本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于評(píng)價(jià)固體熏蒸劑對(duì)蚯蚓急性毒性的方法及裝置。

背景技術(shù)：

近年來，由于我國保護(hù)地栽培的迅速發(fā)展和連年重茬種植，土傳病害問題越來越重，農(nóng)作物產(chǎn)量和品質(zhì)受到嚴(yán)重影響。土壤熏蒸劑因其防病徹底且增產(chǎn)顯著而備受種植者歡迎，用量逐年上升。土壤熏蒸劑作為具有強(qiáng)揮發(fā)性且毒性較高的一類特殊農(nóng)藥，其環(huán)境毒理登記試驗(yàn)的操作非常困難，目前缺乏一種準(zhǔn)確可靠且操作安全、方便的評(píng)價(jià)方法。

盡管經(jīng)濟(jì)合作發(fā)展組織(OECD)、美國國家環(huán)境保護(hù)局(USEPA)和我國環(huán)境保護(hù)部專門為了規(guī)范環(huán)境毒理評(píng)價(jià)試驗(yàn)，都對(duì)常規(guī)農(nóng)藥進(jìn)行蚯蚓急性毒性的提供了標(biāo)準(zhǔn)方法，但由于上述方法中建議的試驗(yàn)裝置為玻璃燒杯而具有強(qiáng)烈揮發(fā)性熏蒸劑會(huì)在試驗(yàn)過程中出現(xiàn)大量逃逸，從而引起試驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確，同時(shí)會(huì)對(duì)試驗(yàn)操作人員形成很大的安全威脅。同時(shí)，上述方法中建議的土壤含水量為人工干土重的35％左右(即達(dá)到飽和含水量或者說相對(duì)含水量為100％)，如果直接將上述玻璃裝置燒杯換成一個(gè)密閉的玻璃容器進(jìn)行試驗(yàn)，空白對(duì)照處理的蚯蚓也會(huì)短期出現(xiàn)大量死亡，從而導(dǎo)致試驗(yàn)失敗。目前，亟需摸索試驗(yàn)出一種專門適用于評(píng)價(jià)具有強(qiáng)烈揮發(fā)性熏蒸劑對(duì)蚯蚓急性毒性的準(zhǔn)確可靠且操作安全的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種用于室內(nèi)評(píng)價(jià)固體土壤熏蒸劑對(duì)蚯蚓急性毒性的方法及裝置，本發(fā)明的方法及裝置，評(píng)價(jià)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，而且重復(fù)性高；同時(shí)本發(fā)明方法及裝置具有對(duì)試驗(yàn)操作人員安全、操作簡便快捷而且成本低廉等優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：

一種用于評(píng)價(jià)固體熏蒸劑對(duì)蚯蚓急性毒性的方法，包括以下步驟：

1)將自然土壤置于熏蒸裝置中；

2)調(diào)節(jié)溫度和光照強(qiáng)度，將多個(gè)蚯蚓放在步驟1)的自然土壤的表面；

3)待蚯蚓全部鉆入自然土壤中后，將固體熏蒸劑均勻混布到自然土壤中；將熏蒸裝置密封，之后進(jìn)行熏蒸處理；

4)調(diào)查蚯蚓的死亡情況，并計(jì)算蚯蚓的死亡率，根據(jù)蚯蚓的死亡率來評(píng)價(jià)熏蒸劑對(duì)蚯蚓急性毒性。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明所述的方法具有評(píng)價(jià)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，而且重復(fù)性高；將熏蒸裝置密封，有利于保證熏蒸的效果更加準(zhǔn)確，同時(shí)避免熏蒸劑從熏蒸裝置逸出對(duì)試驗(yàn)操作人員的健康產(chǎn)生威脅。本發(fā)明的方法對(duì)試驗(yàn)操作人員安全、操作簡便快捷而且成本低廉等優(yōu)點(diǎn)。在步驟2)中是將蚯蚓放在自然土壤的表面，這樣設(shè)置可以檢查挑選蚯蚓的活潑和健康程度。如果放于自然土壤表面的蚯蚓在適宜光照和溫度條件(例如：400Lx-800Lx，18-22℃)下可以在15分鐘內(nèi)鉆入自然土壤中，說明蚯蚓生長健康；如果15分鐘內(nèi)沒有鉆入自然土壤中，說明蚯蚓不活潑或生長不良，需要更換新的健康蚯蚓重新放入。

