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一種用于栽培牛樟芝子實(shí)體的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法與流程

文檔序號:11509081閱讀:697來源:國知局

本發(fā)明涉及食藥用菌技術(shù)領(lǐng)域,尤其涉及一種用于栽培牛樟芝子實(shí)體的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法。



背景技術(shù):

牛樟芝屬于非褶菌目、多孔菌科、薄孔菌屬、多年生蕈菌類,拉丁名為antrodiacamphorata,是1990年才被生化界發(fā)表的新種。因生長在臺灣地區(qū)特有保護(hù)類植物牛樟樹上而得名,是珍貴稀有藥用真菌。牛樟芝子實(shí)體在早期是臺灣地區(qū)原住民族用來治療因飲酒過度所引致的肝損傷、解宿醉的珍寶,現(xiàn)在大量應(yīng)用于保肝護(hù)肝以及抗氧化、抗炎、抗腫瘤等。天然牛樟芝因僅生長于臺灣地區(qū)特有樹種牛樟老樹的中空樹洞與其段木上,而目前牛樟樹僅臺灣地區(qū)地區(qū)較多,且屬于世界一級保護(hù)樹種,野生資源非常稀少價格及其昂貴,用牛樟木生產(chǎn)牛樟芝不是未來發(fā)展方向。



技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足,提供一種用于栽培牛樟芝子實(shí)體的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法,提高牛樟芝子實(shí)體的生產(chǎn)量。

本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的,提供一種栽培牛樟芝子實(shí)體的方法,所述方法包括如下步驟:

s01:獲取菌種:購買牛樟芝菌種,并保存于pda斜面培養(yǎng)基上。

s02:制備液體菌種:將150ml液體種子培養(yǎng)基加入至500ml的三角瓶中,然后接入所述步驟s01中獲得的菌種,旋轉(zhuǎn)式搖床,轉(zhuǎn)速160r/min,在溫度23~27℃的黑暗條件下培養(yǎng)10~15天,獲得液體牛樟芝菌種。

s02:制備栽培培養(yǎng)基:將柞木樹制成直徑20cm,長20cm的木樁,放在水中完全浸沒浸泡30天,浸泡過程中加入木質(zhì)素2%、葡萄糖1%、玉米粉0.5%、磷酸二氫鉀1%;浸泡完成后將樹皮清理干凈裝入聚丙烯500*500菌袋中,將菌袋口用直徑10cm的塑料管套緊,再用7層無紡布將塑料管管口包緊后封口扎緊,放置于105℃條件下進(jìn)行滅菌消毒12h,然后在凈化車間內(nèi)冷卻。

木樁在水中浸泡時,雖然充分濕潤,但木樁中的營養(yǎng)物質(zhì)會有一定的流失,本發(fā)明在浸泡過程中添加木質(zhì)素等營養(yǎng)物質(zhì),增加木樁表層的營養(yǎng)物質(zhì)和微量元素,改良ph,利于菌絲在初期營養(yǎng)生長階段快速生長,減少雜菌的侵染。相對于不添加營養(yǎng)物質(zhì),菌絲生長時間縮短半個月左右。塑料套管可根據(jù)菌袋中牛樟芝生長所需的空氣環(huán)境做成不同規(guī)格的直徑,7層無紡布又足以阻隔空氣中雜菌進(jìn)入菌袋造成污染,這種封口方法使菌袋內(nèi)與外界空氣保持暢通,保證了菌絲生長過程中充足的氧氣供應(yīng)和適宜菌絲生長的濕度;有利于菌絲發(fā)育。

s03:接種:在凈化車間的超凈工作臺上,將發(fā)酵好的液體菌種搖勻,將冷卻好的菌袋打開,用液體接種槍接入160~220ml液體牛樟芝菌種,使牛樟芝液體菌種可從柞木木樁的各個段面流下,再將菌袋扎緊。

s04:發(fā)菌:將接種好的菌袋放置在控溫于20~28℃的凈化車間內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng),菌絲在柞木木樁表面覆蓋長滿并深入木質(zhì)內(nèi)部生長。

s05:子實(shí)體發(fā)育管理:將發(fā)菌良好的裝好木樁的聚丙烯500*500菌袋脫袋,把發(fā)好菌的柞木木樁放置于濕度70~90%、溫度15~25℃的凈化車間進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)過程中無需光照。

本法提供的方法在凈化車間進(jìn)行,可以實(shí)現(xiàn)牛樟芝子實(shí)體的規(guī)?;耘唷?/p>

作為優(yōu)選,所述步驟s03中,發(fā)酵好的液體菌種是將所述步驟s02中獲得的液體牛樟芝菌種接入滅菌并冷卻后的發(fā)酵罐一次發(fā)酵培養(yǎng)基上,在發(fā)酵罐內(nèi)保持恒溫24~28℃,通入無菌空氣培養(yǎng)7~10天獲得。

