12日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)60/552,974中，將其納入本文作為參考，用于所有目的。
II期方法的完整描述見(jiàn)于蛋白設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)室方案編號(hào)DAC-1003(“慢性持續(xù)性哮喘患者的達(dá)珠單抗II期、隨機(jī)化、雙盲、安慰劑對(duì)照、平行分組研究”(A Phase II，Randomized，Double-Blind，Placebo-Controlled，parallel-Group Study ofDaclizumab in Patient with Chronic，Persistent Asthma))，達(dá)珠單抗，日期為2001年3月27日；修改A2001年7月16日；修改B2001年8月24日；修改C2002年4月15日；修改D2002年7月8日；修改E2002年8月28日(將其全文納入本文作為參考)。
表4用于II期方案的縮寫
C.詳細(xì)的研究結(jié)果1.患者分布和基線特征表5-8列出了用達(dá)珠單抗治療之前的患者分布、人口統(tǒng)計(jì)狀況和基線特征。
表5隨機(jī)化之前的患者分布
表6隨機(jī)化后的患者分布
表7患者人口統(tǒng)計(jì)學(xué)特征
表8基線特征(1)
2.方法的特異性分析表9-17列出了對(duì)治療期1(第0-84天)期間所獲患者數(shù)據(jù)進(jìn)行方法特異性分析。
表9FEV1(第0-84天)
表10預(yù)計(jì)的FEV1％(第0-84天)
表11FEV1/FVC(第0-84天)
表12FEF(25-75％)(第0-84天)
對(duì)表9-12中所列的患者肺活量數(shù)據(jù)(FEV1、預(yù)計(jì)FEV1％、FEV1/FVC和FEF(25-75％))的四種不同方法特異性分析各自表明有顯著性差異，這有利于該研究第84天時(shí)達(dá)珠單抗距離基線的平均改變。
而且，觀察到該研究的第14天和第112天之間，達(dá)珠單抗治療患者的基線FEV1百分?jǐn)?shù)測(cè)量值一致地保持在安慰劑相應(yīng)值之上(約2-5％)。
表13癥狀評(píng)分(Sx)(第0-84天)
表14采用β2激動(dòng)劑MDI(第0-84天)
雖然沒(méi)有獲得其它連續(xù)變量的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性數(shù)據(jù)，但是對(duì)這些變量各自的AM_PEFR、無(wú)Sx％天數(shù)和％FEV1，到第84天距基線的平均變化相對(duì)于安慰劑來(lái)說(shuō)有利于達(dá)珠單抗治療的患者。這種有利于達(dá)珠單抗的總趨勢(shì)進(jìn)一步支持其在哮喘治療中的療效。
表17加重
如表17的結(jié)果所示，測(cè)定的達(dá)珠單抗治療患者組哮喘加重情況明顯較低(8％對(duì)15％)。而且，發(fā)現(xiàn)達(dá)珠單抗治療患者發(fā)展至加重的時(shí)間的Kaplan-Meier曲線明顯高于(根據(jù)存活分布函數(shù))安慰劑治療患者的相應(yīng)曲線。在達(dá)珠單抗治療患者中觀察到的存活分布函數(shù)值提高將發(fā)展至加重的時(shí)間從約14天延長(zhǎng)到225天。
類似地，發(fā)現(xiàn)達(dá)珠單抗治療患者發(fā)展至需要使用全身皮質(zhì)類固醇的時(shí)間的Kaplan-Meier曲線明顯高于(根據(jù)存活分布函數(shù))安慰劑治療患者的相應(yīng)曲線。在這種情況下，在達(dá)珠單抗治療患者中觀察到的存活分布函數(shù)值提高將發(fā)展至加重的時(shí)間從約42天延長(zhǎng)到250天。
3.藥效學(xué)終點(diǎn)表18列出了根據(jù)藥效學(xué)數(shù)據(jù)和終點(diǎn)獲得的結(jié)果。此外，觀察到達(dá)珠單抗治療患者的外周嗜酸性粒細(xì)胞基線水平的百分?jǐn)?shù)在0-84天內(nèi)所有時(shí)間點(diǎn)(第28、56和84天)上基本上維持在低于安慰劑治療患者的水平。
表18外周嗜酸性粒細(xì)胞(第0天-第84天)
4.因果分析也根據(jù)對(duì)數(shù)的奇數(shù)比獲得二歧變量的結(jié)果％加重、Sx降低＞＝25％、FEV1提高＞＝10％。所有三個(gè)變量的對(duì)數(shù)奇數(shù)比約為1，這有利于達(dá)珠單抗治療患者。雖然各數(shù)據(jù)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，這種有利于達(dá)珠單抗的總趨勢(shì)進(jìn)一步支持其治療哮喘的療效。
