專利名稱：用作肌肉和靜脈注射的龍膽苦苷粉針劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥有效成分提純及制備粉針劑的工藝，特別是秦艽中提純龍膽苦苷制備粉針劑和用作保肝利膽抗炎藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
龍膽苦苷是裂環(huán)環(huán)烯醚萜類化合物。它主要存在于龍膽科龍膽屬植物中。它在陜西產(chǎn)栽培秦艽中含量較高，最高可達(dá)18％，一般為5％，是龍膽類植物的主要有效成分，是醫(yī)藥生產(chǎn)的較理想原料。秦艽與其它中藥配伍后水煎服用，主要用于治療關(guān)節(jié)炎，服用很不方便。秦艽中的總提取物名龍膽總苷，龍膽總苷是混合物，其中主要成分是龍膽苦苷，含量約為50～70％，其它成分無效或有一定的毒性，用Beagle犬進(jìn)行試驗(yàn)，龍膽總苷注射后會(huì)使犬流涎，四肢無力，約20分鐘后恢復(fù)正常。從秦艽中提取出龍膽總苷制成膠襄劑，用作腸胃道動(dòng)力藥，本申請(qǐng)人已獲得了發(fā)明專利，專利號(hào)為97108434，上述專利提純工藝中，龍膽總苷是用70％乙醇提取，難免帶進(jìn)親脂性成分，給后續(xù)分離龍膽苦苷帶來困難。由于龍膽總苷中包含脂溶性雜質(zhì)，另外，龍膽苦苷分子周圍包圍水化膜，所以龍膽苦苷不易結(jié)晶。對(duì)于單一化合物龍膽苦苷，它即不同于原秦艽藥材，也不同于混合物龍膽總苷。龍膽苦苷結(jié)構(gòu)中存在一定的不穩(wěn)定因素，在堿性條件下易分解，在微酸條件下較穩(wěn)定。如果口服則在胃腸道分解，尤其是腸道幾乎全部分解。在胃中由于酸性環(huán)境，使苷中的糖水解下來，在腸中堿性環(huán)境，龍膽苦苷不穩(wěn)，特別是腸道細(xì)菌就完全破壞了它。由于存在著苷鍵，制成水針劑，高溫滅菌勢(shì)必造成苷鍵水解，析出苷元沉淀。經(jīng)試驗(yàn)120℃30分鐘約有30％的龍膽苦苷分解。龍膽苦苷純化合物含量在95％以上時(shí)，水中溶解度較低，不能直接制成注射用水針劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決龍膽苦苷直接制成水針劑時(shí)的不穩(wěn)定性和口服在腸道被破壞問題，提供一種從秦艽中提純龍膽苦苷制備粉針劑的工藝和其作為制備保肝利膽抗炎藥物的應(yīng)用，同時(shí)龍膽苦苷衍生物作為制備保肝利膽抗炎藥物的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的是以下述方案實(shí)現(xiàn)的用作肌肉和靜脈注射的龍膽苦苷粉針劑，其由如下工藝制得(1)取秦艽或龍膽草藥材加5～20倍量水煎煮3次，每次15分鐘至1小時(shí)，合并煎煮液，離心取上清液，(2)水煎液上D101大孔樹脂柱，每克樹脂上0.8毫升藥液，大孔樹脂用2～6倍量水洗脫，棄去水洗液，大孔樹脂再用3～10倍30％乙醇洗脫，回收洗脫液中的乙醇，并減壓抽干，得殘留物，(3)將回收洗脫液后的殘留物溶于2～5倍量的95％乙醇中，過濾，濾液回收乙醇并抽干，再用95％乙醇溶解，再抽干最后溶于濃乙醇中，放置，析出結(jié)晶，過濾，得龍膽苦苷純品，(4)取龍膽苦苷純品與5～20％量注射用甘露醇，用5～15倍注射用水溶解，用G3～G6漏斗過濾，分裝后凍干得成品。
龍膽苦苷粉針劑作為制備保肝利膽抗炎藥物的應(yīng)用。
龍膽苦苷羰基還原或雙鍵氫化還原或與鹵化氫所得衍生物制備粉針劑作為制備保肝利膽抗炎藥物的應(yīng)用。
