本發(fā)明涉及食藥用菌技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于栽培牛樟芝子實(shí)體的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)：

牛樟芝屬于非褶菌目、多孔菌科、薄孔菌屬、多年生蕈菌類，拉丁名為antrodiacamphorata，是1990年才被生化界發(fā)表的新種。因生長在臺灣地區(qū)特有保護(hù)類植物牛樟樹上而得名，是珍貴稀有藥用真菌。牛樟芝子實(shí)體在早期是臺灣地區(qū)原住民族用來治療因飲酒過度所引致的肝損傷、解宿醉的珍寶，現(xiàn)在大量應(yīng)用于保肝護(hù)肝以及抗氧化、抗炎、抗腫瘤等。天然牛樟芝因僅生長于臺灣地區(qū)特有樹種牛樟老樹的中空樹洞與其段木上，而目前牛樟樹僅臺灣地區(qū)地區(qū)較多，且屬于世界一級保護(hù)樹種，野生資源非常稀少價格及其昂貴，用牛樟木生產(chǎn)牛樟芝不是未來發(fā)展方向。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種用于栽培牛樟芝子實(shí)體的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法，提高牛樟芝子實(shí)體的生產(chǎn)量。

本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，提供一種栽培牛樟芝子實(shí)體的方法，所述方法包括如下步驟：

s01：獲取菌種：購買牛樟芝菌種，并保存于pda斜面培養(yǎng)基上。

s02：制備液體菌種：將150ml液體種子培養(yǎng)基加入至500ml的三角瓶中，然后接入所述步驟s01中獲得的菌種，旋轉(zhuǎn)式搖床，轉(zhuǎn)速160r/min，在溫度23～27℃的黑暗條件下培養(yǎng)10～15天，獲得液體牛樟芝菌種。

s02：制備栽培培養(yǎng)基：將柞木樹制成直徑20cm，長20cm的木樁，放在水中完全浸沒浸泡30天，浸泡過程中加入木質(zhì)素2%、葡萄糖1%、玉米粉0.5%、磷酸二氫鉀1%；浸泡完成后將樹皮清理干凈裝入聚丙烯500*500菌袋中，將菌袋口用直徑10cm的塑料管套緊，再用7層無紡布將塑料管管口包緊后封口扎緊，放置于105℃條件下進(jìn)行滅菌消毒12h，然后在凈化車間內(nèi)冷卻。

木樁在水中浸泡時，雖然充分濕潤，但木樁中的營養(yǎng)物質(zhì)會有一定的流失，本發(fā)明在浸泡過程中添加木質(zhì)素等營養(yǎng)物質(zhì)，增加木樁表層的營養(yǎng)物質(zhì)和微量元素，改良ph，利于菌絲在初期營養(yǎng)生長階段快速生長，減少雜菌的侵染。相對于不添加營養(yǎng)物質(zhì)，菌絲生長時間縮短半個月左右。塑料套管可根據(jù)菌袋中牛樟芝生長所需的空氣環(huán)境做成不同規(guī)格的直徑，7層無紡布又足以阻隔空氣中雜菌進(jìn)入菌袋造成污染，這種封口方法使菌袋內(nèi)與外界空氣保持暢通，保證了菌絲生長過程中充足的氧氣供應(yīng)和適宜菌絲生長的濕度；有利于菌絲發(fā)育。

s03：接種：在凈化車間的超凈工作臺上，將發(fā)酵好的液體菌種搖勻，將冷卻好的菌袋打開，用液體接種槍接入160～220ml液體牛樟芝菌種，使牛樟芝液體菌種可從柞木木樁的各個段面流下，再將菌袋扎緊。

s04：發(fā)菌：將接種好的菌袋放置在控溫于20～28℃的凈化車間內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，菌絲在柞木木樁表面覆蓋長滿并深入木質(zhì)內(nèi)部生長。

s05：子實(shí)體發(fā)育管理：將發(fā)菌良好的裝好木樁的聚丙烯500*500菌袋脫袋，把發(fā)好菌的柞木木樁放置于濕度70～90%、溫度15～25℃的凈化車間進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中無需光照。

本法提供的方法在凈化車間進(jìn)行，可以實(shí)現(xiàn)牛樟芝子實(shí)體的規(guī)?；耘唷?/p>

作為優(yōu)選，所述步驟s03中，發(fā)酵好的液體菌種是將所述步驟s02中獲得的液體牛樟芝菌種接入滅菌并冷卻后的發(fā)酵罐一次發(fā)酵培養(yǎng)基上，在發(fā)酵罐內(nèi)保持恒溫24～28℃，通入無菌空氣培養(yǎng)7～10天獲得。

