一種食用菌的合成培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】一種食用菌的合成培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用，具體組分為：碳源：葡萄糖，麥芽糖，纖維二糖；氮源：硝酸銨，L?天冬氨酸，L?絲氨酸；無(wú)機(jī)鹽：硫酸鎂，氯化鈣，硫酸錳，硫酸鋅，硫酸鐵，硫酸銅；緩沖鹽：磷酸二氫鉀，磷酸氫二鉀；維生素：鹽酸硫胺素；吡哆醇；生物素。碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、緩沖鹽加水溶解后，滅菌，加入維生素儲(chǔ)備液，混勻得全合成培養(yǎng)基。優(yōu)點(diǎn)是：成分明確，質(zhì)量可控，重復(fù)性理想，特別適用于側(cè)耳屬(Pleurotus sp.)食用菌。
【專利說(shuō)明】
一種食用菌的合成培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種食用菌的合成培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]食用菌生產(chǎn)中最常用的培養(yǎng)基是馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)，以及在此基礎(chǔ)上的改良和加富。作為半合成培養(yǎng)基，原料的來(lái)源和處理方法對(duì)最終產(chǎn)品的影響比較大，難以把控質(zhì)量。受營(yíng)養(yǎng)成分限制，菌株長(zhǎng)期使用PDA傳代，種性退化現(xiàn)象明顯，具體表現(xiàn)為畸形菇增加、轉(zhuǎn)化率降低等，并且只有少數(shù)的食用菌能夠在PDA上實(shí)現(xiàn)快速直接出菇。
[0003]全合成培養(yǎng)基成分明確，質(zhì)量穩(wěn)定，雖然成本比半合成培養(yǎng)基高，但是對(duì)食用菌生產(chǎn)中母種(一級(jí)種)的穩(wěn)定性控制是非常必要的。尤其是全合成培養(yǎng)基中雜質(zhì)極少而且容易追蹤，重復(fù)性理想，設(shè)計(jì)合理的全合成培養(yǎng)基能夠提供菌絲至子實(shí)體發(fā)育各個(gè)階段的必須營(yíng)養(yǎng)從而實(shí)現(xiàn)培養(yǎng)基上快速直接出菇，為育種工作提供了一種極其便利的工具。
[0004]人工栽培的側(cè)耳屬(Pleurotussp.)食用菌種類繁多，商品名混亂，但是進(jìn)化上的親緣關(guān)系使側(cè)耳屬內(nèi)食用菌的營(yíng)養(yǎng)需求和代謝過(guò)程存在共性，可以針對(duì)性的設(shè)計(jì)出通用型的培養(yǎng)基O除PDA外,Macaya-Lizano合成培養(yǎng)基也常用來(lái)栽培平燕(P.0streatus)，該培養(yǎng)基的碳氮源單一，緩沖體系彈性小，氮代謝后培養(yǎng)基酸化快，可用范圍和子實(shí)體結(jié)實(shí)能力有局限性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明目的在于提供一種食用菌的合成培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用，成分明確，質(zhì)量可控，重復(fù)性理想，特別適用于側(cè)耳屬(Pleurotus sp.)食用菌。
[0006]—種食用菌的合成培養(yǎng)基，該合成培養(yǎng)基包括碳氮源、無(wú)機(jī)鹽、緩沖鹽和維生素，溶劑為去離子水或純水，具體組分和含量為:
碳源:葡萄糖10g/L，麥芽糖5g/L，纖維二糖5g/L;
氮源:硝酸錢(qián)0.5g/L，L-天冬氨酸lg/L，L-絲氨酸0.2g/L ；
