專利名稱：瑪咖根提取物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然植物的提取物及其應(yīng)用。
瑪咖原產(chǎn)于秘魯海拔3500米以上的安第斯山區(qū)，有悠久的種植和食用歷史，早期的記載表明5800年前瑪咖就出現(xiàn)在南美土地上，2000多年以前，瑪咖被胡寧(Junin)湖畔的San Blas地區(qū)土著居民馴化種植，目前瑪咖分布于一個(gè)比較狹小的區(qū)域，主要位于秘魯胡寧(Junín)和帕斯科(Cerro de Pasco)地區(qū)的suni和“puna”生態(tài)區(qū)。我國目前還沒有瑪咖的種植。
成熟的新鮮瑪咖全草具有膨大的類似蕪菁甘藍(lán)的貯藏根(以后簡稱瑪咖鮮根)，是瑪咖的主要食用部分?，斂r根作為當(dāng)?shù)刈钪饕臓I養(yǎng)作物被奉為安第斯山脈“山神”賜予人們的禮物和祝福，且在中、南美洲國家，如厄瓜多爾、秘魯、墨西哥等將瑪咖作為民間藥用，用于增強(qiáng)精力，提高生育力，緩解絕經(jīng)期婦女的更年期綜合征，緩解抑郁癥，治療哮喘癥和促進(jìn)傷口愈合等。數(shù)千年的應(yīng)用歷史賦予瑪咖“秘魯人參”、“秘魯國寶”等美譽(yù)，瑪咖也成為當(dāng)?shù)鼐用耧嬍持胁豢扇鄙俚募哑罚蔷窒抻诳萍嫉陌l(fā)展，長期以來瑪咖在南美僅僅作為普通食品或做簡單加工，如加工成瑪咖酒、瑪咖面食、瑪咖飲料等在小范圍地域銷售。目前瑪咖根也被開發(fā)成各種高附加值的保健食品、營養(yǎng)補(bǔ)充劑，瑪咖已經(jīng)成為國際矚目的保健品，在美國、歐洲、日本、臺(tái)灣、澳大利亞等地取得了很好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。我國也已經(jīng)有瑪咖保健產(chǎn)品，其天然活性成分沒有經(jīng)過提取分離和純化，因此藥用作用有限，保健作用也有待進(jìn)一步提高。
本發(fā)明的另一目的是以瑪咖根提取物、精制瑪咖根提取物為原料加工成各種劑型的藥品和保健產(chǎn)品，滿足市場對該類產(chǎn)品的需求。
本發(fā)明的一種瑪咖根提取物，以瑪咖鮮根或者干根為原料提取分離，由活性成分和提取物殘?jiān)M成，其特征在于所述活性成分含有重量比10--90％的芥子油苷及其分解產(chǎn)物異硫氰酸酯、重量比5-70％的瑪咖酰胺和瑪咖烯、重量比2-30％的甾醇；提取物殘?jiān)鼧?gòu)成其余部分。
所述的瑪咖根提取物，可以對其繼續(xù)分離純化，含有重量比30-90％的芥子油苷及其分解產(chǎn)物異硫氰酸酯、重量比10-70％的瑪咖酰胺、瑪咖烯、甾醇及提取物殘?jiān)?br> 所述的瑪咖根提取物，也可以對其繼續(xù)分離純化，含有重量比20-70％的瑪咖酰胺和瑪咖烯、重量比30-80％的芥子油苷及其分解產(chǎn)物異硫氰酸酯、甾醇及提取物殘?jiān)?br> 所述的瑪咖根提取物，其進(jìn)一步的特征在于以瑪咖鮮根為原料提取分離時(shí)直接進(jìn)行細(xì)胞破碎，與此同時(shí)或者隨后立即進(jìn)行純化酶處理，純化酶處理方法包括醇類浸泡法、蒸汽加熱法、微波處理法的一種或多種。
所述的瑪咖根提取物具有在制備治療更年期綜合癥、改善性功能、提高生育力的藥物或保健產(chǎn)品方面的用途。
所述的瑪咖根提取物還可繼續(xù)加工成膠囊、片劑、丸劑、口服液、注射劑以及其它控速緩釋藥物新劑型如固體分散藥劑、環(huán)糊精包合藥劑等藥品及保健品，并具有治療更年期綜合癥，增強(qiáng)男女性欲、改善性功能，增加體內(nèi)精子密度、提高生育力，治療抑郁癥等多種醫(yī)藥和保健作用。而且精制瑪咖根提取物在提高生育力和改善性功能上具有更為顯著的功效。