作為優(yōu)選,所述發(fā)酵罐一次發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分:麩皮:5%,玉米粉:5%,麥粒粉:5%,葡萄糖:1%,kh2p04:0.1%,mgs04:0.1%,蛋白胨:0.1%,余量為水。

玉米粉既是氮源,又是碳源,為培養(yǎng)基提供較為全面的營養(yǎng)。硫酸鎂能激發(fā)酶活性,提高菌絲活力。蛋白胨作為速效氮源,滿足菌種快速萌發(fā)的需要。磷酸二氫鉀提供微量元素,并且起到緩沖ph值的作用。

作為優(yōu)選,所述步驟s02中,所述液體種子培養(yǎng)基包括:胡蘿卜200g,葡萄糖20g,水1000ml。

本發(fā)明實(shí)施例提供的技術(shù)方案可以包含以下有益效果:

(1)野生牛樟芝原有宿主牛樟樹是保護(hù)品種、資源匱乏、價格極其昂貴,本發(fā)明采用柞木培育出的牛樟芝,在形態(tài)外觀上和三萜類含量上,基本與牛樟木培育的牛樟芝相近。同時相比于其他木材,柞木又具備不易受雜菌感染、不招蟲害的特性,更關(guān)鍵的是柞木不含農(nóng)藥殘留,有效的降低了污染率,提高產(chǎn)品的成品率及優(yōu)質(zhì)率。

(2)以柞木栽培牛樟芝子實(shí)體的培養(yǎng)周期較牛樟木的培養(yǎng)周期大大縮短,臺灣地區(qū)野生的牛樟木牛樟芝生長期大致為2~3年,而本發(fā)明以柞木栽培牛樟芝子實(shí)體的生長期為1~1.5年。相較于野生牛樟芝的生長周期能夠如此大幅度的提高,得益于凈化車間的環(huán)境控制適合于牛樟芝的生長。在牛樟芝菌種發(fā)菌階段凈化車間控溫于20~28℃之間,在子實(shí)體發(fā)育生長階段凈化車間控溫于15~25℃之間。充分了解牛樟芝的生理特性,科學(xué)合理的調(diào)整牛樟芝生長發(fā)育不同階段所需的最適生長環(huán)境。

(3)以柞木栽培牛樟芝子實(shí)體的栽培基制備過程中,本發(fā)明采用將菌袋口用直徑10cm的塑料管套緊,再用7層無紡布將塑料管管口包緊后封口扎緊。本發(fā)明采用的直徑10cm塑料管可根據(jù)菌袋中牛樟芝生長所需的空氣環(huán)境做成不同規(guī)格的直徑,7層無紡布又足以阻隔空氣中雜菌進(jìn)入菌袋造成污染,這種封口方法使菌袋內(nèi)與外界空氣保持暢通,保證了菌絲生長過程中充足的氧氣供應(yīng)和適宜菌絲生長的濕度。以前采用套環(huán)塞將裝好柞木裝的聚丙烯500*500菌袋口封口,套環(huán)塞封口使得菌袋內(nèi)的空氣與外界完全隔離,菌絲發(fā)育后期會由于袋內(nèi)氧氣不足,二氧化碳濃度過高而停止生長。

(4)目前內(nèi)地對于牛樟芝的研究開發(fā)和利用尚處于起步階段,除了少數(shù)液態(tài)發(fā)酵工藝成功的研究報告之外,至今尚未見子實(shí)體的規(guī)?;耘喑晒Φ膱蟮?。本發(fā)明直接將接種、發(fā)菌、子實(shí)體管理等關(guān)鍵操作均在凈化車間的環(huán)境中進(jìn)行,擺脫了實(shí)驗(yàn)室恒溫恒濕的環(huán)境,在凈化車間已取得大批量的試驗(yàn)相關(guān)成果,為牛樟芝子實(shí)體規(guī)模化栽培奠定了基礎(chǔ)。

具體實(shí)施方式

為了使本技術(shù)領(lǐng)域的人員更好地理解本發(fā)明中的技術(shù)方案,下面將對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述,顯然,所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例,而不是全部的實(shí)施例?;诒景l(fā)明中的實(shí)施例,本領(lǐng)域技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例,都應(yīng)當(dāng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實(shí)施例1