在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可以做如下改進(jìn)。

進(jìn)一步，步驟1)中，所述自然土壤的含水量為該自然土壤飽和含水量的30％-80％，優(yōu)選40％-60％，最佳為50％。

自然土壤這里指的是5年內(nèi)未施用過化肥或農(nóng)藥的非耕地土壤。土層深度為0-30cm，剔除大的石塊或雜物后，過篩5mm后備用。

采用上述方案的有益效果是：自然土壤的含水量(即自然土壤的濕度)過大或過低均不利于蚯蚓在密閉環(huán)境中的存活。從而會(huì)影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。合適的自然土壤的含水量，可以保證蚯蚓可以自然存活4周(即4w)以上。盡可能的排除外生存條件對(duì)蚯蚓致死的影響。試驗(yàn)應(yīng)調(diào)節(jié)自然土壤的相對(duì)含水量至30.0％-80.0％，在40.0％-60.0％范圍內(nèi)更好，最佳為50.0％。

進(jìn)一步，步驟1)中，按照下述的比例加入自然土壤：每0.3L-5L容積的熏蒸裝置加入自然土壤的重量為100g-4000g。

采用上述方案的有益效果是：采用上述的比例，一方面有利于保證蚯蚓在空白對(duì)照自然土壤中正常存活,另一方面確保熏蒸劑發(fā)揮最佳的熏蒸效果,如果自然土壤過多，容易導(dǎo)致密閉容器中空氣不足,從而導(dǎo)致蚯蚓非正常死亡問題，如果熏蒸裝置容積過大，容易導(dǎo)致熏蒸劑施藥不勻,從而導(dǎo)致室內(nèi)熏蒸過程中藥劑擴(kuò)散不勻問題。

進(jìn)一步，步驟2)中，按照下述的比例加入蚯蚓：每0.3L-5L容積的熏蒸裝置加入5-30條蚯蚓。

采用上述方案的有益效果是：采用上述的比例，有利于蚯蚓在合適的密度下生存，如果熏蒸裝置容積過大，容易導(dǎo)致熏蒸劑施藥不勻,從而導(dǎo)致室內(nèi)熏蒸過程中藥劑擴(kuò)散不勻問題；如果蚯蚓數(shù)量過多，容易導(dǎo)致蚯蚓因生存空間不足相互競爭引發(fā)非正常死亡問題。

進(jìn)一步，步驟2)中，溫度為18℃-22℃。

采用上述方案的有益效果是：采用上述的溫度，可以避免蚯蚓因培養(yǎng)溫度的不合適失水死亡，從而使檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確。

進(jìn)一步，步驟2)中，光照強(qiáng)度為400Lx-800Lx。

采用上述方案的有益效果是：采用上述的光照強(qiáng)度，可以避免蚯蚓因光照強(qiáng)度的不合適導(dǎo)致意外死亡，從而使檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確。

進(jìn)一步，步驟3)中，熏蒸處理的時(shí)間為3-21天。

采用上述方案的有益效果是：合適的熏蒸處理的時(shí)間有利于提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性；如果時(shí)間過長，蚯蚓因養(yǎng)分不夠或其他條件死亡，使檢測的蚯蚓的死亡率偏高；如果時(shí)間過短，熏蒸劑還沒有來的及發(fā)揮作用，使檢測的蚯蚓的死亡率偏低。