5.藥代動(dòng)力學(xué)特征(PK)表19中列出了II期研究中測(cè)定的主要PK參數(shù)。
表19主要PK參數(shù)小結(jié)
評(píng)價(jià)了32名患者的PK模式。結(jié)果表明清除率低、分布體積低和消除半衰期長(zhǎng)達(dá)約20天。起初接近血漿體積的低分布體積表明起初沒(méi)有藥物分布在循環(huán)系統(tǒng)以外。給予加載劑量后沒(méi)有觀察到藥物累積。
在一個(gè)臨床地點(diǎn)(包括6名患者)從給藥的同一部位取血樣。這導(dǎo)致在劑量樣品值后5分鐘發(fā)生偏差性高濃度，顯著影響Cmax、V1和Vss值的計(jì)算。把該地點(diǎn)的所有6名患者排除在V1、Vss和第一劑量Cmax值的統(tǒng)計(jì)結(jié)果之外。
表明組平均值的模型曲線(即模擬組平均PK模式的半對(duì)數(shù)級(jí)曲線)與所觀察到的平均PK值緊密相關(guān)。第126天最后一次劑量給藥后，到第210天所觀察的PK值降低到大約1.5μg/mL達(dá)珠單抗的血清濃度。這種降低與該模型曲線緊密相關(guān)，此模型曲線大約在第214天降低到1μg/mL血清濃度。
6.免疫原性用橋連ELISA篩選血清樣品中的抗達(dá)珠單抗抗體。然后，在驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步評(píng)價(jià)篩選到的陽(yáng)性樣品。在測(cè)試抗達(dá)珠單抗抗體的113名患者中，篩選試驗(yàn)篩選出10名陽(yáng)性患者。這些患者中，在達(dá)珠單抗特異性驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中確認(rèn)了6名為陽(yáng)性。接受達(dá)珠單抗的患者中4.7％(4/86)確認(rèn)有可檢測(cè)的抗體。
7.結(jié)論上述II期研究結(jié)果證明達(dá)珠單抗能有效治療吸入皮質(zhì)類固醇控制不佳的慢性持續(xù)性哮喘成年患者。具體說(shuō)，患者顯示出肺功能(肺活量)提高，如治療期1(第0天-第84天)期間通過(guò)FEV1的基線變化百分?jǐn)?shù)所評(píng)價(jià)的那樣。其它肺活量測(cè)定與這些結(jié)果一致。日記癥狀評(píng)分、β2激動(dòng)劑拯救使用和夜間峰值呼氣流速揭示了組內(nèi)和組間距離基線的變化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。在安慰劑組中未觀察到明顯的組內(nèi)變化。
另外，接受達(dá)珠單抗的患者顯示出發(fā)展至需要口服皮質(zhì)類固醇拯救哮喘加重的時(shí)間延長(zhǎng)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。而且，達(dá)珠單抗治療組的外周嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯降低，在所有臨床藥效學(xué)終點(diǎn)中存在一個(gè)清晰和一致的信號(hào)。
此外，用達(dá)珠單抗治療的耐受性通常良好。在達(dá)珠單抗和安慰劑組之間，發(fā)生副反應(yīng)的總頻率和嚴(yán)重性沒(méi)什么不同。
實(shí)施例2包括治療期2期間吸入性類固醇逐漸減少的II期研究數(shù)據(jù)結(jié)果。
本實(shí)施例根據(jù)到第140天獲得的實(shí)施例1所述II期研究(蛋白設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)室方案編號(hào)DAC-1003)數(shù)據(jù)描述了療效結(jié)果。簡(jiǎn)言之，在第85天(即治療期2的開始日)開始，患者服用吸入性曲安西龍(TAA)的劑量，每隔兩周(第84、98和112天)降低患者完成治療期1時(shí)劑量的25％，直到他們完全取消了吸入的類固醇(第126天)，同時(shí)接受達(dá)珠單抗1mg/kg或安慰劑輸液(第84、98、112和126天)，在15分鐘中輸入。如實(shí)施例1所述(也參見(jiàn)圖3的摘要)，每?jī)芍苡^察一次患者的給藥劑量、評(píng)估和測(cè)量藥效。
結(jié)果證明與安慰劑組患者相比，達(dá)珠單抗治療的患者發(fā)展至需要全身給予類固醇拯救的哮喘加重的時(shí)間延長(zhǎng)(p＝0.024)。而且，相比安慰劑組，達(dá)珠單抗組在20周類固醇穩(wěn)定和類固醇逐漸減少期(11.6％與28.6％，p＝0.09)中病情加重的速率降低。達(dá)珠單抗治療患者顯示外周嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)從基線降低到第20周(-30±20/mm3而安慰劑為+60±30/mm3，p＝0.004)。在前56天期間，與安慰劑相比，血清嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白(sECP)基線升高的達(dá)珠單抗治療患者的sECP從基線明顯降低(p＜0.01)。與至少有一次加重的達(dá)珠單抗治療患者的基線提高相比，沒(méi)有哮喘加重的達(dá)珠單抗患者的外周嗜酸性粒細(xì)胞明顯降低(p＝0.032)。