無(wú)機(jī)鹽:硫酸鎂(MgSO4.7H20)0.5g/L，氯化鈣0.2g/L，硫酸錳(MnSO4.7^0)0.2g/L，硫酸鋅(ZnSO4.7H20)0.2g/L，硫酸亞鐵(FeSO4.7出0)0.lg/L，硫酸銅(CuSO4.5H20)0.1g/L；緩沖鹽:磷酸二氫鉀2g/L，磷酸氫二鉀lg/L;
維生素(最終濃度):鹽酸硫胺素(VBl) 100yg/L ；吡哆醇(VB6) 100yg/L;生物素(VH) 100μ
g/L0
[0007]所述合成培養(yǎng)基還包括瓊脂，瓊脂的量為常規(guī)加入量，只需要凝固為固體培養(yǎng)基即可，一般為1.5%?2.0wt%。
[0008]—種食用菌的合成培養(yǎng)基的制備方法，其具體步驟為:
(1)、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、緩沖鹽按比例加水溶解后，滅菌溫度115°C?121°C，滅菌時(shí)間15min ?30min，得溶液 A ；
(2)、維生素分別配制成濃度10mg/L溶液，用無(wú)菌濾膜(<0.45μπι)過(guò)濾除菌，得到維生素儲(chǔ)備液；
(3)、待溶液A冷卻至60 °C以下時(shí)，以鹽酸硫胺素(VBI) 100yg/L;吡哆醇(VB6) 100yg/L;生物素(VH)100yg/L終濃度計(jì)算加入維生素儲(chǔ)備液，混勻得全合成培養(yǎng)基。
[0009]配制溶液A將碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、緩沖鹽加水溶解后，加入瓊脂并煮沸，以制作固體培養(yǎng)基。滅菌后降溫至60°C以下時(shí)，以鹽酸硫胺素(VBl)100yg/L;吡哆醇(VB6)100yg/L;生物素(VHHOOyg/L終濃度計(jì)算加入維生素儲(chǔ)備液，混勻得全合成固體培養(yǎng)基。
[00?0] —種食用菌的合成培養(yǎng)基在側(cè)耳屬(Pleurotus sp.)食用菌培養(yǎng)和保藏中的應(yīng)用。
[0011]本發(fā)明的有益效果:
(1)、該合成培養(yǎng)基為全合成培養(yǎng)基，成分明確，質(zhì)量穩(wěn)定，重復(fù)性理想；
(2)、合成培養(yǎng)基的碳源使用麥芽糖和纖維二糖，增加發(fā)育期間碳源儲(chǔ)備，同時(shí)維持菌株α_糖苷酶和糖苷酶活性，維持菌株種性防止菌種退化；
(3)、合成培養(yǎng)基的無(wú)機(jī)氮源使用硝酸銨，促進(jìn)菌絲快速生長(zhǎng);有機(jī)氮源L-天冬氨酸是三羧酸循環(huán)中間產(chǎn)物產(chǎn)生的氨基酸，增加氮儲(chǔ)備且菌絲利用率高，L-絲氨酸對(duì)促進(jìn)原基萌發(fā)形成子實(shí)體非常重要；
(4)該合成培養(yǎng)基含有生長(zhǎng)必須的多種微量元素和維生素;磷酸緩沖體系有效降低氮源快速利用造成的培養(yǎng)基酸化，有利于增加菌絲生物量，提高菌種質(zhì)量；
(5)該合成培養(yǎng)基成分明確，質(zhì)量可控，重復(fù)性理想，能夠?qū)崿F(xiàn)培養(yǎng)基上快速直接出菇，特別適用于側(cè)耳屬(Pleurotus sp.)食用菌，為育種工作提供了一種極其便利的工具。
【具體實(shí)施方式】
[0012]實(shí)施例1
使用10L液體發(fā)酵罐制作杏鮑菇(P.eryngi i)液體菌種，按發(fā)酵罐操作規(guī)程進(jìn)行空消后配制食用菌的合成培養(yǎng)基基6L，具體用量為:葡萄糖60g，麥芽糖30g，纖維二糖30g，硝酸銨38兒-天冬氨酸68丄-絲氨酸1.28，硫酸鎂(1^304.7取0)38，氯化鈣1.28，硫酸錳(11^04.7H20)1.2g，硫酸鋅(ZnS04.7H20) I.2g，硫酸亞鐵(FeS04.7H20)0.6g，硫酸銅(CuS04.5H20)0.6g，磷酸二氫鉀12g，磷酸氫二鉀6g，去離子水6L，實(shí)消溫度121°C維持30min，得到溶液A。