進(jìn)一步，根據(jù)死亡率判斷熏蒸劑的急性毒性的具體標(biāo)準(zhǔn)為：劇毒，致死中濃度LC₅₀≤0.1mg a.i./Kg_干土；高毒，0.1mg a.i./Kg_干土<LC₅₀≤1.0mg a.i./Kg_干土；中毒，1.0mg a.i./Kg_干土<LC₅₀≤10mg a.i./Kg_干土；低毒，LC₅₀>10mg a.i./Kg_干土。其中，mg a.i./Kg干土指的是每千克干土中熏蒸劑有效成分的含量(mg)。LC₅₀是指半數(shù)致死濃度，即暴露周期內(nèi)，殺死50％受試蚯蚓的含有受試物質(zhì)的有效成分的濃度，即每千克干土中熏蒸劑有效成分的質(zhì)量。

進(jìn)一步，所述蚯蚓選自赤子愛勝蚯蚓、日本杜拉蚓、無錫杜拉蚓、直隸環(huán)毛蚓、湖北環(huán)毛蚓、透明環(huán)毛蚓、狀重環(huán)毛蚓、夏威環(huán)毛蚓、白頸環(huán)毛蚓、舒脈環(huán)毛蚓、毛利環(huán)毛蚓中的任一種或幾種。

進(jìn)一步，所述熏蒸劑為固體類熏蒸劑，所述熏蒸劑選自棉隆微粒劑、氯化苦緩釋顆粒劑或氰氨化鈣緩釋顆粒中的任一種或幾種。

本發(fā)明提供一種實(shí)現(xiàn)上述用于評(píng)價(jià)固體熏蒸劑對(duì)蚯蚓急性毒性的方法的裝置，包括：溫控裝置、光源裝置和熏蒸裝置，所述溫控裝置用于控制整個(gè)裝置所在環(huán)境的溫度，所述光源裝置位于熏蒸裝置的上方，為整個(gè)裝置提供光源；所述熏蒸裝置內(nèi)部可用于盛放自然土壤，自然土壤用于放置蚯蚓；

所述熏蒸裝置包括容器蓋和容器主體，容器蓋蓋合在容器主體的開口處，容器蓋可以打開或密閉容器主體。

采用上述方案的有益效果是：本發(fā)明所述的裝置具有評(píng)價(jià)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，而且重復(fù)性高等優(yōu)點(diǎn)。溫控裝置和光源裝置為蚯蚓提供合適的培養(yǎng)條件，排除因條件不適導(dǎo)致的蚯蚓意外死亡。

在使用時(shí)，容器蓋可以密閉容器主體，有利于保證熏蒸的效果更加準(zhǔn)確，同時(shí)避免熏蒸劑從熏蒸裝置逸出對(duì)試驗(yàn)操作人員的健康產(chǎn)生威脅。本發(fā)明的裝置對(duì)試驗(yàn)操作人員安全、操作簡便快捷而且成本低廉等優(yōu)點(diǎn)。

進(jìn)一步，還包括組合架，所述組合架分成上下設(shè)置的多層，每層均放置有多個(gè)熏蒸裝置，光源裝置為多個(gè)，多個(gè)光源裝置分別固設(shè)在每層的組合架上。

采用上述方案的有益效果是：通過組合架的設(shè)置可以在有限的空間內(nèi)設(shè)置多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，可以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

多個(gè)光源裝置分別固設(shè)在每層的組合架上，可以保證每個(gè)熏蒸裝置的光照條件是相同的，避免因光照不均導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)誤差。

進(jìn)一步，組合架為鐵制或不銹鋼制。

采用上述方案的有益效果是：具有結(jié)實(shí)、耐用且不生銹的優(yōu)點(diǎn)。

進(jìn)一步，當(dāng)容器蓋密閉容器主體時(shí)，容器蓋與容器主體的連接處通過油脂類物質(zhì)密封。

采用上述方案的有益效果是：可以進(jìn)一步提高密封效果。

進(jìn)一步，所述密封時(shí)用的油脂類物質(zhì)為白凡士林或黃凡士林。

采用上述方案的有益效果是：進(jìn)一步提高密封效果。

進(jìn)一步，所述熏蒸裝置為透明玻璃制的廣口瓶或普通干燥器。

采用上述方案的有益效果是：采用透明玻璃的材質(zhì)的熏蒸裝置有利于熏蒸過程中隨時(shí)觀察到藥劑處理后蚯蚓的行為癥狀,比如從自然土壤中逃逸、在自然土壤表面腐爛或在容器內(nèi)壁亂爬等。