本發(fā)明的提純工藝中，秦艽藥材用水煎提取，成本低，而且少含親脂性成分，給后續(xù)處理帶來方便。純化方法簡(jiǎn)便，從原料中分離龍膽苦苷，收得率在3％以上。本發(fā)明龍膽苦苷制成凍干粉針劑，靜脈滴注，既可避免酸堿及腸道細(xì)菌的影響又可避免高溫滅菌的影響，特別是溶解性非常好，成品加入注射用水立即成為澄明液體，符合注射劑要求。龍膽苦苷制成粉針劑，避免了因水針劑滅菌引起過熱分解，也避免了水溶液長(zhǎng)期放置引起的變化。制成凍干粉針劑，具有良好的穩(wěn)定性，使用也較方便。本發(fā)明中龍膽苦苷是主要成分，起治療作用。甘露醇為輔料，起到分散和骨架作用，兼有助溶效果。龍膽苦苷用于治療急性黃疸型肝炎及慢性活動(dòng)性肝炎，對(duì)于急癥適合使用注射劑，特別是靜脈注射。從藥代動(dòng)力學(xué)考慮，藥物進(jìn)入血液后，很快到達(dá)肝臟部位，在肝臟中的分布達(dá)30μg/g，作成注射劑給藥，對(duì)于肝病的治療更顯得合適。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1用作肌肉和靜脈注射的龍膽苦苷粉針劑，由如下工藝制得取秦艽藥材1千克加10千克水煎煮3次，每次30分鐘，合并煎煮液，離心取上清液，龍膽苦苷易于從藥材中煎出。10千克水煎液上10千克已處理好的D101大孔樹脂柱，大孔樹脂可吸附龍膽苦苷，大孔樹脂柱用40千克水洗脫，棄去水洗液，大孔樹脂再用80千克30％乙醇洗脫，龍膽苦苷用稀乙醇可解析下來，回收洗脫液中的乙醇，并減壓抽干，得殘留物。將回收洗脫液后的殘留物溶于3倍量的95％乙醇中，過濾，濾液回收乙醇并抽干，再用95％乙醇溶解，再抽干最后溶于濃乙醇中，放置，析出結(jié)晶，過濾，得龍膽苦苷純品。取龍膽苦苷純品160克，注射用甘露醇原料16克，用2000毫升蒸餾水溶解，加入約0.5克活性炭，6號(hào)垂熔玻璃漏斗濾過，測(cè)定含量后，濾液無菌條件下，裝入2000支凍干瓶中。凍干瓶放入凍干機(jī)凍干，冷凍溫度為-30℃，3小時(shí)，升華溫度-20～-10℃，共6小時(shí)，抽真空。快速升溫干燥，直至40℃，10小時(shí)，壓蓋密封。結(jié)果成餅很好，為乳白色均勻的園餅，各項(xiàng)指標(biāo)均符合規(guī)定。試驗(yàn)數(shù)據(jù)及結(jié)果見表1。
表1 實(shí)施例2秦艽藥材1千克加20千克水煎煮3次，每次1小時(shí)，合并煎煮液，離心取上清液，10千克水煎液用20千克已處理好的D101大孔樹脂柱，大孔樹脂用60千克水洗脫，棄去水洗液，大孔樹脂柱再用100千克10％乙醇洗脫，回收洗脫液中的乙醇，并減壓抽干，得殘留物，將回收洗脫液后的殘留物溶于5倍量的95％乙醇中，過濾，濾液回收乙醇并抽干，再用95％乙醇溶解，再抽干最后溶于濃乙醇中，放置，析出結(jié)晶，過濾，得龍膽苦苷純品，龍膽苦苷純品與20％量注射用甘露醇，用5倍注射用水溶解，按與實(shí)施例1相同方法制備粉針劑。
實(shí)施例3取秦艽藥材1千克加5千克水煎煮3次，每次15分鐘，合并煎煮液，離心取上清液，10千克水煎液用50千克已處理好的D101大孔樹脂柱，大孔樹脂用20千克水洗脫，棄去水洗液，大孔樹脂再用30千克70％乙醇洗脫，回收洗脫液中的乙醇，并減壓抽干，得殘留物，將回收洗脫液后的殘留物溶于2倍量的95％乙醇中，過濾，濾液回收乙醇并抽干，再用95％乙醇溶解，再抽干最后溶于濃乙醇中，放置，析出結(jié)晶，過濾，得龍膽苦苷純品，龍膽苦苷純品與5％量注射用甘露醇，用15倍注射用水溶解，按與實(shí)施例1相同方法制備粉針劑。