將鹽酸硫胺素(VBl)、吡哆醇(VB6)、生物素(VH)分別配制成濃度10mg/L溶液，用無(wú)菌濾膜(<0.45μπι)過(guò)濾除菌，得到維生素儲(chǔ)備液。將溶液A降溫至50°C，加入維生素儲(chǔ)備液至鹽酸硫胺素(VBl)最終濃度為100yg/L;吡哆醇(VB6)最終濃度為100yg/L;生物素(VH)最終濃度為lOOyg/L，繼續(xù)降溫至30°C，5%接種量接種杏白2號(hào)液體母種進(jìn)行菌絲液體發(fā)酵。發(fā)酵控制條件為:溫度(25 ± I) °C，攪拌轉(zhuǎn)200r/min，空氣壓力40kPa?50kPa，通氣量1: 0.5 (V/V.min)，發(fā)酵時(shí)間72h。
[0013]本方法培養(yǎng)的杏鮑菇液體菌種生物量較馬鈴薯葡萄糖及在此基礎(chǔ)上的多種衍生培養(yǎng)基提升20%以上，且菌團(tuán)均勻致密。液體種接種菌袋后，菌絲萌發(fā)時(shí)間較其他液體種配方縮短I?2d，萌發(fā)后菌絲生長(zhǎng)均勻，菌袋個(gè)體間差異較小。
[0014]實(shí)施例2
配制本發(fā)明所述培養(yǎng)基IL用于平菇(P.0streatus)菌種篩檢，具體用量為:葡萄糖10g，麥芽糖5g，纖維二糖5g，硝酸銨0.5g，L-天冬氨酸Ig，L-絲氨酸0.2g，硫酸鎂(MgS04.7H20)0.58，氯化鈣0.28，硫酸錳(11^04.7H20)0.2g，硫酸鋅(ZnS04.7H20)0.2g，硫酸亞鐵(FeS04.7H20)0.1g，硫酸銅(CuS04.5H20)0.lg，磷酸二氫鉀2g，磷酸氫二鉀lg，瓊脂 16g，純水IL，滅菌溫度121°C維持15min，得到溶液A。將鹽酸硫胺素(VBI)、吡哆醇(VB6)、生物素(VH)分別配制成濃度10mg/L溶液，用無(wú)菌濾膜(彡0.45μπι)過(guò)濾除菌，得到維生素儲(chǔ)備液。溶液A降溫至55 0C加入維生素儲(chǔ)備液至鹽酸硫胺素(VBl)最終濃度為I OOyg/L;吡哆醇(VB6)最終濃度為100yg/L;生物素(VH)最終濃度為100yg/L，得到全合成固體培養(yǎng)基。使用90mm無(wú)菌平皿鋪制全合成固體培養(yǎng)基，20mL培養(yǎng)基/平皿，制作固體平板，冷卻后37°C空白培養(yǎng)檢查是否染菌。確認(rèn)無(wú)菌后，使用組織分離法在平菇黑平美豐子實(shí)體菌蓋與菌柄連接處取內(nèi)部組織塊接種于固體平板。
[0015]本方法篩檢組織分離法獲得的平菇黑平美豐菌株，25°C暗培養(yǎng)(7±l)d菌絲可長(zhǎng)滿平皿，9d后放置于人工氣候箱，控制溫度200C、光照10Lux、相對(duì)濕度80 %，12?15d可見(jiàn)原基形成，并直接在固體培養(yǎng)基上產(chǎn)生子實(shí)體。有效縮短育種周期，減少人力物力投入。
[0016]實(shí)施例3
配制本發(fā)明所述培養(yǎng)基IL用于小平菇(P.cornucopiae)菌種繼代保藏，具體用量為:葡萄糖10g，麥芽糖5g，纖維二糖5g，硝酸銨0.5g，L-天冬氨酸lg，L-絲氨酸0.2g，硫酸鎂(MgS04.7H20)0.5g，氯化鈣0.2g，硫酸錳(MnS04.7H20)0.2g，硫酸鋅(ZnS04.7H20)0.2g，硫酸亞鐵(FeS04.7H20)0.1g，硫酸銅(CuS04.5H20)0.lg，磷酸二氫鉀2g，磷酸氫二鉀lg，瓊脂16g，純水IL，滅菌溫度115 °C維持15min，得到溶液A。將鹽酸硫胺素(VBl)、吡哆醇(VB6)、生物素(VH)分別配制成濃度10mg/L溶液，用無(wú)菌濾膜(<0.45μπι)過(guò)濾除菌，得到維生素儲(chǔ)備液。溶液A降溫至55°C加入維生素儲(chǔ)備液至鹽酸硫胺素(VBl)最終濃度為lOOyg/L;吡哆醇(VB6)最終濃度為100yg/L;生物素(VH)最終濃度為100yg/L，得到全合成固體培養(yǎng)基。使用20mmX 200mm無(wú)菌試管分裝制作斜面培養(yǎng)基，冷卻后37°C空白培養(yǎng)檢查是否染菌。確認(rèn)無(wú)菌后，取待保藏菌株遼平16#菌塊接種于本斜面培養(yǎng)基。