進(jìn)一步，所述自然土壤的含水量為該自然土壤的飽和含水量的30％-80％，優(yōu)選40％-60％，最佳為50％。

進(jìn)一步，熏蒸裝置的容積與自然土壤的重量的關(guān)系為：每0.3L-5L容積的熏蒸裝置加入自然土壤的重量為100g-4000g。

進(jìn)一步，熏蒸裝置的容積與與蚯蚓的數(shù)量的關(guān)系為：每0.3L-5L容積的熏蒸裝置加入5-30條蚯蚓。

本發(fā)明所述裝置適用于各種蚯蚓，例如：所述蚯蚓選自赤子愛勝蚯蚓、日本杜拉蚓、無錫杜拉蚓、直隸環(huán)毛蚓、湖北環(huán)毛蚓、透明環(huán)毛蚓、狀重環(huán)毛蚓、夏威環(huán)毛蚓、白頸環(huán)毛蚓、舒脈環(huán)毛蚓、毛利環(huán)毛蚓中的任一種或幾種。

本發(fā)明所述裝置適用于各種固體熏蒸劑，例如：所述固體熏蒸劑選自棉隆微粒劑、氯化苦緩釋顆粒劑或氰氨化鈣緩釋顆粒中的任一種或幾種。

附圖說明

圖1為本發(fā)明所述一種用于室內(nèi)評(píng)價(jià)固體類土壤熏蒸劑對(duì)蚯蚓急性毒性的裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。

附圖中，各標(biāo)號(hào)所代表的部件列表如下：

1、溫控裝置，2、光源裝置，3、組合架，4、容器蓋，5、容器主體，6、自然土壤，7、蚯蚓。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。

一種用于評(píng)價(jià)固體熏蒸劑對(duì)蚯蚓急性毒性的方法，包括以下步驟：

1)將自然土壤置于熏蒸裝置中；

2)調(diào)節(jié)溫度和光照強(qiáng)度，將多個(gè)蚯蚓放在步驟1)的自然土壤的表面；

3)待蚯蚓全部鉆入自然土壤中后，將固體熏蒸劑均勻混布到自然土壤中；將熏蒸裝置密封，之后進(jìn)行熏蒸處理；

4)調(diào)查蚯蚓的死亡情況，并計(jì)算蚯蚓的死亡率，根據(jù)蚯蚓的死亡率來評(píng)價(jià)熏蒸劑對(duì)蚯蚓急性毒性。

上述方法中，各步驟具體的控制參數(shù)如下：

步驟1)中，所述自然土壤的含水量為該自然土壤飽和含水量的30％-80％，優(yōu)選40％-60％，最佳為50％。步驟1)中，按照下述的比例加入自然土壤：每0.3L-5L容積的熏蒸裝置加入自然土壤的重量為100g-4000g。

步驟2)中，按照下述的比例加入蚯蚓：每0.3L-5L容積的熏蒸裝置加入5-30條。步驟2)中，溫度為18℃-22℃。步驟2)中，光照強(qiáng)度為400Lx-800Lx。

步驟3)中，熏蒸處理的時(shí)間為3-21天。

上述方法中，根據(jù)死亡率判斷熏蒸劑的急性毒性的具體標(biāo)準(zhǔn)為：劇毒，致死中濃度LC₅₀≤0.1mg a.i./Kg_干土；高毒，0.1mg a.i./Kg_干土<LC₅₀≤1.0mg a.i./Kg_干土；中毒，1.0mg a.i./Kg_干土<LC₅₀≤10mg a.i./Kg_干土；低毒，LC₅₀>10mg a.i./Kg_干土。