2.瑪咖粗提物采用反相液相色譜柱分離其中天然活性成分。首先用水洗脫該提取物中的多糖等極性成分后，再用乙醇梯度洗脫收集洗脫液，洗脫體積為40倍柱體積，洗脫液濃縮后得到瑪咖提取液。三、瑪咖根提取物及其精制瑪咖根提取物的制備1.瑪咖提取液可以在低于60℃下通過真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器回收溶劑，再通過真空冷凍干燥得到瑪咖根提取物(干粉)。其組成成分為含有重量比10～90％的芥子油苷(glucosinolates)及其分解產(chǎn)物異硫氰酸酯(isothiocyanates)，重量比5～70％的瑪咖酰胺(macamides)和瑪咖烯(macaenes)，重量比2～30％的甾醇(sterols)，重量比2～35％的提取物殘?jiān)?br> 2.瑪咖根提取物可以通過制備型高速逆流色譜對其中的天然活性成分進(jìn)一步分離純化，其中溶劑系統(tǒng)采用氯仿-甲醇-NaH2PO4緩沖溶液(pH值4.8)體積比3□2.5□1。對分離過程中流動(dòng)相進(jìn)行揮發(fā)溶劑濃縮后，通過真空冷凍干燥得到一種精制瑪咖根提取物，含有重量比20～70％的瑪咖酰胺和瑪咖烯，重量比30～80％的芥子油苷及其分解產(chǎn)物異硫氰酸酯、甾醇及提取物殘?jiān)?br> 3.上一步中通過制備型高速逆流色譜對其中的天然活性成分進(jìn)一步分離純化，對分離過程中的固定相采用甲醇充分溶解，揮發(fā)溶劑后，通過真空冷凍干燥得到另一種精制瑪咖根提取物含有重量比30～90％的芥子油苷及其分解產(chǎn)物異硫氰酸酯，重量比10～70％的瑪咖酰胺、瑪咖烯、甾醇及提取物殘?jiān)?br> 實(shí)施例一2.0公斤瑪咖鮮根經(jīng)過采集清洗，在濃度90％以上乙醇存在下采用組織搗碎法進(jìn)行細(xì)胞破碎10分鐘(1公斤鮮根中加入8-10升乙醇)，然后調(diào)節(jié)乙醇濃度到70％，pH維持中性進(jìn)行浸提(溫度＜50℃)36小時(shí)。乙醇-水提取液通過真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后(溫度55℃)得到190.0克瑪咖乙醇-水提取物，首先通過反相液相色譜柱，用水洗脫該提取物中的多糖等極性成分后，再用乙醇梯度洗脫收集洗脫液，濃縮后得到31.2g瑪咖根提取物，其中芥子油苷和異硫氰酸酯含量為36.8％、瑪咖酰胺和瑪咖烯總含量為28.5％、甾醇含量為14.1％，提取物殘?jiān)鼮?0.6％。
實(shí)施例二按照實(shí)施例一方法得到的瑪咖根提取物50.0g，采用高速逆流色譜法對瑪咖天然活性成分瑪咖生物堿(主要含有瑪咖酰胺)進(jìn)一步分離純化，氯仿□甲醇□NaH2PO4緩沖溶液(pH值4.8)體積比3□2.5□1為溶劑系統(tǒng)。對分離過程中流動(dòng)相溶液在50℃下進(jìn)行真空旋轉(zhuǎn)回收溶劑后，通過真空冷凍干燥得到14.2克精制瑪咖根提取物，其中瑪咖酰胺和瑪咖烯含量達(dá)到47.3％，芥子油苷及其分解產(chǎn)物異硫氰酸酯、甾醇及提取物殘?jiān)繛?2.7％；同時(shí)對分離過程中的固定相采用甲醇充分溶解后，40℃下進(jìn)行真空旋轉(zhuǎn)回收溶劑，通過真空冷凍干燥得到21.6克精制瑪咖根提取物，其中芥子油苷及其分解產(chǎn)物異硫氰酸酯含量達(dá)到57.5％，瑪咖酰胺、瑪咖烯、甾醇及提取物殘?jiān)繛?2.5％。