[0017]本方法保藏菌株遼平16#，接種后25°C暗培養(yǎng)9d至菌絲長(zhǎng)滿，置4°C冰箱冷藏保存，20d后取出I支進(jìn)行轉(zhuǎn)管傳代，連續(xù)傳代5次。傳代株與原始保存株平行出菇試驗(yàn)檢測(cè)產(chǎn)量未見(jiàn)顯著減退，總體轉(zhuǎn)化率仍達(dá)到130%以上。使用PDA培養(yǎng)基繼代保存，連續(xù)傳代5次，遼平16#菌株種性退化明顯，轉(zhuǎn)化率降低至110%，且出菇同步性變差。
[0018]以上僅為本發(fā)明的具體實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種食用菌的合成培養(yǎng)基，其特征是: 該合成培養(yǎng)基包括碳氮源、無(wú)機(jī)鹽、緩沖鹽和維生素，溶劑為去離子水或純水，具體組分和含量為: 碳源:葡萄糖10g/L，麥芽糖5g/L，纖維二糖5g/L; 氮源:硝酸錢(qián)0.5g/L，L-天冬氨酸lg/L，L-絲氨酸0.2g/L ； 無(wú)機(jī)鹽= MgSO4.7H20 0.58/1，氯化鈣0.28/1，]?11504.7H20 0.2g/L,ZnS04.7H20 0.2g/L,FeSO4.7H20 0.lg/L,CuSO4.5H20 0.lg/L； 緩沖鹽:磷酸二氫鉀2g/L，磷酸氫二鉀lg/L; 維生素:鹽酸硫胺素(VBl) 100yg/L;吡哆醇(VB6) 100yg/L;生物素(VH) 100yg/L。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的食用菌的合成培養(yǎng)基，其特征是:所述合成培養(yǎng)基還包括瓊脂。3.如權(quán)利要求1所述的一種食用菌的合成培養(yǎng)基的制備方法，其特征是: 具體步驟為: (1)、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、緩沖鹽按比例加水溶解后，滅菌溫度115°C?121°C，滅菌時(shí)間15min ?30min，得溶液 A ； (2)、維生素分別配制成濃度10mg/L溶液，用無(wú)菌濾膜過(guò)濾除菌，得到維生素儲(chǔ)備液； (3)、待溶液A冷卻至60°C以下時(shí)，以鹽酸硫胺素(VBI) 100yg/L;吡哆醇(VB6) 100yg/L;生物素(VH)100yg/L終濃度計(jì)算加入維生素儲(chǔ)備液，混勻得全合成培養(yǎng)基。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種食用菌的合成培養(yǎng)基的制備方法，其特征是:所述無(wú)菌濾膜的孔徑(0.45μηι。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種食用菌的合成培養(yǎng)基的制備方法，其特征是:配制溶液A將碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、緩沖鹽加水溶解后，加入瓊脂并煮沸。6.如權(quán)利要求1所述的一種食用菌的合成培養(yǎng)基在側(cè)耳屬(Pleurotussp.)食用菌培養(yǎng)和保藏中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C05G3/00GK105948938SQ201610404555
【公開(kāi)日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年6月8日
【發(fā)明人】朱巍巍, 陳飛, 李莉, 張疏雨, 楊云橋, 鄧春海, 孟慶國(guó), 陳德偉
【申請(qǐng)人】遼寧省微生物科學(xué)研究院