本發(fā)明還提供一種實(shí)現(xiàn)上述方法的用于室內(nèi)評(píng)價(jià)固體類土壤熏蒸劑對(duì)蚯蚓急性毒性的裝置。

如圖1所示，一種用于室內(nèi)評(píng)價(jià)固體類土壤熏蒸劑對(duì)蚯蚓急性毒性的裝置包括：溫控裝置1、光源裝置2和熏蒸裝置，熏蒸裝置包括容器蓋4和容器主體5，容器蓋4蓋合在容器主體5的開口處，容器蓋4可以打開或密閉容器主體5；所述溫控裝置1用于控制整個(gè)裝置所在環(huán)境的溫度；所述光源裝置2位于容器的上方，為整個(gè)裝置提供光源；所述熏蒸裝置內(nèi)部盛有已人工調(diào)節(jié)至合適含水量的自然土壤6，自然土壤6可放置一定數(shù)量健康并生長一致的蚯蚓7，熏蒸裝置用油脂類物質(zhì)密封。溫控裝置1可以為溫箱或溫室，光源裝置2可以為燈棍或燈泡等室燈。

為了進(jìn)一步提高空間的利用率以及方便在同一批次設(shè)置多個(gè)樣品的檢測，上述裝置還包括組合架3，所述組合架3分成上下設(shè)置的多層，每層均放置有多個(gè)熏蒸裝置，光源裝置為多個(gè)，多個(gè)光源裝置分別固設(shè)在每層的組合架上。在具體設(shè)置組合架3時(shí)，組合架3為鐵制或不銹鋼制。組合架3包括頂板、底板以及位于頂板和底板之間的多個(gè)隔板。多個(gè)隔板沿著豎直方向設(shè)置。每個(gè)隔板以及底板均放置有多個(gè)熏蒸裝置。光源裝置固定在頂板處以及隔板處。凡是有熏蒸裝置的一層均有一個(gè)光源裝置，保證光源裝置能夠照射到熏蒸裝置，并且每層熏蒸裝置得到光照是相同的。

為了進(jìn)一步提高分離效率，所述熏蒸裝置為透明玻璃制的廣口瓶或普通干燥器,容積為0.3L-5L,密封用油脂類物質(zhì)為白凡士林或黃凡士林；所述自然土壤的重量為100g-4000g；溫控裝置1提供的溫度為18℃-22℃；光照強(qiáng)度為400Lx-800Lx。

結(jié)合上述的裝置，在進(jìn)行用于室內(nèi)評(píng)價(jià)固體類土壤熏蒸劑對(duì)蚯蚓急性毒性時(shí),具體操作步驟為：

1)人工調(diào)節(jié)提前風(fēng)干的自然土壤至該自然土壤飽和含水量的30％-80％，優(yōu)選40％-60％，最佳為50％，其中自然土壤中的水為蒸餾水或去離子水，之后稱取一定重量的上述自然土壤至熏蒸裝置的容器主體中，按照下述的比例加入自然土壤：每0.3L-5L容積的熏蒸裝置加入自然土壤的重量為100g-4000g；

2)開啟溫控裝置和光源裝置，調(diào)節(jié)溫度，使溫度為18℃-22℃，調(diào)節(jié)光源使光照強(qiáng)度為400Lx-800Lx，之后挑選一定數(shù)量健康并生長一致的蚯蚓放在自然土壤的表面，按照下述的比例加入蚯蚓：每0.3L-5L容積的熏蒸裝置加入5-30條蚯蚓；

3)待蚯蚓全部鉆入自然土壤6中后，準(zhǔn)確稱取一定重量的固體熏蒸劑均勻到自然土壤6中，之后迅速用油脂類物質(zhì)將熏蒸裝置密封；之后進(jìn)行熏蒸處理，熏蒸處理的時(shí)間為3-21天；

4)熏蒸結(jié)束后，打開熏蒸裝置調(diào)查蚯蚓的死亡情況，并計(jì)算蚯蚓的死亡率，根據(jù)蚯蚓的死亡率來評(píng)價(jià)熏蒸劑對(duì)蚯蚓急性毒性。