實(shí)施例3嚴(yán)重哮喘患者亞組的分析特別分析了實(shí)施例1中所述達(dá)珠單抗治療哮喘療效II期研究在嚴(yán)重哮喘患者亞組中的療效。其數(shù)據(jù)用于此分析的患者是在“頑固性哮喘的ATS討論會(huì)論文集目前可理解的推薦和未回答問(wèn)題”(Proceedings of the ATS workshop on refractoryasthmacurrent understanding，recommendations，and unanswered questions)，American Thoracic Society，Am J Respir Crit Care Med.162(6)2341-51(2000)中所定義的“頑固性哮喘”患者。確定的參數(shù)是TAA劑量＞200mcg/天，需要每天或幾乎每天使用短效β激動(dòng)劑的哮喘癥狀，和FEV1預(yù)計(jì)值＜80％。II期研究的三十三名患者符合該頑固性哮喘的定義。下表20中列出了第12周時(shí)此頑固性哮喘亞組的療效結(jié)果。與實(shí)施例1中所列的總哮喘患者群體相比，這些結(jié)果支持達(dá)珠單抗在嚴(yán)重哮喘患者中療效更好(與安慰劑相比)的結(jié)論。
表20嚴(yán)重哮喘患者群體中的療效分析
也分析了嚴(yán)重哮喘患者群體的哮喘加重?cái)?shù)據(jù)。表21提供了治療期1(第0天-第84天)的結(jié)果表明達(dá)珠單抗治療的嚴(yán)重哮喘患者中加重的發(fā)生率較低(與安慰劑相比)。
表21嚴(yán)重哮喘群體中的哮喘加重
雖然參考本文的優(yōu)選實(shí)施方式描述了本發(fā)明，但是應(yīng)理解，可作出各種修改而不背離本發(fā)明精神。將所有刊物、專利、專利申請(qǐng)和網(wǎng)站以整體納入本文作為參考，其程度與各專利、專利申請(qǐng)或網(wǎng)站被特別和單獨(dú)地引用以全文納入本文作為參考時(shí)相同。
權(quán)利要求
1.一種對(duì)需要呼吸道疾病治療的患者進(jìn)行治療的方法，所述方法包括給予所述患者治療有效量藥物制劑，所述藥物制劑含有能與IL-2受體特異性結(jié)合的抗體。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述呼吸道疾病選自哮喘、過(guò)敏性鼻炎、特應(yīng)性皮炎、鼻息肉病、Churg-Strauss綜合征、鼻竇炎和COPD。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗體是人源化抗體。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述人源化抗體是達(dá)珠單抗。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗體與達(dá)珠單抗結(jié)合相同的表位。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述抗體的氨基酸序列與達(dá)珠單抗的氨基酸序列至少80％相同。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，經(jīng)胃腸道外、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下給予所述藥物制劑。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述藥物制劑是液體，其含有約100mg/ml達(dá)珠單抗、約20-60mM pH約5.5-6.5的琥珀酸鹽緩沖液、約0.01％-0.1％聚山梨醇酯和產(chǎn)生等滲性的張力緩沖劑。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述治療有效量約為0.001mg/kg-10mg/kg。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述治療有效量約為0.5mg/kg-4.0mg/kg。
11.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述治療有效量是約100mg和200mg之間的固定劑量。