實(shí)施例4龍膽藥材碎為粗末，稱取3千克，加水30千克，煎煮30分鐘，過濾，濾渣再加水24千克，煎煮兩次，過濾，合并三次水煎液，10千克水煎液用50千克已處理好的D101大孔樹脂柱，大孔樹脂用20千克水洗脫，棄去水洗液，大孔樹脂再用30千克70％乙醇洗脫，回收洗脫液中的乙醇，并減壓抽干，得殘留物，將回收洗脫液后的殘留物溶于2倍量的95％乙醇中，過濾，濾液回收乙醇并抽干，再用95％乙醇溶解，再抽干最后溶于濃乙醇中，放置，析出結(jié)晶，過濾，得龍膽苦苷純品，龍膽苦苷純品與5％量注射用甘露醇，用15倍注射用水溶解，按與實(shí)施例1相同方法制備粉針劑。
本發(fā)明提純龍膽苦苷為白色粉末或結(jié)晶。結(jié)構(gòu)式為C16H20O9，分子量為356.32，分子式如下圖所示 本發(fā)明提純產(chǎn)物的紅外光譜圖、紫外光譜圖、氫核磁共振譜、碳-13核磁共振譜、質(zhì)譜都與對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所)一致。
本發(fā)明具有保肝利膽和抗炎的作用，用于中醫(yī)濕熱熏蒸癥，具有清熱燥濕，瀉肝利膽的功能。用于治療急性黃疸型，慢性活動(dòng)型肝炎的藥物。已申報(bào)國(guó)家一類中藥新藥。
本發(fā)明對(duì)動(dòng)物急性肝損傷模型、慢性肝損傷模型和免疫性肝損傷模型，用龍膽苦苷肌肉注射進(jìn)行治療，能顯著降低肝損傷動(dòng)物血清轉(zhuǎn)氨酶活性，組織切片顯示能減輕肝組織壞死、腫脹及脂肪變性。促進(jìn)肝臟蛋白質(zhì)的合成。本發(fā)明對(duì)CCl4引起的急性、慢性肝損傷，對(duì)氨基半乳糖引起的損傷及免疫性損傷都有很好的修復(fù)作用。本發(fā)明在高劑量下顯示一定的肝藥酶誘導(dǎo)作用。增加肝藥酶和活性，使肝細(xì)胞代謝增強(qiáng)。
注射龍膽苦苷對(duì)大鼠具有明顯的利膽作用，給藥后動(dòng)物膽汁量、膽固醇、膽紅素都有明顯增加，能提高肝細(xì)胞Na+、K+-ATP酶活性，提高率為35.5％。用苯丙醇對(duì)照，有很好的利膽作用。
對(duì)動(dòng)物急性炎癥，慢性炎癥，非特異性炎癥病理模型，用龍膽苦苷治療，呈現(xiàn)量效關(guān)系。
一般藥理分別用雜種狗、Beagle犬和小白鼠進(jìn)行試驗(yàn)。雜種狗用肌肉注射，Beagle犬采用靜脈注射。用藥三天后，動(dòng)物的精神、活動(dòng)、毛發(fā)、二便等均未發(fā)生明顯影響，用藥期內(nèi)動(dòng)物呼吸、血壓、心率、心電圖等均未發(fā)生明顯變化。結(jié)果表明龍膽苦苷對(duì)動(dòng)物的精神系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)均無明顯影響。
急毒小鼠肌肉注射LD50＝2.5g/kg，靜脈注射LD50＝2.4g/kg，大鼠靜肪注射LD50＝1.8g/kg。
長(zhǎng)期毒性進(jìn)行了三種動(dòng)物觀察，雜種犬、大鼠未見明顯毒性反應(yīng)，Beagle犬中、小劑量未見明顯毒性反應(yīng)，50倍大劑量動(dòng)物有流涎、肌無力、嘔吐，但30分鐘內(nèi)即可消失。大鼠及Beagle犬大中小三個(gè)劑量注射三個(gè)月，進(jìn)行心電圖測(cè)定，血液學(xué)、病理學(xué)檢查，未見異常。長(zhǎng)期毒性顯示，本發(fā)明安全劑量為100mg/kg。