根據(jù)死亡率判斷熏蒸劑的急性毒性的具體標(biāo)準(zhǔn)為：劇毒，致死中濃度LC₅₀≤0.1mg a.i./Kg_干土；高毒，0.1mg a.i./Kg_干土<LC₅₀≤1.0mg a.i./Kg_干土；中毒，1.0mg a.i./Kg_干土<LC₅₀≤10mg a.i./Kg_干土；低毒，LC₅₀>10mg a.i./Kg_干土。

本發(fā)明所述的裝置和方法適用于各種蚯蚓，例如：赤子愛勝蚯蚓、日本杜拉蚓、無錫杜拉蚓、直隸環(huán)毛蚓、湖北環(huán)毛蚓、透明環(huán)毛蚓、狀重環(huán)毛蚓、夏威環(huán)毛蚓、白頸環(huán)毛蚓、舒脈環(huán)毛蚓、毛利環(huán)毛蚓中的任一種或幾種。

本發(fā)明所述的裝置和方法適用于各種固體類熏蒸劑，例如：棉隆微粒劑、氯化苦緩釋顆粒劑或氰氨化鈣緩釋顆粒中的任一種或幾種。

下面以赤子愛勝蚯蚓為例進(jìn)行具體介紹。

實(shí)施例1

以赤子愛勝蚯蚓(Eisenia foetida)為例，利用上述裝置評(píng)價(jià)了固體土壤熏蒸劑質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為98％的棉隆微粒劑對(duì)蚯蚓的急性毒性，具體如下：

1)人工調(diào)節(jié)提前風(fēng)干的自然土壤至飽和含水量的50.0％，分別稱取1000g上述自然土壤置于容積為2.5L的普通干燥器中；

2)調(diào)節(jié)溫度為18℃；光照強(qiáng)度為400Lx。每容器中放入15條生長健康一致的環(huán)帶明顯的赤子愛勝蚯蚓；

3)待蚯蚓全部鉆入自然土壤中后，按照設(shè)置的梯度濃度12.0、6.0、3.0、1.5、0.75、0.38、0.19mg ai/kg_干土分別將相應(yīng)質(zhì)量的棉隆微粒劑(因制劑實(shí)際稱量太低，此處需要提前采用石英砂對(duì)棉隆制劑稀釋100倍后混勻備用)均勻混布到自然土壤中，之后迅速涂抹凡士林并密閉容器，并設(shè)置添加石英砂對(duì)照處理和未做任何處理的空白對(duì)照，每個(gè)處理4次重復(fù)；

4)分別于熏蒸處理1w、2w后，調(diào)查蚯蚓的死亡率；

5)使用DPS軟件對(duì)毒力回歸方程進(jìn)行擬合，求LC₅₀和LC₉₀值，具體數(shù)據(jù)見表1和表2。

表1

表2

通過試驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)：1)石英砂對(duì)照處理和空白對(duì)照處理蚯蚓死亡率在1w、2w均為0.0％，說明該方法可以很好的保證蚯蚓的自然存活；2)通過死亡率調(diào)查和毒力回歸方程進(jìn)行擬合后發(fā)現(xiàn)相關(guān)系數(shù)r分別為0.94和0.95，說明擬合較好。同時(shí)可以分別得到98％的棉隆微粒劑對(duì)赤子愛勝蚯蚓在1w和2w的LC₅₀和LC₅₀值分別為0.90和0.77mg ai/Kg_干土，屬于高毒性。

根據(jù)表1和表2中的數(shù)據(jù)可以看出，本發(fā)明所述的裝置和方法具有評(píng)價(jià)結(jié)果準(zhǔn)確可靠而且重復(fù)性好，同時(shí)操作簡便快捷，對(duì)操作人員安全等優(yōu)點(diǎn)。

實(shí)施例2

發(fā)明人在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上，調(diào)整了熏蒸裝置的容積為0.3L，自然土壤的重量為100g，蚯蚓的數(shù)目為5條。培養(yǎng)溫度為22℃，光照強(qiáng)度為800Lx，熏蒸時(shí)間為3天。其余操作均與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例3