本實(shí)施例提供一種栽培牛樟芝子實(shí)體的方法,所述方案按照如下步驟進(jìn)行:

s01:獲取菌種:購買牛樟芝菌種,并保存于pda斜面培養(yǎng)基上;

s02:制備液體菌種:將150ml液體種子培養(yǎng)基加入至500ml的三角瓶中,然后接入活化的牛樟芝菌種,旋轉(zhuǎn)式搖床,轉(zhuǎn)速160r/min,在溫度23℃的黑暗條件下培養(yǎng)10天,獲得液體牛樟芝菌種;

s03:制備栽培培養(yǎng)基:將柞木樹制成直徑20cm,長度20cm的木樁,放在水中完全浸沒浸泡30天,浸泡過程中加入木質(zhì)素、葡萄糖、玉米粉和磷酸二氫鉀,浸泡完成后將樹皮清理干凈裝入聚丙烯500*500菌袋中,將菌袋口用直徑10cm的塑料管套緊,再用7層無紡布將塑料管管口包緊后封口扎緊,放置于105℃的高溫高壓滅菌罐中進(jìn)行12h滅菌消毒后在凈化車間內(nèi)冷卻;

s04:接種:在凈化車間的超凈工作臺上,將發(fā)酵好的液體菌種搖勻,將冷卻好的菌袋打開,用液體接種槍接入200ml左右的牛樟芝液體菌種,使牛樟芝液體菌種可從柞木木樁的各個段面流下,再將菌袋扎緊;

s05:發(fā)菌:將接種好的菌袋放置在控溫于20℃的凈化車間內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng),菌絲在柞木木樁表面覆蓋長滿并深入木質(zhì)內(nèi)部生長;

s06:子實(shí)體發(fā)育管理:將發(fā)菌良好的裝好木樁的聚丙烯500*500菌袋脫袋,把發(fā)好菌的柞木木樁放置于濕度70%、溫度15℃的凈化車間進(jìn)行培養(yǎng),至牛樟芝子實(shí)體長至1.5~3cm即可采摘,培養(yǎng)過程中無需光照。

實(shí)施例2

本實(shí)施例提供一種栽培牛樟芝子實(shí)體的方法,所述方案按照如下步驟進(jìn)行:

s01:獲取菌種:購買牛樟芝菌種,并保存于pda斜面培養(yǎng)基上;

s02:制備液體菌種:將150ml液體種子培養(yǎng)基加入至500ml的三角瓶中,然后接入活化的牛樟芝菌種,旋轉(zhuǎn)式搖床,轉(zhuǎn)速160r/min,在溫度27℃的黑暗條件下培養(yǎng)15天,獲得液體牛樟芝菌種;

s03:制備栽培培養(yǎng)基:將柞木樹制成直徑20cm,長度20cm的木樁,放在水中完全浸沒浸泡30天,浸泡過程中加入木質(zhì)素、葡萄糖、玉米粉和磷酸二氫鉀,浸泡完成后將樹皮清理干凈裝入聚丙烯500*500菌袋中,將菌袋口用直徑10cm的塑料管套緊,再用7層無紡布將塑料管管口包緊后封口扎緊,放置于105℃的高溫高壓滅菌罐中進(jìn)行12h滅菌消毒后在凈化車間內(nèi)冷卻;

s04:接種:在凈化車間的超凈工作臺上,將發(fā)酵好的液體菌種搖勻,將冷卻好的菌袋打開,用液體接種槍接入200ml左右的牛樟芝液體菌種,使牛樟芝液體菌種可從柞木木樁的各個段面流下,再將菌袋扎緊;

s05:發(fā)菌:將接種好的菌袋放置在控溫于28℃的凈化車間內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng),菌絲在柞木木樁表面覆蓋長滿并深入木質(zhì)內(nèi)部生長;

s06子實(shí)體發(fā)育管理:將發(fā)菌良好的裝好木樁的聚丙烯500*500菌袋脫袋,把發(fā)好菌的柞木木樁放置于濕度90%、溫度25℃的凈化車間進(jìn)行培養(yǎng),至牛樟芝子實(shí)體長至1.5~3cm即可采摘,培養(yǎng)過程中無需光照。

實(shí)施例3

本實(shí)施例提供一種栽培牛樟芝子實(shí)體的方法,所述方案按照如下步驟進(jìn)行:

s01:獲取菌種:購買牛樟芝菌種,并保存于pda斜面培養(yǎng)基上;

s02:制備液體菌種:將150ml液體種子培養(yǎng)基加入至500ml的三角瓶中,然后接入活化的牛樟芝菌種,旋轉(zhuǎn)式搖床,轉(zhuǎn)速160r/min,在溫度26℃的黑暗條件下培養(yǎng)12天,獲得液體牛樟芝菌種;

s03:制備栽培培養(yǎng)基:將柞木樹制成直徑20cm,長度20cm的木樁,放在水中完全浸沒浸泡30天,浸泡過程中加入木質(zhì)素、葡萄糖、玉米粉和磷酸二氫鉀,浸泡完成后將樹皮清理干凈裝入聚丙烯500*500菌袋中,將菌袋口用直徑10cm的塑料管套緊,再用7層無紡布將塑料管管口包緊后封口扎緊,放置于105℃的高溫高壓滅菌罐中進(jìn)行12h滅菌消毒后在凈化車間內(nèi)冷卻;