特殊毒性試驗(yàn)在中國(guó)藥品生物制品檢定所進(jìn)行了Ames試驗(yàn)，采用組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門氏桿菌TA系列四個(gè)菌株，用藥后各菌株回變菌落數(shù)未見明顯增多。染色體畸變?cè)囼?yàn)采用中國(guó)倉鼠細(xì)胞，三個(gè)濃度組給藥。經(jīng)培養(yǎng)，染色體畸變率低于3％。微核試驗(yàn)昆明鼠給藥后，24小時(shí)取股骨骨髓制片，未見微核細(xì)胞增多。致畸試驗(yàn)第四軍醫(yī)大學(xué)藥理室經(jīng)過試驗(yàn)，未見大鼠胎兒畸變。致突變、致癌、致畸胎作用。
動(dòng)物藥代動(dòng)力學(xué)研究主要分布在肝、腎、肺、心、脾，腦中無分布。通過尿排泄97％，血漿蛋白結(jié)合率為46％，符合一房室模型。Beagle犬相對(duì)生物利用度F0-T為104％，F(xiàn)0-∞為99.6％。預(yù)臨床研究在西安傳染病院對(duì)42例乙肝病人治療有效率為97.7％。
本發(fā)明龍膽苦苷龍膽苦苷衍生物制備粉針劑作為制備保肝利膽抗炎藥物的應(yīng)用。
龍膽苦苷在NABH4作用下羰基還原所得衍生物制備粉針劑作為制備保肝利膽抗炎藥物的應(yīng)用。
龍膽苦苷在活性鎳催化下加氫氣雙鍵還原所得衍生物制備粉針劑作為制備保肝利膽抗炎藥物的應(yīng)用。
龍膽苦苷與鹵化氫加成所得衍生物制備粉針劑作為制備保肝利膽抗炎藥物的應(yīng)用。
龍膽苦苷衍生物結(jié)構(gòu)式如下所示
權(quán)利要求
1.用作肌肉和靜脈注射的龍膽苦苷粉針劑，由如下工藝制得(1)取秦艽或龍膽草藥材加5～20倍量水煎煮3次，每次15分鐘～1小時(shí)，合并煎煮液，離心取上清液，(2)水煎液上D101大孔樹脂柱，每克樹脂上0.2～1毫升藥液，大孔樹脂用2～6倍量水洗脫，棄去水洗液，大孔樹脂再用3～10倍10％～70％乙醇洗脫，回收洗脫液中的乙醇，并減壓抽干，得殘留物，(3)將回收洗脫液后的殘留物溶于2～5倍量的95％乙醇中，過濾，濾液回收乙醇并抽干，再用95％乙醇溶解，再抽干最后溶于濃乙醇中，放置，析出結(jié)晶，過濾，得龍膽苦苷純品，(3)取龍膽苦苷純品與5～20％量注射用甘露醇，用5～15倍注射用水溶解，用G3～G6漏斗過濾，分裝后凍干得成品。
2.龍膽苦苷粉針劑作為制備保肝利膽抗炎藥物的應(yīng)用。
3.龍膽苦苷羰基還原或雙鍵氫化還原或與鹵化氫加成所得衍生物制備粉針劑作為制備保肝利膽抗炎藥物的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥有效成分提純及制備粉針劑的工藝，特別是秦艽中提純龍膽苦苷制備粉針劑和用作保肝利膽抗炎藥物的應(yīng)用。其由下述工藝制得秦艽加水煎煮，水煎液用D101大孔樹脂柱吸附并洗脫得殘留物，殘留物溶于95％乙醇中，過濾，放置，析出結(jié)晶，過濾，得龍膽苦苷純品，龍膽苦苷純品與注射用甘露醇，用注射用水溶解，過濾，分裝后凍干得成品。本發(fā)明的提純工藝成本低，而且沒有親脂性成分，給后續(xù)處理帶來方便。純化方法簡(jiǎn)便，從原料中分離龍膽苦苷，收得率在3％以上。本發(fā)明龍膽苦苷制成凍干粉針劑，靜脈滴注，具有良好的穩(wěn)定性，使用也較方便。
文檔編號(hào)C07H1/08GK1437953SQ03114558
公開日2003年8月27日 申請(qǐng)日期2003年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月21日
發(fā)明者孫文基, 尚平平, 楊旭民, 管建軍 申請(qǐng)人:孫文基