12.一種治療患者哮喘的方法，所述方法包括給予所述患者治療有效量的藥物制劑，所述藥物制劑含有能與IL-2受體特異性結(jié)合的抗體。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述哮喘是慢性持續(xù)性哮喘。
14.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述哮喘是中度至重度哮喘。
15.如權(quán)利要求12所述的方法，還包括給予患者一種或多種選自下組的藥物倍氯米松、布地縮松、氟尼縮松、氟替卡松、曲安西龍、莫米松和奈德。
16.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述抗體與所述人IL-2受體的結(jié)合親和力至少為108M-1。
17.如權(quán)利要12所述的方法，其特征在于，所述抗體與所述人IL-2受體的結(jié)合親和力至少為109M-1。
18.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述抗體是單克隆抗體。
19.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述抗體是嵌合抗體。
20.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述抗體是人抗體。
21.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述抗體是人源化抗體。
22.如權(quán)利要求21所述的方法，其特征在于，所述人源化抗體是達(dá)珠單抗。
23.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述抗體與達(dá)珠單抗結(jié)合相同的表位。
24.如權(quán)利要求23所述的方法，其特征在于，所述抗體的氨基酸序列與達(dá)珠單抗的氨基酸序列至少80％相同。
25.如權(quán)利要求24所述的方法，其特征在于，所述抗體CDR區(qū)的氨基酸序列與達(dá)珠單抗CDR區(qū)的氨基酸序列至少95％相同。
26.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，經(jīng)胃腸道外、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下給予所述藥物制劑。
27.如權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于，所述藥物制劑是液體，其含有約100mg/ml達(dá)珠單抗、約20-60mM pH約5.5-6.5的琥珀酸鹽緩沖液、約0.01％-0.1％聚山梨醇酯和維持等滲性的張力緩沖劑。
28.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述治療有效量約為0.001mg/kg-10mg/kg。
29.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述治療有效量約為0.5mg/kg-4.0mg/kg。
30.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述治療有效量約為100mg和200mg之間的固定劑量。
31.一種對(duì)需要Th2細(xì)胞介導(dǎo)的過(guò)敏性疾病治療的患者進(jìn)行治療的方法，所述方法包括給予所述患者治療有效量的藥物制劑，所述藥物制劑含有能與IL-2受體特異性結(jié)合的抗體。
32.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述疾病選自哮喘、過(guò)敏性鼻炎、特應(yīng)性皮炎、鼻息肉病、Churg-Strauss綜合征和鼻竇炎。
33.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述抗體是人源化抗體。
34.如權(quán)利要求33所述的方法，其特征在于，所述人源化抗體是達(dá)珠單抗。
35.如權(quán)利要求33所述的方法，其特征在于，所述抗體與達(dá)珠單抗結(jié)合相同的表位。
36.如權(quán)利要求33所述的方法，其特征在于，所述抗體的氨基酸序列與達(dá)珠單抗的氨基酸序列至少80％相同。
全文摘要
本發(fā)明提供了治療呼吸道疾病的方法。具體說(shuō)，本發(fā)明提供了治療哮喘的方法，該方法包括給予對(duì)象治療有效量的含有抗體的藥物制劑，所述抗體能與IL－2受體結(jié)合。
文檔編號(hào)C07K16/28GK1856325SQ200480027204
公開日2006年11月1日 申請(qǐng)日期2004年9月21日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月23日
發(fā)明者R·S·沙梅斯 申請(qǐng)人:Pdl生物制藥股份有限公司