s04:接種:在凈化車間的超凈工作臺上,將發(fā)酵好的液體菌種搖勻,將冷卻好的菌袋打開,用液體接種槍接入200ml左右的牛樟芝液體菌種,使牛樟芝液體菌種可從柞木木樁的各個段面流下,再將菌袋扎緊;

s05:發(fā)菌:將接種好的菌袋放置在控溫于24℃的凈化車間內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng),菌絲在柞木木樁表面覆蓋長滿并深入木質(zhì)內(nèi)部生長;

s06:子實(shí)體發(fā)育管理:將發(fā)菌良好的裝好木樁的聚丙烯500*500菌袋脫袋,把發(fā)好菌的柞木木樁放置于濕度80%、溫度20℃的凈化車間進(jìn)行培養(yǎng)至牛樟芝子實(shí)體長至1.5~3cm即可采摘,培養(yǎng)過程中無需光照。

實(shí)施例4

本實(shí)施例提供一種栽培牛樟芝子實(shí)體的方法,所述方案按照如下步驟進(jìn)行:

s01:獲取菌種:購買牛樟芝菌種,并保存于pda斜面培養(yǎng)基上;

s02:制備液體菌種:將150ml液體種子培養(yǎng)基加入至500ml的三角瓶中,然后接入活化的牛樟芝菌種,旋轉(zhuǎn)式搖床,轉(zhuǎn)速160r/min,在溫度26℃的黑暗條件下培養(yǎng)13天,獲得液體牛樟芝菌種;

s03:制備栽培培養(yǎng)基:將柞木樹制成直徑20cm,長度20cm的木樁,放在水中完全浸沒浸泡30天,浸泡過程中加入木質(zhì)素、葡萄糖、玉米粉和磷酸二氫鉀,浸泡完成后將樹皮清理干凈裝入聚丙烯500*500菌袋中,將菌袋口用直徑10cm的塑料管套緊,再用7層無紡布將塑料管管口包緊后封口扎緊,放置于105℃的高溫高壓滅菌罐中進(jìn)行12h滅菌消毒后在凈化車間內(nèi)冷卻;

s04:接種:在凈化車間的超凈工作臺上,將發(fā)酵好的液體菌種搖勻,將冷卻好的菌袋打開,用液體接種槍接入200ml左右的牛樟芝液體菌種,使牛樟芝液體菌種可從柞木木樁的各個段面流下,再將菌袋扎緊;

s05:發(fā)菌:將接種好的菌袋放置在控溫于25℃的凈化車間內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng),菌絲在柞木木樁表面覆蓋長滿并深入木質(zhì)內(nèi)部生長;

s06:子實(shí)體發(fā)育管理:將發(fā)菌良好的裝好木樁的聚丙烯500*500菌袋脫袋,把發(fā)好菌的柞木木樁放置于濕度75%、溫度22℃的凈化車間進(jìn)行培養(yǎng)至牛樟芝子實(shí)體長至1.5~3cm即可采摘,培養(yǎng)過程中無需光照。

將上述實(shí)施例中栽培得到的牛樟芝子實(shí)體與臺灣地區(qū)野生的牛樟木上生長的牛樟芝相比,其外觀形態(tài)基本相同,三萜類含量和生長期對比如下表1所示:

表1:各實(shí)施例生長的牛樟芝子實(shí)體對比

上述表1中,對比例1是指臺灣地區(qū)野生的牛樟木上生長的牛樟芝,由表1可知,本發(fā)明實(shí)施例1至實(shí)施例4制備得到的牛樟芝三萜類含量在15~40%之間,相比于臺灣地區(qū)野生的牛樟芝相差無幾,從原種到長成1.5~3cm的牛樟芝子實(shí)體的生長期在1.0~1.5年之間,相比于臺灣地區(qū)野生的牛樟芝生長期縮短了約一半。

當(dāng)然,上述說明也并不僅限于上述舉例,本發(fā)明未經(jīng)描述的技術(shù)特征可以通過或采用現(xiàn)有技術(shù)實(shí)現(xiàn),在此不再贅述;以上實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明的技術(shù)方案并非是對本發(fā)明的限制,參照優(yōu)選的實(shí)施方式對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明,本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解,本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在本發(fā)明的實(shí)質(zhì)范圍內(nèi)所做出的變化、改型、添加或替換都不脫離本發(fā)明的宗旨,也應(yīng)屬于本發(fā)明的權(quán)利要求保護(hù)范圍。

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