實(shí)施例三將β-環(huán)糊精40克加入1升水中，升溫(55℃)使之溶解。取實(shí)施例二中得到的瑪咖酰胺和瑪咖烯含量達(dá)到47.3％的精制瑪咖根提取物6克，用200毫升95％乙醇溶解，然后緩慢滴加到β-環(huán)糊精溶液中，邊滴加邊攪拌。滴加完后繼續(xù)攪拌30分鐘，放于冰箱中24小時(shí)，然后抽濾，用蒸餾水洗滌，-40℃下真空干燥得到淡黃色粉末狀包合物。得到的粉末不僅具有控釋效果，提高人體吸收效率，而且可以掩蓋原精制瑪咖根提取物的刺激性氣味，改善提取物色澤，而且更利于加工成片劑和膠囊等藥物產(chǎn)品和保健產(chǎn)品。
實(shí)驗(yàn)效果一通過小鼠實(shí)驗(yàn)對實(shí)施例一中的瑪咖根提取物和實(shí)施例二中得到的瑪咖酰胺和瑪咖烯含量達(dá)到47.3％的精制瑪咖根提取物改善小鼠性功能的活性進(jìn)行驗(yàn)證。通過預(yù)實(shí)驗(yàn)挑選性能力相近的70只雄性小白鼠和210只雌性小白鼠(昆明種，清潔級(jí)，鼠齡9-11周，體重30±2g)，將70只雄性小白鼠隨機(jī)分為瑪咖根提取物實(shí)驗(yàn)組(A組)、精制瑪咖根提取物實(shí)驗(yàn)組(B組)和對照組(C組)，對照組10只，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組再分高、中、低劑量組(分別為A1和B1組0.12mg/g.bw、A2和B2組0.08mg/g.bw、A3和B3組0.04mg/g.bw，冒號(hào)后為配制的提取物劑量)，每組各10只。實(shí)驗(yàn)組每日用提取物灌胃一次，灌胃量為0.5毫升，連續(xù)6天，對照組每日用0.5毫升生理鹽水灌胃一次。在第6天灌胃后1小時(shí)，按1∶3比例將雄鼠與雌鼠合籠(提前2天對雌鼠皮下注射苯甲酸雌二醇4μg)，記錄各雄鼠交尾潛伏期(從合籠到第1次交尾雌鼠的時(shí)間)和1小時(shí)內(nèi)的交尾次數(shù)。
各實(shí)驗(yàn)組與對照組比較，高中低劑量均可使雄性小白鼠的交尾潛伏期明顯縮短(P＜0.05)，交尾次數(shù)顯著增加(P＜0.05)，而且精制瑪咖根提取物實(shí)驗(yàn)組要比瑪咖根提取物實(shí)驗(yàn)組效果更為顯著，見表1。證明了瑪咖根提取物和該精制瑪咖根提取物在改善性功能上具有良好的效果和巨大的市場潛力。表1口服瑪咖根提取物和精瑪咖根提取物制對雄性小白鼠交尾潛伏期和交尾次數(shù)的影響(Mean±SD)組別 交尾次數(shù)(1小時(shí)內(nèi))交尾潛伏期(s)C組 7.25±1.53 586±211A組A1組(n＝10) 14.38±1.46▲311±142▲A2組(n＝10) 14.21±1.76▲301±155▲A3組(n＝10) 11.23±1.77▲389±165▲B組B1組(n＝10) 13.38±2.15▲352±135▲B2組(n＝10) 12.98±1.67▲343±112▲B3組(n＝10) 10.12±1.89▲423±145▲▲表示與對照組比較P＜0.05實(shí)驗(yàn)效果二通過大鼠實(shí)驗(yàn)對實(shí)施例一中得到的瑪咖根提取物提高生精障礙模型大鼠的精子密度、提高生育力的功效進(jìn)行驗(yàn)證。取雄性生精障礙模型SD大鼠(湖北中醫(yī)研究院藥理研究中心提供，體重200±20g)40只，隨機(jī)分為瑪咖根提取物實(shí)驗(yàn)組(A組)30只和對照組(B組)10只，實(shí)驗(yàn)組再分高、中、低劑量組(每組10只，提取物劑量濃度分別為A1組12mg/g.bw、A2組8mg/g.bw、A3組4mg/g.bw)。實(shí)驗(yàn)組每日用提取物灌胃一次，灌胃量為1毫升，連續(xù)14天，對照組每日用1毫升生理鹽水灌胃一次，另設(shè)正常組(C組)10只正常大鼠，飼養(yǎng)同對照組。所有動(dòng)物于末次給藥2周后處死，一側(cè)附睪作精子計(jì)數(shù)。