作為優(yōu)選，所述發(fā)酵罐一次發(fā)酵培養(yǎng)基包括如下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：麩皮：5%，玉米粉：5%，麥粒粉：5%，葡萄糖：1%，kh2p04：0.1%，mgs04：0.1%，蛋白胨：0.1%，余量為水。

玉米粉既是氮源，又是碳源，為培養(yǎng)基提供較為全面的營養(yǎng)。硫酸鎂能激發(fā)酶活性，提高菌絲活力。蛋白胨作為速效氮源，滿足菌種快速萌發(fā)的需要。磷酸二氫鉀提供微量元素，并且起到緩沖ph值的作用。

作為優(yōu)選，所述步驟s02中，所述液體種子培養(yǎng)基包括：胡蘿卜200g，葡萄糖20g，水1000ml。

本發(fā)明實(shí)施例提供的技術(shù)方案可以包含以下有益效果：

（1）野生牛樟芝原有宿主牛樟樹是保護(hù)品種、資源匱乏、價格極其昂貴，本發(fā)明采用柞木培育出的牛樟芝，在形態(tài)外觀上和三萜類含量上，基本與牛樟木培育的牛樟芝相近。同時相比于其他木材，柞木又具備不易受雜菌感染、不招蟲害的特性，更關(guān)鍵的是柞木不含農(nóng)藥殘留，有效的降低了污染率，提高產(chǎn)品的成品率及優(yōu)質(zhì)率。

（2）以柞木栽培牛樟芝子實(shí)體的培養(yǎng)周期較牛樟木的培養(yǎng)周期大大縮短，臺灣地區(qū)野生的牛樟木牛樟芝生長期大致為2～3年，而本發(fā)明以柞木栽培牛樟芝子實(shí)體的生長期為1～1.5年。相較于野生牛樟芝的生長周期能夠如此大幅度的提高，得益于凈化車間的環(huán)境控制適合于牛樟芝的生長。在牛樟芝菌種發(fā)菌階段凈化車間控溫于20～28℃之間，在子實(shí)體發(fā)育生長階段凈化車間控溫于15～25℃之間。充分了解牛樟芝的生理特性，科學(xué)合理的調(diào)整牛樟芝生長發(fā)育不同階段所需的最適生長環(huán)境。

（3）以柞木栽培牛樟芝子實(shí)體的栽培基制備過程中，本發(fā)明采用將菌袋口用直徑10cm的塑料管套緊，再用7層無紡布將塑料管管口包緊后封口扎緊。本發(fā)明采用的直徑10cm塑料管可根據(jù)菌袋中牛樟芝生長所需的空氣環(huán)境做成不同規(guī)格的直徑，7層無紡布又足以阻隔空氣中雜菌進(jìn)入菌袋造成污染，這種封口方法使菌袋內(nèi)與外界空氣保持暢通，保證了菌絲生長過程中充足的氧氣供應(yīng)和適宜菌絲生長的濕度。以前采用套環(huán)塞將裝好柞木裝的聚丙烯500*500菌袋口封口，套環(huán)塞封口使得菌袋內(nèi)的空氣與外界完全隔離，菌絲發(fā)育后期會由于袋內(nèi)氧氣不足，二氧化碳濃度過高而停止生長。

（4）目前內(nèi)地對于牛樟芝的研究開發(fā)和利用尚處于起步階段，除了少數(shù)液態(tài)發(fā)酵工藝成功的研究報告之外，至今尚未見子實(shí)體的規(guī)?；耘喑晒Φ膱蟮?。本發(fā)明直接將接種、發(fā)菌、子實(shí)體管理等關(guān)鍵操作均在凈化車間的環(huán)境中進(jìn)行，擺脫了實(shí)驗(yàn)室恒溫恒濕的環(huán)境，在凈化車間已取得大批量的試驗(yàn)相關(guān)成果，為牛樟芝子實(shí)體規(guī)模化栽培奠定了基礎(chǔ)。

具體實(shí)施方式

為了使本技術(shù)領(lǐng)域的人員更好地理解本發(fā)明中的技術(shù)方案,下面將對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都應(yīng)當(dāng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實(shí)施例1