發(fā)明人在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上，調(diào)整了熏蒸裝置的容積為5L，自然土壤的重量為4000g，蚯蚓的數(shù)目為30條。培養(yǎng)溫度為20℃，光照強(qiáng)度為500Lx，熏蒸時(shí)間為21天。其余操作均與實(shí)施例1相同。

經(jīng)實(shí)施例2和實(shí)施例3的驗(yàn)證，也能得到與實(shí)施例1類似的結(jié)果。綜上所述，本發(fā)明所述的裝置和方法均具有評(píng)價(jià)結(jié)果準(zhǔn)確可靠而且重復(fù)性好，同時(shí)操作簡便快捷，對(duì)操作人員安全等優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明人還進(jìn)一步提供了下面的實(shí)施例來證明本發(fā)明所述方法的優(yōu)越性。

以赤子愛勝蚯蚓(Eisenia foetida)為例，利用上述裝置，評(píng)價(jià)不同自然土壤濕度對(duì)蚯蚓存活的影響，具體如下：

1)人工調(diào)節(jié)提前風(fēng)干的自然土壤至系列濕度：調(diào)節(jié)后的自然土壤分別為自然土壤飽和含水量的100％、90.0％、80.0％、70.0％、60.0％、50.0％、40.0％、30.0％、20.0％、10.0％，分別稱取1000g上述自然土壤置于容積為2.5L的普通干燥器中，每個(gè)處理4次重復(fù)；

2)調(diào)節(jié)溫度為18℃-22℃；光照強(qiáng)度為400Lx-800Lx。每容器中放入15條生長健康一致的環(huán)帶明顯的赤子愛勝蚯蚓；

3)待蚯蚓全部鉆入自然土壤中后，之后涂抹凡士林密閉容器；

4)分別于熏蒸處理2w、4w、6w、8w后，調(diào)查蚯蚓的死亡率，具體試驗(yàn)數(shù)據(jù)見表3。

表3

試驗(yàn)結(jié)果表明:濕度過大或過低均不利于蚯蚓在密閉環(huán)境中的存活。在4w時(shí)，30.0％-80.0％的相對(duì)含水量處理蚯蚓死亡率均為0.0％，其余處理的死亡率均超過10％；在6w時(shí)，只有40.0％-60.0％的相對(duì)含水量處理的蚯蚓死亡率低于10％，其余處理的蚯蚓死亡率均高于10％，其中50.0％的相對(duì)含水量處理的蚯蚓死亡率最低，仍為0.0％；在8w時(shí)，只有50.0％的相對(duì)含水量處理的蚯蚓死亡率低于10％，其余處理的蚯蚓死亡率均高于10％。因?yàn)樗巹?duì)蚯蚓急性毒性試驗(yàn)通常進(jìn)行1w和2w進(jìn)行調(diào)查。為保證試驗(yàn)方法的可靠性，只有保證蚯蚓可以自然存活4w，因此，試驗(yàn)應(yīng)調(diào)節(jié)自然土壤的相對(duì)含水量至30.0％-80.0％，優(yōu)選40.0％-60.0％，最佳為50.0％。

發(fā)明人也采用了其他種類的固體熏蒸劑，例如氯化苦緩釋顆粒劑或氰氨化鈣緩釋顆粒，發(fā)現(xiàn)具有評(píng)價(jià)結(jié)果準(zhǔn)確可靠而且重復(fù)性好，同時(shí)操作簡便快捷，對(duì)操作人員安全等優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明人也采用了其他種類的蚯蚓進(jìn)行試驗(yàn)，例如：日本杜拉蚓、無錫杜拉蚓、直隸環(huán)毛蚓、湖北環(huán)毛蚓、透明環(huán)毛蚓、狀重環(huán)毛蚓、夏威環(huán)毛蚓、白頸環(huán)毛蚓、舒脈環(huán)毛蚓、毛利環(huán)毛蚓等，也能得到類似的結(jié)果。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。