計(jì)數(shù)附睪尾部組織以106/100mg計(jì)精子密度灌服瑪咖根提取物高、中、低劑量組的精子密度均明顯高于模型動(dòng)物組(P＜0.05)，表明瑪咖根提取物可顯著提高大鼠精子密度(見表2)，提高大鼠的生育力。表2口服瑪咖根提取物對生精障礙模型大鼠精子密度影響(Mean±SD)組別 精子密度(106/100mg)C組 24.20±2.90B組 7.30±1.01A組A1組(n＝10) 20.45±3.15▲A2組(n＝10) 17.43±4.29▲A3組(n＝10) 16.56±2.67▲▲表示與對照組比較P＜0.05實(shí)驗(yàn)效果三通過小鼠實(shí)驗(yàn)對實(shí)施例一中得到的瑪咖根提取物改善去勢小鼠內(nèi)分泌調(diào)節(jié)的功效進(jìn)行驗(yàn)證。取昆明種雄性小鼠60只，體重19±1克，四周齡左右，做3天適應(yīng)培養(yǎng)后隨機(jī)選擇50只小鼠摘除睪丸，術(shù)后兩天隨機(jī)分成空白對照組(10只小鼠)，瑪咖根提取物組(高、中、低三個(gè)劑量，每個(gè)劑量組有10小鼠)，陽性對照組(10只小鼠)，未進(jìn)行睪丸摘除的作為正常組。正常組和空白對照組每日灌胃0.5毫升生理鹽水，陽性對照組每只小鼠一次性注射甲睪素10毫克/千克，瑪咖根提取物組每只每天灌胃瑪咖根提取物0.5毫升，高、中、低劑量組灌胃的瑪咖根提取物含量分別為0.15mg/g.bw，0.10mg/g.bw，0.5mg/g.bw，連續(xù)灌胃22天后，稱量小鼠體重，并在末次給藥后半小時(shí)，全部小鼠摘眼球取血后頸椎脫臼法處死，解剖動(dòng)物，分離前列腺和精囊腺稱重，計(jì)算臟器指數(shù)(臟器重量/10g小鼠體重)。
結(jié)果可見表3瑪咖根提取物對雄性去勢小鼠前列腺和精囊腺重量的影響(Mean±SD)組別 精囊腺+前列腺重量(mg) 臟器指數(shù)(mg/10g體重)正常對照202.65±47.09 53.23±9.60空白對照9.75±4.28 2.955±1.27瑪咖根提取物組高劑量 15.57±6.12▲4.428±1.66▲中劑量 16.30±6.84▲4.732±1.87▲低劑量 12.29±5.313.675±1.51甲基睪丸素 25.67±10.14▲▲7.204±2.96▲▲▲表示與空白對照比較P＜0.05，▲▲表示與空白對照比較P＜0.01結(jié)果表明，瑪咖根提取物高、中劑量能夠顯著增加去勢雄性小鼠前列腺和精囊腺的重量，與空白對照組相比，有顯著性差異。因此表明瑪咖根提取物在調(diào)節(jié)內(nèi)分泌機(jī)能上具有良好的效果和巨大的市場潛力。
實(shí)驗(yàn)效果四通過小鼠實(shí)驗(yàn)對口服實(shí)施例一中得到的瑪咖根提取物對小鼠的抑郁癥功效進(jìn)行驗(yàn)證。篩選游泳能力相近的昆明種小鼠(雄性，清潔級(jí)，體重20±2)50只，隨機(jī)分為瑪咖根提取物實(shí)驗(yàn)組(A組)30只、對照組(B組)10只、陽性抗抑郁藥組(C組，20mg/g.bw)，實(shí)驗(yàn)組再分高、中、低劑量組(每組10只，提取物劑量濃度分別為A1組0.12mg/g.bw、A2組0.08mg/g.bw、A3組0.04mg/g.bw)。實(shí)驗(yàn)組每日用提取物灌胃一次，灌胃量為0.5毫升，連續(xù)14天，對照組每日灌胃0.5毫升生理鹽水。在末次給藥后2小時(shí)后，將小鼠放入高20cm，直徑10cm的圓柱型玻璃缸中，每缸1只、缸中水深10cm，水溫25℃，小鼠游泳2min后，立即開始觀察。觀察持續(xù)4min，累計(jì)此4min內(nèi)小鼠在水中停止掙扎，或呈漂浮狀態(tài)，僅有細(xì)小的肢體運(yùn)動(dòng)以保持頭部浮在水面的持續(xù)時(shí)間(不動(dòng)時(shí)間)。