本實(shí)施例提供一種栽培牛樟芝子實(shí)體的方法，所述方案按照如下步驟進(jìn)行：

s01：獲取菌種：購買牛樟芝菌種，并保存于pda斜面培養(yǎng)基上；

s02：制備液體菌種：將150ml液體種子培養(yǎng)基加入至500ml的三角瓶中，然后接入活化的牛樟芝菌種，旋轉(zhuǎn)式搖床，轉(zhuǎn)速160r/min，在溫度23℃的黑暗條件下培養(yǎng)10天，獲得液體牛樟芝菌種；

s03：制備栽培培養(yǎng)基：將柞木樹制成直徑20cm，長度20cm的木樁，放在水中完全浸沒浸泡30天，浸泡過程中加入木質(zhì)素、葡萄糖、玉米粉和磷酸二氫鉀，浸泡完成后將樹皮清理干凈裝入聚丙烯500*500菌袋中，將菌袋口用直徑10cm的塑料管套緊，再用7層無紡布將塑料管管口包緊后封口扎緊，放置于105℃的高溫高壓滅菌罐中進(jìn)行12h滅菌消毒后在凈化車間內(nèi)冷卻；

s04：接種：在凈化車間的超凈工作臺上，將發(fā)酵好的液體菌種搖勻，將冷卻好的菌袋打開，用液體接種槍接入200ml左右的牛樟芝液體菌種，使牛樟芝液體菌種可從柞木木樁的各個段面流下，再將菌袋扎緊；

s05：發(fā)菌：將接種好的菌袋放置在控溫于20℃的凈化車間內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，菌絲在柞木木樁表面覆蓋長滿并深入木質(zhì)內(nèi)部生長；

s06：子實(shí)體發(fā)育管理：將發(fā)菌良好的裝好木樁的聚丙烯500*500菌袋脫袋，把發(fā)好菌的柞木木樁放置于濕度70%、溫度15℃的凈化車間進(jìn)行培養(yǎng)，至牛樟芝子實(shí)體長至1.5～3cm即可采摘，培養(yǎng)過程中無需光照。

實(shí)施例2

本實(shí)施例提供一種栽培牛樟芝子實(shí)體的方法，所述方案按照如下步驟進(jìn)行：

s01：獲取菌種：購買牛樟芝菌種，并保存于pda斜面培養(yǎng)基上；

s02：制備液體菌種：將150ml液體種子培養(yǎng)基加入至500ml的三角瓶中，然后接入活化的牛樟芝菌種，旋轉(zhuǎn)式搖床，轉(zhuǎn)速160r/min，在溫度27℃的黑暗條件下培養(yǎng)15天，獲得液體牛樟芝菌種；

s03：制備栽培培養(yǎng)基：將柞木樹制成直徑20cm，長度20cm的木樁，放在水中完全浸沒浸泡30天，浸泡過程中加入木質(zhì)素、葡萄糖、玉米粉和磷酸二氫鉀，浸泡完成后將樹皮清理干凈裝入聚丙烯500*500菌袋中，將菌袋口用直徑10cm的塑料管套緊，再用7層無紡布將塑料管管口包緊后封口扎緊，放置于105℃的高溫高壓滅菌罐中進(jìn)行12h滅菌消毒后在凈化車間內(nèi)冷卻；

s04：接種：在凈化車間的超凈工作臺上，將發(fā)酵好的液體菌種搖勻，將冷卻好的菌袋打開，用液體接種槍接入200ml左右的牛樟芝液體菌種，使牛樟芝液體菌種可從柞木木樁的各個段面流下，再將菌袋扎緊；

s05：發(fā)菌：將接種好的菌袋放置在控溫于28℃的凈化車間內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，菌絲在柞木木樁表面覆蓋長滿并深入木質(zhì)內(nèi)部生長；

s06子實(shí)體發(fā)育管理：將發(fā)菌良好的裝好木樁的聚丙烯500*500菌袋脫袋，把發(fā)好菌的柞木木樁放置于濕度90%、溫度25℃的凈化車間進(jìn)行培養(yǎng)，至牛樟芝子實(shí)體長至1.5～3cm即可采摘，培養(yǎng)過程中無需光照。

實(shí)施例3

本實(shí)施例提供一種栽培牛樟芝子實(shí)體的方法，所述方案按照如下步驟進(jìn)行：

s01：獲取菌種：購買牛樟芝菌種，并保存于pda斜面培養(yǎng)基上；

s02：制備液體菌種：將150ml液體種子培養(yǎng)基加入至500ml的三角瓶中，然后接入活化的牛樟芝菌種，旋轉(zhuǎn)式搖床，轉(zhuǎn)速160r/min，在溫度26℃的黑暗條件下培養(yǎng)12天，獲得液體牛樟芝菌種；

s03：制備栽培培養(yǎng)基：將柞木樹制成直徑20cm，長度20cm的木樁，放在水中完全浸沒浸泡30天，浸泡過程中加入木質(zhì)素、葡萄糖、玉米粉和磷酸二氫鉀，浸泡完成后將樹皮清理干凈裝入聚丙烯500*500菌袋中，將菌袋口用直徑10cm的塑料管套緊，再用7層無紡布將塑料管管口包緊后封口扎緊，放置于105℃的高溫高壓滅菌罐中進(jìn)行12h滅菌消毒后在凈化車間內(nèi)冷卻；