結(jié)果表明，瑪咖根提取物組小鼠的強(qiáng)迫性游泳不動(dòng)時(shí)間明顯低于對照組，而且接近陽性抗抑郁藥組的抗抑郁水平(表4)。因此表明瑪咖根提取物在治療抑郁癥上具有良好的效果和巨大的市場潛力。表2口服瑪咖根提取物對小鼠強(qiáng)迫性游泳不動(dòng)時(shí)間的影響(Mean±SD)組別不動(dòng)時(shí)間(s)C組 59.5±21.5B組 109.3±33.5A組A1組(n＝10) 60.5±35.2▲A2組(n＝10) 66.4±32.8▲A3組(n＝10) 71.3±41.1▲▲表示與對照組比較P＜0.0權(quán)利要求
1.一種瑪咖根提取物，以瑪咖鮮根或者干根為原料提取分離，由活性成分和提取物殘?jiān)M成，其特征在于所述活性成分含有重量比10-90％的芥子油苷及其分解產(chǎn)物異硫氰酸酯、重量比5-70％的瑪咖酰胺和瑪咖烯、重量比2-30％的甾醇；提取物殘?jiān)鼧?gòu)成其余部分。
2.如權(quán)利要求1所述的瑪咖根提取物，其特征在于對其繼續(xù)分離純化，含有重量比30-90％的芥子油苷及其分解產(chǎn)物異硫氰酸酯、重量比10-70％的瑪咖酰胺、瑪咖烯、甾醇及提取物殘?jiān)?br> 3.如權(quán)利要求1所述的瑪咖根提取物，其特征在于對其繼續(xù)分離純化，含有重量比20-70％的瑪咖酰胺和瑪咖烯、重量比30-80％的芥子油苷及其分解產(chǎn)物異硫氰酸酯、甾醇及提取物殘?jiān)?br> 4.如權(quán)利要求1-3所述的瑪咖根提取物，其特征在于以瑪咖鮮根為原料提取分離時(shí)直接進(jìn)行細(xì)胞破碎，與此同時(shí)或者隨后立即進(jìn)行純化酶處理，純化酶處理方法包括醇類浸泡法、蒸汽加熱法、微波處理法的一種或多種。
5.如權(quán)利要求1-3所述的瑪咖根提取物在制備治療更年期綜合癥、改善性功能、提高生育力的藥物或保健產(chǎn)品中的用途。
全文摘要
瑪咖根提取物，涉及天然植物的提取物及其應(yīng)用，其目的是通過對天然植物瑪咖中的活性成分提取分離純化，得到具有多種藥用和保健價(jià)值的提取物。本發(fā)明以瑪咖鮮根或者干根為原料提取分離，由活性成份和提取物殘?jiān)M成，活性成分含有重量比10－90％的芥子油苷及其分解產(chǎn)物異硫氰酸酯、重量比5－70％的瑪咖酰胺和瑪咖烯、重量比2－30％的甾醇，以此為原料可以加工成膠囊、片劑以及其它控速緩釋藥物新劑型如固體分散藥劑、環(huán)糊精包合藥劑等。本發(fā)明中的瑪咖根提取物及其以此為原料制備的不同劑型的藥品或保健食品具有治療更年期綜合癥，增強(qiáng)男女性欲、改善性功能，增加體內(nèi)精子密度、提高生育力，治療抑郁癥等作用。
文檔編號(hào)C07B63/00GK1473594SQ0312826
公開日2004年2月11日 申請日期2003年7月1日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月1日
發(fā)明者余龍江, 金文聞, 程華, 孫友平, 張永忠, 楊英 申請人:華中科技大學(xué)