s04：接種：在凈化車間的超凈工作臺上，將發(fā)酵好的液體菌種搖勻，將冷卻好的菌袋打開，用液體接種槍接入200ml左右的牛樟芝液體菌種，使牛樟芝液體菌種可從柞木木樁的各個段面流下，再將菌袋扎緊；

s05：發(fā)菌：將接種好的菌袋放置在控溫于24℃的凈化車間內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，菌絲在柞木木樁表面覆蓋長滿并深入木質(zhì)內(nèi)部生長；

s06：子實(shí)體發(fā)育管理：將發(fā)菌良好的裝好木樁的聚丙烯500*500菌袋脫袋，把發(fā)好菌的柞木木樁放置于濕度80%、溫度20℃的凈化車間進(jìn)行培養(yǎng)至牛樟芝子實(shí)體長至1.5～3cm即可采摘，培養(yǎng)過程中無需光照。

實(shí)施例4

本實(shí)施例提供一種栽培牛樟芝子實(shí)體的方法，所述方案按照如下步驟進(jìn)行：

s01：獲取菌種：購買牛樟芝菌種，并保存于pda斜面培養(yǎng)基上；

s02：制備液體菌種：將150ml液體種子培養(yǎng)基加入至500ml的三角瓶中，然后接入活化的牛樟芝菌種，旋轉(zhuǎn)式搖床，轉(zhuǎn)速160r/min，在溫度26℃的黑暗條件下培養(yǎng)13天，獲得液體牛樟芝菌種；

s03：制備栽培培養(yǎng)基：將柞木樹制成直徑20cm，長度20cm的木樁，放在水中完全浸沒浸泡30天，浸泡過程中加入木質(zhì)素、葡萄糖、玉米粉和磷酸二氫鉀，浸泡完成后將樹皮清理干凈裝入聚丙烯500*500菌袋中，將菌袋口用直徑10cm的塑料管套緊，再用7層無紡布將塑料管管口包緊后封口扎緊，放置于105℃的高溫高壓滅菌罐中進(jìn)行12h滅菌消毒后在凈化車間內(nèi)冷卻；

s04：接種：在凈化車間的超凈工作臺上，將發(fā)酵好的液體菌種搖勻，將冷卻好的菌袋打開，用液體接種槍接入200ml左右的牛樟芝液體菌種，使牛樟芝液體菌種可從柞木木樁的各個段面流下，再將菌袋扎緊；

s05：發(fā)菌：將接種好的菌袋放置在控溫于25℃的凈化車間內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，菌絲在柞木木樁表面覆蓋長滿并深入木質(zhì)內(nèi)部生長；

s06：子實(shí)體發(fā)育管理：將發(fā)菌良好的裝好木樁的聚丙烯500*500菌袋脫袋，把發(fā)好菌的柞木木樁放置于濕度75%、溫度22℃的凈化車間進(jìn)行培養(yǎng)至牛樟芝子實(shí)體長至1.5～3cm即可采摘，培養(yǎng)過程中無需光照。

將上述實(shí)施例中栽培得到的牛樟芝子實(shí)體與臺灣地區(qū)野生的牛樟木上生長的牛樟芝相比，其外觀形態(tài)基本相同，三萜類含量和生長期對比如下表1所示：

表1：各實(shí)施例生長的牛樟芝子實(shí)體對比

上述表1中，對比例1是指臺灣地區(qū)野生的牛樟木上生長的牛樟芝，由表1可知，本發(fā)明實(shí)施例1至實(shí)施例4制備得到的牛樟芝三萜類含量在15～40%之間，相比于臺灣地區(qū)野生的牛樟芝相差無幾，從原種到長成1.5～3cm的牛樟芝子實(shí)體的生長期在1.0～1.5年之間，相比于臺灣地區(qū)野生的牛樟芝生長期縮短了約一半。

當(dāng)然，上述說明也并不僅限于上述舉例，本發(fā)明未經(jīng)描述的技術(shù)特征可以通過或采用現(xiàn)有技術(shù)實(shí)現(xiàn)，在此不再贅述；以上實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明的技術(shù)方案并非是對本發(fā)明的限制，參照優(yōu)選的實(shí)施方式對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在本發(fā)明的實(shí)質(zhì)范圍內(nèi)所做出的變化、改型、添加或替換都不脫離本發(fā)明的宗旨，也應(yīng)屬于本發(fā)明的權(quán)利要求保護(hù)范圍。